1124 nghiên cứu phân lập hợp chất hóa học từ cao phân cực trung bình của cây nhân trần tía (adenosma bracreosum bonati)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC CẦN THƠ NGUYỄN VĂN ĐẠT NGHIÊN CỨU PHÂN LẬP HỢP CHẤT HÓA HỌC TỪ CAO PHÂN CỰC TRUNG BÌNH CỦA CÂY NHÂN TRẦN TÍA (Adenosma bracteosum Bonati) LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ ĐẠI HỌC Cần Thơ – Năm 2014 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC CẦN THƠ NGUYỄN VĂN ĐẠT NGHIÊN CỨU PHÂN LẬP HỢP CHẤT HÓA HỌC TỪ CAO PHÂN CỰC TRUNG BÌNH CỦA CÂY NHÂN TRẦN TÍA (Adenosma bracteosum Bonati) LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ ĐẠI HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC ThS NGUYỄN NGỌC QUỲNH Cần Thơ – Năm 2014 LỜI CẢM ƠN Em xin chân thành cảm ơn Cô Ths Nguyễn Ngọc Quỳnh, người ln theo sát tận tình dạy, giúp đỡ em hoàn thành luận văn Em xin cảm ơn Cô Ths Thạch Trần Minh Uyên, Thầy Ths Lê Thanh Vĩnh Tuyên, Cô Ths Nguyễn Thị Trang Đài, Chị Nguyễn Vũ Phương Lan, Chị Ngô Thị Kim Hương tạo điều kiện thuận lợi cho em trình thực nghiệm đề tài Xin cảm ơn bạn lớp Dược K35 quan tâm, động viên, giúp đỡ lúc khó khăn Con cám ơn ba mẹ gia đình ln ủng hộ giúp hoàn thành luận văn Nguyễn Văn Đạt LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan tất kết luận văn hoàn toàn riêng chưa công bố cơng trình Cần Thơ, ngày tháng Sinh viên ký tên Nguyễn Văn Đạt năm 2014 i MỤC LỤC Trang TRANG PHỤ BÌA LỜI CAM ĐOAN MỤC LỤC i DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT iii DANH MỤC BẢNG iv DANH MỤC HÌNH VÀ SƠ ĐỒ v ĐẶT VẤN ĐỀ Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 TỔNG QUAN VỀ CHI ADENOSMA 1.1.1 Thực vật học .2 1.1.2 Thành phần hóa học 1.1.3 Flavonoid 1.1.4 Các thành phần khác 1.1.5 Tác dụng sinh học 1.2 TỔNG QUAN VỀ NHÂN TRẦN TÍA 1.2.1 Thực vật học .7 1.2.2 Thành phần hóa học 1.2.3 Tác dụng sinh học 12 Chương ĐỐI TƯỢNG - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU .14 2.1.1 Mẫu nguyên liệu .14 2.1.2 Dung mơi, hóa chất 14 2.1.3 Trang thiết bị 14 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15 2.2.1 Chiết xuất .15 2.2.2 Phân tích sơ thành phần hóa thực vật cao phân cực trung bình .17 2.2.3 Phân lập hợp chất hóa học 18 ii 2.2.4 Kiểm tra độ tinh khiết .20 2.2.5 Khảo sát cấu trúc chất phân lập 20 Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 22 3.1 PHÂN TÍCH THÀNH PHẦN HĨA HỌC CAO PHÂN CỰC TRUNG BÌNH 22 3.1.1 Phân tích sơ thành phần hóa học 22 3.1.2.