Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng hỗn dịch nano piroxicam dùng cho nhãn khoa

PIROXICAM 3 1 Côngthức

Một sốđặc điểm

- Hình thức: Bộtkếttinh,màuvàngnhạt,vịđắng,khôngmùi

- Độ tan: rất ít tan trong nước (0,015 mg/ml), trong dung dịch acid

(0,023mg/mlở p H 2 , 0 ) v à t r o n g m ộ t s ố d u n g m ô i h ữ u c ơ , í t t a n t r o n g a l c o l và dung dịch kiềm (1,03 mg/ml ở pH 7,5), tan trong dicloromethan [32],[50].

6 0 C),II(195,5 0 C),III(178,4 0 C),IV(164,1 0 C).DạngthùhìnhII khôngbềndễchuyểnthànhdạng I[118].

Tính acidbase:tính acidyếu(pKa=6,3),pKa1=1,86vàpKa2=5,46. Địnhtính :phổtửngoại,hongngoại. Địnhlượng :

Piroxicam nguyên liệu: định lượng bằng phương pháp chuẩn độ trong môitrường khan Hòa tan dược chất trong hỗn hợp đong thể tíchanhydrica c e t i c vàacidacetic,chuẩnđộbằngdung dịchacidpercloric 0,1M.

-Piroxicam trong chế phẩm bào chế: định lượng bằng quang phổ tử ngoạihoặc bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao với detecter thích hợp[32],[114].

Tácdụng,chỉđịnh

- Tác dụng: tác dụng chống viêm (nhóm NSAIDs), giảm đau, hạ sốt, chốngkết tập tiểu cầu Piroxicam thuộc nhóm oxicam, tác dụng hạ sốt kém,nhưng tác dụng chống viêm mạnh hơn nên chủ yếu dùng giảm đau vàchống viêm.

- Chỉ định: Piroxicam dùng trong viêm khớp dạng thấp, viêm xương khớp,thoáihóa khớp,viêm cộtsốngdínhkhớp,bệnhcơxươngcấp,c h ấ n thương trong thể thao Thống kinh và đau sau phẫu thuật, bệnh Gút cấp[5].Piroxicamlàm ộ t t r o n g n h ữ n g t h u ố c đ i ề u t r ị v i ê m , d ị ứ n g v à xuất huyết dưới kết mạc rất hiệu quả [36], [62] Ngoài ra,piroxicam cònđượcsửdụngchốngviêmsauphẫuthuậtởmắt [101].

Cácdạngbàochế có trênthịtrường

Thuốc tiêm 20 mg/ml, viên nang, viên nén 10 mg, 20m g ( F e l d e n , Pirox, Kecam, Pirox 10, Pirox 20 ) Thuốc đặt trực tràng 20 mg (Felden,Oximezin,Zitumex…).Bôingoàida:gel0 , 5 ( F e l d e n , Z e r o s p a m , Flodenu…)

Trongy học,mộtsốcấu trúc sinh học cơbản: nguyên tửhydroc ó đường kính khoảng 0,1 nm,phân tử ADN rộng khoảng 3 nm, ribosom 10 nm,virus100nm, vikhuẩn1000 nm, tếbàohongcầucó đườngkínhkhoảng 7000 nm,d à y k h o ả n g 2 0 0 0 n m , … [ 10],

[ 48].D o đ ó , m u ố n n g h i ê n c ứ u , đ i ề u t r ị bệnh ở mức độ tế bào hay dưới tế bào, y sinh học là lĩnh vực ứng dụng mạnhmẽnhấtcác tiếnbộ củacôngnghệnano.

Kích thước tiểu phân là một trong những đặc điểm quan trọng nhất củahệ tiểu phân nano Yếu tố này ảnh hưởng đến khả năng tạo hạt, độ ổnđ ị n h củat i ể u p h â n n a n o v à k h ả n ă n g g i ả i p h ó n g t h u ố c t ừ h ệ n a n o Hơnn ữ a , đặcđi ểm nàycòn ả n h h ư ở n g t ớ i q u á t r ì n h s i n h h ọ c c ủ a t h u ố c tr o n g c ơ t h ể vàk h ả n ă n g đ ư a t h u ố c t ớ i đ í c h T r o n g m ộ t s ố n g h i ê n c ứ u t r ê n t h ế g i ớ i , cáct i ể u p h â n n a n o c ó t h ể đ ư ợ c c h ế t ạ o ở k í c h t h ư ớ c d ư ớ i 1 0 0 0 n m đ ế n vài chục nanom t[40],[80],[48].

- Tiểu phân nano vào tĩnh mạch dễ bị hệ thống miễn dịch nhận biết và loạikhỏi vòng tuần hoàn bởi các bạch huyết cầu Bề mặt tiểu phân sơ nướchấp phụ nhiều các thành phần của máu, chủ yếu là protein (opsonin) gâyra hiện tượng opsonin hóa Vì vậy, để k o dài thời gian lưu thuốc trongvòng tuần hoàn và đưa được thuốc tới đích, các tiểu phân nano thườngđược bao bằng các polyme hoặc chất diện hoạt thân nước như PEG,Tween,.[ 40],[97].

- Điện tích bề mặt tiểu phân cũng là một đặc tính quan trọng tạo nên tínhchất riêng biệt của tiểu phân nano Điện tích bề mặt này ảnh hưởng đếntương tác tĩnh điện của các tiểu phân với nhau, tương tác của tiểu phânvớicácthànhphầntrongdịchsinhhọchaytrênbềmặtmàngsinhhọ c.

CÔNGNGHNANOTRONG NGÀNH DƯC 4 1 Vài nétvềhệnano

Ưu,nhượcđiểmcủa dạngthuốc nano

Vớicácdược chất í ttan,cáctiểuph ân nanodo kí ch thướcnhỏ,diệ ntích tiếp xúc với môi trường sinh học lớn nên độ tan và tốc độ hòa tan tăng,những tiểu phân có kích thước nhỏ hơn 200 nm dễ dàng đi qua các mạch máudo đó thuốc tác dụng nhanh; mở rộng phạm vi xây dựng công thức, tận dụngcácdược chấttruyềnthốngtheocáchdùngmới.

Xia và cộngsự nghiêncứuc h ế t ạ o n i t r e n d i p i n n a n o v ớ i K T T P l à 209±9nm.Nitrendipinnanohòa tanđượctrên90s a u 2phút,trongkhiđó, nitrendipinn g u y ê n l i ệ u c h ỉ h ò a t a n đ ư ợ c 2 0 % s a u 1 2 0 p h ú t K h i t h ử t r ê n chuột theo đường uống , giá trị Cmaxvà AUC0-12của hỗn dịch nano tương ứngcao gấp 6,1 lần và 5,0 lần so với viên nén trên thị trường [121] Trong mộtnghiên cứu khác của Quan và cộng sự, các tác giả bào chế hỗn dịch uốngnitrendipin và đánh giá sinh khả dụng của thuốc trên chuột So với hỗn dịchthô, sinh khả dụng của hỗn dịch nano tinh thể cao gấp 9 lần, hỗn dịch nanochứat i ể u p h â n đ ư ợ c b a o b ề m ặ t b ằ n g c h i t o s a n c ó s i n h k h ả d ụ n g c a o g ấ p 13l ầ n [ 96].M ộ t s ố d ư ợ c c h ấ t k h á c c ũ n g đ ã đ ư ợ c n g h i ê n c ứ u b à o c h ế ở kíchthướcnanođểlàmtăngđộtan,tăngsinhkhảdụngbaog o m : le vofloxacin[35],indomethacin [81],p h e n y t o i n , salbutamol [87],artes unat

Các hệ nano gom dược chất gắn với chất mang thích hợp dễ dàng điquađ ư ợ c t ế b à o , x â m n h ậ p v à o m á u , h ệ t h ố n g n ộ i b à o , g a n , t ủ y x ư ơ n g , màng ruột, lớp niêm mạc… Điều này có ý nghĩa đặc biệt với các dược chấtthấm kém Mou và cộng sự nghiên cứu dược động học của hỗn dịch nanoitraconazol trên chuột đã công bố rằng AUC0-36của hỗn dịch nano cao gấp1,5đ ế n 1 , 8 l ầ n s o v ớ i v i ê n n a n g c ứ n g c h ứ a p e l l e t g i ả i p h ó n g n h a n h t r ê n thịtrường(Sporanox)[83].

Shudo và cộng sự nghiên cứu chế tạo hệ nano của probucol (Pro.) vớimột số chất mang gom: polyvinyl pyrolidon (PVP K12, PVP K17, PVP K30)vànatridodecylsulfat(SDS).Kếtquảchothấy:hệtiểuphânnanogo mProvà SDS làm tăng hấp thu dược chất lên 3 lần, hệ nano gom Pro-PVP-SDSlàmdược chấthấpthu tăng25lần sovới nguyênliệu [107].

Prajapati vàcộngsự nghiêncứu bàochế dendrimep o l y a m i d o - a m i n củapiroxicamvàđánhg i á s i n h k h ả d ụ n g i n v i v o c ủ a t h u ố c t r ê n c h u ộ t So với hỗn dịch quy ước, sau khi tiêm tĩnh mạch, diện tích dưới đường congcủa hỗn dịch nano cao hơn (321 so với 279 àg.giờ/ml), thời gian bỏn thảităngl ê n 8 g i ờ T á c d ụ n g c h ố n g v i ê m c ủ a h ỗ n d ị c h n a n o c a o h ơ n h ỗ n d ị c h quyướcrất nhiềukhi đánh giá mứcđộphù chân chuột[94].

Kimv à c ộ n g s ự n g h i ê n c ứ u t í n h t h ấ m c ủ a k e t o p r o f e n t r ê n d a c h u ộ t cho thấyketoprofennano liposomthấmcao gấp9 lầnso vớinguyên liệu[58]. Nghiên cứu của Han và cộng sự với hệ nano liposom flubiprofen cũngchot h ấ y d ạ n g l i p o s o m n à y l à m t ă n g t í n h t h ấ m q u a d a c h u ộ t l ê n g ấ p 5 l ầ n sovớidược chấtbanđầu [51]. Đối với hệ tiểu phân nano lipid chứa quercetin, Bose và cộng sự nhậnthấy rằngtùy thuộc vàoloạitádượcl i p i d , l ư ợ n g d ư ợ c c h ấ t t h ấ m q u a d a caogấp2,3đến2,5 lầnsovớinguyênliệukíchthướcmicro[30].

Zhangvàcộngsựnghiêncứuhệnanoinsulingom:insulin/PEG-chitosan. Với tiểu phân kích thước 150-300 nm, thế Zeta 16-30 mV, hỗn dịchnano hấp thu qua niêm mạc mũi cao gấp 3 lần so với hỗn dịch quy ước vàdung dịchinsulin[127].

Nhóm nghiên cứu của Shahnaz đãbào chế và đánh giá sinh khả dụngcủa hỗn dịch nanoleuprolid –chitosan thiolat khi sử dụng qua niêm mạc mũi.Sovớidungdịchleuprolid,hỗndịchnanocóthờigianbánthảikéodàihơ n4l ầ n , n o n g đ ộ đ ỉ n h t r o n g h u y ế t t ư ơ n g t ă n g 3 , 8 l ầ n v à s i n h k h ả d ụ n g t ă n g 6,5lần [103].

Nghiên cứuin vivocủa Madhusudhan cho thấycarbamazepin trong hệnhũ tương nano tiêm tĩnhmạchphân bốt ă n g ở t ấ t c ả c á c m ô Đ ặ c b i ệ t , nong độ dược chất trong não và tỉ lệ nong độ não/huyết thanh tăng cao (2,37lần và 3 lần với chất ổn định 1-O-decylglycerol) [74].Kreutervà cộng sự chếtạo hệ nano bao bởi polysorbat, tiểu phân nano giống như các lipoprotein khốilượng phân tử thấp (LDL) Hệ nano này có thể vận chuyển qua maom ạ c h máunãodogắnvàocácr e c e p t o r L D L [ 64].H ỗ n d ị c h t i ê m

N i t r e d i p i n nanolipidrắnđượcManjunathnghiênc ứ u t r ê n c h u ộ t ( t i ê m t ĩ n h m ạ c h ) Kếtquảcho thấy:cáct i ể u p h â n c ó t h ế Z e t a â m t ậ p t r u n g n h i ề u ở g a n Trong khi đó,tiểuphâncó thếZetadươngtậptrungnhiềuởnão[76].

KhiKTTPdượcchấtdưới70nm vàđ ặ c b i ệ t k ế t h ợ p v ớ i p o l y m e thân nước (ví dụ: PEG), tiểu phân tránh được quá trình opsonin hóa trong tĩnhmạch, giảm sự đàothải theocơ chế miễndịch, hấpt h u c h ủ y ế u t h ô n g q u a tác dụng thực bào của hệ thống lưới nội mô nên được coi là hệ vận chuyểnthuốc lý tưởng điều trị các bệnh ung thư

[80] Kết quả nghiên cứu của Ploskercho thấy: liposom doxorubicin được bao PEG (Doxil®, Caelyx™)c ó t h ờ i gian bánt h ả i k é o d à i t ớ i 7 9 , 9 g i ờ , t ă n g l ê n r ấ t n h i ề u s o v ớ i d ạ n g t h u ố c quy ước Thuốc có mặt trong hệ tuần hoàn vàở m ô v ẫ n c ò n n g u y ê n d ạ n g được bao PEG, phân hủy và thải trừ khỏi mô rất chậm [93] Zahr và cộng sựnghiêncứuhấpthuinvitrocủahệnanogomcáctiểuphândượcchất đượ cbaob ở i P E G v à k ế t q u ả l à l ư ợ n g d ư ợ c c h ấ t h ấ p t h u v à o đ ạ i t h ự c b à o sau 24 giờ của các tiểu phân nano được bao PEG giảm 3 lần so với tiểu phânnano khôngbao[132]. Baerta và cộng sự nghiêncứuhệ nanohỗndịchrilpivirin (kích thước 200 nm). Các tác giả chỉ ra rằng hệ nano hỗn dịchrilpivirinduytrìgiảiphóng3thángtrênchó và3 tuầntrên chuột[23].

 Tănghoạttính sinhhọccủathuốc Đối với thuốc kháng sinh, kháng thuốc là hiện tượng dễ xảy ra do nhiềunguyên nhân khác nhau Do đó, kháng sinh khó có thể triệt tận gốc được cácmầm bệnh.Những hệ tiểu phân nano kết hợp giữa kháng sinh và chất mangđặc hiệu có thể giúp đưa thuốc đến tận tế bào nhiễm khuẩn, giải phóng thuốctạiđóvàlàmtăngđángkểhiệulựcđiềutrị củathuốckhángsinh.

Dillenvàcộngsựnghiêncứubàochếvàđánhgiátácdụngcủahệnano gom ciprofloxacin, Eudragit RS 100 (hoặc RL 100) và PLGA Thử tác dụngkhángk h u ẩ n t r ê n t r ự c k h u ẩ n m ủ x a n h v à t ụ c ầ u v à n g( P a e r u g i n o s a v à

S aureus).Với một tỷ lệ nhất định (Eudragit/PLGA%/75), hoạt lực củakháng sinh nano tăng lên và duy trì kéo dài hơn so với kháng sinh nguyên liệu[41]. Đối với thuốc chống viêm, do không phân bố chọn lọc trên các tổ chứcviêmnênđ ể đ ạ t hiệuq u ả điềutrị, thườngp h ả i d ù n g thuốc v ớ i l i ề u c a o m à đa số các thuốc chống viêm có nhiều tác dụng phụ nên đây là một bất lợi chobệnh nhân Sử dụng các dạng thuốc nano có thể làm tăng độ tan và tính thấmcủanhữngthuốcc h ố n g v i ê m í t t a n n ê n c ó t h ể g i ả m đ ư ợ c l i ề u v à g i ả m tác dụng phụ Có thể tạo hệ tiểu phân với các nhóm chức đặc hiệu trên bề mặtđểđưathuốctớitổchứcviêmlàmtăngtácdụngđiềutrị.Hơnnữa,vớic áctổc h ứ c đ ã b ị t ổ n t h ư ơ n g ( u , v i ê m , ) k h o ả n g c á c h l i ê n b à o c ủ a t h à n h vi mao quản đã bị nới rộng (300-700 nm) Các tiểu phân nhỏ hơn 250 nm dễdànghấpthuvàocáctổchứcv i ê m T r o n g n g h i ê n c ứ u c ủ a A d i b k i a v à cộng sự, hệ nano piroxicam/Eudragit RS 100 thể hiện rõ tác dụng chống viêmcaohơn so vớipiroxicam nguyên liệu trong viêmmàngb o đ à o g â y r a b ở i nộiđộctốvikhuẩn [15]. Đốivớit h u ố c c h ố n g u n g t h ư : c ô n g n g h ệ n a n o đ e m l ạ i n h ữ n g thànhcônglớnđốivớimộtsốthuốcđiềutrịvàthiếtbịchẩnđoánsớm Hệtiểuphânnanođượcbàoc h ế n h ư n h ữ n g h ệ t á c d ụ n g t ạ i đ í c h v ớ i c á c chất mang có khả năng đưa các dược chất, hoá trị liệu hay gen điều trị tới tậntế bào ác tính Một số tiểu phân tạo ra được các tác động nhiệt hay tác động từđể tiêu diệt khối u, một số khác chứa chất mang giúp chống lại khả năng nhậnbiết của p-glycoprotein màng huyết tương (Pgp) làm cho tế bào khối u khôngcòn cơ chếkhángdược chấtđiềutrịungthư [48],[71],[80],[128].

Matsumotovàcộngsựdngl i ệ u p h á p g e n đ ể n g ă n c á c t ế b à o ungthưtạothêmn h ữ n g m ạ c h m á u m ớ i b ằ n g c á c h d ngv e c t o r A N D có tác dụng ức chế yếu tố tăng trưởng thành mạch (VEGF). Với hệ tiểu phânmang điện tích dương bề mặt do bao gelatin, khi tiêm vào khối u trên chuột,yếu tố ức chế VEGF còn xuất hiện ở xung quanh khối u sau

10 ngày trong khihệtiểuphân khôngbao gelatinkhôngtìmthấycácyếutốnày[77].

 Dùng thuốc theo đường uống: có thể bào chế các hệ tiểu phân nano vớinhững đặc tính nhất định để đưa thuốc đến từng vị trí trên ruột Ví dụ để đưathuốc tới ruột non, có thể gắn lectin (một loại protein) lên bề mặt tiểu phân đểliên kết đặc trưng với glucoprotein của niêm mạc ruột non Để đưa thuốc đếnđại tràng, tiểuphân polyme bảovệ dược chấttránh phân hủy và hấp thu ởphần đầu ruột non Khi đến đại tràng, tiểu phân kết dính sinh học với tổ chứcviêmt ạ o r a n o n g đ ộ t h u ố c c a o t ạ i đ ó V í d ụ : đ i ề u t r ị v i ê m đ ạ i t r à n g t r ê n động vật thí nghiệm bằng rolipram, nếu sử dụng dung dịch, triệu chứng viêmtái phát khi ngừng uống thuốc Trong khi đó, với hỗn dịch nano, hiệu quảchốngviêmvẫnkéodài5ngàysaukhingừngthuốc[68].

Vớin h ữ n g t h u ố c h ấ p t h u ở đ ư ờ n g t i ê u h ó a , đ ể d ẫ n t h u ố c t ớ i đ í c h một cách chủ động hơn, người ta d ng giải pháp biến tính tiểu phân, bao haygắnb ề m ặ t t i ể u p h â n b ằ n g c á c s e n s o r d ẫ n đ ư ờ n g l i ê n k ế t v ớ i c á c r e c e p t o r đặc trưng có nhiều trong cơ quan đích Nghiên cứu của Sharma và cộng sự vềmột số thuốc chống lao đã sử dụng aglutinin trong mầm lúa mì kết hợp vớiPLGA Hỗn dịch nano có thể làm giảm liều thuốc chống lao khi thử nghiệmtheođ ư ờ n g u ố n g v à x ô n g h í t t r ê n l ợ n S ử d ụ n g h ỗ n d ị c h n a n o , r i f a m p i c i n ton tại trong huyết tương 6-7 ngày còn isoniazid và pyrazinamid là 13-14ngày.Trong khi đó, sử dụng nguyên liệu thường,thời gian lưuchỉc ó 4 -

9 n g à y đ ố i v ớ i i s o n i a z i d v à p y r a z i n a m i d Cả3dược chấtnàyđềuthấycó trongphổi,gan,láchtrong15ngày[104].

Một sốchếphẩmthuốc nanotrênthịtrường

Cùng vớisự phát triểnc ủ a k h o a h ọ c c ô n g n g h ệ , n h i ề u p h ư ơ n g t i ệ n , thiết bị tiện ích ra đời và nhờ đó các hệ nano thuốc được nghiên cứu thửnghiệm nhiều hơn Hiện nay, trên thị trường có một số chế phẩm dạng nanođượcl ư u h à n h v à đ ã m a n g l ạ i h i ệ u q u ả đ i ề u t r ị c a o , v í d ụ n h ư : A b r a x a n e ®

(Nanoliposome paclitaxel kích thước trung bình 130 nm) Rapamune(chứasirolimus : kháng sinhnhóm macrolid), Emend(chứa aprepitant :m ộ t c h ấ t đối kháng chọn lọc cao của neurokin-1 receptor),Tricor (chứa fenofibrate),MegaceES (Megestrol acetat dẫn xuất tổng hợp từ:progestrol) [31], Doxil,Lipo-dox (chứa liposome doxorubixin),Endorem ® (nano oxyd sắtdùng đểchẩn đoán hình ảnh) Băng gạc sát trùng chứa nano bạc và oxyd kẽm của hãngNucryst,bănggạccầmmáu chứananonhômsilicat của công tyZ-medic.

HỖNDỊCH NANOỨNGDỤNGTRONGBÀOCHE THUOC 15 1 Kháiniệmvềhỗndịchnano

Phân loạihỗndịchnano

Căncứvàocấ u trúctiểuphânnano trongmô i trường, hỗndịchnan ocó thểchia thànhhainhómchính:

- Hỗndịch chứatiểu phân nano tinh thể.

- Hỗn dịchchứatiểuphân nanocóc h ấ t m a n g : n a n o c ầ u , n a n o n a n g , nano lipidrắn,liposom,nanopolyme.

Độổnđịnhvậtlýcủahỗndịchnano

Tiểu phân nano trong môi trường lỏng dễ bị tăng kích thước do một sốnguyên nhânsauđây:

Trongm ộ t h ệ đ a p h â n t á n , t h e o t h ờ i g i a n , c á c h ạ t n h ỏ t e o đ i d o b ị hòa tan trong khi các hạt lớn lại to lên do dược chất tái kết tinh trên bề mặt(hình1.1).Kếtquảlàxảyrahiệntượngkeotụ.

