1121 nghiên cứu phân lập hợp chất phân cực từ nhân trần tía (adenosma bractesum bonati)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC CẦN THƠ NGÔ QUANG HƯNG NGHIÊN CỨU PHÂN LẬP HỢP CHẤT PHÂN CỰC TỪ NHÂN TRẦN TÍA (Adenosma bractesum Bonati) LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ ĐẠI HỌC Cần Thơ – 2014 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC CẦN THƠ NGÔ QUANG HƯNG NGHIÊN CỨU PHÂN LẬP HỢP CHẤT PHÂN CỰC TỪ NHÂN TRẦN TÍA (Adenosma bractesum Bonati) LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ ĐẠI HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS PHẠM THỊ TỐ LIÊN Cần Thơ – 2014 LỜI CẢM ƠN Em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến cô TS Phạm Thị Tố Liên tận tình bảo, hỗ trợ động viên em suốt thời gian làm đề tài Em xin gửi lời cảm ơn đến cô Ths Nguyễn Ngọc Quỳnh, người tận tình hướng dẫn, truyền đạt kiến thức kinh nghiệm quý báu, định hướng giải vấn đề mà em gặp phải suốt trình làm đề tài tốt nghiệp Em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến cô Ths Thạch Trần Minh Uyên, thầy Ths Lê Thanh Vĩnh Tuyên, cô Ths Nguyễn Thị Trang Đài thầy Trần Bá Việt Q ln động viên, tận tình chia sẻ kinh nghiệm quý báu để em hoàn thành đề tài Em không quên gửi lời cảm ơn đến cô Nguyễn Vũ Phương Lan cô Ngô Thị Kim Hương động viên tinh thần giúp đỡ em suốt q trình thực đề tài mơn Mình xin chân thành cảm ơn bạn lớp Dược khóa 35, em lớp Dược khóa 36 quan tâm, chia sẻ khó khăn giúp đỡ để hồn thành đề tài tốt nghiệp Con xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến ba mẹ ln động viên vượt qua khó khăn suốt thời gian làm đề tài LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan tất kết luận văn trung thực, hoàn toàn riêng chưa công bố cơng trình Cần Thơ, ngày 10 tháng 06 năm 2014 Sinh viên ký tên Ngô Quang Hưng i MỤC LỤC TRANG PHỤ BÌA Trang LỜI CAM ĐOAN MỤC LỤC i DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT iv DANH MỤC CÁC BẢNG v DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH VÀ SƠ ĐỒ vi ĐẶT VẤN ĐỀ Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 THỰC VẬT HỌC 1.1.1 Chi Adenosma 1.1.2 Nhân trần tía 1.2 THÀNH PHẦN HĨA HỌC NHÂN TRẦN TÍA 1.2.1 Tinh dầu 1.2.2 Flavonoid 1.2.3 Các thành phần khác 1.3 TÁC DỤNG VÀ CÔNG DỤNG CỦA NHÂN TRẦN TÍA 1.3.1 Tác dụng sinh học 1.3.2 Công dụng dân gian 10 Chương ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 11 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 11 2.2 ĐỊA ĐIỂM NGHIÊN CỨU 11 2.3 HĨA CHẤT - DUNG MƠI - TRANG THIẾT BỊ 11 