Kiểm chứng mô hình gây rối loạn lipid máu thể âm hư bằng hydrocortison trên chuột nhắt trắng

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH - NGUYỄN THỊ MỘNG KHA KIỂM CHỨNG MƠ HÌNH GÂY RỐI LOẠN LIPID MÁU THỂ ÂM HƯ BẰNG HYDROCORTISON TRÊN CHUỘT NHẮT TRẮNG LUẬN VĂN THẠC SĨ Y HỌC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH, NĂM 2022 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH - NGUYỄN THỊ MỘNG KHA KIỂM CHỨNG MƠ HÌNH GÂY RỐI LOẠN LIPID MÁU THỂ ÂM HƯ BẰNG HYDROCORTISON TRÊN CHUỘT NHẮT TRẮNG NGÀNH: Y HỌC CỔ TRUYỀN MÃ SỐ: 8720113 LUẬN VĂN THẠC SĨ Y HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS NGUYỄN THỊ SƠN THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH, NĂM 2022 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng Các số liệu nêu luận văn trung thực chưa công bố cơng trình khác Nghiên cứu thực Phịng thí nghiệm Y dược cổ truyền - Khoa Y học cổ truyền thuộc Đại học Y dược TP Hồ Chí Minh, tuyệt đối khơng chép từ nguồn khác Tơi hồn tồn chịu trách nhiệm trước Hội đồng cam đoan TP Hồ Chí Minh, ngày tháng Tác giả luận văn Nguyễn Thị Mộng Kha năm 2022 MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT i DANH MỤC BẢNG ii DANH MỤC HÌNH iv ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Đại cương lipid máu 1.2 Rối loạn lipid máu theo Y học đại .10 1.3 Tổng quan glucocorticoid 14 1.4 Rối loạn lipid máu theo Y học cổ truyền 22 1.5 Các mô hình gây âm hư .28 1.6 Thiết bị sử dụng 36 CHƯƠNG 2: PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 38 2.1 Nguyên vật liệu 38 2.2 Phương pháp nghiên cứu 39 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ 50 3.1 Điều chế cao Tri bá dưỡng âm thang 50 3.2 Khảo sát liều thời gian sử dụng hydrocortison gây mơ hình rối loạn lipid máu thể âm hư 53 3.3 Kiểm chứng mơ hình RLLM thể âm hư 61 CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN 73 4.1 Kiểm nghiệm cao tri bá dưỡng âm thang 73 4.2 Khảo sát liều thời gian uống hydrocortison gây mơ hình rối loạn lipid máu thể âm hư chuột nhắt trắng 73 4.3 Kiểm chứng mơ hình rối loạn lipid thể âm hư 88 4.4 Triển vọng đề tài 94 CHƯƠNG 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ .95 5.1 Kết luận 95 5.2 Kiến nghị 96 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC PHỤ LỤC PHỤ LỤC i DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT TÊN ĐẦY ĐỦ TỪ VIẾT TẮT 11β-HSD 11-beta hydroxysteroid dehydrogenase ACAT Men Acyl CoA cholesterol transferase BAT Brown adipose tissue BTMXV Bệnh tim mạch xơ vữa CETP Cholesterol ester transferase protein Cho TP Cholesterol toàn phần CK Creatine kinase CM Chylomicron FFA Free fatty acid GC Glucocorticoid GR Glucocorticoid receptor HGM CoA Hydroxylmethyl Glutaryl CoA HL Hepatic