Nguyên nhân chủ yếu dẫn đến sự keo tụ là sự va chạm giữa các hạt keo.Khi hai hạt va chạm nhau, giữa chúng phát sinh hai lực: hút và đẩy Lực hút làlựcVan der Waals Lựcđẩy cóbảnc h ấ t t ĩ n h đ i ệ n L ự c đ ẩ y x u ấ t h i ệ n l à d o sựbiếndạngcủalớpvỏionxung quanhhạt keo (khíquyển ion).

Hình1.2.Mô hnhlớp điệnkép xung quanhtiểu phântích điện. a:trạngtháitĩnh,b :trạngtháikhiichuyển

Mật độ tiểu phân quyết định khoảng cách giữa các tiểu phân trong môitrường lỏng do đó ảnh hưởng đến tần số va chạm giữa các tiểu phân và trựctiếpảnh hưởngđến lựch ú t v à l ự c đ ẩ y g i ữ a c h ú n g T r o n g c á c c h ế p h ẩ m hỗn dịch thuốc, để đảm bảo tác dụng điều trị, mật độ pha phân tán thường caohơn nhiều so với ngưỡng mật độ bền của hệ keo Vì vậy, duy trì độ ổn địnhcủahỗndịchlà rấtkhó.

1.3.3.2 Biệnpháplàm tăngđộổnđịnhcủa hỗndịch nano trongbàoche

 Tănglựcđẩytĩnh điện giữa cáctiểu phân:

 Điều chỉnh lớp điện kép quanh tiểu phân thông qua việc điều chỉnh pHcủam ô i t r ư ờ n g p h â n t á n v à s ử d ụ n g h ợ p l ý c á c t h à n h p h ầ n t á d ư ợ c cókhảnăngphânlythànhion.

 Tạolớpáobaobọccáctiểuphân Để các tiểu phân khi va chạm không liên kết với nhau, có thể sử dụngpolymeđ ể t ạ o l ớ p c ấ u t r ú c k h ô n g g i a n c o n g k ề n h q u a n h c h ú n g N h ữ n g polyme thường được sử dụng trong hỗn dịch nano gom có: HPMC, chitosan,PVP, alginat, carbopol, poloxamer [54] Trong một số trường hợp, cần phảikếth ợ p c á c p o l y m e v ớ i n h a u , h o ặ c p o l y m e v ớ i c h ấ t d i ệ n h o ạ t t h í c h h ợ p đểt ă n g h i ệ u q u ả g i ữ ổ n đ ị n h c h o h ỗ n d ị c h V a n E e r d e n b r u g h đ ã t ổ n g h ợ p từ nhiều công trình nghiên cứu về một số polyme và chất diện hoạt sử dụngmộtc á c h h i ệ u q u ả đ ể d u y t r ì t ố t đ ộ ổ n đ ị n h c ủ a h ỗ n d ị c h n a n o t i n h t h ể (bảng1.1)[116].

Mộttrongnhữngbiệnpháphiệuquảhiệnna yđangđượcápdụnglà bào chế hệ tiểu phân nano dưới dạng đôngkhô khi sử dụngm ớ i p h â n t á n trongm ô i t r ư ờ n g l ỏ n g Ở d ạ n g n à y , c á c t i ể u p h â n đ ư ợ c p h â n t á n đ ề u v à cốđ ị n h t r ê n t á d ư ợ c t ạ o k h u n g t r o n g m ô i t r ư ờ n g k h ô n ê n h ạ n c h ế đ ư ợ c hiệnt ư ợ n g k ế t t ụ H ơ n n ữ a , b ề m ặ t v à c ấ u t r ú c c ủ a t i ể u p h â n k h ô n g b ị tácđ ộ n g b ở i p H v à c á c i o n c ó m ặ t t r o n g m ô i t r ư ờ n g , c á c p o l y m e s ử d ụ n g kết hợp trong tiểu phân ít có nguy cơ biến đổi Nhiều công trình nghiênc ứ u đãápdụng kỹ thuậtđ ô n g k h ô t r o n g b à o c h ế h ệ t i ể u p h â n n a n o v ớ i c á c dược chất như: peptid [70], nucleosid(tác nhân kháng ung thư và virus) [29],albumin huyếttương [21].

B ng 1 1 Một số chất ổn định sử dụng trong hỗn dịch nano tinh thể[116]

Poloxamer188 Azithromycin, dexamethason, prednisolon,omeprazol,

Thành phầnhỗndịchnano

Các dược chất thuộc nhóm 2 và 4 trong hệ thống phân loại sinh dượchọc là đốitượngchủyếucủa những nghiên cứu bàoc h ế d ạ n g t h u ố c n a n o , điển hình là các thuốc chống ung thư, chống viêm không steroid (NSAIDs),chống nấm.

Ngoạit r ừ dạngt i ể u p hâ n d ư ợ c c hấ t n a n o , cáck i ể u c ấu tr úc k h á c c ủa tiểuphânnanođềusửdụngkếthợpvớichấtmang,cácchấtmangđ ón g vai tròquantrọng tronghệtiểu phân.

 Với nano nang, chất mang có tác dụng bảo vệ dược chất khỏi các yếu tốngoại môinhưnhiệtđộ,ánh sáng,pH,enzym,

 Chất mang ảnh hưởng đến hình dạng, kích thước, tính chất bề mặt củatiểu phânnên hành trình của tiểu phân sau khi vào cơ thể và quá trìnhgiảiphóngdược chất nhiềukhi đượcquyếtđịnh bởichất mang.

 Chất mang cần đảm bảo không gây phản ứng miễn dịch, không tích lũytrong cơ thể,khôngđộcvàđủ tiêuchuẩn để đưavàocơthể.

 Polymethiênnhiênphânhủysinhhọc:alginat,chitosan,gelatin,gliandin,cyc lodextrinvàdẫnchất.

 Polyme t ng hợp phân hủy sinh học: nhóm polylactid và polylactid-co- glycolid(PLA,PGA&PLGA),polyanhydrid,polycaprolacton,polyalkyl- cyanoacryla(PACA).

+ Triglycerid mạch ngắn (12carbon).

+ Compritol 888® ATO:glycerol behenat lipid rắn, dùng nhiều trongchếphẩmtiêmvà dùngqua da,niêmmạc.

+Gelucire44/14:glyceridbãohòađượcpolyglycolhóac ó c h ứ a mono,dih ay triglyceridvàestechứa2acidbéocủap o l y e t h y l e n glycol.Gelucirecókhả năng làmtăngtínhthấmcủadược chấtquada.

Nhómnàykhôngđượcsửdụngphổbiếntrongchếtạohệnano.Trong một số trường hợp, dẫn chất cellulose có khả năng cải thiện tính thấm và hòatancủatiểuphândược chất.

Các polyme kết dính sinh học trong tiểu phân nano có thể làm tăng hấpthu thuốc do tương tác với niêm mạc hấp thu Khả năng kết dính phụ thuộcvàonhữngtươngtácgiữapolymevàlớpmàngnhày.N h ữ n g t ư ơ n g t á c k hôngđ ặ c h i ệ u d ự a t r ê n c á c t í n h c h ấ t v ậ t l ý c ủ a p o l y m e , n h ữ n g t ư ơ n g t á c đặc hiệu dựa trên liên kết của một số nhóm thế trongpolyme với những vị tríđặc hiệutrên màng nhày Quátrình kết dính gom 3g i a i đ o ạ n : đ ầ u t i ê n , polyme được thấm ướt và trương nở sau đó thấm vào lớp màng nhày thôngqual o n g g h é p c ấ u t r ú c k h ô n g g i a n g i ữ a p o l y m e v à c á c c h u ỗ i m u c i n v à cuối cùng là hình thành các liên kết yếu Sau khi liên kết được với lớp mucin,các polyme thân nước hấp phụ nước từ các mô nhày và các mô này mất nướcnên co rút lại, làm cho các khe liên bào tự nhiên được nới rộng ra do đó tăngkhảnăngthấmcủa thuốc [69].

Môi trường phân tán của hỗn dịch nano có thể chứa đầy đủ các thànhphầnnhưtronghỗndịchquyước bao gom:

- Chất gâythấm,gâyphân tán (chấtổn định)

- Một số tádược khácđượcthiếtkếphù hợpvớiđườngdùng

+Gâytê, giảmđauchohỗndịchtiêm Đa số các hệ nano có khả năng thấm tốt nên có thể không cần sử dụngchấtgâyt h ấ m n h ư n g chấtgâyp h â n tánđóngvaitròrấtquantrọngvì quyết định độ ổn định vật lý của hỗn dịch (tăng khả năng phân tán các tiểuphân trong môi trường và giảm hiện tượng kết tụ tiểu phân) Các chất ổn địnhthường dùngđượctrìnhbàyở bảng1.1 (trang17).

Trong hỗn dịch quy ước, pH có vai trò làm tăng độ ổn định và độ an toàncủa chế phẩm Đối với hỗn dịch nano, pH và chất điều chỉnh pH ảnh hưởngnhiều đến cấu trúc và đặc điểm của tiểu phân, đặc biệt là tiểu phân nano cóchất mang Nếu pH không thích hợp, chất mang có thể bị hòa tan, phân hủyhay biến tính làm phá vỡ cấu trúc ban đầu và thay đổi tác dụng điều trị củathuốc Các ion trong hệ đệm có khả năng hấp phụ hay tương tác với bề mặttiểu phân làm thay đổi thế Zeta và đặc điểm bề mặt do đó trực tiếp ảnh hưởngđến quátrìnhsalắngvà kếttụtiểuphântrongmôi trường phântán.

Các chất khác trong hỗn dịch cũng có thể ảnh hưởng đến tiểu phân nanonếu có thể phân ly thành ion: những ion trơ với bề mặt tiểu phân ít ảnh hưởngđến độ ổn định, những ion nhạy cảm với bề mặt tiểu phân cần chú ý đếnngưỡng keotụ.

Kỹthuậtbàochếhỗndịchnano

- Kĩt h u ậ t c h ế t ạ o h ệ n a n o b ằ n g c á c h p h â n c h i a ( t o p - d o w n ) : dùng các biện pháp thích hợp để làm nhỏ nguyên liệu thô thành các tiểuphântrongkhoảngkíchthướcnano.

- Kĩ thuật chế tạo hệ nano bằng cách kết tụ tiểu phân (bottom-up): bao gomnhững quá trình tạo những tiểu phân có kích thước nano từ những phân tửdượcchất [15],[48],[115],[121]

1.3.5.1 Kĩ thuật phân chiabằngphươngpháp cơhọc

Dượcchấtsiêumịnđược đưavàocác máy nghiềnb i c h u y ê n d ụ n g nănglượngcaoc hế từcácvậtnghiềnbicóchứ avậtliệunghiềnbềnchắc, đặcbiệtnhưthépkhôngrỉmạbềmặt,zirconiox yd,polystyren Tốcđộvà hiệu suất nghiền phụ thuộc vào độ bền cơ học của dược chất, vật liệu nghiềnvà tốc độquay của thiếtbị[48],[89],[115].Phương pháp nàyb a o g o m nghiền khô và nghiền ướt Phương pháp nghiền khô được áp dụng cho cácdượcchấtcócấutạobềnchắc,chịuđượcnhiệtđộcao(tiểuphânkimloạ i),sửdụngtrongnhữngtrườnghợp cầnthuđược chất dướidạng bộtkhô.

Phươngphápnghiềnướtđượcd ù n g p h ổ b i ế n h ơ n n g h i ề n k h ô v ì dượcchất ítbịtác độngcủanhiệtvàthờigiannghiền ng ắn , đongt hờ i trự ctiếp tạo ra dạng bào chế (hỗn dịch nano) Dược chất được nghiền trong môitrường lỏng chứa các chất ổn định Sau khi nghiền 30 đến 60 phút có thể thuđược hỗn dịch có kích thước tiểu phân trung bình dưới 200 nm[67] Môitrườnglà nước tinh khiết, với dược chất không bền trong nước có thể dùngmôi trường khan nước (dầu, PEG,

Miglyol 812 ).Sau khi nghiền, có thể chohỗnd ị c h q u a m á y đongn h ấ t h ó a đ ể đ o n g n h ấ t K T T P Đ ể t r á n h si n h n h i ệ t , máynghiềnthườngđược trangbịbộphậnlàmlạnhbênngoài.

Thựcc h ấ t , đ â y c ũ n g l à p h ư ơ n g p h á p n g h i ề n t r o n g m ô i t r ư ờ n g l ỏ n g , kếthợpnghiềnvàđongnhấthóatiểuphân.D ượ cchất rắ nđãchia nhỏđếnmột mức độ nhất định (cỡ micromet) đi qua một khe hẹp dưới áp lực cao đểđạt đến kích cỡ nanomet [48], [89], [115] Lực phân chia tiểu phân chủ yếu làlực nén ép, va đập Ngoài ra, hỗn dịch nano còn được bào chế bằng cácphươngphápkhác,vídụnhưh ỗ n d ị c h n a n o k i m l o ạ i t r o n g d ầ u , c ó t h ể thu được bằng cách bắn phá lá kim loại nhúng trong dầu bằng tia laser cócường độ thích hợp [126] Hỗn dịch nano tinh thể bào chế bằng phương phápvi hóa lỏng (microfluidization) khi bắn phá 2 dòng tia hỗn dịch ngược chiềunhaudướiáplực cao[67].

1.3.5.2 Kĩ thuậtkettinh từdungdịch Đặc điểm: dược chất và polymeđược hòa tan trong dung môi tạo thànhdungd ị c h C á c t i ể u p h â n n a n o đ ư ợ c k ế t t ủ a d o p h ả n ứ n g h ó a h ọ c h a y d o thayđổi dungmôi trongđiềukiệnkhuấytrộntốc độcao[9],[48],[63].

Kỹthuật kếttủa từdungdịchbaogomcác phương phápsau:

Nhũ hóa và bốc hơi dungm ô i , k ế t t ủ a d o t h a y đ ổ i d u n g m ô i , s ử d ụ n g d u n g môi siêu tới hạn, tự nhũ hóa hay khuếch tán dung môi, keo tụ hay gel ion hóa,phunsấy,hóamuối Trongsốđó,ngànhdượcthườngápdụngmộts ố phương phápsau:

- Dượcchấtthândầuvàp o l y m e h ò a t a n t r o n g d u n g m ô i t ạ o t h à n h phad ầ u P h ố i h ợ p t ừ t ừ p h a d ầ u v à o p h a n ư ớ c t r o n g đ i ề u k i ệ n thích hợp để hình thànhn h ũ t ư ơ n g d ầ u / n ư ớ c v ớ i k í c h t h ư ớ c g i ọ t r ấ t n h ỏ Tiếptheo, bốchơidungm ô i h ữ u c ơ đ ể t i ể u p h â n n a n o k ế t t ủ a l ạ i Với dược chất tan trong nước cần tạo nhũ tương kép (nước/ dầu/nước) trongquátrìnhbàochế.Phươngphápn à y đ ư ợ c á p d ụ n g r ấ t p h ổ b i ế n t r o n g công nghệ dược phẩm vì tạo ra các hệ tiểu phân nano gom dược chất kết hợpvớichấtmanglàm thay đổi đáng kể đặc tính sinhd ư ợ c h ọ c c ủ a d ư ợ c c h ấ t [48].

B ng 1 2 Một số công tr nh nghiên cứu bào chế hỗn dịch nanobằng phương phápnhũhóa và bốchơidung môi

Tác gi ,TLTK Natri diclofenac

Dược chất thân dầu được hòa tan trong dung môi thích hợp, sau đó phốihợp vào môi trường nước có chứa chất ổn định trong điều kiện thích hợp đểdược chất kiết tinh lại, hình thành hỗn dịch nano Phương pháp này thườngđược áp dụng để bào chế tinh thể nano, một số trường hợp đặc biệt có thể tạora nano cầu hay nano nang khi đưa thêm chất mang vào dung dịch dược chấthoặcmôitrườngnước.

Xia và cộng sự nghiên cứu bào chế hỗn dịch nitrendipin bằng phươngpháp kếttinh và thu được nitrendipinnano tinh thểKTTP209±9 nm,t h ế Zeta-13,9±1,9 mV[121].

Mokarram và cộng sự nghiên cứu bào chế hỗn dịch nano indomethacin(IND)bằngcách kết tủa IND trong dungdịchP V P ở c á c p H k h á c n h a u Tiểu phân IND/PVP có kích thước khoảng 100 - 150 nm.Khả năng hòa tancủaINDtronghệnanocao gấp4lần sovớinguyênliệudạngkếttinh[81].

Trong bào chế nguyên liệu nano, khí carbonic lỏng (CO2) siêu tới hạnthường được sử dụng theo nguyên tắc như sau: hòa tan dược chất trong

CO2ởáps u ấ t c a o t r o n g b ì n h k h í n é n , s a u đ ó x ả C O2đểg i ả m á p s u ấ t đ ộ t n g ộ t , dượcc h ấ t s ẽ b ị k ế t t ủ a l ạ i d ư ớ i d ạ n g si ê u m ị n h o ặ c h ò a t a n dược c h ấ t v à o dungmôiroi bơm vàoCO2siêu tớihạn, dungm ô i c h u y ể n s a n g C O 2l à m kết tủa dược chất [48] Một số dược chất đã được bào chế thành dạng nanonhờ CO2siêu tới hạn bao gom: indomethacin nano tinh thể (300 - 500 nm)[111], phenytoin nano tinh thể(75 - 200 nm)

[109], dexamethason natri sulfatnanonang (dượcchấtđượcbaobằngPLGA,kích thước70nm)[110].

Phương pháp tuy đơn giản nhưng tỉ lệ tiểu phân nano thu được sau khiphun sấy không cao Kích thước tiểu phân phụ thuộc vào điều kiện phun sấy(đườngkínhvòiphun,nhiệtđộbốchơi,khảnăngbayhơicủadungmôi, ).

Gabrielle Pilcer và cộng sự đã áp dụng phương pháp này để bào chế thuốc bộtxông hít tobramycin nano Với sự kết hợp của natri glycocholat, sản phẩmtạo ra cókíchthước tiểu phânkhoảng200nm[92].

Ngoài ra, hỗn dịch thu được sau khi nghiền, kết tủa và đong nhất hóacũng có thể đem phun sấy Khi cần, có thể cho tá dược tạo cốt vào hỗn dịchphun sấy để tạo siêu vi cầu mang dược chất Phương pháp phun sấy còn đượcdùngđểbao tiểu phân nano dượcchất làm chấtmang định hướng tớiđ í c h hoặc biến tính bề mặt để tránh nhận biết của hệ thực bào Phối hợp polymehoặcchấtbaovào hỗndịchtiểuphân rốiphunsấy[48].

1.4.1 Đặc điểmsinhlýliên quan đến hấp thuthuốcở mắt

Bệnh lý ở mắt rất đa dạng và phức tạp, một trong những hiên tượngthường gặp là viêm hay loét do nhiễm khuẩn, nhiễm virus hoặc ký sinh trùng,có thể xảy ra ở các bộ phận từ bờ mi, giác mạc, kết mạc đến võng mạc, kể cảcáctuyếnvàdịchBêncạnhđócòncócácbệnhvềkhúcxạ,khốiuvàbệnh mạch máu [2],[7]. Để điều trị bệnh ở mắt, có thể dùng thuốc tại chỗ, tiêm vào mắt hoặcdùng thuốc toàn thân Mỗi cách điều trị đều có những ưu nhược điểm nhấtđịnh, tuy nhiên, dùng thuốc tại chỗ vẫn là lựa chọn đầu tiên và đa số thuốcnhãn khoa đang được sử dụng là có tác dụng tại chỗ ở mắt (dung dịch, hỗndịch,nhũtương,thuốcmỡ)

Thuốc tác dụng tại chỗ ở mắt có sinh khả dụng thấp do các đặc điểmsinh lýtựnhiêncủamắtnhư:

- Cấutạo củahệthốnggiácmạc,kếtmạc(hạn chếhấp thuthuốc). Đểl à m t ă n g s i n h k h ả d ụ n g c ủ a t h u ố c n h ỏ m ắ t , c á c n h à k h o a h ọ c đ ã

THUOCNHÃN KHOABÀOCHETỪ HNANO 25 1 Đặcđiểmsinhlýliênquanđếnhấpthuthuốcởmắt

Thuốctác dụngtạimắtbàochếtừhệnano

Gần đây, nhiều công trình nghiên cứu đã ứng dụng công nghệ nanotrong phát triểncác thuốctác dụng tạichỗởm ắ t Đ â y l à n h ữ n g c h ế p h ẩ m được bào chế từ nguyên liệu kích thước nano, chủ yếu là dược chất ton tạidưới dạng nano tinh thể, nano polyme, nano lipid rắn và liposom. Chế phẩmbào chế dựa trên hệ nano có thể làm tăng bám dính thuốc trên niêm mạc mắt,tăng thấm qua giác mạc và đi sâu vào các bộ phận trong mắt Khả năng bámdính hay thấm sâu phụ thuộc vào kích thước, cấu trúc và bề mặt của tiểu phânnano.

Nano tinh thể dễ chế tạo được tiểu phân kích nhỏ Độ tan và tốc độ hòatan của dược chất tăng nên có thể hấp thu tốt hơn Bào chế hỗn dịch thuốcnhỏmắt,mỡ, kem,gel tram ắ t t ừ d ư ợ c c h ấ t n a n o t i n h t h ể r ấ t t h u ậ n t i ệ n , đặcbiệt làthuốctiêmtrựctiếp vàotừng vịtrí cụthểtrong mắt[22].

Alivàcộngsựnghiêncứuhỗndịchnhỏmắtchứananotinhthểhydrocortison nhận thấy hỗn dịch nano có sinh khả dụng cao gấp đôi so vớidung dịchvàduytrìtác dụng ởmắttới9giờ[19].

Polymekếthợpvớidượcchấttrongcùngmộttiểuphânlàmchochúng có khả năng kết dính tốt trên niêm mạc Các polyme giúp giải phóng thuốckéodài,duytrìnongđộd ư ợ c c h ấ t ổ n đ ị n h t r ư ớ c g i á c m ạ c t r o n g s u ố t thời gian lưu thuốc Một số polyme tạo lớp áo điện tích dương cho tiểu phântạon ê n t ư ơ n g t á c t ĩ n h đ i ệ n v ớ i c á c i o n đ i ệ n t í c h â m tr o n g l ớ p m u x i n t r ê n bề mặt niêm mạc mắt nên làm tăng bám dính và hấp thu thuốc [18], [22].Bhatta và cộng sự nghiên cứu bào chế hệ tiểu phân kết hợp giữa natamycin,lecithin và chitosan thu được sản phẩm có KTTP 213 nm, thế Zeta +43 mV.Đánh giá trên mắt thỏ, các tác giả nhận thấy sinh khả dụng của hỗn dịch nanocao gấp 1,47 lần so với hỗn dịch trên thị trường và tốc độ thanh thải thuốcgiảm7,4lần[26].