2.3.1 Hóa chất dung môi 11 2.3.2 Trang thiết bị 12 2.4 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 12 2.4.1 Chiết xuất 12 2.4.2 Phân tích sơ thành phần hóa học từ cao (F) Nhân trần tía 14 ii 2.4.3 Phân lập 15 2.2.4 Kiểm tra độ tinh khiết 16 2.4.5 Khảo sát cấu trúc chất phân lập 16 Chương KẾT QUẢ 17 3.1 CHIẾT XUẤT 17 3.2 PHÂN TÍCH SƠ BỘ THÀNH PHẦN HĨA HỌC TỪ CAO F CỦA NHÂN TRẦN TÍA 17 3.3 PHÂN LẬP 17 3.3.1 Phân lập hợp chất AB1 18 3.3.2 Phân lập hợp chất AB2, AB3 AB4 20 3.4 XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC HÓA HỌC CỦA CÁC HỢP CHẤT ĐƯỢC PHÂN LẬP 31 3.4.1 Xác định cấu trúc hợp chất AB1 31 3.4.2 Xác định cấu trúc hợp chất AB2 32 3.4.3 Xác định cấu trúc hợp chất AB3 33 3.4.4 Xác định cấu trúc hợp chất AB4 35 Chương BÀN LUẬN 37 4.1 PHÂN TÍCH SƠ BỘ THÀNH PHẦN HĨA HỌC 37 4.2 PHÂN LẬP 37 4.2.1 Xử lý cao (F) 37 4.2.2 Phân lập 38 KẾT LUẬN 47 KIẾN NGHỊ 48 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC iv DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Từ gốc Ý nghĩa Ac Acetone Dung môi aceton AcOH Acid acetic Acid acetic BuOAc Butyl acetate Dung môi butyl acetat Cf Chloroform Dung môi chloroform COSY Correlated Spectroscopy (Phổ) tương quan 1H – 1H D Doublet Đỉnh đôi kép DEPT Distortionless Enhancement by Polarization Transfer (Phổ) DEPT DMSO Dimethyl Sulfoxide Dung môi dimethyl sulfoxid EA Ethyl acetate Dung môi EtOH Ethanol Dung môi ethanol HMBC Heteronuclear Multiple Bond Correlation (Phổ) tương quan 1H – 13C HSQC Heteronuclear Single Quantum Correlation (Phổ) 1H gắn 13C SC Scuterllarin Scuterllarin IR Infrared (Phổ) hồng ngoại ISC Isoscutellarein-8-O-β-Dglucuronopyranoside Isoscutellarein-8-O-β-Dglucuronopyranosid MeOH Methanol Dung môi methanol n-BuOH n-Buthanol Dung môi n-buthanol NMR Nuclear Magnetic Resonance (Phổ) Cộng hưởng từ hạt nhân PE Petroleum ether Dung môi petroleum ether S Singlet Đỉnh đơn iv Chữ viết tắt TMS Từ gốc Ý nghĩa Tetra Methyl Silan Thuốc thử TT UV Ultra violet Tử ngoại khả kiến UV - Vis Ultra violet - Visible Quang phổ tử ngoại khả kiến VS Vanillin-Sulfuric Thuốc thử vanillin - sulfuric v DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 1.1 Một số hợp chất tinh dầu Nhân trần tía Bảng 2.1 Các hóa chất - dung môi sử dụng 11 Bảng 2.2 Phản ứng định tính sơ nhóm hợp chất cao (F) 14 Bảng 3.1 Kết phân tích sơ thành phần hóa học cao (F) 17 Bảng 3.2 Các phân đoạn từ F1 - F6 20 Bảng 3.3 Các hệ dung môi khảo sát cho sắc ký cột C1 22 Bảng 3.4 Kết phân đoạn sắc ký cột C1 .22 Bảng 3.5 Các hệ dung môi khảo