Nghiên cứu bào chế viên nén nổi chứa curcumin để tăng cường tác dụng kháng ung thư
MỤC LỤC
DANHMỤCCÁCHÌNH
1.Phổ UV-Vis của mẫu chuẩn curcumin, mẫu thử HPTR curcumin/(PVPK30+Tween80)và hệtádượcPVPK30+Tween80trongđệmpH 1,2..60. 2.Phổ UV-Vis của mẫu chuẩn curcumin có sử dụng methanol trong giaiđoạnđầuxửlýmẫu,mẫutrắngđệmpH1,2vàmẫutrắngmethanol..60.
ĐẶTVẤNĐỀ
Có nhiềudạng bào chế mới ra đời trong đó có thuốc nổi, là một trong những dạng thuốc cónhiều tiềm năng ứng dụng, hứa hẹn mang đến phương pháp trị liệu mới có hiệu quảnhờ thuốc có tỉ trọng thấp hơn dịch dạ dày (≈1,004g/cm3) nên có khả năng nổi vàlưu ở dạ dày mà không bị tác động bởi tốc độ làm rỗng dạ dày trong một thời giandài[110]từ đó giúp thuốc không bị phân hủy bởi pH kiềm của ruột non, giúp giảmliều, giảm tần số dùng thuốc, giảm sự dao động của nồng độ thuốc trong máu, tăngsự hấp thu… khắc phục được những hạn chế vốn có của những dạng thuốc truyềnthống,nângcaohiệuquảđiềutrịlâmsàng[101],[110]. Chođếnnay,trênthịtrườngViệtNamchưacódạngthuốcnổichứacurcumin và chưa có bất kỳ nghiên cứu nào về tác dụng ức chế sự phát triển tế bào ung thư dạdày của curcumin được thực hiện. Vì vậy, với mong muốn tìm ra một dạng thuốcmới, có thể khai thác hết tiềm năng chữa bệnh của một hoạt chất có nguồn gốc từthiên nhiên, ít tác dụng phụ cũng như góp phần nghiên cứu đánh giá hiệu quả khángung thư của curcumin trên chuột nhắt trắng, đề tài“Nghiên cứu bào chế và đánhgiá tác dụng kháng ung thư của viên nén nổi chứa curcumin”được thực hiện vớimụctiêunhưsau:. 1) Xây dựng và thẩm định quy trình định lượng curcumin trong hệ phân tán rắnbằng phương pháp quang phổ tử ngoại khả kiến (UV-Vis) và trong viên nénnổibằngphươngphápsắckýlỏnghiệunăngcao(HPLC). 2) Nghiên cứu bào chế hệ phân tán rắn (HPTR) chứa curcumin có độ hòa tancaobằng cácphương phápvà chấtmang khác nhau. 4) Đánh giá tác dụng kháng ung thư dạ dày của thành phần công thức viên nénnổi chứa HPTR curcumin 100 mg trên dòng tế bào ung thư ở người(in vitro)vàtrênchuộtnhắttrắng(invivo).
CHƯƠNG1.TỔNGQUANTÀILIỆU
TỔNGQUANVỀCURCUMIN
Curcumin có khả năng ngăn chặn các loại ung thư dạ dày, da, tuyến vú, miệng,phổi, gan, thực quản, ruột non, ruột già… Curcumin tác động đến hầu hết các giaiđoạn hình thành và phát triển khối u. Trong khi hầu hết cỏc nghiờn cứu cho thấy cáccurcumin-glucuronid và tetrahydrocurcumin có hoạt tính kém hơn curcumin thì mộtsố nghiên cứu khác cho rằng những hợp chất này có thể có hoạt tính mạnh hơncurcumin.
TỔNGQUANVỀDẠNG THUỐCNỔITRONGDẠDÀY 1. Kháiniệm
Gupta Neeta và Aggarwal Nidhi (2008) nghiên cứu viên nén nổi chứa curcumin(CI) và viên nén nổi chứa phức curcumin-β-cyclodextrin (CII) theo cơ chế sủi bọtkhí với thành phần tá dược là HPMCK15 (200 mg), dicalci phosphat (20 mg), natricarbonat (40 mg), acid citric (20 mg), carbopol 934P (25 mg) và magnesium stearat(10 mg) bằng phương pháp xát hạt ướt. Kết quả cho thấy, trong môi trường thử pH 1,2 viên có tiềm thời và thờigian nổi là khoảng 6,5 phút và > 480 phút; kết quả cũng cho thấy độ hòa tan củacurcumin là rất thấp vì vậy cần phải thêm vào 1% (w/v) natri lauryl sulfat vào dungdịchthửđộhòatan[121].