Với những dược chất thân nước rất khó thấm qua giác mạc, việc chế tạohệ tiểu phân nano lipid đã chuyển dược chất sang dạng thân lipid nhờ liên hợpvới các nhóm este hay amid Về bào chế, có thể kết hợp một số thành phầnlipid khác nhau trong cấu trúc của tiểu phân để cải thiện nhiều hơn khả năngthấm của thuốc Hơn nữa, có thể biến đổi bề mặt tiểu phân nanolipd rắn bằngcách kết hợp với polyme hay chất diện hoạt để tăng sinh khả dụng và đưathuốc tới đích hoặc duy trì giải phóng thuốc kéo dài từ vài ngày đến vài tháng[102] Luo và cộng sự nghiên cứu tác dụng của hệ tiểu phân nano chứaflubriprofentrênmắtthỏ.Dượcc h ấ t d ư ợ c c h ế t ạ o t h à n h n a n o l i p i d r ắ n với Glucire, Compritol ATO 888 và Miglyol 812 Tiểu phân nano lipid sau đóđược bao ngoài bởi chitosan. Màng bao này khiến cho thế Zeta của tiểu phântăng từ -0,446 mV lên đến +20,7 mV, thời gian thải trừ thuốc trước giác mạcchậmđinhiều,AUC tăng7,7lầnvàhệ sốthấmtăng2,4 lần[72].

Do có cấu trúc nhân lỏng và lớp phospholipid bao ngoài gần giống vớiniêm mạc nên tiểu phân liposom rất linh hoạt, có khả năng phân giải sinh họcvàtươnghợpsinhhọc,bám dínhtốttrêngiácmạc.Tùythuộcvàothànhphần vỏ lipid, liposom có thể tích điện âm, tích điện dương hoặc trung tính, có thểvừa thân nước vừa thân dầu, khả năng thấm qua giác mạc tốt Ngoài ra,liposom còn có khả năng bảo vệ dược chất tránh được sự phân hủy của enzymtrong màng nước mắt Hơn nữa, có thể biến tính bề mặt liposom bằng polymehay chất diện hoạt để cải thiện nhiều hơn sinh khả dụng của thuốc [22], [78].Hosny và cộng sự nghiên cứu bào chế gel thân nước chứa nano liposomciprofloxacindùngchonhãnk h o a K h i đ á n h g i á s i n h k h ả d ụ n gi n v i t r o (sử dụng giác mạc mắt thỏ bóc tách), khả năng thấm ciprofloxacin từ gel chứaliposomcao gấp5lần sovớidung dịchciprofloxacin[53].

Đánhgiá tácdụngcủa thuốc nanotrên mắt

Bột đông khô hay chế phẩm chứa dược chất nano (kem, gel) được đặttrong túi thẩm tích hoặc đưa trực tiếp hoặc vào môi trường (dung dịch đệmphosphat pH 6,8-7,4 hoặc dung dịch nước mắt nhân tạo pH 7,4) ở điều kiệnnhiệt độ 37 O C, tốc độ khuấy xác định Sau từng khoảng thờig i a n x á c đ ị n h , hútd ị c h m ô i t r ư ờ n g , l ọ c q u a m à n g l ọ c c e l l u l o s e a c e t a t k í c h t h ư ớ c l ỗ l ọ c 20 nm roi định lượng dược chất bằng phương pháp thích hợp.Một số côngtrìnhnghiên cứ uđãsửdụngphươngphápnàyđểsơbộkhảosát xuhư ớnggiảip hó ng d ư ợ c c h ấ t t ừ h ệ n a n o tr ư ớ c kh i t h ử t r ê n m à n g s i n h h ọ c h a y thửinvivovídụnhư:hệnanopiroxicam/EudragitRS100[15],diclofenac/Eudragit

1 4 0 0 0 D a đ i q u a M ô i t r ư ờ n g k h u ế c h t á n l à nước tinh khiết, dung dịch đệm pH 6,8-

7,4 hoặc dung dịch nước mắt nhân tạoởnhiệtđộ37 O C,tốcđộkhuấythíchhợp.Địnhlượngdượcchấtgiảiphó ngquamàng sautừngkhoảngthờigianbằng phươngpháp HPLC.Cách đánh giá này được áp dụng trong một số nghiên cứu như: hỗn dịch nano amphoterecinvàEudragitRS100[39],hỗndịchnanocyclosporin/PLGA/Eugragit RL100/Carbopol [18],pilocarpin/PLGA/chitosan[124].

Nhiều công trình nghiên cứu cho rằng tiểu phân mang điện tích dươngcó khả năng kết dính và thấm sâut r o n g m ắ t S ở d ĩ n h ư v ậ y l à d o t ư ơ n g t á c tĩnhđ i ệ n g i ữ a c á c t i ể u p h â n n à y v ớ i l ớ p m u c i n m a n g đ i ệ n t í c h â m t r ê n niêm mạc Một số nhà khoa học đã đánh giá tương tác này bằng phương phápđo độ đục hay đo thế Zeta của tiểu phân khi đưa chúng vào hỗn dịch mucintrong nước (0,1%) Tiểu phân mang điện tích dương làm tăng mạnh độ đụccủahỗndịchmucinsovớit i ể u p h â n m a n g đ i ệ n t í c h â m T h ế Z e t a c ủ a tiểuphân sụt giảmmạnh sau khigắn kếtvới muxin[75],[98],[124].

Với thiết bị bình khuếch tán Franz, một số công trình nghiên cứu đãđánh giá được khả năng thấm của thuốc qua giác mạc khi cố định giác mạcbóc tách từ động vật vào vị trí tiếp giáp giữa ngăn đặt mẫu và môi trườngkhuếch tán Giác mạc nguyên vẹn phải được bóc tách từ mắt động vật trongvòng 25-30 phút kể từ khi súc vật chết và thử ngay trong vòng 1 giờ sau đó(thường dùngmắtlợn,dê,cừu,thỏ ).

Bãng 1 3 Một số nghiên cứu về tính thấm của hỗn dịch nanotrêngiácmạc động vật đã bóctách ( ex vivo )

4 Cyclosporin/phospholipid/chitosan lợn Sandri[99]

 Việc dự đoán sinh khả dụng, dược động học hay tác dụng dược lý củathuốctrên mắt ngườidựa trênsốliệutừkếtquảthửnghiệmtrên động vật.

 Đas ố c á c n g h i ê n c ứ u đ á n h g i á s i n h k h ả d ụ n g c ủ a t h u ố c n h ỏ m ắ t ở động vật được tiến hành trên mắt thỏ Sở dĩ như vậy vì một số tác giả đãcông bố rằng giác mạc mắt thỏ và giác mạc mắt người gần giống nhau vềcấu tạo giải phẫu và các thông số sinh lý cơ bản (bảng 1.4) Ngoài ra, việcnghiên cứucònđượcthựchiệntrênmắtdê, lợn,hoặc cừu.

 Đánh giá sinhkhảdụngcủathuốctrên mắtcómộthạnchế lớn đól à lượng mẫu lấy được từ mỗi thời điểm rất ít và rất khó lấy mẫu mà khônggây tổn thương cho mắt Cách đánh giá sinh khả dụng của thuốc nhỏ mắtrất phongphú,baogomcác phươngphápsau:

- Địnhlượngdượcchấtởmộtsốmôt r o n g mắt(giácmạc,kếtmạc, củng mạc,võngmạc ).

Bãng 1 4 Một số đặc điểm giãi phẫu, sinh lý của mắt người và mắt thỏ[73]

Tốcđộ chớp mắt tựphát 4-5lần/giờ 6-15lần/phút

Màngnhấpnháy có không pHnướcmắt 7,14 –7,82 Áp suấtthẩmthấu củanước mắt 305mOsm/l

Bềdàygiác mạc(nm) 0,40 0,52 Đườngkínhgiácmạc(nm) 15 12

 Định lượng dược chất trong thủy dịch mắt để xác định lượng dược chấtthấmquagiác mạc.

0 0 b ằ n g c á c h định lượng dược chất trong thủy dịch mắt thỏ sau khi nhỏ thuốc Thủy dịchđược trộn với đong thể tích dung dịch kẽm sulfat 2%, ly tâm lấy dịch, lọc quamànglọcteflon0,2àm,địnhl ư ợ n g h o ạ t c h ấ t t r o n g t h ủ y d ị c h b ằ n g phương pháp HPLC Kết quả thử nghiệm cho thấy hỗn dịch nano acyclovir cósinhk h ả d ụ n g c a o g ấ p đ ô i d u n g d ị c h v à k h ả n ă n g b á m dínhc ủ a t h u ố c v ớ i giácmạc tốthơn[38].

Tương tự như trên, Wu và cộng sự đánh giá sinh khả dụng của hỗn dịchnano mycophenolat/chitosan Kết quả định lượng dược chất trong thủy dịchchỉ ra rằng hỗn dịch chứa tiểu phân nano được bao chitosanthấm rất tốt quagiác mạc So với hỗn dịch quy ước, AUC và Cmaxcao gấp 4 lầnvà 3 lần, thờigianlưuthuốctrướcgiác mạc tăng4 lần[120].

Basaran và cộng sự đánh giá sinh khả dụng của hỗn dịch nano lipid rắncyclosporin dựa vào nong độ dược chất trong thủy dịch mắt cừu Các tác giảnhậnt h ấ y r ằ n g t i ể u p h â n n a n o l i p i d c ó k í c h t h ư ớ c 2 4 8 n m v à t h ế Z e t a

+50 mV làm cho dược chất bám dính và thấm sâu hơn trong mắt, vì thế nongđộ dược chất trong thủy dịch và dịch kính sau 48 giờ vẫn rất cao Trong khiđó, nếu dùng nhũ tương thông thường hay hỗn dịch nanocyclosporin – chitosan,nongđộdượcchấtgiảmsau 2giờ đến8giờ[25].

Ngoài phương phápđịnh lượng dược chất trực tiếp từ thủy dịch, một sốnhà nghiên cứu đã sử dụng phương pháp vi thẩm tích để đánh giá khả năngthấm thuốc qua giácmạc Cụ thể như sau: đặt vào tiền phòng mắt thỏ mộtmàngt h ẩ m t í c h Đ ặ t ố n g m a o d ẫ n v à o d ư ớ i k ế t m ạ c , n h ỏ t h u ố c v à o m ắ t Nước muối sinh lý được dẫn vào tiền phòng qua mao quản, dịch thẩm tíchđượchútrađềuđặnsautừngkhoảngthờigiannhấtđịnhvàđịnhlượngdược

Ong vi mao quản Thủy dịch chất bằng phương pháp HPLC Phương phápnày được áp dụng để đánh giásinh khả dụnghỗn dịch cyclosporin trong nghiên cứu của Aksungur [16], hỗndịch dexamethasol trong nghiên cứu của Gan [43] và hỗn dịch nano ibuprofentrong nghiêncứucủaZurMulen [128]vàLi[68].

Hình 1 3 Mô hình đánh giá khã năng thấm của dược chất qua giác mạcbằng phươngpháp vithẩmtích

 Định lượng dược chất ở một số mô trong mắt (giác mạc, kết mạc, củngmạc,võngmạc ).

Ngoài việc định lượng dược chất trong thủy dịch, để đánh giá hiệu quảsử dụng thuốc, dược chất còn có thể được chiết tách và định lượng từ các môcủa mắt (giác mạc, kết mạc, củng mạc ) Nếu áp dụng phương pháp này, mỗithỏ chỉcóthểlấymẫuđược1lần

FK-506 là một thuốc ức chế miễn dịch chủ yếu được sử dụng sau khicấyghépnộitạngđểlàmgiảmnguycơđàothải.Feivàcộngsựđãchếtạo hện a n o F K 5 0 6 v ớ i P L G A v à đ á n h g i á k h ả n ă n g t h ấ m v à l ư u t h u ố c t r ư ớ c giác mạc bằng cách định lượng dược chất trong máu và một số bộ phận củamắt thỏ.K ế t q u ả c h o t h ấ y d ư ợ c c h ấ t t ậ p t r u n g n h i ề u ở g i á c m ạ c v à k ế t m ạ c , có trong thủy dịch và màng bo đào rất ít Các tác giả đã không phát hiện thấydượcchất trongmẫumáu.Đểxác địnhhiệuquả chốngthảig h é p , n h ó m nghiêncứusosánhtácdụngcủa4 sảnphẩmtrênthỏđãcấyghépgiácm ạc bao gom: dung dịch đệm phosphat đang trương, hỗn dịch chứa nano cầuPLGA,h ỗ n d ị c h n a n o F K 5 0 6 / P L G A , h ỗ n d ị c h d e x a m e t h a s o n 0 , 5 % Kết quả là hỗn dịch nano FK506/PLGA chống thải ghép tốt nhất và tác dụngkéo dàinhất[44].

Một số thuốc có tác động đến nhãn áp đã được đánh giá sinh khả dụngbằng sự thay đổi nhãn áp sau khi dùng thuốc Ví dụ như hydrocortison [19],Alivàcáccộng sự nhận thấy:hỗnd ị c h n a n o h y d r o c o r t i s o n l à m t h a y đ ổ i nhãn áptrong8-9giờcònhỗndịchthường khoảngthờigiannàylà 5giờ.

Phương pháp đánh giá như trên cũng được áp dụng trong nghiên cứuhỗn dịch nano dexamethason/chitosan/Pluronic F127 [90] Thuốc chống tăngnhãn ápdạng hỗndịch gelchứananoForskolin[49].

 Gâyviêmtrênmắt sau đó dùngthuốcđểđánh giáhiệu quảđiềutrị.

Adibkia và công sự đã đánh giá tác dụng chống viêm của hỗn dịch nanopiroxicam/Eudragit RS 100 bằng cách tiêm vào thủy tinh thể cả hai mắt thỏnội độc tố vi khuẩn (dung dịch lypo poly saccarin (LPS) phân lập từ chủngSalmonella typhimuriumgâybệnh viêmmàng bođào trênngười).

VÀPHƯƠNG PHÁPNGHIÊNCỨU

Nguyên liệu

Súc vật thí nghiệm: thỏ khỏe mạnh, cân nặng 2,5-3,0 kg, không có bấtcứ dấu hiệu bất thường nào trên mắt Thỏ được cung cấp từ Cơ sở chăn nuôiđộng vậtthí nghiệm(G1)–Viện Kiểmnghiệmthuốctrungương.

Thiếtbị

- Máyđong nhất hóaUNI-DRIVE(Đức).

- Cânphântích,cânkỹthuật,thiếtbịlọcvàmộtsốdụngcụthínghiệm,thiếtb ịbàochế,phântíchkhác.

PHƯƠNGPHÁP NGHIÊNCỨU 37 1 Phươngphápbàochế piroxicamnano

Piroxicam nano tinh thể được bào chế bằng phương pháp kết tinh dothayđổidungmôi,mỗimẻbàochếthựchiệnvới100-

200mgpiroxicam,100 mlmôi trường phân tán,cácthành phần tádượctrình bàyởbảng2.2.

- Dung dịch dược chất: hòa tan piroxicam và tá dược khác (nếu có) vào hỗnhợpd u n g m ô i ) L ọ c q u a m à n g l ọ c p o l y t e t r a f l u o r o e t h y l e n ( P T F E ) , kớchthướclỗlọc0,2àm(dungdịchA).

- Môi trường phân tán: hòa tanP V A t r o n g n ư ớ c t i n h k h i ế t , l ọ c q u a m à n g lọc cellulose acetat kớch thước lỗ lọc0 , 2 à m ( d u n g d ị c h B ) , l à m l ạ n h (nhiệt độtừ-2đến0 0 C).

- Nhỏ giọt dung dịch A vào dung dịch B trong thời gian 5 phút (tốc độ1ml/ phút) Làm lạnh môi trường liên tục bằng hỗn hợp đá muối, nhiệt độđược kiểm soát trong khoảng khảo sát (0-20 0 C) Khuấy trộn liên tục bằngmáy khuấy từ, tốc độ khuấy khoảng 900 vòng/phút trong suốt thời gianphối hợp2dungdịch.

- Tiếp tục khuấy trộnbằng một thiết bị khác (siêu âm, máy đong nhất hóa)trong 5phút.

- Loại dung môi dicloromethan bằng cách bốc hơi ở nhiệt độ phòng kết hợpvới khuấytừkhoảng400vòng/phút,trong24giờ.

- LoạidungdịchPVAbằngc á c h lytâm15000vòng/phúttrong15ph út

- Loại nước bằng cáchđông khô, dùng 2% tá dược tạo khung (manitol,sorbitol,glucosse,PVA),tỷlệpiroxicam1%

+Giaiđoạnđônglạnh:nhiệtđộ-70 0 C,thời gian6giờ.

+ Giai đoạn làm khô sơ cấp: nhiệt độ -15 0 C, tốc độ gia nhiệt 0,5 0 C/ phút,lưu20giờ.

+Giaiđoạnlàmkhôthứcấp:nhiệtđộ3 0 0 Cv ớ i t ố c đ ộ g i a n h i ệ t 0,25 0 C/ phút,lưu8giờ,ápsuất0,5-0,6 mbar.

Hệ nano piroxicam-Eudragit (RS 100, RL 100, S100) được bào chếbằngphươngphápnhũhóavàbốchơidungmôi.Mỗimẻbàochếthựchiệnvới100 mg piroxicam, môi trường phân tán 100 ml, các tá dược khác trình bày ởbảng2.3.

- Dung dịch dược chất và polyme: hòa tan piroxicam, Eudragit(RS100,RL100,S100)vàtádượckhác(nếucó)trong7,5mlh ỗ n h ợ p ethanolvàdicloromethan theotỷlệ1:2(dungdịchC).

- Môi trường phân tán: hòa tan PVA trong nước (nong độ thay đổi theomụcti êu k h ả o sá t) , lọcq ua mà ng lọ cc el lu lo se a c e t a t k íc ht h ư ớ c lỗ lọc0,2 àm(dungdịchD), làmlạnhở nhiệtđộtừ-2 0 C đến0 0 C.

- Nhũhóat ừ t ừ d u n g d ị c h C v à o d u n g d ị c h D t r o n g 5 p h ú t ( t ố c đ ộ 1,5ml/phút).L à m l ạ n h b ằ n g h ỗ n h ợ p đ á m u ố i , d u y t r ì n h i ệ t đ ộ trongkhoảngkhảosát(0-20 0 C).Khuấy trộnliênt ụ c t r o n g t h ờ i g i a n phốihợphaidungdịch.

- Loại dung môidicloromethanvàethanolbằng cách bốc hơi ở nhiệt độphòngkết hợpvớikhuấytừkhoảng400 vòng/phút,trong 24giờ.

- Loại dung dịch PVA bằng cách ly tâm với tốc độ 15000 vòng/phút trong30phút.Rửaphầncắn3lầnbằngnướctinhkhiết.

- Loại nước bằng cách đông khô,dùng 2% tá dược tạo khung (manitol,sorbitol, glucosse, PVA), tỷ lệ piroxicam 1%.Quá trình đông khô đượcthựchiệnvớicác thôngsốkỹthuậtnhưtrìnhbàyởmục2.2.1.1.

2.2.1.3 Khảosát cáce u tố ảnhhưngđensh nhthànhpiroxicamnano

Thay đổi thành phần, tỷ lệ tá dượcvà các yếu tố kỹ thuậtt r o n g q u y trình, đánh giá kích thước tiểu phân sau khibào chế, căn cứ vào đó để lựachọntá dượcvà thôngsốkỹthuậtthíchhợp.

Nguyên tắc: chùm điện tử quét trên bề mặt của mẫu được thu lại bởi cácđầu dò để biến đổi thành những tín hiệu phản ánh bề mặt, thành phần của mẫuđưa ra màn hình quan sát Do cách tạo ảnh, các ảnh SEM có đặc điểm của ảnh3chiều.

Sử dụng kính hiển vi điện tử FEI Quanta 200 có độ phóng đại M x- 800000x;độphângiảiδ=1,0 nm;điện áp gia tốcU=0,5-30kV.

Chuẩn bị mẫu: piroxicam được sấy khô, mẫu sau đó được đưa lên khaynhôm nhỏ, và được bao phủ bởi một lớp platin mỏng trong môi trường khíargonbằngthiếtbị chuyêndụng.

 Xácđịnh kích thướcbằngphương pháp tánxạlaser

Nguyên tắc: khi chiếu chùm tia laser vào các tiểu phân có kích thướckhác nhau sẽ thu được mức độtán xạ ánh sáng khác nhau Dựa vàom ứ c đ ộ tán xạ của chùm tia sau khi va chạm vào tiểu phân ta có thể tính được KTTPtheothuyếtMie.

Thiết bị đo:máy phân tích KTTP Zetasizer ZS 90 (Malvern) đo KTTPtrong khoảng0,011-3,000 μm.m. Điều kiện đo: Pha hỗn dịch đến nong độ dược chất khoảng 0,005% Hệsốtánxạánh sángcủa Eudragitl à 1,71,piroxicamlà 1,33.

Phép đo cho kết quả kích thước trung bình của các tiểu phân, mức độđong đều KTTP thể hiện ở chỉ số đa phân tán (PDI) KTTP được phân bốtrong khoảnghẹpnếuPDI≤0,3.Côngthức tính PDI nhưsau[100]:

Trongđó: PDIlàchỉsốđaphân tán là độ lệch chuẩn KTTP giữa các lần đod là KTTP trungbình

Phân bố giữa dược chất và tá dược được xác định bằng hình ảnh chụpquakính hiểnvi điệntửtruyềnqua(ápdụng chotiểu phânnanopolyme)

Trạng thái kết tinh của dược chất được xác định bằng phương phápnhiễu xạ tia X (X-ray):các mẫu được nghiền mịn, đặt vào khay kim loại đưavào thiết bị chiếu tia X với bước sóng tia X tới từ bức xạ Kacủa đong kim loại(Cu) làλCu= 1,5405A 0 , cường độ dòng điện 30 mA, điện áp 40 kV, góc quéttừ5 0 -60 0 ,tốc độquét2 0 /phút.

Thế Zeta được xác định gián tiếp thông qua linh độ điện di của tiểuphân nano khi đặt trong điện trường Tốc độd i c h u y ể n c ủ a t i ể u p h â n đ ư ợ c xácđịnh thông qua việc sosánhs ự s a i k h á c v ề p h a g i ữ a á n h s á n g t á n x ạ (tia thử) và ánhsáng từ nguon lade (tia chuẩn) nhờ ứng dụng định luậtDoppler Hỗn dịch chứa piroxicam nano được pha loãng đến nong độ 0,005%trướckhiđưavàomáyđo.