sát cho sắc ký cột C2 25 Bảng 3.6 Kết phân đoạn sắc ký cột C2 .26 Bảng 3.7 Các hệ dung môi khảo sát cho sắc ký cột C3 28 Bảng 3.8 Kết phân đoạn sắc ký cột C3 .29 Bảng 3.9 Các đỉnh đáng ý phổ hồng ngoại hợp chất AB1 31 Bảng 3.10 Các đỉnh đáng ý phổ hồng ngoại hợp chất AB2 33 Bảng 3.11 Các đỉnh đáng ý phổ hồng ngoại hợp chất AB3 34 Bảng 3.12 Các đỉnh đáng ý phổ hồng ngoại hợp chất AB4 35 Bảng 4.1 Tín hiệu AB3 phổ NMR 43 Bảng 4.2 Tín hiệu AB4 phổ NMR 45 vi DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH VÀ SƠ ĐỒ Trang Hình 1.1 Nhân trần tía (Adenosma brateosum Bonati) Hình 1.2 Đặc điểm hình thái Nhân trần tía Hình 1.3 Một số cấu trúc hóa học tinh dầu từ Nhân trần tía .7 Hình 1.4 Cấu trúc hóa học số flavonoid Nhân trần tía Hình 1.5 Cấu trúc hóa học stigmasterol (1) acid betulinic (2) Hình 3.1 Hợp chất AB1 18 Hình 3.2 Phổ UV - Vis hợp chất AB1 18 Hình 3.3 Hợp chất AB1 khai triển sắc ký lớp mỏng ba hệ dung mơi 19 Hình 3.4 Các phân đoạn từ F1 đến F6 sắc ký lớp mỏng 20 Hình 3.5 Các phân đoạn cột C1 sắc ký lớp mỏng 23 Hình 3.6 Hợp chất AB2 23 Hình 3.7 Phổ UV - Vis hợp chất AB2 23 Hình 3.8 Hợp chất AB2 khai triển sắc ký lớp mỏng ba hệ dung môi 24 Hình 3.9 Các phân đoạn cột C2 sắc ký lớp mỏng 26 Hình 3.10 Hợp chất AB3 27 Hình 3.11 Phổ UV - Vis hợp chất AB3 .27 Hình 3.12 Hợp chất AB3 khai triển sắc ký lớp mỏng ba hệ dung mơi 27 Hình 3.13 Các phân đoạn cột C3 sắc ký lớp mỏng 29 Hình 3.14 Hợp chất AB4 30 Hình 3.15 Phổ UV - Vis hợp chất AB4 .30 Hình 3.16 Hợp chất AB4 khai triển sắc ký lớp mỏng ba hệ dung mơi 30 Hình 3.17 Cấu trúc hóa học hợp chất AB1 32 Hình 3.18 Cấu trúc hóa học hợp chất AB2 33 Hình 3.19 Cấu trúc hóa học hợp chất AB3 34 Hình 3.20 Các tương tác C - H phổ HMBC hợp chất AB3 .34 Hình 3.21 Cấu trúc hóa học hợp chất AB4 36 PL - 15 AB3−DMSO−HMBC ppm 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160 170 8.5 8.0 7.5 7.0 6.5 6.0 5.5 5.0 PL 3.10 Phổ HMBC phóng to AB3 4.5 ppm PL - 16 AB3−DMSO−HSQC ppm 30 35 40 45 50 55 60 65 70 75 80 85 90 95 100 105 110 115 120 125 130 135 140 145 PL 3.11 Phổ HMBC phóng to AB3 150 ppm PL - 17 PHỤ LỤC CÁC PHỔ CỦA CHẤT AB4 PL 4.1 phổ UV - Vis chất AB4 PL 4.2 Phổ hồng ngoại chất AB4 PL - 18 PL 4.3 Dữ liệu phổ hồng ngoại chất AB4 Wavenumber Abs intensity Rel intensity Width Found if threshold < Shoulder 3852,59 0,905 0,087 6,51 25,78 3749,31 0,887 0,103 12,66 30,69 3648,24 0,890 0,089 5,37 25,72 3273,75 0,817 0,155 339,0 32,34 1652,95 0,692 0,319 144,2 93,99 1624,27 0,755 0,075 12,99 20,38 1576,94 0,754 0,080 13,88 20,98 1541,40 