Khóa luận tốt nghiệp nhân nhanh giống hoa cúc vàng (chrysanthemum indicum) bằng phương pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật

HỌC VIỆN NƠNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA NƠNG HỌC KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP TÊN ĐỀ TÀI: NHÂN NHANH GIỐNG HOA CÚC VÀNG (CHRYSANTHEMUM INDICUM) BẰNG PHƯƠNG PHÁP NUÔI CẤY MÔ TẾ BÀO THỰC VẬT Người thực : BÙI THỊ THANH THANH Mã SV : 621706 Lớp : K62-KHCTA Người hướng dẫn : TS PHẠM PHÚ LONG Bộ môn : THỰC VẬT HÀ NỘI 2021 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan, số liệu kết nghiên cứu khóa luận trung thực chưa sử dụng bảo vệ báo cáo Tôi xin cam đoan, giúp đỡ cho khóa luận cảm ơn thơng tin trích dẫn khóa luận rõ nguồn gốc Hà Nội , ngày 08 tháng 08 năm 2021 Sinh viên Bùi Thị Thanh Thanh ii LỜI CẢM ƠN Để có báo cáo khóa luận tốt nghiệp này, khơng có nỗ lực cố gắng thân, mà tận tâm nhiệt huyết thầy cô thiếu cổ vũ động viên gia đình bạn bè Em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới thầy cô trực tiếp giảng dạy, truyền cho em kiến thức làm hành trang sau Đặc biệt thầy cô khoa Nông Học – Học Viện Nông Nghiệp Việt Nam, người thầy, người cô mang trái tim nhiệt huyết, yêu nghề Em xin chân thành cảm ơn thầy TS Phạm Phú Long tận tình hướng dẫn giúp đỡ, động viên cổ vũ tinh thần suốt trình em thực khóa luận Cuối em xin gửi lời cảm ơn thân thương đến gia đình bạn bè, người sát cánh ủng hộ em q trình học để thực khóa luận tốt nghiệp Hà Nội, ngày 08 tháng 08 năm 2021 Sinh viên Bùi Thị Thanh Thanh iii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN ii LỜI CẢM ƠN iii TÓM TẮT vi DANH MỤC HÌNH VÀ BIỂU ĐỒ vii DANH MỤC BẢNG viii Viết tắt ix PHẦN I: PHẦN MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích yêu cầu đề tài 1.2.1 Mục đích 1.2.2 Yêu cầu đề tài PHẦN II: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Giới thiệu chung Cúc hoa vàng 2.2 Nguồn gốc phân bố 2.3 Phân loại 2.4 Đặc điểm thực vật học 2.4.1 Thân 2.4.2 Lá 2.4.3 Hoa 2.5 Điều kiện sinh thái 2.5.1 Nhiệt độ 2.5.2 Ánh sáng 2.5.3 Ẩm độ 2.6 Giá trị dược liệu Cúc hoa Vàng (Chrysanthemum indicum) 2.7 Tình hình nghiên cứu nước 10 2.8 Tình hình nghiên cứu nước 11 2.9 Tình hình khai thác phát triển Cúc Hoa Vàng (Chrysanthemum indicum) Việt Nam 11 2.10 Các phương pháp nhân giống Cúc Hoa Vàng (Chrysanthemum indicum) 12 2.10.1 Nhân giống phương pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật 12 2.11 Các yếu tố ảnh hưởng tới q trình ni cấy mơ tế bào thực vật 17 2.11.1 Mẫu nuôi cấy 17 2.11.2 Điều kiện nuôi cấy 18 iv 2.11.3 Chất điều hoà sinh trưởng thực vật (ĐHSTTV) 19 PHẦN III: VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 23 3.1 Đối tượng, địa điểm thời gian nghiên cứu 23 3.1.1 Đối tượng nghiên cứu 23 3.1.2 Vật liệu