F i s c h e r , tiến hànhtheoPL-10.3,Dược điểnViệt NamIV.

Phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao được sử dụng để định lượngpiroxicam Qua tham khảo tài liệu [32], [114], điều kiện sắc ký được lựa chọnnhưsau:

- CộtZorbax SB-C18,150 x4,6mm,kớchthướchạtnhoi5 àm.

- Pha động: Methanol : dung dịch đệm citro-phosphat (55:45), pha độngđược lọc qua màng lọc 0,45 àm, siờu õm 15 phỳt pH của pha độngtrong khoảng4,9-5,0.

Dung dịch đệm citro-phosphat: Trộn dung dịch (1) gom 13,49g natridihydrophosphatdodecahydrat(tươngứng5 , 3 5 g dinatri hydrophosphat) trong 100 ml nước vào dung dịch (2) gom 8,45g acidcitricm o n o h y d r a t ( t ư ơ n g ứ n g 7 , 7 2 g a c i d c i t r i c ) t r o n g

4 0 0 m l n ư ớ c , thêmnước cấtvừa đủ1000ml. Điều kiện sắc ký: tốc độ dòng: 1,0 ml/phút, thể tích tiêm mẫu: 20 àl,detectorUV,đoởbướcsúng254nm.

Cânchínhxáckhoảng25,0mgpiroxicamchuẩn,hòatantrongmethanol vừa đủ 50 ml Lấy 1 ml dung dịch này pha loãng 10 lần bằngmethanol chứa 0,01 N acid hydrocloricđược dung dịch có nong độkhoảng 50àg/ml.Lọc quamànglọc0,45 àm.

- Cân chính xác lượng mẫu thử (bột đông khô piroxicam) tương ứng với25 mg piroxicam, hòa tan trong methanol vừa đủ 50 ml, siêu âm 5 phút.Lấy dung dịch này pha loãng 10 lần bằngdung dịchmethanolc h ứ a 0,01Nacidhydrocloric.Lọcqua mànglọc0,45àm.

- Tiêmlầnlượtdungdịchchuẩnvàdungdịchthửlênhệthốngsắcký,g hi lại sắc ký đo Dựa vào diện tích píc, lượng cân chuẩn, hàm lượngchuẩn,hệsốphaloãngtínhrahàmlượngpiroxicamtrongchếphẩm.

- Cho bột piroxicam nguyên liệu trong 50 ml dung môi (1g piroxicam vớiDCM, 400 mg với aceton, 250 mg với PEG 400, 50 mg với ethanol)hoặc bột nano đông khô

(tương ứng khoảng 20 mg piroxicam) trong 50mlnước cất,khuấybằngmáykhuấytừở25 0 Cđếnbãohòa.

- Hút 1ml dịch sau khi ly tâm, thêm dung dịch methanol chứa 0,01N acidhydrochloric vừa đủ 10 ml Xác định lượng piroxicam hòa tan bằngphương phápHPLC.

- Sử dụng thiết bị cánh khuấy với tốc độ 100 v/ph Môi trường 900 mlnướccấtở nhiệtđộ:37±0,5 0 C.

- Mẫu nano piroxicam sau đông khô được cân chính xác với lượng dượcchất tương ứng khoảng 50 mg piroxicam Sau từng khoảng thời giannhất định trong vòng 6 giờ, hút 5 ml dung dịch (có bổ sung 5 ml nướcvào môi trường) Ly tâm 15000 vòng/phút trong 30 phút Hút 1 ml dịchsau khi ly tâm, thêm dung dịch methanol chứa 0,01N acid hydrochloricvừa đủ 10 ml Định lượng piroxicam trong dịch pha loãng bằng phươngphápHPLC.Lượng piroxicamhòatan đượctính theobiểuthứcsau:

Qt: tổng lượng piroxicam đã hòa tan tại thời điểm thứ t

(àg)V: thểtớch mụitrường khuếchtỏn (ml) v:thểtích mỗi lần lấymẫu thử(ml)

Phân tán bột đông khô nano vào môi trường nước cất, theo dõi đến khitoàn bộ tiểu phân lắng xuống.L ấ y l ớ p d ị c h t r ê n c ủ a m ô i t r ư ờ n g p h â n t á n đ ể đo KTTP Thời gian sa lắng hoàn toàn được xác định khi trong lớp dịch nàyKTTPtrungbìnhđ o được dưới10nm.

% , nuôi cấy trong môi trường thioglycolat không có thạch và môi trường caseinđậu tương lỏng, áp dụng cả phương pháp cấy trực tiếp và phương pháp dùngmàng lọc Thành phầnmôi trườngvà quá trình nuôic ấ y t h ự c h i ệ n t h e o chuyên luận “Thử vô khuẩn” ghi trong PL-266 của Dược điển Việt Nam IV.Theodõivà đánhgiákếtquả sau14ngày.

Tiệt khuẩn tất cả các dụng cụ, thiết bị sử dụng trong bào chế bằng cácphương phápthíchhợp.

- Ngâmtrương nở HPMC(nongđộ0,1%)trongnướccấtphatiêm.

- Hòatantrongnướccấtphatiêmcácthànhphầngom:hệđệm,chấtbảoquản,ch ấtđangtrương.

- Tiệtkhuẩnbằngcáchlọcdungdịchquamànglọccelluloseacetatkíchthướcl ỗlọc 0,2àmhoặchấpở 120 0 C trong20phỳt

- Bốchơidung môitrong24giờở điều kiệnvôkhuẩn.

- Phân tán hệ tiểu phân nano vào dung dịch manitol đã lọc loại khuẩn sauđóđôngkhôvớicácthôngsố kỹthuậtnhưtrìnhbàyởmục 2.2.1.1.

Sử dụng máy đo độ nhớt DV-E Brookfield, phương pháp đo dựa trênnguyêntắcc ủ a n h ớ t k ế q u a y v ớ i c á c t h ô n g s ố : s ố k i m S 6 4 , t ố c đ ộ quay100vòng/phút,nhiệtđộ25 0 C.

Sảnphẩm đôngkhônanopiroxicam đượcđựngtronglọt h ủ y t i n h không màu, đậy nút cao su và nắp nhôm, bảo quản trong 1 năm ở điều kiệnthực (trong phòng thí nghiệm với nhiệt độ 15-35 0 C, độ ẩm 50-90%) và điềukiệnlãohóacấptốc(trongtủ vikhí hậu,nhiệtđộ40±2 0 C,độẩm75±5%).

Sau từng khoảng thời gian 3 tháng, lấy mẫu đánh giácác đặc tínhc ủ a hệ nano bao gom: KTTP,h à m l ư ợ n g d ư ợ c c h ấ t , h à m ẩ m , đ ộ t a n v à đ ộ h ò a tan.Đánhgiá lạicấutrúc tiểuphânsau 1năm.

Phân tán piroxicam nano đông khô trong môi trường phân tán của hỗndịch nhỏ mắt Bảo quản ở điều kiện thực trong vòng 1 tháng sau đó đánh giálạihàmlượngdược chất,kíchthước tiểuphânpiroxicam.

- Thiết bị:hệthốngthửgiải phóngquamàngHanson Research.

Công thức pha nước mắt nhân tạo như sau:Natri clorid 6,70g

- Mẫuthử: hỗndịchhoặcdung dịch piroxicam0,5%,thểtích thử1ml

+Màng sinh học: giác mạcbóctáchtừmắt thỏ.

- Lấy mẫu: sau mỗi giờ, lấy 1 ml môi trường, bổ sung 1 ml môi trườngkhuếchtánmớivàtiếnhànhthínghiệmtrong6giờ.Địnhlượngpiroxicamg iải phóngbằngphương phápsắckí lỏng hiệu năngcao.

- So sánh trực tiếp với dung dịch piroxicam chuẩn đã biết trước nong độ,tínhl ư ợ n g d ư ợ c c h ấ t g i ả i p h ó n g v à h ấ p t h u q u a m à n g t ạ i t ừ n g t h ờ i điểmtheocôngthứcsau:

Qt: Tổng lượng piroxicam đã giải phóng tại thời điểm thứ t

(àg)V:Thểtớch mụitrườngkhuếchtỏn(ml) v:Thểtích mỗilầnlấymẫu thử(ml)

Saukhilấytừmắtthỏ,thủydịchđượctrộnđonglượngvớimethanol,để yêntrong1giờ,lytâmvớitốcđộ13000vòng/phút.Dịchtrongsaukhily tâm được định lượng bằng phương pháp HPLC trình bày ở mục 2.1.2.5.Quytrình thẩm định phương pháp định lượng được tiến hành theo hướng dẫn củaFDA. b- Tínhđặchiệu

Chuẩnbị6 m ẫ u t h ủ y dịch trắng có nguongốc khácnhau

BÀOCHEP I R O X I C A M N A N O TINHTHỂ 51 1 Nghiêncứubàochếpiroxicamnanotinhthể

- Khuấybằngmáykhuấytừ(900vòng/ phút)trong5phútsauđókhuấyvới máykhuấytốc độcao(10000vòng/phút) trong5 phút.

- Đôngkhô hỗn dịch chứa1%p i r o x i c a m v à 2 % manitol.

Piroxicam nano tinh thể ở dạngđông khô được chụp bằng kính hiển viđiện tử quét (SEM) Quan sát hình ảnh thu được, có thể thấy hệ nano gom cáctiểu phân dạng phiến mỏng hình thoi hoặc oval, bề mặt nhẵn, viền cạnh phangmịn(hình3.5).

Phântíchkíchthướchạtb ằ n g p h ư ơ n g p h á p t á n x ạ l a s e r , h ệ n a n o sau khi chế tạo gom các tiểu phân có kích thước trung bình 277,6 ± 10,2 nm,PDI0,172 ±0,029(phụlục1.1).

Các mẫu piroxicam nguyên liệu, piroxicam nano được đo phổ nhiễu xạtiaX ( X - r a y) t r o n g c á c đ i ề u k i ệ n n h ư gh i ở m ụ c 2 2 2 2 K ế t q uả đ ư ợ c t h ể hiệntro nghình3.6và 3.7.

Hình3.7.Phổnhiễuxạ tia Xcủa piroxicamnanotinhthể

Phổ X-ray của piroxicam nano chứa đầy đủ các píc có trên phổX-raycủa mẫu nguyên liệu nhưng với cường độ thấp hơn một chút Điều này chứngtỏsảnphẩmtạoracócấutrúctinhthể.MặcdùKTTPnhỏ,chúngvẫnlàcác tinh thể nano, không phải bột vô định hình Kết quả này phù hợp với nghiêncứu của Dengning Xia và cộng sự khi đánh giá nano nitrendipin chế tạo bằngphương phápkếttủa[121].

Tiểuphânpiroxicamnanot i n h t h ể đ ư ợ c x á c đ ị n h t h ế Z e t a t r o n g bốn môi trường: nước cất, hệ đệm citric – citrat pH 6, hệ đệm phosphat pH 6vàhệđệmacetic– acetatpH6.Trongmôitrườngnước,thếZetaổnđịnhởgiá trị -8,02 ± 0,15 mV nhưnggiảm xuống rất thấp trong các môi trường đệm(bảng3.13,phụ lục 2.1).

Môi trường Nướccất Đệmci tric - citrat Đệmacet ic-acetat Đệmp hosphat ThếZeta(mV) -8,12 ±0,11 -1,47 ±0,08 -2,73 ±0,06 -1,96 ±0,05

Bột đông khô được xác định hàm lượng nước bằng phương pháp Karl- Fischer (trình bày ở mục 2.2.2.4.) Kết quả cho thấy các mẫu nano đông khôcó hàmlượngnướctrongkhoảng1,78±0,37%(n=5).

Piroxicam trong bột đông khô được định lượng bằng phương phápHPLC (trình bày ở mục 2.2.2.5) Hàm lượng piroxicam nằm trong khoảng32,77 %±0,69%(n=5).

Mức độ và tốc độ hòa tan của piroxicam thay đổi ở kích thước nano.Khảosátkhảnănghòatancủapiroxicam trongn ư ớ c t h e o p h ư ơ n g p h á p trình bày ở mục 2.2.2.6 Ở điều kiện phòng thí nghiệm, tại mỗi thời điểm địnhlượng piroxicam(0,5,1,2,3,4,5,6giờ),lượngpiroxicamhòatan từbộtđông khônanođềucaogấp1,5-

Bãng 3 14 Lượng piroxicam hòa tan trong môi trường (mg)

6 14,4±1,1 27,0±1,5 Ở 25 0 C, độ tan của piroxicam nano là 0,033 ± 0,001m g / m l t r o n g k h i đó,độtancủapiroxicamnguyênliệu là0,016 ±0,001mg/ml.

Như vậy, tốc độ hòa tan của piroxicam tăng lên (hình 3.8) và độ tantăng khoảng 2 lần so với nguyên liệu Đây là một trong những đặc tính quantrọng của hệ tiểu phân nano được ứng dụng trong bào chế để tăng SKD củathuốc.

Hình3.8.Đồ thịbiểudiễn độ hòa tancủa piroxicamnanotinhthể

Sản phẩm đông khô nano phân tán ngay trong môi trường nước cất khilắc nhẹ bằng tay Theo dõi trong điều kiện thực, tốc độ sa lắng phụ thuộc vàoKTTP.Saukhisal ắ n g , c á c t i ể u p h â n d ễ k ế t t ụ t h à n h t i ể u p h â n l ớ n (bảng 3.15) Điều này cho thấy hệ tiểu phân nano tinh thể kém ổn định trongmôi trường lỏng, đây là một trong những khó khăn khi ứng dụng hệ này vàodạngthuốc.

Bãng 3 15 Hiện tượng sa lắng của các tiểu phân kích thước khác nhau(n=5)

KTTP(nm) Thờigiansalắng hoàn toàn KTTPsausa lắng(nm)

Có tỷ lệ nhỏ TP kích thước2000

Có xuất hiện TP kích thước5000

Theo tài liệu tham khảo [15], hệ tiểu phân piroxicam nano polyme đượcbào chế bằng phương pháp trình bày ở mục 2.2.1.2 với các thành phần nhưghi ởbảng3.16.

- MẫuthửgompiroxicamvàEudragit(RS100,RL100vàS100)v ớ i cáctỷlệkhác nhau.Kýhiệulà PE-RS,PE-RL,PE-S

- Mẫutrắngkhông cópiroxicam Ký hiệulàE-RS,E-RL,E-S

Cácmẫuđượcbàochếtrongmộtsốđiềukiệnkhácnhau,sauđóđượcso sánh về hình dạng kích thước và cấu trúc tiểu phân để đánh giá ảnh hưởngcủatừngyếutốđếnkhảnănghìnhthànhhệnano.

Bãng 3 16 Công thức bào chế piroxicam nano bằng phương phápnhũhóavàbốc hơidung môi

3.2.1.1 Lựa chọn thông số kỹ thuật trong quá trình bào che piroxicamnano polyme

Hệ nano được bào chế với công thức ghi ở bảng 3.17 với Eud RS 100,thay đổi các điều kiện nhiệt độ, thiết bị, thời gian để đánh giá ảnh hưởng củacácyếutốnàyđếnsựhìnhthànhtiểuphânnano.

Bãng3.17.Cácthànhphầncơbãntrong bào chếhệnano polyme

Dung dịch C được phối hợp với dung dịch D để tạo nhũ tương với điềukiện nhiệt độ từ 0 đến 15 0 C với máy khuấy 4 cánh khuấy Sau khi bốc hơidung môi, đo kíchthước tiểu phân tạo thành Kết quả thí nghiệm trình bày ởbảng3 1 8 c h o thấy: cà ng k h ố n g c h ế đ ư ợ c n h i ệ t đột h ấ p , K TT P c à n g g i ả m , nhỏnhất ởnhiệtđộ từ0-5 0 C.

Bãng 3 18 Kích thước tiểu phân piroxicambào chếởcácđiềukiệnnhiệtđộ khácnhau (n=5)

Bàochếhệnanotrongđiềukiệnphốihợphaiphaở0-5 0 C,sửdụngcácthiết bị khuấyvà đong nhất sauđây:

- MáyđongnhấthóaUNIDRIVE(ĐNH) Ởcôngđoạn này,cácthí nghiệmđượcthực hiệnbằng2 cách:

- Cách1:phốihợpdungdịchCvàodungdịchDvàkhuấytrong5phútvới 1 thiếtbị khuấy.

Sauk h i l i t â m v à r ử a t ủ a , x á c đ ị n h k í c h t h ư ớ c t i ể u p h â n piroxicamtrong sảnphẩm,kết quảtrìnhbàyởbảng3.19chothấy:

- Trong số các thiết bị đã sử dụng, những thiết bị không có cánh khuấychia cắt bề mặt phân cách pha kém nên KTTP lớn Khi sử dụng thiết bịcó cánh khuấy và tăng số cánh khuấy, KTTP giảm đi rõ rệt. Máy khuấy4cánh khuấy là thiết bị tạor a đ ư ợ c h ệ t i ể u p h â n v ớ i k í c h t h ư ớ c n h ỏ nhấtnênđược chọndùng trongcác thínghiệmtiếp theo.

- Quát r ì n h k h u ấ y g i a i đ o ạ n đ ầ u q u y ế t đ ị n h k í c h t h ư ớ c t i ể u p h â n p h a phân tán Sử dụng siêu âm hay đong nhất hóa sau đó không làm giảmđángkểKTTP nhưngphânbốkíchthướcđongđềuhơn.

Bãng 3 19 Tiểu phân piroxicam bào chếbằngcácthiếtbịkhuấy khácnhau(n=5)

M1,từ3000đến12000v/ph Cầutrứng,k h ố i đa giác >3000

(PDI=0,356 ±0,025) ĐNH:1 0 0 0 0 - 1 5 0 0 0 v/ph, Nhiều hìnhdạng 300–3000nm

Giaiđoạn2:ĐNH15000v/ph Đasốhình cầu 372,4 ±25,5

Thời gian tác động lực gây phân tán là một trong những yếu tố quantrọng quyết định sự hình thành và kích thước giọt nhũ tương Trong quy trìnhbào chế piroxicam nano polyme, công đoạn tạo nhũ tương được khảo sát vớimáy khuấy M3 trong khoảng thời gian lần lượt là 2, 3, 5, 7, 10, 15 phút.Dungd ị c h C đ ư ợ c t h ê m t ừ t ừ v à o d u n g d ị c h D t r o n g s u ố t t h ờ i g i a n n à y Hìnhdạng,kíchthướctiểuphânxácđịnhtrongtừngtrườnghợp,kếtqu ảghiở bảng 3.20 cho thấy: trong phạm vi nhất định, khi tăng thời gian khuấy,KTTPn h ỏ v à đ ề u h ơ n N ế u k é o d à i t h ờ i g i a n k h u ấ y q u a m ộ t n g ư ỡ n g x á c định, KTTP tăng lên Như vậy, trong những thí nghiệm đã thực hiện, thời giankhuấy5 phútl à điềukiệnthíchhợpchoviệchìnhthànhtiểuphânnano.

Bãng 3 20 Kích thước tiểu phân piroxicambàochếvớithờigian khuấykhácnhau(n=5)

Nhũ tương hình thành sau 5 phút khuấy trộn bằng máy khuấy M3 đượctiếptụckhuấyvớimáyĐNHt r o n g đ i ề u k i ệ n n h i ệ t đ ộ v ẫ n d u y t r ì t ừ 0-5 0 C trong các khoảng thời gian lần lượt là: 1,3,5,7,10,15 phút, tốc độ khuấy15000v ò n g / p h ú t K ế t q u ả đ o K T T P s a u k h i b à o c h ế c h o t h ấ y, t h ờ i g i a n khuấy ở giai đoạn này ít ảnh hưởng đến KTTP trong hệ nano (kích thước đạtđược368,7nm±31,2nm).Khităngthờigiantừ1đến5phút,KTTPđong đều hơn (PDI giảm từ 0,40 xuống 0,13) Nếu khuấy trên 5 phút, KTTP và chỉsốPDIkhônggiảm.

Như vậy, căn cứ vào các kết quả khảo sát về lực, thời gian và thiết bịgây phân tán, trong các nghiên cứu tiếp theo, giai đoạnnhũ hóa dung dịch Cvào dungdịchDđược thựchiệnvới cácđiềukiệnsau:

- Máykhuấy4cánh khuấy,tốcđộ18000 vòng/phúttrong5 phút

- Máy đong nhất hóa UNIDRIVE, tốc độ 15000 vòng/phút trong 5 phúttiếp theo.

Nhũ tương sau khi hình thành tiếp tục được khuấy trộn để bốc hơi dungmôi tại nhiệt độ phòng thí nghiệm với máy khuấy từ (400 vòng/phút) trong 24giờ Ở giai đoạn này, một phần dược chất tiếp tục kết tinh trong môi trườngdướidạngtiểuphânnano.

Hỗn dịch nano sau khi bốc hơi dung môi được ly tâm để loại dung dịchPVA Quá trình ly tâm được khảo sát với tốc độ 8000, 10000, 12000, 15000,18000 vòng/phút trong thời gian 5, 10, 15, 20, 25 phút Khác với hỗn dịchnano tinh thể, hỗn dịch nano polyme khó ly tâm hơn do môi trường PVA 5%có độ nhớt cao Hiệu quả của quá trình ly tâm được đánh giá bằng tỷ lệpiroxicam hao hụt sau khi ly tâm (piroxicam hao hụt ton tại ở dạng hòa tan vàdạngtiểuphânsiêunhỏ).

Với tốc độ ly tâm 15000 vòng/phút, sau khi ly tâm trong khoảng thờigian lần lượt là 5, 10, 15 phút, dễ dàng quan sát thấy: thời gian càng dài, lớpdịchtrên càng ít đục hơn Tăng thời gian ly tâm lên 20, 25 phút, lớp dịch ởtrên có độ đục không giảm khi quan sát bằng mắt thường So sánh 3 mẫu lytâm 15, 20, 25 phút, tỷ lệ piroxicam trong lớp dịch ở trên định lượng đượcbằng phương pháp HPLC lần lượt là 29,1%; 28,5% và 27,5% (so với lượngpiroxicam đưa vào ban đầu) Như vậy, khi tăng thời gian thời gian ly tâm lên20,25phút,lượngpiroxicamhaohụtgiảmkhôngđángkể,quytrìnhbàochế kéo dài, không thuận lợi cho việc tăng quy mô thí nghiệm Do đó, các mẫuđượclựa chọn chếđộlytâm15000vòng/phútvớithờigian15phút.

