Nghiên cứu tác dụng kháng ung thư phổi của virus vaccine sởi trên thực nghiệm

BỘGIÁODỤCVÀĐÀOTẠO BỘYTẾ TRƯỜNGĐẠIHỌCYHÀNỘI NGUYỄNTHỊMỸTHÀNH NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG KHÁNG UNG THƯPHỔI NGƯỜICỦAVIRUSVACCINESỞITRÊNTHỰC NGHIỆM LUẬNÁNTIẾNSỸYHỌC HÀNỘI,NĂM2023 BỘ GIÁODỤCVÀĐÀOTẠO BỘYTẾ TRƯỜNGĐẠIHỌCYHÀNỘI NGUYỄNTHỊMỸTHÀNH NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG KHÁNG UNG THƯPHỔINGƯỜICỦAVIRUSVACCINE SỞITRÊNTHỰC NGHIỆM Chuyên ngành: Dị ứng Miễn dịchMãsố:62720109 (KhoahọcYsinh Mãsố:9720101) LUẬNÁNTIẾNSỸYHỌC NGƯỜIHƯỚNG DẪNKHOAHỌC: GS.TS.NGUYỄNLĨNHTỒN TS.NGUYỄNVĂNĐƠ HÀNỘI, NĂM 2023 LỜICẢMƠN Vớilịngkínhtrọngvàbiếtơnsâusắc! Tôi xin chân thành cảm ơn Đảng ủy, Ban Giám Hiệu trường Đại học YKhoaVinhđãtạomọiđiềukiệnchotơiđượchọcnghiêncứusinhđúngchunngànhmình uthích Tơi xin chân thành cảm ơn Đảng ủy, Ban Giám Hiệu trường Đại học YHàNội,PhịngSauđạihọc,BộmơnSinhlýbệnhMiễndịchTrườngĐạihọcYHàNội;BộmơnSinhlýbệnh,ViệnnghiêncứuYDượchọcQnsự,KhoaGiảiphẫubệnhBệnhviện103HọcviệnQnYđãtạođiềukiện,giúpđỡtơitrongqtrìnhhọctậpvànghiên cứu Tơi xin chân thành cảm ơn Bộ mơn Sinh học tế bào, khoa Sinh học,Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia Hà Nội vàKhoa Hìnhthái, Viện 69, Bộ tư lệnh Lăng Chủ Tịch Hồ Chí Minh tạo điều kiện, giúpđỡtơihồnthànhluậnánnày Tơix i n b y t ỏ l ò n g b i ế t n s â u s ắ c đ ế n G S T S N g u y ễ n L ĩ n h T o n , TSNguyễnVănĐơlànhữngngườiThầyđãtậntìnhtrựctiếpdạydỗ,dìudắt,hướng dẫn tạo điều kiện cho tơi suốt q trình nghiên cứu vàhồn thànhluậnánnày Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn kính trọng đến Q Thầy, Cơ tronghội đồng chấm luận án dành nhiều thời gian công sức bảo, giúp đỡtơi hồnthànhbảnluậnánnày Tơi xin chân thành cảm ơn động viên, giúp đỡ vơ tư, tận tình TSLê Duy Cương, TS Ngô Thu Hằng anh chị trước, đồng nghiệp, vàbạn bè trongquátrình học tập Cuối cùng, tơi xin tỏ lịng biết ơn tới công ơn nuôi dạy Thầy mẹ tôi,sự quan tâm giúp đỡ, động viên Thầy mẹ, chồng, con, hai anh trai chịdâu vàbạnbèthânthiếtđểtơicóđượcngày hơmnay Hà Nội, ngàythángnăm 2022NguyễnThị MỹThành LỜICAMĐOAN Tôi xin cam đoan số liệu luận án kết nhóm nghiên cứuchúngtơi.Kếtquảđềtàinàylàthànhquảnghiêncứucủa tậpthểmàtơil àmộtthànhviênchính.Tơiđãđượctồnbộcácthànhviêntrongnhómnghiêncứu đồng ý cho phép sử dụng đề tài vào luận án để bảo vệ lấy bằngtiến sĩ Các số liệu, kết nêu luận án trung thực chưa đượcai cơngbốtrong bấtkỳcơng trìnhnàokhác Tácgiảluậnán NguyễnThị MỹThành MỤCLỤC ĐẶTVẤN ĐỀ CHƯƠNG1:TỔNGQUANTÀILIỆU .3 1.1 Ungthưphổi .3 1.1.1 Tìnhhìnhungthưphổitrênthếgiới 1.1.2 Tìnhhìnhung thưphổiởViệtNam 1.1.3 Nguyênnhân vàcácyếu tốnguy cơungthưphổi 1.1.4 Phânloạiung thưphổi 1.1.5 Cơchếbệnh sinh củaung thưphổi .10 1.1.6 Cácphươngpháp điều trịung