Định tính xác định flavonoid cao phân cực trung bình 22 3.2 CHIẾT XUẤT VÀ PHÂN LẬP .23 3.1.1 Phân tách cao C1.10 chiết phân bố lỏng-lỏng kết hợp thay đổi pH .23 3.2.2 Phân tách cao G4 .27 3.3 XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC CÁC HỢP CHẤT PHÂN LẬP ĐƯỢC 33 3.3.1 Xác định cấu trúc D1 .33 3.3.2 Xác định cấu trúc D2 .34 3.3.3 Xác định cấu trúc D3 .35 3.3.4 Xác định cấu trúc D4 .36 3.3.5 Xác định cấu trúc D5 .36 Chương BÀN LUẬN 37 4.1 PHÂN TÍCH SƠ BỘ THÀNH PHẦN HÓA HỌC 37 4.2 XỬ LÝ CAO CHIẾT 37 4.3 PHÂN LẬP VÀ XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC 39 4.3.1 Hợp chất D1 .39 4.3.2 Hợp chất D2 .43 4.3.3 Hợp chất D3 .44 4.3.4 Hợp chất D4 .45 4.3.5 Hợp chất D5 .45 KẾT LUẬN 46 KIẾN NGHỊ 47 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC iii DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Ý nghĩa Từ gốc Ac Aceton Aceton COSY Correlated Spectroscopy (Phổ) tương quan 1H – 1H DEPT Distortionless Enhancement by Polarization Transfer d doublet Đỉnh đôi DMSO Dimethyl Sulfoxide Dimethyl sulfoxid EA, EtOAc Ethyl acetate Ethyl acetat HMBC Heteronuclear Multiple Bond Phổ tương quan dị nhân Correlation đa nối Heteronuclear Single Quantum Phổ tương quan dị nhân Correlation đơn nối IR Infrared (Phổ) hồng ngoại m multiblet Nhiều đỉnh NMR Nuclear Magnetic Mesonance Cộng hưởng từ hạt nhân NOESY Nuclear Overhauser Effect HSQC Spectroscopy SKLM Sắc ký lớp mỏng SPE Solid Phase Extraction Chiết pha rắn q quaterlet Đỉnh bốn t triplet Đỉnh ba UV Ultra violet Tử ngoại TT VS Vanillin-Sulfuric Thuốc thử VanillinSulfuric iv DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Kết hoạt tính chống oxy hóa in vitro loại cao chiết 13 Bảng 2.1 Các phản ứng định tính sơ thành phần cao phân cực trung bình 17 Bảng 3.1 Kết định tính sơ thành phần hóa học cao phân cực trung bình 22 Bảng 3.2 Kết định tính xác định flavonoid cao phân cực trung bình 22 Bảng 3.3: Các phân đoạn thu từ cao C1.10 Nhân trần tía .23 Bảng 3.4 Các hệ dung môi khảo sát cho sắc ký cột cao H 27 Bảng 3.5 Các phân đoạn thu từ sắc ký cột cao H Nhân trần tía .28 Bảng 4.1 Các nhóm chức đặc trưng D1 phổ IR 39 Bảng 4.2 Dữ liệu phổ NMR D1 41 Bảng 4.3 So sánh liệu phổ D1 isoscutellarein 8-O-β-glucuronopyranosid 42 v DANH MỤC HÌNH VÀ SƠ ĐỒ Hình 1.1 Đặc điểm hình thái A.bracteosum Bonati .8 Hình 1.2 Cây mang hoa (1) hoa tươi (2) Nhân trần tía .8 Hình 1.3 Thân (1) hoa (2) Nhân trần tía phơi khơ Hình 1.4 Cơng thức hóa học số hợp chất tinh dầu Nhân trần tía .10 Hình 1.5 Một số flavonoid phân lập Nhân trần tía 11 Hình 1.6 Cơng thức hóa học stigmasterol (1) acid betulinic (2) .12 Hình 1.7 Cơng thức hóa học sitosterol-3-O-β-D glucopyranosid 12 Hình 3.1 Sắc ký đồ phân đoạn thu từ cao C1.10 Nhân trần tía 23 Hình 3.2 Hợp chất D1 24 Hình 3.3 Sắc ký đồ D1 với hệ dung môi khác 25 Hình 3.4 Tinh thể D2 hỗn hợp PE-MeOH (8:2) 26 Hình 3.5 Sắc ký đồ D2 với hệ dung môi khác .26 Hình 3.6 Sắc ký đồ phân đoạn thu từ sắc