nghiên cứu 23 3.1.3 Địa điểm nghiên cứu 23 3.1.4 Thời gian nghiên cứu 23 3.2 Nội dung nghiên cứu phương pháp nghiên cứu 23 3.2.1 Nội dung nghiên cứu 23 3.3 Các tiêu theo dõi 27 3.4 Phương pháp nghiên cứu 28 3.4.1 Phương pháp khử trùng mẫu cấy 28 3.4.2 Phương pháp nhân nhanh 28 3.4.3 Phương pháp tạo hoàn chỉnh 28 3.4.4 Phương pháp xử lý số liệu 29 PHẦN IV: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 30 4.1 Tạo callus từ nguồn vật liệu ban đầu 30 4.2 Giai đoạn nhân nhanh chồi 32 4.2.1 Ảnh hưởng nồng độ BA NAA số chồi, đường kính cây, chiều cao, số (theo dõi tuần) 32 4.1.2 Ảnh hưởng nồng độ BA đến số chồi, trọng lượng chồi, đường kính, chiều cao số (theo dõi tuần) 35 4.1.3 Ảnh hưởng nồng độ BA đến hệ số nhân nhanh chồi 38 4.4 Giai đoạn sinh trưởng phát triển 40 4.4.2 Biểu đồ so sánh tiêu sinh trưởng giai đoạn sinh trưởng phát triển qua tuần tuần theo dõi 47 Biểu đồ 4.5 Biểu đồ so sánh chiều rộng (cm) 49 4.5 Giai đoạn rễ 49 PHẦN V: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 53 5.1 Kết luận 53 5.2 Kiến nghị 53 PHỤ LỤC 54 TÀI LIỆU THAM KHẢO 59 v TÓM TẮT Cây cúc hoa vàng (Chrysanthemum indicum) dược liệu có nhiều cơng dụng như: tán phong thấp, nhiệt, giải độc, làm sáng mắt Hoa dùng chữa chứng cảm lạnh, sốt, hoa mắt, chóng mặt, nhức đầu, đau mắt đỏ, chảy nhiều nước mắt, mờ mắt, huyết áp cao, đinh độc, mụn nhọt sưng đau Ngồi cịn có tác dụng nội tiết giúp trẻ lâu, dùng để ướp chè hay ngâm rượu uống, dùng rửa đắp mụn nhọt Hiện có nhiều cơng trình nghiên cứu tác dụng dược lý loài này, nhiên cơng trình nghiên cứu nhân giống in vitro cịn hạn chế Cơng trình nghiên cứu có kết sau: Vật liệu ban đầu phù hợp để vào mẫu lá, đỉnh sinh trưởng, cuống Thời gian khử mẫu thích hợp 10 phút Mơi trường ½ MS + 0.1g inositol + 30g đường + 1,0 ppm – BA + 0,5 ppm α – NAA + 6,5g agar môi trường tạo callus tối ưu ½ MS + 0.1g inositol + 30g đường + 0,5 ppm – BA + 0,5 ppm α – NAA + 6,5g agar môi trường tốt cho phát triển chồi với hệ số nhân 2,47 ± 0,24 lần Đối với phát triển Cúc hoa vàng mơi trường ½ MS + 0.1g inositol + 30g đường + 6,5g agar + 1,0 ppm BA + 0,5 ppm α - NAA môi trường tối ưu cho phát triển trước tiến hành giai đoạn rễ Ở giai đoạn rễ môi trường thuận lợi cho phát triển rễ môi trường MS + 0,1 g/l inositol + 30 g/l đường + 6,5 g/l agar + 0,1 g/ AC + 0,1 ppm BA + 0,3 ppm α – NAA vi DANH MỤC HÌNH VÀ BIỂU ĐỒ Hình 1.1 Hình ảnh Cúc Hoa Vàng (Chrysanthemum indicum) .5 Hình 2.1 Hoa cúc hoa vàng Hình 2.2 Nụ hoa cúc hoa vàng .8 Hình 4.1: Hình ảnh tạo callus cơng thức 32 Hình 4.2: Mẫu bệnh .32 Hình 4.3: Nhân nhanh sau tuần công thức 35 Hình 4.4 Hình ảnh giai đoạn nhân nhanh 38 Hình 4.5: Nhân nhanh cơng thức sau tuần 39 Hình 4.6: Nấm bệnh giai đoạn nhân nhanh 40 Hình 4.7 Sinh trưởng phát triển công thức 45 Hình 