thưphổihiệnnay tạiViệtNam 17 1.2 Liệuphápvirusvaccinesởiđiều trịungthưphổingười 21 1.2.1 Sinhhọcvirussởi .21 1.2.2 Virusvaccinesởilâynhiễmđặchiệutếbàoung thưphổi 22 1.2.3 Cáccơchếvirusvaccinesởilygiảitếbàoungthưphổi .24 1.2.4 Đápứng miễndịchvậtchủkhángMeV 34 1.2.5 Cácthửnghiệmlâmsàng sửdụngMeV điều trịungthư 35 CHƯƠNG2:ĐỐITƯỢNGVÀ PHƯƠNGPHÁPNGHIÊN CỨU 37 2.1 Đốitượngnghiêncứu 37 2.1.1 Động vật 37 2.1.2 Vậtliệunghiêncứu 37 2.1.3 Trangthiếtbịsửdụng trongnghiên cứu .38 2.2 Phươngphápnghiêncứu 39 2.2.1 Nicấyvàtăngsinh cácdịng tếbào 39 2.2.2 Tăngsinhvàchuẩnđộvirusvaccinesởi 41 2.2.3 ĐánhgiávirusvaccinesởilygiảitếbàobằngthửnghiệmMTT 45 2.2.4 ChuẩnbịmẫutếbàoH460 vàA549nhiễmMeVđánhgiátếbàochếtt heochươngtrìnhbằngphươngphápdịngchảy .47 2.2.5.Phươngphápphântíchtếbàodịng chảyđánhgiátỉlệtếbàoH460 vàA549chếttheochươngtrình .50 2.2.6 Phươngphápnichuộtthiếuhụtmiễndịch(chuộtnude) .52 2.2.7 TạokhốiutếbàoH460trênđùichuộtnudevàtínhthểtíchkhốiu .53 2.2.8 PhươngphápđiềutrịchuộtnudebằngMeV 54 2.2.9 PhươngphápđánhgiáhiệuquảđiềutrịkhốiutếbàoH460củaMeV .54 2.2.10 PhươngphápphẫutíchlấymơutếbàoH460ởchuộtnudesauđiềut rịbằng MeV .55 2.2.11 XửlýmơutếbàoH460thànhmẫutếbàođểđánhgiátỉlệcáctếbàomiễnd ịchvàtếbàochếttheochươngtrìnhbằngphươngpháp tếbàodòng chảy 56 2.2.12 ĐánhgiásiêucấutrúcmôutếbàoH460trênchuộtnudesauđiềutrịbằng MeV 58 2.2.13 PhântíchgiảiphẫubệnhmơutếbàoH460cấyghéptrênchuộtnude .59 2.2.14 Phương pháp phântíchkếtquả 61 2.2.15 Đạođứctrongnghiên cứu 61 2.2.16 Hạnchếcủanghiên cứu 62 CHƯƠNG3:KẾTQUẢNGHIÊNCỨU 65 3.1 Nicấy,tăngsinhdịngtếbàoH460A549,Verovàvirusvaccinesởi 65 3.1.1 Nicấy,tăngsinh cácdịng tếbàoH460,A549vàVero 65 3.1.2 Tăngsinh virusvaccinesởi 66 3.2 Chuẩnđộ TCID50củavirusvaccinesởi 67 3.3 Lyg iả i trực tiếp t ế bào u n g t h phổingườ i dòngH460 v A549 c ủ a Vi rusvaccinesởiinvitro .68 3.3.1 TếbàoH460vàA549nhiễmvirusvaccinesởitạohợpbàoinvitro .68 3.3.2 Hiệuq uả lyg iả i tếbào u ng t h phổi người H460 A549 b ằn g thử nghiệmMTTcủavirusvaccinesởi 69 3.3.3 Đánh giá tỉ lệ tế bào H460 A549 chết theo chương trình sau nhiễmMeVinvitrobằngphươngphápphântíchtếbàodịngchảy .75 3.4 Virusv a c c i n e s i k h n g u t ế b o u n g t h p h ổ i H c ấ y g h é p t r ê n chuộtthiếuhụtmiễndịch 87 3.4.1 Kếtquảghépu dòng tếbàoung thưphổingườiH460 .87 3.4.2 Kết điều trị chuột nude mang khối u tế bào ung thư phổi ngườiH460bằngvirusvaccinesởi 88 3.4.3 Tỉlệtế bào u H460cấy ghépt r ê n c h u ộ t n u d e c h ế t t h e o c h n g trìnhsauđiềutrịbằngMeV .91 3.4.4 Hìnhản hs i cấu t r ú c tếbào up h ổ i H460 vàA549 s au điều t r ị bằn gvirusvaccinesởi 94 3.4.5 KếtquảgiảiphẫubệnhutếbàoH460cấyghéptrênchuộtNudesauđ iều trịbằngMeV 96 CHƯƠNG4:BÀN LUẬN 97 4.1 TăngsinhcácdòngtếbàoVerovàtếbàoungthưphổingườiH460vàA549invit ro 97 4.1.1 Tăngsinh