lipaza LCAT Lecithin-Cholesterol Acyltransferase LP Lipoprotein Trung bình ± Độ lệch chuẩn M ± SD NPY Neuropeptide Y NT24h/TT Nước tiểu 24 giờ/thể trọng NU24h/TT Nước uống 24 giờ/thể trọng SD Sprague Dawley Thức ăn 24 giờ/ thể trọng TA24h/TT Tri bá dưỡng âm thang TBDAT TG Triglycerid TP Thành phố TT Thuốc thử UCP1 Uncoupling protein YHCT Y học cổ truyền YHHĐ Y học đại ii DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1: Tương quan rối loạn lipid máu âm hư .26 Bảng 1.2: Tương quan biểu rối loạn lipid máu thể âm hư người chuột 27 Bảng 1.3: Một số mơ hình gây âm hư glucocorticoid 30 Bảng 1.4: Công thức thuốc Tri bá dưỡng âm thang .34 Bảng 1.5: Kết lipid máu theo nghiên cứu Lin Changsong .35 Bảng 3.1: Độ ẩm dược liệu Tri bá dưỡng âm thang .50 Bảng 3.2: Độ ẩm cao Tri bá dưỡng âm thang 50 Bảng 3.3: Hiệu suất chiết cao Tri bá dưỡng âm thang 50 Bảng 3.4: Độ tan nước cao Tri bá dưỡng âm thang 51 Bảng 3.5: Độ tro tồn phần độ tro khơng tan acid hydrochloric 51 Bảng 3.6: Sắc ký lớp mỏng Thục địa, Sơn thù .52 Bảng 3.7: Sắc ký lớp mỏng Mẫu đơn bì, Hồng bá, Ích mẫu .53 Bảng 3.8: Nồng độ cholesterol toàn phần chuột nhắt trắng 54 Bảng 3.9: Nồng độ Triglycerid chuột nhắt trắng 55 Bảng 3.10: Nồng độ LDL-c chuột nhắt trắng 55 Bảng 3.11: Nồng độ HDL-c chuột nhắt trắng 56 Bảng 3.12: Trọng lượng thể chuột 57 Bảng 3.13: Tỷ lệ lượng thức ăn 24 giờ/ thể trọng chuột .57 Bảng 3.14: Tỷ lệ lượng nước uống 24 / thể trọng chuột 58 Bảng 3.15: Tỷ lệ lượng nước tiểu 24 / thể trọng chuột 58 Bảng 3.16: Nhiệt độ hậu môn sáng .59 Bảng 3.17: Nhiệt độ hậu môn vào buổi chiều 59 Bảng 3.18: Độ vận động ngang chuột nhắt trắng 60 Bảng 3.19: Nồng độ Cholesterol toàn phần chuột nhắt 62 Bảng 3.20: Nồng độ Triglycerid chuột nhắt trắng 63 Bảng 3.21: Nồng độ LDL-c chuột nhắt trắng 64 Bảng 3.22: Nồng độ HDL-c chuột nhắt trắng 64 Bảng 3.23: Trọng lượng thể chuột 65 Bảng 3.24: Tỷ lệ lượng thức ăn 24 giờ/ thể trọng 66 iii Bảng 3.25: Tỷ lệ lượng nước uống 24 giờ/thể trọng 67 Bảng 3.26: Tỷ lệ lượng nước tiểu 24 giờ/thể trọng 68 Bảng 3.27: Nhiệt độ hậu môn buổi sáng .69 Bảng 3.28: Nhiệt độ hậu môn buổi chiều .70 Bảng 3.29: Độ vận động ngang chuột phút .71 Bảng 3.30: Độ vận động dọc chuột phút 72 iv DANH MỤC HÌNH Hình 1.1: Sơ đồ chuyển hóa mỡ máu .9 Hình 1.2: Cơ chế bệnh sinh đàm thấp 23 Hình 1.3: Lồng chuyển hóa 36 Hình 1.4: Máy đếm vận động hồng ngoại 37 Hình 2.1: Quy trình chiết cao đặc Tri bá dưỡng âm thang 39 Hình 3.1: Độ hoạt động dọc tự nhiên (lần/5 phút) 61 ĐẶT VẤN ĐỀ Rối loạn lipid máu (RLLM) yếu tố nguy bệnh tim mạch xơ vữa (BTMXV), gây nhiều biến chứng nguy hiểm đe dọa tính mạng người như: nhồi máu tim, tai biến mạch máu não,…19, 56 Điều trị có hiệu RLLM bao gồm thay đổi lối sống, kết hợp sử