4.8 Sinh trưởng phát triển công thức .45 Hình 4.9: Rễ công thức 51 Hình 4.10: Rễ cơng thức 52 Biểu đồ 4.1: Biểu đồ so sánh trọng lượng (gam) 48 Biểu đồ 4.2: Biểu đồ so sánh chiều cao (cm) 48 Biểu đồ 4.3: Biểu đồ so sánh số lá/thân .48 Biểu đồ 4.4: Biểu đồ so sánh chiều dài (cm) .49 Biểu đồ 4.5: Biểu đồ so sánh chiều rộng lá(cm) 50 vii DANH MỤC BẢNG Bảng 4.1: Ảnh hưởng nồng độ chất kích thích đến tỉ lệ mẫu sống, tỉ lệ tạo callus trọng lượng callus 30 Bảng 4.2 Ảnh hưởng BA đến số lá, chiều cao, số chồi (theo dõi tuần) 33 Bảng 4.3 Ảnh hưởng nồng độ BA đến số lá, số chồi, chiều cao, đường kính trọng lượng chồi 35 Bảng 4.4 Ảnh hưởng nồng độ BA đến hệ số nhân nhanh chồi (theo dõi tuần) 38 Bảng 4.5 Ảnh hưởng nồng độ chất điều tiết sinh trưởng (BA) đến giai đoạn sinh trưởng phát triển (theo dõi tuần) .40 Bảng 4.6: Ảnh hưởng nồng độ chất điều tiết sinh trưởng (BA) đến giai đoạn sinh trưởng phát triển (theo dõi tuần).Error! Bookmark not defined Bảng 4.7 Ảnh hưởng 6- BA đến phát triển Cúc hoa vàng 46 Bảng 4.8: Ảnh hưởng nồng độ chất điều hòa sinh trưởng đến rễ .50 viii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Viết đầy đủ Viết tắt ĐHSTTV điều hịa sinh trưởng thực vật CT1 cơng thức CT2 công thức CT3 công thức CT4 công thức CT5 công thức CT6 công thức CT7 công thức 6- BA 6- Benzyladenin α-NAA Naphanthalene acetic acid ix PHẦN I: PHẦN MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Từ lâu, người biết nhân giống trồng nhiều biện pháp Từ cách gieo hạt đến cách mà người ta lấy trực tiếp nhánh để trồng, gọi giâm cành, chiết cành, hay chắp nối thân với thân cách ghép cành Những ưu điểm vượt trội ứng dụng rộng rãi Cùng lúc nhân giống lên hàng lọạt mà không nhiều thời gian để gieo hạt, chờ cho lớn Bên cạnh người ta lại có cơng nghệ đại hơn, gọi công nghệ nuôi cấy mô tế bào Cùng với phát triển khoa hoc kỹ thuật, công nghệ ứng dụng rộng rãi trồng Cùng lúc tạo hàng vạn trồng mới, nhanh chóng mà khơng thiết phải từ hạt mà lấy mơ bào nào, trừ mơ tế bào hố gỗ Tuy nhiên cơng nghệ đòi hỏi tốn kém, kiên nhẫn khéo léo Nuôi cấy mô tế bào thực vật lĩnh vực bao gồm nhiều kỹ thuật khác nuôi cấy in vitro như: nuôi cấy phôi, quan, tế bào protoplast Việc đời kỹ thuật nuôi cấy mô tế bào thực vật mở hướng cho nghiên cứu thực vật, nhanh chóng giành vị trí quan trọng lĩnh vực công nghệ sinh học sản xuất cải thiện giống trồng Khả ứng dụng nuôi cấy mô tế bào thực vật rõ lĩnh vực nhân giống phục tráng trồng Trong giai đoạn nay, nuôi cấy mô tế bào thực vật ứng dụng mạnh mẽ vào thực tiễn chọn giống, nhân giống, sản xuất chất thứ cấp có hoạt tính sinh học nghiên cứu lý luận di truyền thực vật bậc cao Phương pháp áp dụng nhiều loại cây, hoa cúc vàng số Để Cúc hoa vàng trở thành sản phẩm mang giá trị kinh tế cao Ngồi ứng dụng thành