0,748 0,102 6,65 30,43 1508,37 0,720 0,135 12,63 40,26 1456,08 0,760 0,120 30,29 31,81 1230,68 0,737 0,203 49,60 57,34 1016,27 0,821 0,133 16,14 38,88 877,53 0,892 0,083 18,73 24,47 668,28 0,903 0,094 60,98 23,58 2923,16 0,882 0,032 39,45 100,02 2852,41 0,896 0,010 16,20 36,46 2300,68 0,901 0,018 66,92 100,50 761,70 0,956 0,015 6,13 27,22 833,80 0,931 0,040 30,54 35,51 1103,97 0,912 0,024 9,13 27,83 1716,03 0,836 0,056 4,86 24,88 1652,95 0,692 0,319 144,2 144,19 1669,03 0,825 0,009 3,03 3,44 4.245 4.233 3.809 3.344 3.322 2.507 2.504 2.500 2.497 2.493 7.048 7.031 7.026 6.700 6.695 6.691 6.682 6.678 6.276 5.626 5.614 5.602 8.861 9.270 AB4−DMSO−1H Current Data Parameters 113QUYNH_AB4 NAME EXPNO PROCNO F2 − Acquisition Paramet Date_ 20140523 H 11 H H OH H11,13 O H10,14 12OH 2.134 10 H7 7OH 2.088 2.054 1.030 11 H8 H5 3OH 12 mm Multinucl zg30 65536 SOLVENT NS DS SWH DMSO 16 10000.000 0.152588 AQ 3.2769001 ======== CHANNEL f1 ==== NUC1 RG 181 1H P1 8.50 DW 50.000 PL1 −4.00 SFO1 500.1335009 DE 6.00 TE 300.0 F2 − Processing paramete SI 32768 D1 1.00000000 SF 500.1300051 MCREST 0.00000000 WDW EM MCWRK 0.015000000 SSB LB 0.30 GB PC 1.00 H PROBHD PULPROG TD FIDRES H 2.117 HO 8.22 spect PL 4.4 Phổ 1H-NMR AB4 ppm PL - 19 H H2 C O 14 1.044 12 13 1.000 1.021 H 10 OH Time INSTRUM H10,14 H5 PL 4.5 Phổ 1H-NMR phóng to AB4 H11,13 H7 H8 7OH PL - 20 40.002 39.834 39.667 39.500 39.333 39.166 39.000 32.692 59.486 108.953 115.323 129.402 126.989 141.490 150.303 156.057 167.117 173.576 AB4−DMSO−C13CPD Current Data Parameters 113QUYNH_AB4 NAME EXPNO PROCNO H 11 H 10 H H 14 13 HO H H2 C O OH 12 H C11,13 H ======== CHANNEL f1 ==== NUC1 13C P1 7.40 0.00 PL1 125.7715724 SFO1 C10,14 OH ======== CHANNEL f2 ==== CPDPRG2 waltz16 NUC2 1H PCPD2 80.00 PL2 −4.00 PL12 15.47 22.00 PL13 500.1320005 SFO2 O C6 C4 200 180 C12 C2 C3 160 140 C7 C9 120 C8 C5 100 80 60 40 PL 4.6 Phổ 13C-NMR AB4 F2 − Processing paramete SI 32768 SF 125.7578508 WDW EM SSB LB 1.00 GB 20 ppm PL - 21 F2 − Acquisition Paramet Date_ 20140523 Time 8.29 INSTRUM spect PROBHD mm Multinucl PULPROG zgpg30 TD 65536 SOLVENT DMSO NS 128 DS SWH 31446.541 FIDRES 0.479836 AQ 1.0420883 RG 32768 DW 15.900 DE 6.00 TE 300.0 D1 2.00000000 d11 0.03000000 DELTA 1.89999998 MCREST 0.00000000 MCWRK 0.01500000 40.002 39.834 39.667 39.500 39.333 39.166 39.000 32.692 59.486 108.953 115.323 129.402 126.989 141.490 150.303 156.057 167.117 173.576 AB4−DMSO−C13CPD Current Data Parameters 113QUYNH_AB4 NAME EXPNO PROCNO ======== CHANNEL f1 ==== NUC1 13C P1 7.40 