dụng thuốc có tác dụng hạ lipid máu hạn chế phát triển ngăn ngừa biến chứng BTMXV 11 43 Một phân tích gộp từ 26 thử nghiệm lâm sàng ngẫu nhiên có nhóm chứng cho thấy hiệu điều trị làm giảm LDL – c statin, giảm mmol/L (40mg/dl) LDL -c làm giảm 10% tử vong nguyên nhân, giảm 20% tử vong bệnh động mạch vành, giảm 23% biến cố động mạch vành lớn, giảm 16% đột quỵ thiếu máu 43 Điều trị RLLM thuốc Y học đại (YHHĐ) nhóm statin, nhóm fibrat,…vẫn chủ yếu mang lại hiệu tốt đồng thời xảy nhiều tác dụng phụ như: rối loạn tiêu hóa, đau đầu, đau cơ, tăng men gan, tiêu vân, … 19, 42, 51 Do đó, xu hướng điều trị RLLM từ thuốc có nguồn gốc thảo dược vừa mang lại hiệu điều trị vừa hạn chế tác dụng phụ thuốc YHHĐ cho người bệnh 48 RLLM YHCT quy vào phạm trù chứng “đàm thấp”, “phì bàng” (béo phì), tình trạng hư tiêu thực, “tiêu” đàm thấp nội sinh, khí trệ huyết ứ, “bản” cơng tạng phủ thất điều hư tổn RLLM phân thành nhiều hội chứng bệnh tùy hội chứng bệnh cụ thể mà sử dụng thuốc điều trị 7, Âm hư hội chứng bệnh YHCT phổ biến lâm sàng Trong RLLM theo YHCT, hội chứng bệnh âm hư thường gặp người lớn tuổi, người trạng gầy 73 Qua nghiên cứu lâm sàng RLLM cho thấy biểu hội chứng âm hư chiếm tỷ lệ cao (31,96%) 66 Hiện có nhiều nghiên cứu thuốc YHCT điều trị RLLM từ độc vị, thuốc cổ phương gia giảm đến chế phẩm thuốc 45, 53 23, 31,… Ở Việt Nam, đa số nghiên cứu thuốc YHCT điều trị RLLM thường dùng mơ hình gây RLLM động vật phổ biến là: dùng chế độ ăn giàu cholesterol, dùng chất diện hoạt (tyloxapol, polyxamer, ) Các mơ hình mang lại hiệu gây tăng lipid tốt, chưa thể mơ hình RLLM hội chứng YHCT cụ thể 16, 20, 23, 37 Do đó, mơ hình động vật nghiên cứu với hội chứng YHCT cụ thể hữu ích nghiên cứu thuốc YHCT nói chung thuốc YHCT điều trị RLLM nói riêng 61 Trên giới có tác giả xây dựng mơ hình âm hư hydrocortison đồng thời gây rối loạn chuyển hóa lipid thực chuột cống SD (Sprague Dawley rat) 71, chuột nhắt Côn Minh 69 Ở Việt Nam, chuột nhắt trắng Swiss albino giống chuột thường sử dụng nghiên cứu thực nghiệm, chúng có kích thước nhỏ nên vô hại thao tác 21, 27, 40 Chuột nhắt Swiss albino chuột cống SD gần tương đồng số huyết học, sinh hóa máu, điều kiện ni dưỡng, nhiên kích thước chuột cống lớn chi phí cho chuột cao so với chuột nhắt gây nên khó khăn tái tạo mơ hình động vật cần số lượng lớn động vật để khảo sát 27, 54, 60 Chuột nhắt Côn Minh dòng chuột sử dụng phổ biến nghiên cứu y sinh học Trung Quốc, thuộc dịng chuột Swiss, dùng gây mơ hình địi hỏi phải nhập chuột Việt Nam 49 Cho nên, với mong muốn góp phần tạo thuận tiện cho nghiên cứu nước nghiên cứu thuốc YHCT điều trị RLLM thể âm hư, đề tài thực kiểm chứng mơ hình gây RLLM thể âm hư hydrocortison chủng chuột nhắt trắng Swiss albino