cơng sinh học nông nghiệp đại chọn tạo giống mới, cải tiến kỹ thuật bảo quản hoa tươi, hoa khơ, nhân tố góp phần tạo nên thành tựu sử dụng công nghệ nhân giống in vitro để sản xuất Đây biện pháp dùng phổ biến nước trồng cúc, cúc Hình 4.7 Sinh trưởng phát triển cơng thức Hình 4.8 Sinh trưởng phát triển công thức 45 4.4.1 Ảnh hưởng 6- BA lên phát triển Cúc hoa vàng Chất kích thích 6- BA thường sử dụng để kích thích phát triển chồi, ni cấy mơ Ở thí nghiệm sinh trưởng phát triển ta thấy thay đổi tiêu liên quan đến chiều cao lá, ta có bảng so sánh thay đổi sau tuần nuôi cấy sau (tham khảo bảng 4.7) phía Bảng 4.7 Ảnh hưởng 6- BA đến phát triển Cúc hoa vàng Công Trọng Chiều cao Số lá/thân Chiều dài Chiều rộng thức lượng tăng tăng sau tăng sau tăng sau tăng sau sau tuần tuần (cm) tuần tuần (cm) tuần (cm) 0,12± 0,02b 0,06±0,11a 4,90±0,65ab 0,01±0,04a 0,01±0,02abc CT2 0,04±0,05ab 0,11±0,05a 5,30±0,50ab 0,12±0,12a 0,04±0,02bc CT3 0,15±0,03a 0,08±0,05a 2,70±0,75ab 0,14±0,06a 0,14±0,05abc CT4 0,02±0,02c 0,51±0,07a 4,20±1,50ab 0,13±0,02a 0,12±0,03abc CT5 0,03±0,01d 0,36±0,04a 4,60±1,62a 0,17±0,04a 0,22±0,04ab CT6 0,03±0,02b 0,34±0,09a 0,80±0,52b 0,17±0,10a 0,24±0,09a CT7 0,04±0,02bc 0,03±0,19a 4,20±1,11ab 0,03±0,12a 0,04±0,08c (gam) CT1 (ĐC) Ghi chú: a, b, c hàng thể khác biệt với mức ý nghĩa α= 0,05 phép thử Duncan Kết bảng 4.7 cho thấy tiêu trọng lượng chiều cao, số lá, chiều dài lá, chiều rộng có thay đồi Cụ thể: 46 Chiều cao công thức CT4 thay đổi rõ rệt nhất, cao lên 0,51 ± 0,07cm/cây Ở công thức CT4, CT5, CT6 thay đổi chiều cao rõ rệt cơng thức cịn lại, cao lên trung bình 0,3 – 0,5 cm/cây Trong công thức CT1, CT2, CT3, CT7 chiều cao tăng từ 0,03 ± 0,19 cm/cây - 0,11 ± 0,05cm/cây Về số thay đổi rõ ràng khác với chiều cao Sau tuần số công thức CT2 tăng 5,30 ± 0,50 lá/cây Các cơng thức cịn lại tăng từ – lá/cây Chiều dài tăng mạnh công thức CT3, CT4, CT5, CT6, tăng từ 0,12 ± 0,12cm - 0,17 ± 0,10 cm/cây Chiều rộng tăng mạnh công thức CT6 với nồng độ BA 2,5 ppm tăng khoảng 0,24 ± 0,09 cm Có thể thấy nồng độ chất điều hịa sinh trưởng cao hay thấp có ảnh hưởng định tới tiêu theo dõi 4.4.2 Biểu đồ so sánh tiêu sinh trưởng giai đoạn sinh trưởng phát triển qua tuần tuần theo dõi Các biểu đồ biến động trọng lượng cây, chiều cao cây, số thân chiều dài lá, chiều rộng tổng hợp biểu đồ 4.1 đến 4.5 Trọng lượng (gam) Biểu đồ so sánh trọng lượng 0,70 0,60 0,50 0,40 0,30 0,20 0,10 trọng lượng sau tuần Công thức trọng lượng sau tuần 47 Biểu đồ 4.1: Biểu đồ so sánh trọng lượng (gam) Chiều cao (cm) Biểu đồ so sánh chiều cao 2,50 2,00 1,50 1,00 0,50 - Chiều cao sau tuần Công thức Chiều cao sau tuần Biểu đồ 4.2: Biểu đồ so sánh chiều cao (cm) Biểu đồ so sánh số Số lá/thân 25,00 20,00 15,00 10,00 5,00 số sau tuần Công thức số