BÀOCHEPIROXICAM NANOPOLYME 67 1 Nghiên cứubàochếpiroxicamnanopolyme

Phân tích hình ảnh chụp qua kính hiển vi điện tử quét (hình 3.9) và đokích thước bằng phương pháp tán xạ lase Kết quả cho thấy tiểu phân nanopolymehình cầu,KTTPt r u n g bình 347,2±17,7nm(PDI=0,156 ±0,028).

Hình 3 9 Hình ãnh tiểu phân piroxicam qua kính hiển vi điện tử quét(SEM) A: Hệtiểu phânnanopiroxicam:Eudragit RS100=1:5 (PE-RS5)

D:Eudragit RS100bàochếtheo quytrìnhnhũ hóavàbốchơi dung môi

Hình ảnh chụp qua kính hiển vi điện tử truyền qua cho thấy các tiểuphântronghệnanocó cấutrúcpolyme baolấydược chất(hình3.10)

Hình 3 10 Hình ãnh tiểu phân piroxicam nano polyme qua kính hiển viđiệntửtruyền qua(TEM)

Mức độ kết tinh của dược chất trong hệ tiểu phân được xác định thôngqua phổ X- ray So với phổ X-ray của nguyên liệu, biên độ các pic trong phổX-ray của mẫu Pvà PE-RS5 giảm đi (hình 3.11) Số pic càng ít, biên độ piccàng thấp, mức độ kết tinh của dược chất càng giảm Riêng mẫu PE-RS5 chỉcó2picrấtnhỏ chứngtỏtỷlệ kết tinhgiảmvà tỷlệvôđịnhhình tăng cao.

Bột đông khô được phân tán trong môi trường nước và đo thế Zeta theophương pháp trình bày ở mục 2.2.2.3 Thí nghiệm được tiến hành trên 3 mẫubào chếtheophươngpháptrìnhbàyởmục2.2.1.2.

- Mẫu1:hệtiểu phân chỉcó piroxicam(P)

- Mẫu2:hệtiểu phânchỉcó riêng EudragitRS100 (E-RS)

- Mẫu3:hệtiểu phân piroxicam-EudragitRS100tỷlệ1:5 (PE-RS5).

Hình 3 11 Phổ nhiễu xạ tia X của các mẫu nghiên cứu

PE5 VL: hỗn hợp vật lý piroxicam- Eudragit (1:5)

P: piroxicam bào chế theo quy trình nhũ hóa v bốc hơi dung môi PE-RS5: hệ tiểu phân nano piroxicam- Eudragit (1:5) E-RS: Eudragit bào chế theo quy trình nhũ hóa và bốc hơi dung môi khiEudr ag it RS 10 0 baongoàid ư ợ c c hấ t, ti ểu phânnanopolymec ó điệntíchbề mặtdương

Bãng3.29.ThếZeta của tiểuphântrong nước(n=5)

Sản phẩm đông khô được xác định hàm lượng nước bằng phương phápKarl-Fischer (trình bày ở mục 2.2.2.5) Hàm lượng nước trong mẫu khoảng1,21±0,17%(n=5).

Piroxicam trong sản phẩm đông khôđượcđ ị n h l ư ợ n g b ằ n g p h ư ơ n g pháp HPLC (trình bày ở mục 2.2.2.5) Hàm lượng piroxicam trong mẫu nằmtrong khoảng8,56±0,31%(n=5).

2 ± 0 , 0 0 1 m g / m l ) cao gấp đôi so với piroxicam nguyên liệu (0,016 ± 0,001 mg/ml) Tuy nhiên,tốcđộ hòa tantrong2giờđầu thấphơn(bảng3.30,hình3.12).

Bãng 3 30 Lượng piroxicam hòa tan trong 900 ml môi trường (mg)

6 14,4±1,1 27,5±1,3 Độ tan của piroxicam tăng lên do dược chất ton tại phần lớn ở dạng vôđịnh hình trong mỗi tiểu phân kích thước siêu nhỏ Tuy nhiên do cấu trúc tiểuphân có polyme bao ngoài, quá trình giải phóng dược chất từ tiểu phân ra môitrường phải trải qua nhiều giai đoạn: đầu tiên, nước từ môi trường thấm qualớp vỏ polyme, hòa tan dược chất trong lòng tiểu phân sau đó dung dịch dượcchất thẩm thấu và khuếch tán qua lớp vỏ ra môi trường bên ngoài Vì vậy, tốcđộtancủapiroxicamtrong 2giờđầuthấphơnsovớinguyênliệu.

Hình 3 12 Đồ thị biểu diễn độ hòa tan của piroxicam nano polymevà nguyên liệu

3.2.2.7 Khảnăngphân tán lại vàổn địnhkchthước tiểu phântrongnước

Bột đông khô được phân tán trong nước cất sau đó theo dõi hiện tượngsa lắng và kết tụ ở điều kiện thực Sau khi sa lắng hoàn toàn, siêu âm và đo lạikích thước tiểu phân, kết quả trình bày ở bảng 3.31 cho thấy: tiểu phân nanopolyme càng ít sa lắng khi kích thước tiểu phân càng nhỏ Sau khi sa lắng, cáctiểuphândễdàng táchrờivàphântántrởlại,ítxuấthiện hiệntượng kết tụ.

Bãng 3 31 Hiện tượng sa lắng của các tiểu phân piroxicam nano polyme(n=5)

Thời gian sa lắng hoàn toàn(ngày)

Có tỷ lệ nhỏ TP kích thước1000

Sản phẩmđông khô sau khi bào chế theo quy trình ghi ở mục 2.2.3.2.đượck i ể m t r a t i ê u c h u ẩ n v ô k h u ẩ n b ằ n g p h ư ơ n g p h á p t r ì n h b à y ở m ụ c

2.2.2.7 Kết quả nuôi cấy cho thấy piroxicam nano polymeđông khô bào chếvới quytrìnhđãnghiêncứuđạt tiêuchuẩnvôkhuẩn (Phụlục3)

3.2.3 Độổnđịnhcủapiroxicamnanopolymeđôngkhô Độổnđịnhcủapiroxicamnanođ ô n g k h ô đ ư ợ c đ á n h g i á t h e o phư ơng pháp trình bày ở mục 2.2.4.1 Mẫu ban đầu có hàm lượng dược chất8,56 ± 0,31 % tính theo khối lượng khô, hàm lượng nước 1,2 ± 0,17 %, KTTPtrung bình347,2nm± 17,7nm.

3.2.3.1 Độ ổn định củadượcchất Định lượng piroxicam trong bột đông khô sau từng khoảng thời giannhất định, kết quả trình bày ở bảng 3.32 cho thấy: trong các mẫu đã khảo sát,sau12tháng,hàmlượngpiroxicam nằmtrongkhoảngtừ 97%đến101%.

Nhưvậy,piroxicamởdạng tiểuphânnanopolymeổnđịnhvềmặthóahọctr ong điềukiệnthựcvà lãohóa cấptốc.

Bãng 3 32 Hàm lượng piroxicam trong sãn phẩm đông khôsauthờigian bãoquãn (n=3)

H.lượng 1,21 1,21 1,42 1,67 1,63 Điều nước ±0,17 ±0,20 ±0,19 ±0,19 ±0,18 kiện thc

%Px so 100 100,90 98,94 97,19 97,87 với ban ±1,30 ±1,50 ±1,30 ±1,40 đầu

H.lượng 1,21 1,25 1,34 1,57 1,61 Điều kiệnlão hóacấp tốc nước (%) ±0,17 ±0,15 ±0,12 ±0,16 ±0,16

%Px so 100 97,8 97,20 97,00 97,19 với ban ±1,50 ±1,30 ±1,40 ±1,8 đầu

3.2.3.2 Độ ổn địnhkch thước tiểu phân

Saumỗi 3tháng, phân tánhệnano ởdạng đông khô vào nướcvàđ o kích thước tiểu phânbằng phương pháp tán xạ laser Kết quả thu được trìnhbày ở bảng 3.33 cho thấy kích thước tiểu phân piroxicam tăng không đáng kểsau1nămbảoquản ởđiềukiệnthựcvà điều kiệnlãohóa cấptốc.

Bãng 3 33 Kích thước tiểu phân piroxicam nano polyme sau thời gianbão quãn (n=3)

Thờigian(tháng) 0 3 6 9 12 Điều KTTP 347,2 352,5 357,2 359,8 361,2 kiện (nm) ±17,7 ±15,6 ±18,1 ±18,7 ±15,5 thục PDI 0,152 ±0,019

0,152 ±0,025 Điều kiện KTTP 347,2 356,3 351,5 359,4 363,2 lão hóacấp tốc

Thế Zeta của tiểu phân được xác định 3 tháng 1 lần, kết quả đo đượccho thấy rằng điện tích bề mặt của tiểu phân nano polyme ổn định trong vòng1nămtheodõi(bảng3.34).

Bãng 3 34 Thế Zeta của tiểu phân piroxicam nano polymesauthờigian bãoquãn(n=5) Điềukiện bãoquãn

Hình 3 13 Hình ãnh tiểu phân piroxicam nano polyme sau 1 năm bão quãn ở điều kiện thục (TEM)

Hình 3 14 Phổ nhiễu xạ tia X của piroxicam nano polyme đông khô sau 1 năm bão quãn ở điều kiện thục File: Nuong-DH Duoc-M1.raw - Type: 2Th/Th locked - Start: 5.000 ° - End: 59.990 ° - Step: 0.030 ° - Step time: 1.0 s - Temp.: 25.0 °C (Room) - Anode: Cu - Creation: 05/18/11 19:05:53

Sau 1 năm bảo quản, piroxicam nano polyme được chụp hình ảnh bằngkính hiển vi điện tửtruyền qua và phân tích bằng nhiễu xạ tia X Kết quả thuđược cho thấy tiểu phân vẫn còn nguyên cấu trúc polyme bao ngoài dược chất(hình 3.13) Tuy nhiên, phần dược chất nằm trong polyme bắt đầu có hiệntượng sắp xếp lại, trên phổ

X ray xuất hiện một số pic biên độ nhỏ và mật độthưa (hình 3.14) Điều này chứng tỏ một phần dược chất đã chuyển từ dạng vôđịnh hìnhsangdạngkếttinh.

Khảo sát độ tan của piroxicam nano polymetheo phươngp h á p t r ì n h bàyởmục2.2.2.6.Kếtquảchothấy,sovớiđộtancủapiroxicamn anosaukhi bào chế (0,033 ± 0,001 mg/ml), độ tan của piroxicam ở mẫu bảo quảntrongđ i ề u k i ệ n t h ự c ( 0 , 0 3 2 ± 0 , 0 0 1 m g / m l ) v à đ i ề u k i ệ n l ã o h ó a c ấ p t ố c (0,031 ± 0,001 mg/ml) thay đổi không đáng kể sau 1 năm Tuy nhiên, số liệuthống kê ởbảng 3.35 và biểu diễn ở đo thị hình 3.15 cho thấy, tốc độ hòa tancủa piroxicam giảm đi trong 1-2 giờ đầu Sở dĩ như vậy là vì một phần dượcchất ở phần lõi của tiểu phân chuyển sang dạng kết tinh nên làm giảm tốc độhòatanvàgiảmtốcđộ khuếchtán ramôi trườngbênngoài.

Bãng 3 35 Lượng piroxicam hòa tan trong môi trườngsau1nămbãoquãn(n=3)

Thời gianxác địnhnồng độpiroxic amhòa tan(giờ)

Trong đieukiệnlão hóa cấp tốc

Hình 3 15 Đồ thị biểu diễn độ hòa tan của piroxicam nano polymesaubàochếvàsau1nămbãoquãn ở điềukiện thục

3.3 BÀO CHẾ HỖN DỊCH NANO PIROXICAM

Trong 2 loại tiểu phân nano đã bào chế được, mỗi loại đều có những ưunhược điểm nhất định Việc lựa chọn hệ tiểu phân đưa vào dạng bào chế căncứvàomộtsố đặc điểmtrìnhbàyởbảng3.36.

Tiểu phân piroxicam nano tinh thể dễ bào chế hơn và dễ kiểm soátKTTPhơn Tuy nhiên, độ ổn định vật lý kém hơn và có thể bị rửa trôi nhanhhơn khi nhỏ mắt Vì vậy, hệ tiểu phân nano polyme piroxicam – Eudragit RS100 được lựa chọnđểbàochếhỗndịchnhỏ mắt. Để xây dựng công thức hỗn dịch, từng loại tá dược được khảo sát riêngbằng cách đưa vào môi trường phân tán, theo dõi độ ổn định của hỗn dịchtrong 1 tháng ở nhiệt độ phòng, đánh giá ảnh hưởng của tá dược đến hệ tiểuphân nanodựa vào hiện tượng sa lắng và KTTPtrung bìnhđ ể l ự a c h ọ n t á dượcthíchhợp.

Bãng 3.36.So sánhpiroxicamnano polymevànano tinht h ể Đặc điểm Piroxicam nano tinh thể

Kỹthuậtbào chế dễdàng khó hơn

Cấu trúc Tinh thể Polymebaongoài dược chất

-2 - 12 Độổnđịnhvật lý trong nước Dễ kếttụ Ít kết tụ Độ tan Gấp 2lầnnguyên liệu

Sử dụng dung dịch natri hydroxyd 0,1M và acid clohydric 0,1M để điềuchỉnh pH của môi trường phân tán đạt các giá trị 6,0; 6,5; 7,0; 8,0; 8,5 Theodõi hiện tượng sa lắng của hỗn dịch bằng cảm quan và đo KTTP trong hỗndịch.Kếtquảghiởbảng3.37.

Bãng 3 37 Ảnh hưởng của pH môi trường phân tánđếnđộổn địnhcủahỗn dịchnano(n=5) pH Hiện tượng sa lắng,kếttụ

KTTP trung bìnhsau1 tháng (nm)

8,5 Lắng cặn,dịch trên trongmờ,vànghơn

Kết quả trình bày trong bảng 3.37 cho thấy pH ảnh hưởng đáng kể tới độbền của hỗn dịch nano Trong khoảng pH 6,0 - 6,5, hỗn dịch không có hiệntượng sa lắng hay kết tụ, kích thước tiểu phân ổn định Khi pH= 7 KTTP bắtđầu tăng lên và tăng rõ rệt ở pH 8,0 đong thời hiện tượng sa lắng xuất hiện ỞpH 8,5, bằng cảm quan, có thể phát hiện dược chất đã bị hòa tan một phầntrong môi trường Như vậy, khoảng pH từ 6,0 đến 6,5 thuận lợi để duy trì độổnđịnhcủa hỗndịchnanopiroxicam.

ĐÁNHGIÁSINHKHẢDỤNGHỖNDỊCH CHỨAPIROXICAM NANO TRÊNMATTHỎ 101 1 Thẩmđịnhphươngphápđịnhlượngpiroxicamtrongthủydịch.101 2 Đánh giásinhkhảdụng củahỗndịch nano piroxicam

Chuẩn bị 6 mẫu thủy dịch trắng và 6 mẫu piroxicam trong thủy dịch cónong độ 200 ng/ml, xử lý theo quy trình (mục 2.2.5.2.a) và tiến hành địnhlượng bằng phương pháp HPLC (mục 2.2.2.5.) Kết quả được trình bày ở đothịhình3.23,3.24vàbảng3.42.

Trên sắc ký đo hình 3.24, nhận thấy pic của piroxicam có thời gian lưukhoảng 6,7 phút Trên sắc ký đo của mẫu thủy dịch trắng (hình 3.23) hầu nhưkhông cópicxuấthiệntại vị trípiccủapiroxicampha trongthủydịch.

Hình 3 24 Sắc ký đồ của mẫu chứa piroxicam trong thủy dịch,nồng độ200ng/ml

Kết quả trình bày ở bảng 3.42 cho thấyđáp ứng của mẫu trắng tại thờiđiểm trùng với thời gian lưu của piroxicam bằng 9,8% đáp ứng của piroxicamởn o n g độ L L O Q N h ư v ậ y , p h ư ơ n g ph áp đ ị n h l ư ợ n g lự ac h ọ n c ó t í n h đ ặ c hiệuđốivớipiroxicam.

Bãng 3 42 Ảnh hưởng của mẫu trắng tại thời điểm trùng vớithờigian lưu của piroxicam

STT Đáp ứng pic mẫutrắng (àAU) ĐápứngpicPx ởnồng độLLOQ(àAU)

Xây dựng đường chuẩn biểu thị mối quan hệ giữa nong độ piroxicamtrong thủy dịch thỏ và diện tích pic thu được trên sắc ký đo theo phương phápmô tảởmục 2.2.5.2 c Kếtquảđượctrìnhbàyởbảng 3.43vàhình3.25. y = 49.616x - 22.505 R² = 1

Bãng 3 43 Tương quan giữa nồng độ piroxicam trong thủy dịchvà diệntích pic (n=3)

Phương trình hoi quy:yI,62x–22,51

Hình 3 25 Đồ thị biểu diễn mối tương quan giữa nồng độ piroxicamtrong thủydịch vàdiệntích pic

Tính lại nong độ hoạt chất có trong các mẫu chuẩn theo phương trình hoi quyđãx â y d ự n g X á c đ ị n h đ ộ đ ú n g b ằ n g c á c h s o v ớ i g i á t r ị t h ự c tương ứngcủa từngnongđộ.Kếtquảđượcghi lại ởbảng3.44.

Bãng 3 44 Nồng độ piroxicam trong các mẫu chuẩntínhtheophương trìnhhồi quy

Nồngđộ tìmthấy (ng/ml) Độđúng(%)

Trong khoảng nong độ khảo sát, 100% số điểm đạt được độ đúng so vớigiá trị thực nằm ở giới hạn cho phép (85%-115%), giá trị R 2 =1 Như vậy, vớikhoảng nong độ đã khảo sát, có sự tương quan tuyến tính giữa nong độpiroxicam trong thủy dịch với diện tích pic thu được Khoảng tuyến tính nàyphù hợpđểđịnhlượngpiroxicamtrongthủydịch.

Chuẩn bị 6 mẫu chuẩn có nong độ piroxicam 200 ng/ml Tiến hành địnhlượngb ằ n g p h ư ơ n g p h á p H P L C T í n h k ế t q u ả d ự a t h e o đ ư ờ n g c h u ẩ n p h a dược chất trong thủy dịch, tiến hành trong cùng điều kiện Các nong độ tìmthấy so với giá trị thực đều nằm trong khoảng 80-120 % và có RSD < 2%(bảng 3.45) Do đó, nong độ piroxicam 200 ng/ ml đạt yêu cầu giới hạn địnhlượng dưới.

Bãng3.45.Xácđịnhgiới hạnđịnhlượng dưới(LLOQ)

Việc thẩm định độ đúng của phương pháp định lượng được tiến hànhtheop h ư ơ n g p h á p t r ì n h b à y ở m ụ c 2 2 5 2 e K ế t q u ả t h u đ ư ợ c t r ì n h b à y ởbảng3.46.Cáckếtquảphântíchcóđộđúngđạtkhoảng97

%đến104%,độ lệch chuẩn tương đối RSD < 3% Điều này cho thấy phương pháp có độđúng cao,cóthểápdụng đểđịnhlượngpiroxicamtrongthủydịchmắt thỏ.

Bãng 3.46.Kết quãthẩmđịnhđộđúng,độlặp lại trongngày

Mẫu LQC(624,0ng/ml) MQC(3466,0ng/ml) HQC(5200,0ng/ml)

Nong độ(ng /m l) Độđú ng(%)

Nongđ ộ(ng/ ml) Độđú ng(%)

Nongđ ộ(ng/ ml) Độđ úng(

2.2.5.2 f Kết quả thu được trình bày ở bảng 3.47 Các kết quả phân tích chothấy: độ đúng nằm trong khoảng 92% - 110% Độ lặp lại trong ngày và khácngày cao, độ lệch chuẩn tương đối nhỏ RSD < 5% Như vậy, có thể kết luậnphương pháp định lượng piroxicam trong thủy dịch mắt thỏ có độ chính xáccao.

Bãng3.47.K ế t q u ã thẩmđịnhđộ lặplạikhác ngày củaphươngphápđịnhlượngpiroxicamtrongthủydịchmắtthỏ

Mẫu LQC(624,0 ng/ml) MQC(3466,0ng/ml) HQC(5200,0 ng/ml)

Nong độ(ng/ml) Độđ úng (%)

Nong độ(ng/ml) Độđ úng (%)

Nong độ(ng/ml) Độđ úng (%)

NGÀYTHỨHAI LQC(621,0ng/ml) MQC(3450,0ng/ml) HQC(5175,0ng/ml)

NGÀYTHỨ3 LQC(627,0ng/ml) MQC(3483,4ng/ml) HQC(5225,0ng/ml)

 Độon địnhtrong thờigianngắn của mẫuthủydịchchứadượcchất Độ ổn địnhtrong thời gian ngắn củam ẫ u t h ủ y d ị c h c h ứ a d ư ợ c c h ấ t được xác định theo phương pháp trình bày ở mục 2.2.5.2 g. Kết quả trình bàyở bảng 3.48 cho thấy: nong độ của mẫu sau khi bảo quản 5 giờ ở nhiệt độphòng có độ lệch so với mẫu được xử lý ngay không quá 1% và giá trị RSD%giữa các kết quả định lượng ở mỗi nong độ đều nhỏ hơn 2%. Như vây, mẫuthủy dịch ổn định ở nhiệt độ phòng trong 5 giờ Trongb ả n g

3 4 9 , n o n g đ ộ mẫu tiêm lại sau 24 giờ có độ lệch so với nong độ mẫu tiêm ngay sau xử lýkhông quá 15% và giá trị RSD% giữa các kết quả định lượng ở mỗi nong độđều nhỏ hơn 15% Như vậy, mẫu piroxicam sau xử lý từ thủy dịch được coi làổnđịnhtrong24giờ.

Bãng 3 48 Độ ổn định của mẫu thủy dịch chứa dược chấtởnhiệt độ phòngsau 5 giờ (n=3)

Mẫu Nồng độmẫuLQC(ng/ml) NồngđộmẫuHQC(ng/ml)

Ban đầu Sau 5giờ Ban đầu Sau 5giờ

Bãng 3 49 Độ ổn định của mẫu sau xử lý bão quãnởnhiệtđộ phòngtrong24 giờ (n=3)

Mẫu Nồng độmẫuLQC(ng/ml) NồngđộmẫuHQC(ng/ml)

Tiêmngay Sau 24giờ Tiêmngay Sau 24giờ

Việclấymẫuthủydịchđượctiếnhànhmộtlầntrênmỗithỏ.Lấymẫutừh aimắt ởcùngmộtthời điểmvà địnhlượng riêngmỗimẫu.