PHƯƠNGPHÁPNGHIÊNCỨU
Tuy nhiên, do đường tiêu hóa củachuột nhỏ, không thể uống cả viên thuốc với khối lượng 1 g do đó đề tài chỉ thựchiện đánh giá khả năng ức chế tế bào ung thư dạ dày của thành phần công thức viênnén nổi chứa HPTR curcumin, từ kết quả này sẽ giúp cho đề tài có những cơ sở dữliệu quan trọng góp phần cho những nghiên cứu tiếp theo, thửn g h i ệ m t r ê n l o à i độngvậtthínghiệmkhác. Đánh giá tác dụng kháng ung thư dạ dày của thành phần công thức viênnénnổichứaHPTRcurcumin100mg trênchuộtnhắttrắng(invivo). Thử độc tính cấp của thành phần công thức nén nổi placebo và viên nén nổichứa HPTRcurcumin100mg. cái)uống mẫu thử liều tối đa duy nhất có thể qua đường uống (chuột được cho nhịn đóiítnhất12giờtrước khichouốngmẫuthửnghiệm).
CHƯƠNG3.KẾTQUẢNGHIÊNCỨU
II IIII
Việcxáthạtvàsửahạt Dễ,nhanh Dễ,nhanh Khó Khó,mấtnhiều thờigian Nhận xét:với kết quả ởbảng 3.23, cho thấy để vừa có tiềm thời nổi ngắn, đồngthời giữ viên nguyên vẹn không bị rã, thuận lợi cho quy trình bào chế thì tỉ lệ hỗnhợpdung môicồn-nước(9:1) làthíchhợpđểkhảosátcáccôngthứctiếptheo. Curcuminhòa tan(mg). Các thông số kiểm nghiệm bán thành phẩm và thành phẩm viên nén nổichứaHPTRcurcumin 100mg. Các thông số kiểm nghiệm bán thành phẩm được trình bày ởPL-5.2. cho thấycác công thức đều chocốm có độtrơn chảy tốt, góc nghỉ đều <3 0 o, độ ẩm <. 7%;kếtquảcó sự lặplạigiữa 03lônghiên cứu. Kết quả kiểm nghiệm 03 lô viên nén nổi chứa HPTR curcumin 100 mg đượctrìnhbàyởbảng3.37. Chỉtiêu Mứcchấtlượng Kếtquả. Độhòa tan sau4giờ. Tiềm thời < 180 giâyThờigiannổi>8giờ Tính nguyên vẹn củaviên. curcuminđượchòat ansovớihàm lượng ghi trênnhãn. nguyênvẹntro ngsuốtquátrình nổi. nguyênvẹntro ngsuốtquátrình nổi. >8giờ) Viên nguyênvẹn trong. Nhận xét:cáclô thuốc trước khi đưa vào nghiên cứuđộ ổnđịnhđều đạtc á c yêu cầu kiểm nghiệm, được phép đưa các lô thuốc đã bào chế xây dựng tiêu chuẩncơsởvànghiêncứukhảosátđộổnđịnh. Tính Viênnén màuvàng. chất đều,tròn,cócạnh, Đạt Đạt Đạt. Thờigian lưupic Định curcumincủa mẫu. tính thửvàmẫuchuẩn Đúng. Đạt Đạt Đạt. Hình ảnh X-quang của viên đối chiếu được trình bày ởPL-5.9. Bảng3.38.Kếtquảthửnghiệmđộổnđịnhcủa3lôởđiềukiệnlão hóacấptốctạithờiđiểm 6tháng. Chỉtiêu Mứcchấtlượng Kếtquả. Độhòa tan sau4giờ. Tiềm thời < 180 giâyThờigiannổi>8giờ Tính nguyên vẹn củaviên. curcuminđượchòat ansovớihàm lượng ghi trênnhãn. nguyênvẹntro ngsuốtquátrình nổi. nguyênvẹntro ngsuốtquátrình nổi. >8giờ) Viên nguyênvẹn trong. Nhận xét:kết quả khảo sát độ ổn định