ký cột cao H 29 Hình 3.7 Hợp chất D3 29 Hình 3.8 Sắc ký đồ D3 với hệ dung môi khác 30 Hình 3.10 Tinh thể D4 .31 Hình 3.9 Sắc ký đồ D4 với hệ dung môi khác .31 Hình 3.11 Hợp chất D5 32 Hình 3.12 Sắc ký đồ D5 với hệ dung môi khác 33 Hình 3.13 Cấu trúc hóa học D1 34 Hình 3.14 Sắc ký đồ D3 + N3 khai triển theo chiều (1), theo chiều (2) 35 Hình 3.15 Cấu trúc hóa học D2 35 Hình 3.16 Sắc ký đồ D3 + N3 khai triển theo chiều (1), theo chiều (2) 35 Hình 4.1 Cấu trúc D1 tương tác HMBC COSY .41 Hình 4.2 Cấu trúc hóa học D1 đánh số carbon 42 Sơ đồ 2.1 Quy trình chiết xuất cao C1.10 dịch EA (E) 16 Sơ đồ 2.2 Quy trình chiết xuất cao G4 .16 Sơ đồ 3.1 Quy trình phân tách cao C1.10 24 ĐẶT VẤN ĐỀ Trên giới ước tính có khoảng 800 triệu người mắc bệnh viêm gan mạn tính do nhiều nguyên nhân khác nhau, viêm gan virus vấn đề quan trọng nhất, nguyên nhân làm tỉ lệ ghép gan ngày tăng Đây bệnh truyền nhiễm, dẫn đến xơ gan, ung thư gan nguy tử vong [37] Các thuốc tân dược dùng điều trị bệnh viêm gan thường có giá thành cao nhiều tác dụng không mong muốn Do vấn đề tìm thuốc có nguồn gốc từ dược liệu quan tâm Nhiều dược liệu sử dụng điều trị viêm gan bước đầu có hiệu tốt Nhân trần tía (Adenosma bracteosum Bonati) số dược liệu sử dụng lâu đời dân gian để chữa bệnh liên quan đến gan mật cho thấy có hiệu tốt Tuy nhiên, nghiên cứu trước Nhân trần tía Việt Nam nói riêng giới nói chung chủ yếu tác dụng dược lý, chưa có nhiều nghiên cứu thành phần hóa học Trong nghiên cứu gần chứng minh flavonoid Nhân trần tía có tác dụng bảo vệ gan, chống oxy hóa [16] Đồng thời flavonoid có nhiều dịch chiết phân cực trung bình phân cực Nhân trần tía Chính đề tài “Nghiên cứu phân lập hợp chất hóa học từ cao phân cực trung bình Nhân trần tía (Adenosma bracteosum Bonati)” thực với mục tiêu cụ thể: Nghiên cứu sơ thành phần hóa học từ cao phân cực trung bình dược liệu Nhân trần tía Chiết xuất phân lập số hợp chất tinh khiết từ cao phân cực trung bình Khảo sát cấu trúc chất phân lập Ý nghĩa đề tài: - Có kết khảo sát sơ thành phần hóa học dược liệu Nhân trần tía , từ định hướng phương pháp chiết xuất phân lập số nhóm hợp chất cụ thể - Phân lập xác định cấu trúc số hợp chất hóa học từ Nhân trần tía, khẳng định bổ sung vào thành phần hóa học Nhân trần tía PL-7 PL-9 Phổ DEPTex D1 PL-8 PL-10 Phổ COSY D1 PL-11 Phổ COSYex D1 PL-9 PL-12 Phổ HMBC D1 PL-10 PL-13 Phổ HMBCex1 D1 PL-11 PL-14 Phổ HMBCex2 D1 PL-12 PL-15 Phổ HMBCex3 D1 PL-13 PL-16 Phổ HSQC D1 PL-14 PL-17 Phổ HSQCex1 D1 PL-15 PL-18 Phổ HSQCex2 D1 PL-16 PL-19 Phổ ROESY D1 PL-20 Phổ ROESYex1 D1 PL-17 PL-21 Phổ ROESYex2 D1 D4 PL-18 PL-22 Phổ 1H-NMR D4 D4 PL-19 PL-23 Phổ 1H-NMRex D4 D5 PL-20 PL-24 Phổ 1H-NMR D5 D5 PL-21 PL-25 Phổ 1H-NMR D5