dòngtếbàoVero 97 4.1.2 Nicấy,tăngsinhdịngtếbàoungthưphổingườiH460vàA549 98 4.2 Tăng sinhvirusvaccinesởivàChuẩnđộ TCID50 99 4.3 Virusvaccinesởily giảitếbào H460 vàA540 invitro 102 4.3.1 Ly giảitrựctiếpbằng cách tạohợpbào invitro 102 4.3.2 Đánhg i h i ệ u q u ả c ủ a v i r u s v a c c i n e s i l y g i ả i t ế b o H v A549bằngnghiệmphápMTT 104 4.3.3 MeVgâychếttếbàoapoptosisdòngtếbàoungthưphổiH460vàA549in vitro 105 4.4 VirusvaccinesởikhángutếbàoungthưphổingườiH460cấyghéptrê nchuộtthiếuhụtmiễndịch .108 4.4.1 Đánhg i đ ộ c t í n h c ủ a v i r u s v a c c i n e s i đ i ề u t r ị c h u ộ t t h i ế u h ụ t miễndịchmangkhốiu tếbào ungthưphổingườiH460 108 4.4.2 Virus vaccinesởikhángutế bàoungthư phổingườiH t r ê n chuộtthiếuhụtmiễndịch .109 4.4.3 Virus vaccine sởi kích thích miễn dịch đặc hiệu kháng u tế bào ungthưphổingườiH460 trênchuộtthiếuhụtmiễndịch 112 4.4.4 MeVkhángtếbàouH460cấyghépt r ê n c h u ộ t n u d e q u a c o n đườngchếttếbàoapoptosis 117 4.4.5 Kếtquảsiêu cấut rúc t ếb o uphổingườiH460 ghéptrênchuột thi ếuhụtmiễndịchsauđiều trịbằngvirusvaccinesởi 119 4.4.6 KếtquảgiảiphẫubệnhtếbàouphổingườiH460ghéptrênchuộtthiếuhụ tmiễndịchsauđiều trịbằngvirusvaccinesởi 123 KẾTLUẬN 128 KHUYẾNNGHỊ .130 DANHMỤCCÁCCƠNGTRÌNH CƠNGBỐKẾT QUẢNGHIÊNCỨUCỦAĐỀTÀI,LUẬNÁN TÀILIỆUTHAMKHẢO PHỤLỤC DANHMỤC CÁCCHỮ,KÝHIỆUVIẾTTẮT AAH AtypicalAdenomatousHyperplasia Apoptosis Chếttheochươngtrình ATP AdenosineTriphosphate CDX CellLineDerivedXenograft CEA CarcinoembryonicAntigen DAMP Damage-AssociatedMolecularPattern DC DedriticCell DNA Deoxyribonucleicacid EGFR Epidermalgrowthfactorreceptor F Fusion(hòamàng) FDA FoodandDrugAdministration FITC Fluoresceinisothiocyanate H Hemagglutinin HLA Humanleukocyteantigen HR/CI HazardRatio/ConfidenceIntervals IFN Interferon IL Interleukin LUAD Lungadenocarcinoma LUSC Lungsquamouscellcarcinoma MeV Mealsevaccinevirus MHC MajorHistocompatibilityComplex MOI Multiplicityofinfection MTT 3-[4,5-dimethylthiazole-2-yl]-2,5-diphenyltetrazoliumbromide MV Mealsevirus MV-Edm MeaslesvirusstrainEdmonston NIH-AARP NationalI n s t i t u t e s o f H e a l t h AmericanAssociationofRetired NIS Persons Sodium-IodineSymporter NK NaturalKiller NSCLC Non-smallcelllungcancer OV OncolyticVirus PAMP Pathogen-AssociatedMolecularPattern PBS Phosphatebufferedsaline PCR PolymeraseChainReaction PD1 ProgrammedCellDeathProtein1 PDL1 ProgrammedCellDeathLigand1 PFU Plaqueformingunits PI Propidiumiodide RNA Ribonucleicacid ROS ReactiveOxygenSpecies SCLC Smallcelllungcancer TAA Tumor-AssociatedAntigens TCID TissueCultureInfectiousDose TGF-β TransformingGrowthFactorβ TNF Tumornecroticfactor UTP Ungthưphổi VATS Video-assistedthoracoscopicsurgery VEGF Vascularendothelialgrowthfactor Wnt Wingless-relatedintegration