của viên nén nổi curcumin 100mg bằngphương pháp lão hóa cấp tốc cho thấy hàm lượng curcumin giảm dần theo thời giankhảo sát, đến tháng thứ 6 hàm lượng hoạt chất ở lô 1 giảm 10,69%, lô 2 giảm 9,41%và lô 3 giảm 10,44%; nghĩa là có sự thay đổi “đáng kể” vì vậy đề tài ước tính tuổithọdựatrênkếtquảnghiêncứudàihạn. Tính Viênnén màuvàng. chất đều,tròn,cócạnh, Đạt Đạt Đạt. Thờigianlưupic Định curcumincủa mẫu. tính thửvàmẫuchuẩn Đúng. Đạt Đạt Đạt. Kếtquảnghiêncứuđộổnđịnhcủa 3lôviênnénnổicurcumin100mgbằngp hươngphápthửnghiệmdàihạntạithờiđiểmthángthứ24đượctrìnhbàyởbảng. Bảng3.39.Kết quảthửnghiệmđộổnđịnhcủa3lôởđiều kiệnthửnghiệmdài hạntạithờiđiểm24tháng. Chỉtiêu Mứcchấtlượng Kếtquả. Độhòa tan sau4giờ. Tiềm thời < 180 giâyThờigiannổi>8giờ Tính nguyên vẹn củaviên. curcuminđượchòat ansovớihàm lượng ghi trênnhãn. nguyênvẹntro ngsuốtquátrình nổi. nguyênvẹntro ngsuốtquátrình nổi. >8giờ) Viên nguyênvẹn trong.
CHƯƠNG4.BÀNLUẬN
NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ HỆ PHÂN TÁN RẮN CHỨA CURCUMIN CểĐỘ HềA TAN CAO BẰNG CÁC PHƯƠNG PHÁP VÀ CHẤT MANG KHÁCNHAU
Từ kết quả trình bày từbảng 3.13 đến 3.18cho thấy tất cả các hệ chất mangnghiên cứu đều có khả năng cải thiện độ tan của curcumin, tuy nhiên hiệu quả củamỗi hệ chất mang là không giống nhau tùy thuộc vào cấu trúc hóa học của hệ chấtmang sử dụng, sự tương tác giữa các thành phần trong HPTR, phương pháp bào chếkhác nhau… Trong 14 công thức nghiên cứu, công thức N_F3 có mức độ cải thiệnđộ hòa tan cao nhất, mặc dù kết quả độ hòa tan cao nhất chỉ đạt 50,85% (kl/kl)nhưng môi trường pH = 1,2 là môi trường rất khó để hòa tan curcumin, nếu so vớiđộ hòa tan của curcumin nguyên liệu ở cùng thời điểm thì HPTR đã cải thiện độ hòatangấp237,2- 342,8lần.Kếtquảnàylàmộtđiểmmớicủađềtàivìchođếnnayrấtítnghiêncứucảithiện độhòatancủacuộc curcuminvớimôitrường thửpH=1,2. Kết quả này phù hợp vớinghiên cứu của KumarGSvàcộngsự (2011)[55], đã nghiên cứub à o c h ế v i ê n n é n nổi chứa cefuroxim axetil với ba loại polyme HPMC K4M, HPMC K15M, gômxanthan, nhận thấy rằng tất cả các viên sử dụng HPMC làm tá dược tao khung cótiềm thời nổi ngắn (20 đến 68 giây) còn những viên sử dụng gôm xanthan có tiềmthời tăng lên đáng kể (5 phút đến 10 phút).So sánh về thời gian nổi và tính nguyênvẹn thì các công thức sử dụng gôm xanthan> HPMC K15M> HPMC K4M, do đóđể viên vừa có tiềm thời nổi ngắn, thời gian nổi dài và giữ được tính nguyên vẹn thìviệc phối hợp gôm xanthan với HPMC K4M hoặc HPMC K15M là cần thiết.