Nong độ piroxicam trong thủy dịch mắt thỏ được xác định bằng phươngpháp HPLC Thí nghiệm được tiến hành trên 4 lô thỏ (10 con/lô) Mỗi lô thỏđược nhỏ một trong bốn loại thuốc nhỏ mắt gom, hỗn dịch chứa piroxicamnano polyme, hỗn dịch chứa piroxicam nano tinh thể, dung dịch piroxicam,hỗn dịch quy ước, các chế phẩm chứa 0,5% piroxicam Tại mỗi thời điểm, lấymẫu 1 lần từ 2 mắt thỏ được 2 mẫu riêng biệt Lặp lại thí nghiệm 3 lần trên 12lôthỏ.

Hỗnd ị c h p i r o x i c a m q u y ư ớ c đ ư ợ c b à o c h ế t ừ p i r o x i c a m n g u y ê n l i ệ u với môi trường phân tán giống như hỗn dịch piroxicam nano (công thức ghi ởtrang96),dung dịchpiroxicam0,5 %đượcbào chếvới công thứcnhưsau:

Dung dịch acid citric1Mvừađủ pH 8,4-8,6

So sánh sinh khả dụng hỗn dịch nano polyme, hỗn dịch quy ước và dungdịch cùngchứa0,5%piroxicam. Định lượng piroxicam trong thủy dịch mắt lấy từ các lô thỏ đã nhỏthuốc Kết quả định lượng sau từng khoảng thời gian ghi ở bảng 3.50 và biểudiễn ở hình 3.26 cho thấy: trong 3 loại thuốc nhỏ vào mắt thỏ, dược chất từhỗn dịch quy ước thấm qua giác mạc ít nhất, Cmaxđạt được ở 20 phút khoảng3400 ng/ml sau đó giảm nhanh xuống khoảng 1000 ng/ml ở thời điểm

45 phútvà chỉ còn khoảng 200 ng/ml sau 180 phút Dung dịch piroxicam sau khi nhỏvào mắt thỏ nhanh chóng đạt được nong độ gần 8000 ng/ml trong thuỷ dịchsau 20 phút nhưng sau đó giảm rất nhanh, chỉ còn khoảng 2000 ng/ml sau 45phút và giảm xuống đến 1000 ng/ml sau 60 phút Sau 180 phút, nong độpiroxicam trong thủy dịch hầu như không còn (khoảng 100 ng/ml) Trong khiđó hỗn dịch chứa piroxicam nano giải phóng dược chất chậm hơn,

Cmaxđạtđượcs a u 3 0 p h ú t , t ạ i t h ờ i đ i ể m n à y n o n g đ ộ d ư ợ c c h ấ t t r o n g t h ủ y d ị c h khoảng 7000 ng/ml, gần bằng nong độ dược chất đạt được khi dùng dung dịchvàgấpđôisovớihỗndịchquyước.Nongđộpiroxicamtrongthủydịchduytrì ở mức khoảng 5500 ng/ml sau 45 phút, 3500 ng/ml sau 60 phút và sau 180phút,nongđộdược chấttrongthủydịchvẫn còntrên 1000ng/ml

Bãng 3 50 Nồng độ piroxicam trong trong thủy dịch mắt thỏsau khinhỏt h u ố c 0 , 5 % (n=6) Thời gian(phú t)

Hỗndịch nano Dung dịch Hỗndịchquyước

Hình 3 26 Đồ thị biểu diễn mức độ thấm của piroxicamquagiác mạc mắt thỏ

HN:hỗndịchnano,DD:dungdịch,HD:hỗndịchquyước

N ồ n gđ ộ P xt ro n gt h ủ yd ịc h (n g/ m l)

Phân tích và xử lý thống kê các kết quả bằng phần mềm WinNolin 5.2,tính toán các thông số liên quan đến hấp thu thuốc qua giác mạc, số liệu thuđược trình bày ở bảng 3.51 cho thấy dung dịch và hỗn dịch quy ước đạt đượcCmaxsau20phúttrong khi đó hỗn dịch nano đạtđượcCmaxs a u

3 0 p h ú t Nong độ đỉnh của hỗn dịch nano bằng 90% so với dung dịch nhưng đạt 210 %so với hỗn dịch quy ước Tính đến thời điểm dừng thí nghiệm,AUC1-180củahỗn dịch nano cao gấp 1,8 lần so với dung dịch và gấp 2,5 lần so với hỗn dịchquyư ớ c A U C d ự đ o á n ( A U C0-

VỀPIROXICAM 115 4.2 VỀKỸTHUẬT BÀOCHEPIROXICAM NANO 116 4.2.1 Môi trườngphântán

g , m ộ t phầnphadầukhôngđượcnhũhóahoàntoànvàophanướcvàpiroxica mtừđó khuếch tán vào pha nước, kết tinh thành những tinh thể hoặc tiểu phânkhôngđ ư ợ c b a o p o l y m e h o à n c h ỉ n h , h ì n h d ạ n g v à k í c h t h ư ớ c k h ô n g đ ề u Quan sát trong quá trình thực nghiệm, đối với những mẫu này, sau khi phốihợp 2 pha và tác động lực gây phân tán, trong nhũ tương xuất hiện một lượngnhỏtiểuphânlắngdướiđáydụngcụthínghiệm.KhităngnongđộPVAl ên5 %, hiện tượng này mất đi, tiểu phân tạo ra gần giống hình cầu, kích thướcnhỏ và đong đều, cấu trúc polyme bao ngoài dược chất Rõ ràng, khi nong độPVA tăng,khảnăng nhũhóa tăng lên, phadầu dễphântán hơnt r o n g p h a nước làm cho các giọt chất lỏng trong nhũ tương nhỏ đi, hệ ổn định hơn trongquá trình bay hơi dung môi để tạo tiểu phân rắn Tuy nhiên, khi tăng nong độPVA lên tới 10%, mặc dù KTTP giảm xuống (< 200 nm) nhưng các tiểu phânnày không thu lại được bởi những thiết bị ly tâm ở phòng thí nghiệm Vì vậy,nong độ PVA 5% thích hợp hơn cả trong thành phần và quy trình bào chếpiroxicamnanopolyme.

4.2.2 Dungmôi hòatandượcchất Đối với những hệ tiểu phân nano bào chế bằng cách tập hợp từ phân tử(bottom up), kỹ thuật kết tủa trong dung dịch thường được sử dụng với rấtnhiềup h ư ơ n g p h á p p h o n g p h ú v à đ a d ạ n g N g u y ê n t ắ c c h u n g c ủ a k ỹ t huật này là dược chất được hòa tan hoàn toàn trong 1 dung môi hoặc hệ dung môisau đó kết tủa trong một môi trường xác định theo các cơ chế khác nhau,vớisựcómặtcủacáctádượckhácnhautùythuộcvàomụcđíchsửdụng.Dođó, giai đoạn đầu tiên, quan trọng là hòa tan dược chất trong dung môi thích hợp.Dung môi ảnh hưởng trực tiếp đến quá trình phân tán dược chất trong môitrường nên góp phần quyết định sự hình thành tiểu phân Nong độ của dượcchất trong dung môi quyết định mật độ tiểu phân sau khi hình thành, ảnhhưởng đến độ ổn định của hệ tiểu phân Khi phân tán dung dịch dược chấttrong môi trường với tốc độ chậm thích hợp thì tiểu phân tạo ra nhỏ và đều.Với tốc độ kết hợp khoảng 1ml/phút và sử dụng dụng cụ có bộ phận nhỏ giọt,hệdungmôi phảithỏa mãnmột sốyêucầusauđây:

- Dễ bay hơi ở điều kiện thường để thuận tiện cho việc loại dung môi sau khitiểu phân hình thành nhưng không bay bơi quá nhanh tránh làm dược chấtkết tủa ở đầu dụng cụ thí nghiệm hoặc làm dược chất bị tách khỏi môitrườngsớmtạo thànhcác tiểuphânlớn.

Vìvậy,khi khảosátlựa chọndungmôi,nhữngc ăn cứquantrọngđể lựa chọn bao gom: độ tan của dược chất trong từng dung môi, tính chất của hệdung môi khi phối hợp các thành phần, tốc độ bay hơi dung môi ở điều kiệnthường vàkíchthướctiểuphân hìnhthànhsaukhibàochế. Đốivớiquytrìnhbàochếpiroxicamnanotinhthể,việckếthợpdicloromethan với PEG có ưu điểm hòa tan tốt piroxicamvà giảm tốc độ bayhơi dicloromethan Hơn nữa, khi trong dung dịch dược chất chứa một dungmôi có thể trộn lẫn với nước thì dung dịch này sẽ phân tán tốt hơn trong nước,tạođiềukiệnthuận lợichoviệchìnhthành tiểuphânkíchthướcnhỏ. Đối với quy trình bào chế piroxicam nano polyme, Eudragit có mặttrong dung dịch dược chất đã hạn chế sự bay hơi dicloromethan Một phầnethanol trong hệ dungmôi này giúp cho dung dịchp h â n t á n t ố t h ơ n t r o n g nướcđểtạonhũ tươngtrunggiantrướckhitiểuphân hìnhthành.

Trong những nghiên cứu về thuốc nano, có nhiều yếu tố tạo ra nhữngthànhcông độtphá trongv i ệ c n â n g c a o h i ệ u q u ả đ i ề u t r ị c ủ a c h ế p h ẩ m Một trong số đó chính là sự kết hợp hoàn hảo giữa dược chất và tá dược trongcùng tiểu phân với kích thước vô cùng nhỏ bé Chính sự kết hợp này đã tạo ranhững thay đổi đáng kể đặc điểm của dược chất và hình thành hệ vận chuyểnthuốc một cách thông minh, cải thiện sinh khả dụng và đặc biệt là đưa thuốctới đích Việc lựa chọn chất mang rất phức tạp vì trong một số trường hợp,chính chất mang là yếu tố quyết định “hành trình” sinh học của thuốc Trongphạm vi của nghiên cứu này, với mục đích hướng tới một chế phẩm thuốc nhỏmắt sinh khả dụng cao, điều quan trọng là lựa chọn được một tá dược có thểbào chế được hệ tiểu phân nano giúp dược chất được lưu giữ lâu trước giácmạc và thấm qua giác mạc nhiều hơn Theo tài liệu tham khảo về nghiên cứuthuốc nano, nhiều tá dược có thể được sử dụng làm chất mang cho tiểu phânnano bao gom các polyme tự nhiên, bán tổng hợp hay tổng hợp có khả năngphân hủy sinh học hoặc không phân hủy sinh học.

Trong số này, các polymedùngc h o h ệ n a n o ở m ắ t k h i k ế t h ợ p v ớ i c á c t h u ố c c h ố n g v i ê m t h ư ờ n g l à nhóm Eudragit Theo công bố của các tác giả trong những nghiên cứu với cácdượcchấtgomibuprofen,flubriprofen,diclofenac,piroxicam,methylprednisol one, acyclovir, ciprofloxacin, Eudragit là nhóm tá dược có nhiều ưuđiểm, ví dụ như: bao tốt dược chất với hiệu suất nano nang hóa cao đong thờigiúp dược chất thấm tốt hơn qua giác mạc, tăng hiệu quả điều trị mà khônggây độc với các mô mắt [17], [37], [85] Vì vậy, trong nội dung nghiên cứucủa đề tài, 3 tá dược là Eudragit S 100, RL 100, RS 100đ ã đ ư ợ c k h ả o s á t trong quá trình bào chế hệ tiểu phân nano piroxicam Với kết quả trình bày ởmục 3.2.1.2, dễ nhận thấy các polyme ảnh hưởng rất khác nhau đến hình tháivà KTTP Hiện tượng này có thể do tương tác bề mặt hay cấu trúc không giangiữadượcchất,EudragitvàPVAtrongmôitrường.Đểkhangđịnhđiềun ày cần thực hiện các biện pháp phân tíchở m ứ c đ ộ p h â n t ử T u y n h i ê n c ă n c ứ vào đặcđiểmriêngcủa từngpolyme,c ó thểnhậnđịnhnhưsau:

- VớiEudragitS100,dođạiphântửtíchđiệnâm,khikếthợpvớipiroxicamcũngt íc hđiệnâ m, giữachúng hìnhthànhm ột lựcđẩytĩnhđi ện Do đó, khả năng gắn kết kém chặt chẽ dẫn đến việc polyme không bao đềudược chất Điều này phù hợp với thực tế là trong sản phẩm tạo ra có rất nhiềumảnh tinh thể giống như ở nguyên liệu Kể cả khi tỷ lệ polyme tăng, quá trìnhbaoc ũ n g x ả y rak h ô n g h o à n t o à n v à x u ấ t h i ệ n t h ê m nhiềuđ á m poly med ư thừakếtthànhmảng.

- Eudragit RS 100 và RL 100 đều tích điện dương nên khả năng gắn kếtvới dược chất tốt hơn Tuy nhiên, trong 2 tá dược này, Eugragit RL thân nướcnhiều hơn nên khi nhũ hóa dung dịch chứa piroxicam và Eudragit RL100 vàophan ư ớ c , b ả n c h ấ t p o l y m e c ó k h ả n ă n g h ư ớ n g n ư ớ c , c ó t h ể t ạ o l i ê n k ế t hydrat hóa với nước nên hiệu quả bao dược chất giảm sút, tiểu phân khó tạothành hìnhcầuvà kíchthướckémđềuhơn.

- Trongsố3tádượcđãkhảosát, EugragitRS100thểhiệnưuđiểmcót hể kết hợp với piroxicam để tạo ra hệ tiểu phân có kích thước nhỏ nhất, hìnhdạng giống hình cầu nhất và bề mặt tương đối nhẵn Khi sử dụng tá dược này,tỷ lệ polyme so với dược chất ảnh hưởng rất nhiều đến đặc tính của hệ tiểuphân (bảng 3.23.) Nếu tỷ lệ polyme thấp, sản phẩm có chứa nhiều mảnh tinhthể, kích thước tương đối lớn, thậm chí quan sát được bằng mắt thường trênkính hiển vi Sở dĩ như vậy là vì khi lượng polyme không đủ,nhiều tiểu phânkhông được bao hoặc được bao không triệt để với kích thước rất nhỏ dưới tácđộng của lực khuấy lớn đã va chạm nhiều với nhau dẫn đến hiện tượng kết tụOswald (Điều này cũng phù hợp với kết quả thu được khi bào chế piroxicamtinh thể: tốc độ khuấy càng cao kích thước tiểu phân càng lớn, càng nhiềumảnh tinh thể hình dạng không xác định) Khi lượng polyme tăng lên, hiệntượng nàygiảmđi,trong sảnphẩmthuđượcchủyếulà các tiểuphân hìnhcầu có cấu trúc polyme bao ngoài dược chất, kích thước nhỏ và tương đối đongđều Tuy nhiên, khi tỷ lệ polyme quá cao, lượng dư sẽ hình thành nhiều tiểuphân polyme riêng biệt hay các đám kết dính Các tiểu phân polyme có kíchthước rất nhỏ, tỷ trọng thấp nên làm giảm sự đong đều hàm lượng dược chấttrong mỗi mẻ bào chế Các mảnh polyme lớn dễ kết tập các tiểu phân nhỏxungquanhnógâynênhiệntượngkếtdínhtiểuphânlàmchohệnanoké mổnđịnhkhiphântántrongnước.

Với phương pháp bào chế hệ nano trình bày trong nội dung nghiên cứu.Trước tiên, dược chất được hòa tan trong dung môi thích hợp, sau đó, đượcphân tán trong dung dịch nước Theo nguyên tắc chung, hai pha không đongtanp h â n t á n v à o n h a u t ố t h ơ n n ế u s ứ c c ă n g b ề m ặ t p h â n c á c h p h a g i ả m Chính vì vậy, một số chất diện hoạt đã được sử dụng trong quy trình bào chếhệ nano Kết quả cho thấy ảnh hưởng của chất diện hoạt đến sự hình thành vàổnđịnhcủa hệnanorấtphức tạp.

Khi thêm chất diện hoạt vào môi trường phân tán, tất cả các thí nghiệmđềutạoracác tiểuphânkíchthướclớnhơnsovớitrường hợpkhô ngdùng chất diện hoạt Hiện tượng này do các chất diện hoạt hòa tan hoàn toàn tronglòngm ô i t r ư ờ n g p h â n t á n K h i p h ố i h ợ p v ớ i d u n g d ị c h d ư ợ c c h ấ t , t ỷ l ệ chấtdiệnhoạttậpt r u n g ở b ề m ặ t p h â n c á c h p h a k h ô n g c a o n ê n k h ô n g cảithiệnđượckhảnăngphânt á n M ặ t k h á c , c á c c h ấ t d i ệ n h o ạ t t r o n g dung dịch làm hòa tan nhanh các tiểu phân rất nhỏ nên dẫn đến hiện tượngdược chất dễ kết tinh lại trên bề mặt các tiểu phân khác khiến cho tiểu phâncủa hệ nano lớn hơn cả khi không dùng chất diện hoạt Khi thêm chất diệnhoạtvàodungdịchdượcchất (hòatantrong dicloromethan vàPEG),đasốcác thí nghiệm tạo ra sản phẩm có KTTP nhỏ hơn Hiện tượng này xảy ra dochấtdiệnhoạtđượcphântánđềutrongmộtlượng nhỏdungmôi,tậptru ng nhiều ở bề mặt phân cách giữa hai pha khi phối hợp, làm tăng khả năng phântán của dung dịch dược chất, do đó, tiểu phân hình thành có kích thước nhỏ.Chấtdiện hoạt làm giảm KTTPtốt nhất là natri desoxycholatđãđượcl ự a chọn để tham gia vào quy trình bào chế piroxicam nano tinh thể Trong mộtgiới hạn nhất định, khi tăng chất diện hoạt, KTTP giảm đi nhưng khi lượngchất diện hoạt quá cao, KTTP tăng lên Điều này có thể do khi tăng chất diệnhoạt quá cao, khả năng phân tán của dược chất tăng, KTTP giảm mạnh đếnmức thay đổi độ tan Lượng piroxicam hòa tan trong môi trường phân tán tăngdẫn đến hiện tượng tái kết tinh trên bề mặt một số tiểu phân khác làm tăngKTTP trung bình của hệ Mặt khác, KTTP phân tăng còn có thể do hiện tượngkếttụ nhữngtinhthểsiêunhỏ mớihìnhthành.

Kết quả ở bảng 3.25 cho thấy: chất diện hoạt không làm giảm KTTPpiroxicamn a n o p o l y m e t r o n g s ả n p h ẩ m T u y n h i ê n , t r o n g q u á t r ì n h thực nghiệm xuất hiện một số hiện tượng sau: giai đoạn nhũ hóa xảy ra rất tốt,nhũtương hìnht h à n h n h a n h v à r ấ t m ị n , c h ỉ s a u k h i b ố c h ơ i d u n g m ô i , tiểu phân piroxicam mới có kích thước lớn và nguyên nhân của tình trạng nàycó thể do hiện tượng kết tụ tiểu phân Chất diện hoạt đã làm tăng khả năngphân tán giữa 2 pha Thêm vào đó, tốc độ khuấy ở giai đoạn nhũ hóa rất caonên các tiểu phân hình thành có kích thước nhỏ hơn trước nhiều và nhỏ đếngiới hạn có thể kết tụ nhanh chóng ngay sau khi tạo ra.

Vì vậy, đểbào chếpiroxicamnanopolyme,cácchấtdiệnhoạtkhôngthamgiatrongthànhphầ ntá dược củaquytrình.

Dầu silicon có ưu điểm phá bọt tốt và tương đối trơ về mặt hóa học,không ảnh hưởng đến tác dụng dược lý của dược chất nên được sử dụng trongcáct h í n g h i ệ m Đ ố i v ớ i q u y t r ì n h b à o c h ế p i r o x i c a m n a n o t i n h t h ể , dầusilicon l à m giảmđángkểlớpbọt trê nbềmặt m ô i t rườ ng phântá nn ê n làm tăng tốc độ bay hơi dung môi vì thế tác động rõ rệt đến KTTP piroxicam.Do dung môi bay hơi nhanh nên piroxicam nhanh chóng tiếp xúc với dungdịch nước ở nhiệt độ thấp Quá trình kết tinh diễn ra đột ngột vì thế tạo ranhữngtinhthểnhỏ kíchthướcnano.

Với quy trình bào chế piroxicam nano polyme, do nong độ dung dịchPVA tương đối cao (5%), lượng silicon đã khảo sát ít ảnh hưởng đến lớp bọttrênbềmặtdungd ị c h n ê n k h ô n g l à m t ă n g t ố c đ ộ b a y h ơ i d u n g m ô i Nếu tăng lượng dầu silicon, tỷ lệ của pha dầu tăng lên, lượng chất nhũ hóakhông thay đổi, quá trình nhũ hóa diễn ra không hoàn toàn có thể làm tăngkích thước giọt nhũ tương dẫn đến tăng KTTP nano Vì vậy, trong quy trìnhnày, silicon không được sử dụng, quá trình bốc hơi dung môi được thúc đẩybằngcáchtạobềmặtthoángvàkhuấyliêntục.

Hướng ứng dụng chính của hệ tiểu phân nano là đưa vào dạng thuốclỏng và bán rắn Một trong những khó khăn lớn nhất của các chế phẩm này làphải duy trì được độ ổn định vật lý (hạn chế sa lắng và kết tụ) Nhiều côngtrình nghiên cứu đã sử dụng kỹ thuật đông khô như một giải pháp hữu hiệu đểkhắc phục tình trạng này Bột đông khô chứa hệ tiểu phân nano được bào chếthànhn g u y ê n l i ệ u p h ụ c v ụ c h o c á c d ạ n g t h u ố c T r o n g b ộ t đ ô n g k h ô , cáctiểuphânđượcphântánđềuvàcốđịnhtrêntádượctạokh ungnênhạnchếđượchiệntượngkếttụ.Hơn nữa, bềm ặ t v à c ấ u t r ú c c ủ a t i ể u p h â n không bị tác động bởi pH và các ion có mặt trong môi trường lỏng, cácpolyme sử dụng kết hợp trong tiểu phân ít có nguy cơ biến đổi.Do đó, biệnpháp đông khô không chỉ làm tăng độ ổn định vật lý, hóa học của hệ nano màcònổn địnhcả mứcđộgiải phóng dược chất.M ặ t k h á c , s ử d ụ n g h ệ n a n o dướidạngđ ô n g k h ô c ò n t h u ậ n l ợ i c h o b à o c h ế c á c t h u ố c v ô k h u ẩ n Tuy nhiên, trong quá trình đông khô hỗn dịch, các tiểu phân nano phải chịunhiềutácđộngcủa các giaiđoạnđôngkhô Sựkếttinhnướcđácóthể tạonên lựcn é n c ơ h ọ c l ê n c á c t i ể u p h â n n a n o T r o n g q u á t r ì n h l à m k h ô ở á p s u ấ t thấp, bề mặt tiểu phân có thể bị thay đổi nhất là những tiểu phân có polyme,protein hay lipid bao ngoài. Nhiều trường hợp, tá dược bảo vệ cần phải thêmvào hỗn dịch trước khi đông khô để bảo vệ tránh áp lực đông đặc và áp lựclàm khô(tá dược tạo khung)cũng như tăng sự ổnđịnh củac h ế p h ẩ m t r o n g quá trình bảo quản [12] Những tá dược tạo khung phổ biến nhất là các loạiđường: trehalose, saccarose, glucose, manitol Những loại đường này, ở nhiệtđộ đặc biệt Tg’ ngăn cản sự kết tụ và tránh áp lực cơ học của tinh thể đá [12].Những tá dược tăng ổn định có khả năng tạo liên kết hydro với nhóm chứchoạt động trên bề mặt tiểu phân nano (protein, liposom) thay thế nước bị mất,giúp bảo vệ đặc tính của tiểu phân Cấu trúc vô định hình của tiểu phân nanovà tá dược bảo vệ cho phép thu được số lượng cầu nối lớn nhất, do đó cácdisacaridtontạiởdạngvôđịnhhìnhcóhiệuquảbảovệtốthơncácmonosacarid ở dạng kết tinh trong quá trình đông khô [12], [57] Một sốtrường hợp có thể không cần dùng thêm chất bảo vệ khi trong công thức cókhoảng 5%PVAhoặc mộtsố chấtổnđịnhhệkeokhác[12].