0.00 PL1 SFO1 125.7715724 ======== CHANNEL f2 ==== CPDPRG2 waltz16 NUC2 1H PCPD2 80.00 PL2 −4.00 PL12 15.47 22.00 PL13 SFO2 500.1320005 F2 − Processing paramete SI 32768 SF 125.7578508 WDW EM SSB LB 1.00 GB 180 170 160 150 140 130 120 110 100 90 80 70 60 50 PL 4.7 Phổ 13C-NMR phóng to AB4 40 ppm PL - 22 F2 − Acquisition Paramet Date_ 20140523 Time 8.29 INSTRUM spect PROBHD mm Multinucl PULPROG zgpg30 TD 65536 SOLVENT DMSO NS 128 DS SWH 31446.541 FIDRES 0.479836 AQ 1.0420883 RG 32768 DW 15.900 DE 6.00 TE 300.0 D1 2.00000000 d11 0.03000000 DELTA 1.89999998 MCREST 0.00000000 MCWRK 0.01500000 AB4−DMSO−C13CPD&DEPT DEPT90 170 160 150 140 130 120 110 100 90 80 70 60 50 40 ppm 160 150 140 130 120 110 100 90 80 70 60 50 40 ppm 160 150 140 130 120 110 100 90 80 70 60 50 40 ppm DEPT135 PL - 23 CH&CH3 CH2 170 C13CPD 170 PL 4.8 Phổ 13C-DEPT AB4 PL - 24 PL 4.9 Phổ HSQC AB4 PL - 25 AB4−DMSO−HSQC ppm 108 110 112 114 116 118 120 122 124 126 128 130 7.2 7.1 7.0 6.9 6.8 6.7 6.6 6.5 PL 4.10 Phổ HSQC phóng to AB4 6.4 6.3 ppm PL - 26 AB4−DMSO−HMBC ppm 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160 170 180 PL 4.11 Phổ HMBC AB4 ppm PL - 27 AB4−DMSO−HMBC ppm 110 115 120 125 130 135 140 145 150 155 160 165 170 175 PL 4.12 Phổ HMBC phóng to AB4 (1) ppm PL - 28 AB4−DMSO−HMBC ppm 110 115 120 125 130 135 140 145 150 155 160 165 7.2 7.0 6.8 6.6 6.4 6.2 6.0 5.8 PL 4.13 Phổ HMBC phóng to AB4 (2) 5.6 170 ppm AB4−DMSO−COSYGP Current Data Parameters 113QUYNH_AB4 NAME EXPNO PROCNO F2 − Acquisition Parameters 20140529 Date_ Time 12.09 INSTRUM spect PROBHD mm Multinucl PULPROG cosygpqf TD 2048 SOLVENT DMSO NS DS SWH 5482.456 Hz FIDRES 2.676980 Hz AQ 0.1869188 sec RG DW 181 DE 91.200 usec TE 6.00 usec 303.3 K d0 0.00000300 sec D1 1.48689198 sec d13 0.00000400 sec D16 IN0 0.00020000 sec 0.00018178 sec MCREST 0.00000000 sec MCWRK 1.48689198 sec ppm 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0 5.5 ====== GRADIENT CHANNEL GPNAM1 SINE.100 GPNAM2 SINE.100 GPX1 0.00 GPX2 0.00 GPY1 0.00 GPY2 0.00 GPZ1 10.00 GPZ2 10.00 P16 1000.00 6.0 6.5 7.0 ===== % % % % % % usec F1 − Acquisition parameters ND0 256 TD 500.1325 MHz SFO1 FIDRES 21.489479 Hz SW 11.000 ppm FnMODE QF 7.5 8.0 F2 − Processing parameters SI 1024 SF 500.1300136 MHz WDW SINE SSB 0.00 Hz LB GB 1.00 PC 8.5 9.0 9.5 10 PL 4.14 Phổ COSY AB4 ppm F1 − Processing parameters 1024 SI MC2 QF SF 500.1300081 MHz WDW SINE SSB 0.00 Hz LB GB PL - 29 ======== CHANNEL f1 ======== NUC1 1H P0 8.50 usec P1 8.50 usec PL1 −4.00 dB SFO1 500.1325006 MHz