KẾTLUẬN
- Viênnénnổibàochếđạttấtcảcáctiêuchuẩnchungcủathuốcviênnénvề tính chất cảm quan, định tính, định lượng (90-110%), độ cứng khoảng(40-60N), độ hòa tan sau 4 giờ cao hơn xấp xỉ 241lần so với viên nén nổichứacurcuminnguyênliệuvàsau8giờxấpxỉ 196lần. - Kết quả chụp X quang cho thấy viên nén nổi lưu lại được trong dạ dày chóthử nghiệm > 4h30 phút, là cơ sở dữ liệu quan trọng có giá trị khoa học đểtiến hành thử nghiệm lâm sàng đặc biệt là trên người tình nguyện chohướngnghiêncứutiếptheo.
TÀILIỆUTHAMKHẢO
GugulothuDalapathi B and Vandana B Patravale (2012), "A new stability- indicating HPLC method for simultaneous determination of curcumin andcelecoxibatsinglewavelength:anapplicationtonanoparticulateformulati on",PharmaceuticaAnalyticaActa.3(4),pp.1-6. TadrosMinaIbrahim(2010),"Controlled-releaseeffervescentfloatingmatrix tablets of ciprofloxacin hydrochloride: Development, optimizationandin vitro-in vivoevaluation in healthy human volunteers",Europeanjournalof pharmaceuticsandbiopharmaceutics.74(2),pp.332-339.
DANHMỤC CÁCPHỤLỤC
YÊUCẦUKỸ THUẬT Tính chất:bột màuvàng,dễtantrongethanol, methanol
Dung dịch curcumin chuẩn đối chiếu: cân chính xác khoảng 10 mg curcumin chuẩncho vào bình định mức 50 mL, thêm methanol, lắc kỹ đến tan hoàn toàn. Giảmkhốilượngdolàmkhô:xácđịnhtrên1,0gchếphẩm.Dùngchéncâncó nắpmàilàm bìđựngmẫu, sấy ở nhiệt độ 120oC trong2 giờ,lấy ra để nguộitrong bình hút ẩm, cân xác định khối lượng bì (a g).
ĐểNGGểI-BẢOQUẢN - Đónggóitrongbaobìkhô,sạch,kín
Hút 1mL dịch lọc cho vào bình định mức 10 mL, bổ sung thể tích vừa đủ bằng đệm pH1,2;đođộhấpthuởbước sóng428nm.Mẫutrắnglàdung dịchđệm pH1,2. Độ ẩm:cân khoảng 3-5 g bột cho vào cân hồng ngoại xác định độ ẩm, trải đều cốmđảm bảo phủhết đĩa cân.
NỔICURCUMIN10 0mg
PHƯƠNGPHÁPTHỬ 1. Tínhchất:bằngcảmquanchếphẩmphải đạtyêucầu đãnêu
Dung dịch chuẩn:cân chính xác khoảng 10 mg curcumin chuẩn hòa tan trong bìnhđịnhmức50mLvớiMeOH,siêuâmtrong10phút,bổsungvừađủbằngMeOH ,lắc đều, thu được dung dịch C chứa curcumin nồng độ khoảng 200 àg/mL. Hỳtchớnh xỏc 0,5 mL dung dịch C cho vào bình định mức 10 mL, bổ sung vừa đủ đếnvạch bằng ACN, lắc đều, lọc qua màng lọc 0,45 àm thu được dung dịch curcuminchuẩncúnồngđộkhoảng10àg/mL.
ĐểNGGểI-BẢOQUẢN - Đónggóitrongbaobìkhô,sạch, kín
Đánh giá theo 3 mức: tốt (viên không bị vỡ); khá (viên bị vỡ một phần);kém(viênbịvỡhoàntoàn)(quansát6viên ởmục 2.7). ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG KHÁNG UNG THƯ DẠ DÀY CỦATHÀNH PHẦN CÔNG THỨC VIÊN NÉN NỔI CHỨA HPTR CURCUMIN100 MG TRÊN DềNG TẾ BÀO UNG THƯ Ở NGƯỜI (IN VITRO) VÀ TRấNCHUỘT NHẮTTRẮNG(INVIVO).