VỀHTIỂUPHÂNNANOPIROXICAM 129 4.4 VỀBÀOCHE HỖNDỊCHNANODÙNGCHONHÃN KHOA 131 4.5 VỀĐÁNHGIÁSINHKHẢDỤNGCỦAHỖNDỊCHNANO 134 4.5.1 Phươngphápđánhgiásinhkhả dụng

Phương pháp này có ưu điểm là đánh giá được chính xác thời gian lưuthuốc tại mắt Tuy nhiên, cần có một chất có khả năng phát phóng xạ tia gamaphù hợp với dược chất và không ảnh hưởng đến hành trình sinh học của dượcchất và phải có thiết bị đo bức xạ gama Hiện nay, ngành dược của Việt Namchưacóđủ điều kiệnđểáp dụngphươngpháp này.

Dựa vào những ưu nhược điểm của từng phương pháp phân tích ở trên,cănc ứ t í n h h ì n h t h ự c t ế t ạ i c ơ s ở n g h i ê n c ứ u , p h ư ơ n g p h á p đ ị n h l ư ợ n g dượcchấttrongthủydịchđãđượclựachọnđểđánh giásin hkhảdụngcủa hỗn dịch nhỏmắtchứapiroxicam nano Dotốc độ boi hoànvàc h ấ t l ư ợ n g thủydịchkhácnhaukhihútnhiềulầnnênviệclấymẫuđượcthựchi ệnmộtlần trên mỗi mắt Điều đang lo ngại ở cách lấy mẫu này là sai số cá thể lớn.Tuy nhiên, trong quá trình thực nghiệm, kết quả cho thấy: nong độ dược chấttrong thủy dịch lấy từ hai mắt của một thỏ tại cùng thời điểm tính từ khi nhỏthuốc khác nhau không nhiều Ở những khoảng thời gian giống nhau sau khinhỏ thuốc, nong độ piroxicam trong thủy dịch của các thỏ khác nhau chênhlệchk h ô n g qu á3 5 % Ch ên h lệchc h ủ yế uở n h ữ n g thời đ i ể m cáchx athời gian nhỏ thuốc (120 phút, 180 phút) Trong vòng 60 phút đầu, độ lệch nàykhông quá 20 % Điều này cho thấy phương pháp định lượng dược chất trongthủy dịch tuy khó thực hiện nhưng kết quả tương đối ổn định và đáng tin cậy.Có thể nhận định, phương pháp này có triển vọng áp dụng rộng rãi cho nhiềudượcchấtkhác.

C đ ư ợ c ápdụngvớicácđiềukiệnsắckýnhưđốivớipiroxicamnguyênliệ uvàchế phẩm quy định trong dược điển Anh, Mỹ Quy trình thẩm định phương phápđịnhlượngđượctiếnhành theohướngdẫncủaViệnK i ể m n g h i ệ m t h u ố c trung ươngvàthamkhảoquytrìnhcủa FDA[43].

1 0 0 à l ) v à h à m l ư ợ n g d ư ợ c c h ấ t t h ấ p T h à n h p h ầ n t h ủ y d ị c h c ú c h ứ a 0,02 % albumin và globulin, 0,03 % acid amin và 0,008% g l u c o s e [ 7] Mặcdù hàm lượng thấp nhưng protein vẫn có thể gây tắc cột sắcký Do đó, đa sốcông trình nghiên cứu đều phải loại bỏ protein trước khi định lượng Phươngpháp thườngd ù n g đ ể x ử l ý p r o t e i n t r o n g t h ủ y d ị c h l à t r ộ n m ẫ u v ớ i đ o n g lượng methanol hoặc acetonitril sau đó ly tâm tốc độ cao, hút lấy phần dịchtrong, tiến hành sắc ký.Wu và cộng sự đã xử lý mẫu thủy dịch mắt thỏ khinghiên cứu sinh khả dụng của hỗn dịch chứa mycophenolat mofetil nano bằngcách trộn thủy dịch với hỗn hợp HCl 1M và methanol (tỷ lệ 4: 14) [120],Giunchedi và cộng sự xử lý mẫu thủy dịch trong nghiên cứu vi cầu piroxicambằng cách trộn với đong thể tích methanol chứa 6% acid pecloric

[46] Trongnội dung nghiên cứu của luận án, methanol được sử dụng đong thể tích vớithủydịchđểloạiproteintrongmẫu.S a u k h i đ ư a v à o h ệ t h ố n g s ắ c k ý , hình ảnh trên sắc ký đo cho thấy pic tạp rất ít Điều này có nghĩa là phần lớntạp protein đã bị loại trong quá trình xử lý mẫu, phần còn lại qua được cột tớidetector nhưng không hấp thụ tử ngoại tại bước sóng phát hiện (254 nm) Dođó,quytrìnhxửlývàphântíchmẫu có độchọnlọccaovớipiroxicam.

Kếtquả thẩm địnhchothấy phươngphápphântíchp i r o x i c a m t r o n g thủy dịch có tính đặc hiệu, độ đúng, độ lặp lại, độ tuyến tính và giới hạn địnhlượng đáp ứng được các yêu cầu chung của FDA về thẩm định phương phápphântíchtrongdịchsinhhọc

Khi đánh giá sinh khả dụng của hỗn dịch nano piroxicam, do không cóthuốcđ ố i c h i ế u g ố c n ê n c h ú n g t ô i t i ế n h à n h s o s á n h h ỗ n d ị c h n a n o v ớ i hỗnd ị c h b à o c h ế t ừ n g u y ê n l i ệ u b a n đ ầ u v à d u n g d ị c h p i r o x i c a m c ó c ù n g nong độ (bảng 3.51, hình 3.26) Nhìn lại kết quả thử độ tan, rõ ràng độ tan củapiroxicam nano cao gấp đôi so với nguyên liệu nhưng tốc độ hòa tan trong 2giờ đầu giảm Như vậy, nếu căn cứ vào kết quả định lượng nong độ piroxicamtrong thủy dịch (in vivo), có thể thấy rằng tốc độ thấm dược chất qua giác mạckhôngc h ỉ p h ụ t h u ộ c v à o đ ộ t a n v à t ố c đ ộ h ò a t a n c ủ a d ư ợ c c h ấ t T r o n g 30 phút đầu,Cmaxcủahỗn dịch nanoc a o g ấ p đ ô i s o v ớ i h ỗ n d ị c h q u y ư ớ c Cót h ể nhậnđị nh r ằ n g , trướck hi dư ợc c h ấ t h òa tanvà th ấm quag i á c m ạ c , một phần những tiểu phân rất nhỏ đi qua khe tế bào giác mạc, giải phóng vàhòa tan dược chất ngay trong thủy dịch làm tăng cao nong độ dược chất ở khuvực này Đây chính là ưu điểm của hỗn dịch nano khi sử dụng tại chỗ ở mắt.Tuy nhiên, kết quả này chưa thực sự đánh giá được hiệu quả điều trị của hỗndịch nano và ưu điểm vượt trội của nó so với hỗn dịch quy ước bởi vì các thínghiệm được tiến hành trên mắt thỏ không bị bệnh Hiệu quả của hỗn dịchnano chỉ có thểđánh giá một cách chính xác trên mắt thỏ đã gây viêm Khigiác mạc bị viêm, khe tế bào có thể giãn rộng trên

300 nm tạo điều kiện thuậnlợi cho các tiểu phân đi qua và tập trung nhiều dưới niêm mạc, vì thế nong độdược chất trongthủy dịch có thể cao hơn nhiều và hiệu quả điều trịs ẽ t ă n g lên,các triệu chứngviêmcó thểthuyên giảmnhanh chónghơn.

Trongn g h i ê n c ứ u v ề piroxicam củaA d i b k i a vàc ộ n g s ự [ 15],c ác t á c giả đã đánh giá tác dụng chống viêm của piroxicam nano bằng cách đếm sốbạch cầu trong thủy dịch và quan sát triệu chứng viêm trên mắt thỏ Nhómnghiên cứu đã sử dụng hỗn dịch được sau khi chế tạo để thử tác dụng màchưa nghiên cứu chế phẩm thuốc nhỏ mắt Như vậy các kết quả nghiên cứumớichỉđánhgiáđượcsơbộhiệuquảđiềutrịcủapiroxicamnano.Nhữngtác dụngnàycóthểthayđổikhiđưanguyênliệunanovàodạngbàochếvớisựcó mặtcủa nhiềutá dược khác.

Trong quá trình thực hiện luận án, chúng tôi đã bào chế được piroxicamnanotinhthểvà piroxicamnanopolyme.

Với các kết quả nghiên cứu đã trình bày ở chương III, piroxicam nanotinht h ể d ễ b ị r ử a t r ô i b ở i d ị c h n ư ớ c m ắ t n ê n k h ô n g t h u ậ n l ợ i k h i đ ư a v à o dạng thuốc nhỏ mắt Tuy nhiên, dạng tiểu phân này có thể ứng dụng tốt trongcác dạng thuốc dùng ngoài da do dễ bào chế được kích thước nhỏ nên bámdínhtốttrênda.Hơnnữa,vớikíchthướcnhỏ,cáctiểuphândễdàngđis âuvào các lỗ chân lông, lưu lại ở đó và giải phóng thuốc từ từ nên có thể kéo dàitácdụngtạichỗ trênda[19].

Piroxicam nano polyme có khả năng ứng dụng tốt cho thuốc nhỏ mắt.Tuy nhiên, với các trang thiết bị còn hạn chế,trong các mẫu bào chế được(KTTP trung bình khoảng 350nm) vẫn có chứa một tỷ lệ nhỏ các tiểu phânkích thước 500-600 nm Các tiểu phân này có thể sa lắng trong môi trườnglỏng sau 2-3 tháng Vì vậy, để đảm bảo độ ổn định của hỗn dịch nano,biệnpháp tốt nhất là đưa ra sản phẩm dưới dạng đông khô với môi trường phân tánvô khuẩn đi kèm, khi sử dụng mới phân tán lại Như vậy, để thuận tiện chobệnh nhân trong việc pha thuốc, bao bì của chế phẩm cần được nghiên cứu kỹcàngđểdễpha,dễdùngvàkhôngbịnhiễmkhuẩnkhithaotác.

- Lầnđ ầ u t i ê n ở V i ệ t N a m , p i r o x i c a m đ ư ợ c b à o c h ế d ư ớ i d ạ n g t i ể u p h â n nanobaogom:piroxicamnanot i n h t h ể v à p i r o x i c a m n a n o p o l y m e Công trình nghiên cứuđã khảosát đượcmộtsốyếutố công thức vàk ỹ thuật ảnh hưởng đến sự hình thành tiểu phân nano, lựa chọn được nhữngđiều kiện thích hợp để bào chế piroxicam nano Hệ tiểu phân được duy trì ởdạngđôngkhôvớinhữngđặc tínhổnđịnh.

1 0 , 2 n m (PDI 0,172 ± 0,029); thế Zeta -8,02 ± 0,15 mV; độ tan tăng gấp 2 lầnnguyênliệu.Hệtiểuphânổnđịnhkíchthướcởdạngđôngkhônhưngd ễkếttụ trongnước.

- Piroxicamnanopolymec ó K T T P t r u n g b ì n h 3 4 7 , 2 n m ± 1 7 , 7 n m (PDI= 0 , 1 5 6 ± 0 , 0 2 8 ) ; c ấ u t r ú c E u d r a g i t R S 1 0 0 b a o n g o à i d ư ợ c c h ấ t , thếZeta25,2±1,3mV.Piroxicamtontạiphầnlớnởdạngvôđịn hhình,độ tan tăng gấp 2 lần so với nguyên liệu nhưng tốc độ hòa tan giảm tronghaigiờđầu.Hệtiểuphânở dạngđôngkhôvớihàmlượngnướckhoảng1,2

%, rất ít kết tụt r o n g m ô i t r ư ờ n g l ỏ n g S ả n p h ẩ m n g h i ê n c ứ u ổ n đ ị n h v ề hàm lượng, KTTP và độ hòa tan của piroxicam trong 12 tháng ở điều kiệnthựcvà lãohóa cấptốc.

2 Bàochếhỗndịchnhỏmắtchứa piroxicamnano polyme Đã xây dựng được công thức và quy trình bào chế hỗn dịch chứa piroxicamnano polyme (0,5%) dùng cho nhãn khoa Hỗn dịch sau khi pha chế từ bộtđông khôổn địnhtrong1 thángở điều kiệnthực.

Việcđ á n h g i á s i n h k h ả d ụ n g c ủ a t h u ố c n g h i ê n c ứ u t r ê n m ắ t t h ỏ đãchứngtỏhỗndịchnanochứa0,5%piroxicamcókhảnăn gkéodàithời gian lưu thuốc trước giác mạc và tăng tính thấm của piroxicam nênc ả i thiện đáng kể sinh khả dụng của chế phẩm Các kết quả bước đầu nghiêncứu hỗn dịch nhỏ mắt piroxicamgóp phần mở ra hướng nghiên cứu mớitrong bàochế thuốc nhãnkhoaở trongnước. ĐỀXUẤT

2 Hoànthiệnquytrìnhbàochếpiroxicamnanovớiquymôlớn,hướngtớisảnx uấtnguyên liệunanoứngdụng trongcácdạngthuốc.

3 Nghiêncứubàochếhỗndịchlỏngchứa piroxicamnano đểsản xuấtđượcchếphẩmcó thể sửdụng thuậntiệntrongđiềutrị.

DANH MỤC CÁC CÔNG TRÌNH ĐÃ CÔNG

1 NguyễnThịMaiAnh, NguyễnVănLong, NguyễnTrường Sơn(2009),“ N g h i ê n c ứ u c h ế t ạ o v à đ á n h g i á m ộ t s ố đ ặ c t í n h c ủ a h ệ nanopiroxicam”,Tạpchí Dượchọc,400,tr.50-53.

2 Nguyễn Thị Mai Anh, Nguyễn Văn Long (2011), “Nghiên cứu xâydựng công thức hỗn dịch nano piroxicam”,Tạp chí Dược học, 423,tr.39-42.

“Nghiên cứu bào chế piroxicam nano tinh thể bằng phươngphápkếttinh” ,TạpchíDượchọc,436,tr.5-9

1 Bộ Y Tế, (2006),Kỹ thuật bào chế và sinh dược học các dạng thuốc,

2 Bộ Môn Bào Chế, (2009),Sinh dược học bào chế, Nhà xuất bản Y học, tr.51-67.

4 BộMôn BàO Chế, (2013),Kỹ thuật nano và liposome ứng dụng trongdược phẩm và mỹ phẩm, Trung tâm thông tin - thư viện Đại học Dược

5 Bộ Y Tế, (2010),Dược thư Quốc gia Việt Nam,Nhà xuất bản Y học, tr.799-801.

6 BộYTế (2009),D ư ợ c điển ViệtNamIV,tr.496-497,PL-421.

7 Phan Dẫn, (2004),Nhãn khoa giản yếu, Nhà xuất bản Y học, tr 13-

8 TôMinhHùng,(2008),Nghiêncứubàochếmàngđặtnhãnkhoaindomethacin tác dụng kéo dài, Luận án tiến sĩ dược học, Học viện Quâny.

9 Từ Minh Koóng, (2007), "Công nghệ nano và sản xuất dược phẩm",Tạpchídượchọc,369,tr.2-4.

10 Lê Văn Truyền, (2007), "Công nghệ nano, y học nano về dược phẩmnano",Tạpchídượchọc,370,tr.2-3.

11 AbdelwahedW.,DegobertG.,FessiH.(2006),"Investigationofnanocapsules stabilization by amorphous excipients during freeze-dryingand storage",European journal of pharmaceutics and biopharmaceutics,63(2),pp.87-94.

12 AbdelwahedW.,DegobertG.,StainmesseS.,etal.(2006),"Freeze-drying of nanoparticles: formulation, process and storage considerations",Advanceddrugdeliveryreviews,58(15),pp.1688-1713.

13 AbdulkarimM.F.,AbdullahG.Z.,ChitneniM.,etal.(2011),"Formulation and characterization of palm oil esters based nano-cream fortopical delivery of piroxicam",International Journal of Drug Delivery,2(4),pp.287-298.

14 Abdulkarim M F., Abdullah G Z., Chitneni M., et al.(2011),

"Stabilitystudies of nano-cream containing piroxicam",International

15 Adibkia K., Shadbad M R S., Nokhodchi A., et al.(2007),

"Piroxicamnanoparticles for ocular delivery: physicochemical characterization andimplementation in endotoxin-induced uveitis",Journal of Drug Targeting,15(6),pp.407-416.

16 Agnihotri S M., Vavia P R (2009), "Diclofenac-loaded biopolymericnanosuspensionsforophthalmicapplication",Nanomedicine:n anotechnology,biologyandmedicine,5(1),pp.90-95.

17 Ahuja M., Dhake A S., Sharma S K., et al.(2011), "Diclofenac- loadedEudragitS100nanosuspensionforophthalmicdelivery",Journalofmic roencapsulation,28(1),pp.37-45.

18 Aksungur P., Demirbilek M., Denkbas E B., et al.(2011),

"Developmentand characterization of Cyclosporine A loaded nanoparticles for oculardrug delivery: Cellular toxicity, uptake, and kinetic studies",Journal ofcontrolled release : official journal of the

19 AliH.S.M.,YorkP.,AliA.,etal.(2010),"Hydrocortisonenanosuspensions for ophthalmic delivery: A comparative study betweenmicrofluidic nanoprecipitation and wet milling",Journal of controlledrelease,pp.175-181.

20 Alvarez-Roman R., Naik A., Kalia Y., et al.(2004), "Skin penetration anddistribution of polymeric nanoparticles",Journal of controlled release,99(1),pp.53-62.

21 Anhorn M G., Mahler H C., Langer K (2008), "Freeze drying of humanserumalbumin(HSA)nanoparticleswithdifferentexcipients",Internation alJournalof Pharmaceutics,363(1-2),pp.162-169.

22 Araújo J., Gonzalez E., Egea M A., et al.(2009), "Nanomedicines forocularNSAIDs:safetyondrugdelivery",N a n o m e d i c i n e : nanotec hnology,biologyand medicine,5(4),pp.394-401.

23 BaertL (2009), "Development of a long-acting injectable formulationwith nanoparticles of rilpivirine (TMC278) for HIV treatment",Europeanjournalofpharmaceuticsandbiopharmaceutics,72(3),p p.502-508.

24 Banerjee R., Bhatt P M., Ravindra N V., et al.(2005), "Saccharin salts ofactive pharmaceutical ingredients, their crystal structures, and increasedwatersolubilities",Crystalgrowth&design,5(6),pp.2299-2309.

25 BasaranE.,DemirelM.,SirmagülB.,etal.(2010),"Cyclosporine-

26 Bhatta R., Chandasana H., Chhonker Y., et al.(2012),

"Mucoadhesivenanoparticles for prolonged ocular delivery of natamycin: in-vitro andpharmacokinetics studies",International Journal of

27 Bhattacharyya M., Basu S., Gupta B., et al.(1993), "Formulation and invitro-in vivo characterization of solid dispersions of piroxicam",Drugdevelopmentandindustrialpharmacy,19(6),pp.739-747.

29 Bildstein L., Hillaireau H., Desmặle D., et al.(2009), "Freeze-drying ofsqualenoylated nucleoside analogue nanoparticles",International

30 Bose S., Du Y., Takhistov P., et al.(2013), "Formulation optimization andtopicaldeliveryofquercetinfromsolidlipidbasednanosystems",Internation aljournalofpharmaceutics,441,pp.56-66.

31 Bosselmann S., Williams Iii R O (2012), "Has nanotechnology led toimprovedtherapeuticoutcomes?",Drugdevelopmentandindustrialpharm acy,38(2),pp.158-170.

33 Cervin C., Tinzl M., Johnsson M., et al.(2010), "Properties and effects ofa novel liquid crystal nanoparticle formulation of docetaxel in a prostatecancermousemodel",Europeanjournalofpharmaceuticalsciences,4 1(2),pp.369-375.

34 Cheong H.-A., Choi H.-K (2002), "Enhanced percutaneous absorption ofpiroxicamviasaltformationwithethanolamines",Pharmaceuticalresearch,1 9(9),pp.1375-1380.

35 Cheow W S., Chang M W., Hadinoto K (2010), "Antibacterial efficacyof inhalable evofloxacin-loaded polymeric nanoparticles against

E colibiofilm cells: The effect of antibiotic release profile",Pharmaceuticalresearch,27,pp.1597-1609.

(2007),"Eudragit®microparticlesasapossibletoolforophthalmicadministrat ionofacyclovir",Journalofmicroencapsulation,24(5),pp.445-456.

(2009),"Polymericocularnanosuspensionf o r c o n t r o l l e d r e l e a s e o f a c y c l o v i r : i n v i t r o r e l e a s e a n d ocular distribution",Iranian Journal of Pharmaceutical Research, 8(2),pp.79-86.

39 Das S., Suresh P K (2010), "Nanosuspension: a new vehicle for theimprovement of the delivery of drugs to the ocular surface.

(2007),"Roleofnanotechnologyinpharmaceuticalproductdevelopment",Jo urnalofpharmaceutical sciences,96(10),pp.2547-2565.

41 Dillen K., Vandervoort J., Van Den Mooter G., et al.(2006),

"Evaluationofciprofloxacin-loadedEudragit®RS100orR L 1 0 0 / P L G A nanoparticles",Internationaljournalofpharmaceutics,314(1),pp.72-82.

42 Eljarrat-BinstockE.,OrucovF.,AldoubyY.,etal.(2008),"Chargednanoparticles delivery to the eye using hydrogel iontophoresis",J o u r n a l of controlledrelease,126(2),pp.156-161.

43 Fda - Cder - Cvm (2001),Guidance for industry: Bioanalytical methodvalidation.

44 FeiW L., Chen J Q., Yuan J., et al.(2008), "Preliminary study of theeffectofFK506nanospheric- suspensioneyedropsonrejectionofpenetratingkeratoplasty",Journalofocula rpharmacologyandtherapeutics,24(2),pp.235-244.

45 Gilhotra R M., Gilhotra N., Mishra D (2009), "Piroxicam bioadhesiveocularinserts:physicochemicalcharacterizationandevaluationi nprostaglandin-induced inflammation",Current eye research, 34(12), pp.1065-1073.

46 Giunchedi P., Conte U., Chetoni P., et al.(1999), "Pectin microspheres asophthalmiccarriersforpiroxicam:evaluationinvitroandinv i v o i n albino rabbits",European journal of pharmaceutical sciences, 9(1), pp 1-7.

47 Gupta H., Aqil M., Khar R., et al.(2011), "Biodegradable levofloxacinnanoparticlesforsustainedoculardrugdelivery",Journalofdrugt argeting,19(6),pp.1-9.

48 Gupta R B (2006),Nanoparticle technology for drug delivery, Taylor

49 Gupta S., Samanta M K., Raichur A M (2010), "Dual-drug deliverysystembasedonInsitugel- formingnanosuspensionofforskolintoenhance antiglaucoma efficacy",AAPS PharmSciTech, 11(1), pp 322-335.

50 Gwak H.-S., Choi J.-S., Choi H.-K (2005), "Enhanced bioavailability ofpiroxicam via salt formation with ethanolamines",International journal ofpharmaceutics,297(1),pp.156-161.

51 Han F., Li S., Yin R., et al.(2008), "Investigation of nanostructured lipidcarriers for transdermal delivery of flurbiprofen",Drug development andindustrialpharmacy,34(4),pp.453-458.

(2011),"Developmentandoptimizationofsolidlipidnanoparticleformu lationforophthalmicdeliveryofchloramphenicol using a Box-Behnken design",International journal ofnanomedicine,6,p.683.

53 Hosny K M (2010), "Ciprofloxacin as ocular liposomal hydrogel",AAPSPharmSciTech,11(1),pp.241-246.

55 Kalam M A., Sultana Y., Ali A (2010), "Preparation, characterization,and evaluation of gatifloxacin loaded solid lipid nanoparticles as colloidalocular drug delivery system",Journal of drug targeting, 18(3), pp 191-204.

(2007),"Stabilizingeffectoffourtypesofdisaccharideontheenzymaticactivit yoffreeze- driedlactatedehydrogenase:stepbystepevaluationfromfreezingtostorage",P harmaceutical research,24(10),pp.1883-1890.

58 Kim B S., Won M., Lee K M., et al.(2008), "In vitro permeation studiesof nanoemulsions containing ketoprofen as a model drug",Drug delivery,15(7),pp.465-469.

59 Klang S., Siganos C., Benita S., et al.(1999), "Evaluation of a positivelycharged submicron emulsion of piroxicam on the rabbit corneum healingprocess following alkali burn",Journal of controlled release, 57(1), pp.19-27.

60 Kocbek P., Baumgartner S., Kristl J (2006), "Preparation and evaluationofnanosuspensionsforenhancingthedissolutionofpoorlys o l u b l e drugs",Internationaljournalofpharmaceutics,312(1-2),pp.179-186.

61 KompellaU.B.,EdelhauserH.F.,editors(2011),Drugproductdevelopmentfo rthebackoftheeye,Springer,pp.261-290.

62 Kosrirukvongs P (1997), "Topical piroxicam and conjunctivitis",Journalof the Medical Association of Thailand

63 Kreuter J (2007), "Nanoparticles a historical perspective",Internationaljournalofpharmaceutics,331(1),pp.1-10.

66 Kumar P S., Saini T R., Chandrasekar D., et al.(2007), "Novel approachfor delivery of insulin loaded poly (lactide-co-glycolide) nanoparticlesusingacombinationofstabilizers",DrugDelivery,14(8),pp.517-523.

(2010),"Nanosuspensiontechnology:a review",International journal of pharmacy and pharmaceutical sciences,2(4),pp.35-40.

68 Lamprecht A., Ubrich N., Yamamoto H., et al.(2001),

"Biodegradablenanoparticlesfortargeteddrugdeliveryintreatmentofinflam matorybowel disease",Journal of pharmacology and experimental therapeutics,299(2),p.775.

69 Lemarchand C., Gref R., Couvreur P (2004), "Polysaccharide- decoratednanoparticles",Europeanjournalofpharmaceuticsa n d biophar maceutics,58(2),pp.327-341.

70 Lim S B., Rubinstein I., ệnyỹksel H (2008), "Freeze drying of peptidedrugsself-associatedwithlong- circulating,biocompatibleandbiodegradablestericallystabilizedphospholipi dnanomicelles",Internationaljournal ofpharmaceutics,356(1-2),pp.345- 350.

71 LogothetidisS., editor (2012),Nanomedicine and nanobiotechnology,Springer,pp.18-23.

72 Luo Q., Zhao J., Zhanga X., et al.(2011), "Nanostructured lipid carrier(NLC) coated with Chitosan Oligosaccharides and its potential use inoculardrugdeliverysystem",Internationaljournalofp h a r m a c e u t i c s,403,pp.185-191.

73 Macha S., Mitra A K., Hughes P M., editors (2003),Ophtalmic drugdeliverysystems,2ed,Marcel Dekker,pp.59-169.

74 Madhusudhan B., Rambhau D., Apte S., et al.(2007), "1-O- alkylglycerolstabilizedcarbamazepineintravenouso/wnanoemulsionsfordr ugtargetingin mice",Journalofdrug targeting,15(2),pp.154-161.

75 MahmoudA.A.,El-FekyG.S.,KamelR.,etal.(2011),"Chitosan/ sulfobutylether-beta-cyclodextrinnanoparticlesasa potentialapproachforoculardrugdelivery",Internationaljournalofpharmac eutics,413(1-2),pp.229-236.

(2006),"Pharmacokinetics,tissuedistribution and bioavailability of nitrendipine solid lipid nanoparticlesafterintravenousandintraduodenaladministration",Journalof drugtargeting,14(9),pp.632-645.

77 MatsumotoG., KushibikiT., Kinoshita Y.,etal.(2006), "Cationizedgelatin delivery of a plasmid DNA expressing small interference RNA forVEGF inhibits murine squamous cell carcinoma",Cancer science, 97(4),pp.313- 321.

( 2 0 1 0 ) , "Mucoadhesiveliposomesasoculardeliverysystem:physical,mi crobiological,andinvivoassessment",Drugdevelopmentandindustrialphar macy,36(1),pp.108-118.

79 Mitra A K., editor (2003),Ophthanmic drug delivery systems,

80 Mohanraj V J (2006), "Nanoparticles - a review",Tropical journal ofpharmaceutical,5(1),pp.561-573.

81 Mokarram A R., Keshavarz M., Ahmadi A., et al.(2010), "Preparationand in-vitro evaluation of indomethacin nanoparticles",DARU Journal ofpharmaceutical sciences,18(3),pp.185-191.

82 MotwaniS.K.,ChopraS.,TalegaonkarS.,etal.(2008),"Chitosan– sodiumalginatenanoparticlesassubmicroscopicreservoirsforoculardelivery:For mulation,optimisationandinvitrocharacterisation",Europeanjournalofphar maceuticsandbiopharmaceutics,68(3),pp.513-525.

83 Mou D., Chen H., Wan J (2011), "Potent dried drug nanosuspensions fororalbioavailabilityenhancementofpoorlysolubledrugswithpH- dependent solubility",International journal of pharmaceutics, 413, pp.237-244.

84 Murthy S N., Zhao Y.-L., Sen A., et al.(2004), "Cyclodextrin enhancedtransdermaldeliveryofpiroxicamandcarboxyfluoresceinbyelectro poration",Journalof controlledrelease,99(3),pp.393-402.

85 NagarwalR.C.,KantS.,SinghP.,etal.(2009),"Polymericnanoparticulate system: a potential approach for ocular drug delivery",Journalofcontrolledrelease,136(1),pp.2-13.

86 Nalwa H S (2004),Encyclopedia of nanoscience and nanotechnology,American ScientificPublishersStevensonRanch,pp.3-25.

87 NiwaT.,NakanishiY.,DanjoK.(2010),"One- steppreparationofpharmaceutical nanocrystals using ultra cryo-milling technique in liquidnitrogen",Europeanjournalofpharmaceuticalsciences,41(1),pp.78-85.

88 Ourique A., Pohlmann A., Guterres S., et al.(2008), "Tretinoin- loadednanocapsules:Preparation,physicochemicalcharacterization,andpho tostability study",International journal of pharmaceutics, 352(1-2),pp.1-4.

(2004),"Nanosuspensions:apromisingdrugdeliverystrategy",Journalofpha rmacyandpharmacology,56(7),pp.827-840.

90 PepiI., Hafner A., LovriJ., et al.(2010), "A nonionic surfactant/chitosanmicellesysteminaninnovativeeyedropformulation",Journ alofPharmaceutical Sciences,99(10),pp.4317-4325.

92 Pilcer G., Vanderbist F., Amighi K (2009), "Preparation andcharacterizationof spray-dried tobramycin powders containing nanoparticlesforpulmonarydelivery",Internationaljournalofpharmaceutic s,365(1-2),pp.162-169.

93 Plosker G L (2008), "Pegylated Liposomal Doxorubicin",Drugs,

94 PrajapatiR.N.,TekadeR.K.,GuptaU.,etal.(2009),"Dendimer-mediated solubilization, formulation development and in vitro- in vivosssessmentofpiroxicam",Molecularpharmaceutics,6(3),pp.940-950.

95 Qian Y., Wang F., Li R., et al.(2010), "Preparation and evaluation of insitu gelling ophthalmic drug delivery system for methazolamide",Drugdevelopmentandindustrialpharmacy,36(11),pp.1340- 1347.

97 Romberg B., Hennink W E., Storm G (2008), "Sheddable coatings forlong-circulating nanoparticles",Pharmaceutical research, 25(1), pp. 55-71.

98 Rossi S., Ferrari F., Bonferoni M C., et al.(2000), "Characterization ofchitosan hydrochloride-mucin interaction by means of viscosimetric andturbidimetricmeasurements",Europeanjournalofpharmaceuticalscienc es,10(4),pp.251-257.

99 SandriG.,BonferoniM.C.,GửkỗeE.H.,etal.(2010),"Chitosan-associated

SLN: in vitro and ex vivo characterization of cyclosporine Aloaded ophthalmic systems",Journal of microencapsulation, 27(8), pp.735-746.

100 Schọrtl W., editor (2007),Light scattering from polymer solutions andnanoparticledispersions,Springer,pp.58-60.

101 Scuderi B., Driussi G., Chizzolini M., et al.(2003), "Effectiveness andtoleranceofpiroxicam 0.5%a n d d i c l o f e n a c so d i u m 0.1%i n c o n t r o l l i n g inflammation after cataract surgery",European journal of ophthalmology,13(6),pp.536-540.

102 Seyfoddin A., Shaw J., Al-Kassas R (2010), "Solid lipid nanoparticles foroculardrugdelivery",Drugdelivery,17(7),pp.467-489.

103 Shahnaz G., Vetter A., Barthelmes J., et al.(2012), "Thiolated chitosannanoparticlesf o r t h e n a s a l a d m i n i s t r a t i o n o f l e u p r o l i d e : b i o a v a i l a b i l i t y andpharmacokineticcharacterization",Internati onalJournalofPharmaceutics,428(1-2),pp.164-170

104 Sharma A., Sharma S., Khuller G K (2004), "Lectin-functionalized poly(lactide-co-glycolide)nanoparticlesaso r a l / a e r o s o l i z e d a n t i t u b e r c u l a r drug carriers for treatment of tuberculosis",The Journal of antimicrobialchemotherapy,54(4),pp.761-766.

105 Sharma G., Van Der Walle C., Ravi Kumar M (2013), "Antacid co- encapsulatedpolyesternanoparticlesforperoraldeliveryofinsulin:Developm ent, pharmacokinetics, biodistribution and pharmacodynamics",Internationaljournal ofpharmaceutics,440(1),pp.99-110.

(1997),"Physicochemicalcharacterizationsofpiroxicam-poloxamer solid dispersion",Pharmaceutical development andtechnology,2(4),pp.403-407.

107 Shudo J., Pongpeerapat A., Wanawongthai C., et al.(2008), "In vivoassessmentoforaladministrationofprobucolnanoparticlesinrats",Biolo gical&pharmaceuticalbulletin,31(2),pp.321-325.

108 Tamilvanan S., Benita S (2004), "The potential of lipid emulsion forocular delivery of lipophilic drugs",European journal of pharmaceuticsand biopharmaceutics,58(2),pp.357-368.

109 Thakur R., Gupta R B (2006), "Formation of phenytoin nanoparticlesusingrapidexpansionofsupercriticalsolutionwithsolidcosolve nt(RESS-SC) process",International journal of pharmaceutics, 308(1-2),pp.190-199.

(2005),"Formationofnanoparticlesofahydrophilicdrugusingsupercriticalca rbondioxideandmicroencapsulationforsustainedrelease",Nanomedicine:nanotech nology,biologyandmedicine,1(1),pp.85-90.

111 TozukaY.,MiyazakiY.,TakeuchiH.(2010),"Acombinationalsupercritical CO2 system for nanoparticle preparation of indomethacin",Internationaljournal ofpharmaceutics,386(1-2),pp.243-248.

112 Trapani A., Laquintana V., Denora N., et al.(2007), "Eudragit RS

100microparticlescontaining2-hydroxypropyl-[beta]- cyclodextrinandglutathione: Physicochemical characterization, drug release and transportstudies",Europeanjournalofpharmaceuticalsciences,30(1),pp.64- 74.

113 TressetG.,DavyCheongW.C.,ShireenTanY.L.,etal.(2007),"Phospholipid- based artificial viruses assembled by multivalent cations",Biophysicaljournal,93(2),pp.637-644.

115 VanEerdenbrughB.,FroyenL.,MartensJ.,etal.(2007),"Characterizationofphysico- chemicalpropertiesandpharmaceuticalperformance of sucrose co-freeze- dried solid nanoparticulate powders ofthe anti-HIV agent loviride prepared by media milling",InternationalJournalofPharmaceutics,338(1- 2),pp.198-206.

116 Van Eerdenbrugh B., Van Den Mooter G., Augustijns P (2008), "Top- downproductionofdrugnanocrystals:nanosuspensionstabilization,miniatur izationandtransformationintosolidproducts",InternationalJournalofPhar maceutics,364(1),pp.64-75.

(2006),"Flurbiprofenloadedbiodegradablenanoparticlesforophtalmicadmi nistration",Journalofsharmaceutical sciences,95(11),pp.2393-2405.

118 Vrečer F., Vrbinc M., Meden A (2003), "Characterization of piroxicamcrystalmodifications",Internationaljournalofp h a r m a c e u t i c s, 256(1),pp.3-15.

119 Wu K., Li J., Wang W., et al.(2009), "Formation and characterization ofsoliddispersionsofpiroxicamandpolyvinylpyrrolidoneusingspraydryinga ndprecipitationwithcompressedantisolvent",Journalofpharmaceutical sciences,98(7),pp.2422-2431.

(2011),"Thebiologicalcharacteristicsandpharmacodynamicsofamycophen olatemofetilnanosuspensionophthalmicdeliverysysteminrabbits",Journalofphar maceutical science,pp.1350-1361.

121 Xia D., Quan P., Piao H., et al.(2010), "Preparation of stable nitrendipinenanosuspensionsusingtheprecipitation- ultrasonicationmethodforenhancement of dissolution and oral bioavailability",European journal ofpharmaceutical sciences,40(4),pp.325-334.

122 Xie Y., Cao W., Krishnan S., et al.(2008), "Characterization of mannitolpolymorphicformsinlyophilizedproteinformulationsusingamultiv ariatecurveresolution(MCR)- basedRamans p e c t r o s c o p i c method",Pharmaceutical research,25(10),pp.2292-2301.

123 Xiong R., Lu W., Yue P., et al.(2008), "Distribution of an intravenousinjectable nimodipine nanosuspension in mice",Journal of pharmacy andpharmacology,60(9),pp.1155-1159.

(2011),"Developmentofmucoadhesivepoly(lactide-co- glycolide)nanoparticlesforocularapplication",Pharmaceutical development and technology, 16 (1), pp 29-35.

125 Yỹksel N., Karataş A., ệzkan Y., et al.(2003), "Enhanced bioavailabilityofp i r o x i c a m u s i n g G e l u c i r e 4 4 / 1 4 a n d L a b r a s o l : i n v i t r o a n d i n v i v o evaluation",European journal of pharmaceutics and biopharmaceutics,56(3),pp.453-459.

126 Zamiri R., Zakaria A., Abbastabar H., et al.(2011), "Laser- fabricatedcastoroil- cappedsilvernanoparticles",Internationaljournalofnanomedicine,6,pp.565 -571.

127 Zhang X., Zhang H., Wu Z., et al.(2008), "Nasal absorption enhancementof insulin using PEG-grafted chitosan nanoparticles",European journal ofpharmaceuticsand biopharmaceutics,68(3),pp.526-534.

128 ZhouY.,KopecekJ.(2013),"Biologicalrationaleforthedesignofpolymeric anti-cancer nanomedicines",Journal of drug targeting, 21(1),pp.1-26.

129 ZojajiS.,JalaliF.(2012),"Preparationandassessmentofpiroxicamloaded solid lipid nanoparticles",Research in pharmaceutical sciences,7(5),p.S231.

130 Zullo S J., Srivastava S., Looney J P., et al.(2002),

"Nanotechnology:emergingdevelopmentsandearlydetectionofcancer.Atwo -dayworkshopsponsoredbythenationalcancerinstituteandthenationalinstitute of standards and technology, August 30-31 2001, on the NationalInstitute of Standards and

131 Xiao X C., Hong Z G (2010), "Firstborn microcrystallization method topreparenanocapsulescontainingartesunate",Internationaljournalofnano medicine,5,p.483-489.

132 Zahr A S., Davis C A., Pishko M V (2006), "Macrophage uptake ofcore-shell nanoparticles surface modified with poly (ethylene glycol)",Langmuir-ACSPublications,22(19),pp.8178-8185.

1 PHỤLỤC1: Mộtsố kếtquảđo kíchthướctiểu phân

4 PHỤLỤC4: Mộtsố sắckýđođịnh lượng piroxicamtrong thủydịch

5 PHỤLỤC5: Mộtsố kếtquảnghiên cứu tínhthấmpiroxicam quagiácmạcmắtthỏ

A:ngay sau khibàoche,B:sau 1 nămbảo quảnỡđieukiệnthực

A:ngay sau khibàoche.B:sau 1 nămbảo quảnỡđieukiện thực

:trongnước,B,C,D:trongmitrường đệmcitric-citrat,đệmacetic- acetatvàđệmphosphat

:trongnước,B,C,D:trongmitrườngđệmcitric-citrat,đệmacetic- acetatvàđệmphosphat

Hình A: Hình ãnh các mẫu nuôi cấy trong môi trường thioglycolatsau14 ngày

Hình B: Hình ãnh các mẫu nuôi cấy trong môi trường caseinđậutươnglỏngsau14 ngày

Phụ lục 4.1 Sắc ký đồ định lượng piroxicam trong thủy dịchtại thờiđiểm5 phútsau khinhỏthuốc

D:\HPLC\Piroxicam MA\231211\Piroxicam 5HD-

Pk# Name RetentionTime Area Asymmetry Theoretical plates

D:\HPLC\Piroxicam MA\231211\Piroxicam 5HN-

Pk# Name RetentionTime Area Asymmetry Theoretical plates

P ir ox ic am 6 7 7 7 P iro xi ca m 1 6 75 7 1

Phụ lục 4.2 Sắc ký đồ định lượng piroxicam trong thủy dịchtại thờiđiểm30 phút sau khi nhỏthuốc

D:\HPLC\Piroxicam MA\231211\Piroxicam 30HD-

D:\HPLC\Piroxicam MA\231211\Piroxicam 30HN-

Pk# Name RetentionTime Area Asymmetry Theoretical plates

Pi ro xi ca m P iro xi ca m 6 78 3 6 79 2 1 1

Phụlục4.3.Sắckýđồđịnhlượngpiroxicamtrongthủy dịchtại thờiđiểm60 phút sau khi nhỏthuốc

D:\HPLC\Piroxicam MA\231211\Piroxicam 60HD-

Pk# Name RetentionTime Area Asymmetry Theoretical plates

D:\HPLC\Piroxicam MA\231211\Piroxicam 60HN-

P iro xi ca m P ir ox ic am 6 77 0 6 81 3 1 1

Phụ lục 4.4 Sắc ký đồ định lượng piroxicam trong thủy dịchtại thờiđiểm180phút saukhinhỏ thuốc

D:\HPLC\Piroxicam MA\231211\Piroxicam 180HD-

Pk# Name RetentionTime Area Asymmetry Theoretical plates

D:\HPLC\Piroxicam MA\231211\Piroxicam 180HN-

P iro xi ca m P iro xi ca m 6 83 7 1 6 80 2 1

Khốilượng Px thấmqua giỏcmạc(àg)từcỏchỗndịch

12cps 9cps 6cps Tween80 Cremopho rRH 40

Phụ lục 5.2 Ảnh hưởng của độ nhớt đến khã năng thấm piroxicamquagiác mạc mắt thỏ

Khối lượng Px thấm qua giỏc mạc (àg) từ cỏc hỗn dịchcó độ nhớt khácnhau

Khối lượng Px thấm qua giỏc mạc (àg) từ cỏc hỗn dịchcó KTTPkhác nhau

Phụ lục 5.4.Ảnh hưởng của chất diện hoạt đến khã năng thấm piroxicamquagiác mạc mắt thỏ

KhốilượngPx thấmqua giỏcmạc(àg)từhỗndịchchứacỏc chất diệnhoạt (CDH)

Tween20 Tween40 Tween80 Cremopho rRH40