sau tuần Biểu đồ 4.3: Biểu đồ so sánh số lá/thân Biểu đồ so sánh chiều dài Chiều dài (cm) 1,60 1,40 1,20 1,00 0,80 0,60 0,40 0,20 chiều dài sau tuần Công thức Chiều dài sau tuần 48 Biểu đồ 4.4: Biểu đồ so sánh chiều dài (cm) Chiều rộng lá(cm) Biểu đồ so sánh chiều rộng 0,80 0,70 0,60 0,50 0,40 0,30 0,20 0,10 chiều rộng sau tuần Công thức chiều rộng sau tuần Biểu đồ 4.5 Biểu đồ so sánh chiều rộng (cm) 4.5 Giai đoạn rễ Do than hoạt tính có ảnh hưởng rõ rệt đến khả rễ cây, nên thí nghiệm cuối ta tiến hành cho thêm vào mơi trường thí nghiệm 0,1g AC (than hoạt tính)/1 lít mơi trường để hỗ trợ thúc đẩy trình rễ Giai đoạn thực thay đổi nồng độ NAA công thức Tiến hành theo dõi đánh giá sau 10 ngày nuôi cấy Kết thể bảng 4.8 49 Bảng 4.8 Ảnh hưởng nồng độ chất điều hòa sinh trưởng đến rễ Công thức Số rễ Chiều dài rễ (cm) CT1 3,4 ± 0,6b 1,6 ± 0,27a CT2 2,4 ± 0,4bc 1,61 ± 0,15a CT3 8,1 ± 0,7a 1,93 ± 0,1a CT4 2,7 ± 0,5bc 0,64 ± 0,13b CT5 1,1 ± 0,3c 0,33 ± 0,117b CT6 3,9 ± 0,9b 0,57 ± 0,11b Ghi chú: a,b,c, hàng thể khác biệt với mức ý nghĩa α= 0,05 phép thử Duncan Nồng độ NAA thay đổi dẫn đến chiều dài rễ số rễ thay đổi theo Cụ thể: Ở công thức CT1 (công thức đối chứng) cơng thức CT2 có nồng độ NAA 0,1 cm 0,3 cm chiều dài rễ công thức không khác nhau, 1,6 cm 1,61 cm Số lượng rễ hai công thức rễ/gốc Rễ phát triển Các công thức số CT4 công thức CT6 có chiều dài rễ ngắn số rễ/ gốc phát triển từ - rễ/gốc Công thức CT5 công thức số rễ chiều dài rễ Các rễ công thức dài khoảng 0,3 – 0,4 cm số lượng thấp Trung bình gốc có rễ Mơi trường khơng thích hợp để làm môi trường rễ 50 Công thức CT3 công thức rễ phát triển tốt chiều dài số lượng Trung bình chiều dài rễ cơng thức lên đến 1,9 cm cao công thức CT1 công thức CT2 0,3 cm Cao công thức CT1 CT2 1,29 cm – 1,36 cm Cao công thức CT5 1,6 cm Số rễ cơng thức đạt trung bình rễ/gốc cao hẳn so với cơng thức cịn lại có – rễ/gốc Kết luận: Cơng thức CT3 có nồng độ BA 0,1 ppm, α- NAA 0,3 ppm, 0,1 g/l AC công thức rễ tốt Số rễ đạt 8,1 ± 0,7 rễ/cây chiều dài rễ đạt 1,93 ± 0,1 cm/cây Tham khảo hình 4.9 Hình 4.9 Rễ cơng thức 51 Hình 4.10 Rễ cơng thức 52 PHẦN V: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 Kết luận Môi trường ½ MS + 0.1g inositol + 30g đường + 1,0 ppm – BA + 0,5 ppm α – NAA + 6,5g agar môi trường tạo callus tối ưu với tỉ lệ mẫu 85,00 ± 1,74 %, tỉ lệ tạo callus: 80,83 ± 1,83 %, khối lượng callus 1,97 ± 0,20g ½ MS + 0,1g inositol + 30g đường + 0,5 ppm – BA + 0,5 ppm α – NAA + 6,5g agar môi trường tốt cho phát triển chồi với hệ số nhân 2,47 ± 0,24 lần sử dụng mơi trường có nồng độ BA 1,0 ppm Đối với phát triển Cúc hoa vàng mơi trường ½ MS + 0,1g inositol + 30g đường + 6,5g agar + 1,0 ppm BA + 0,5 ppm α - NAA môi trường tối ưu cho phát triển trước tiến hành giai đoạn rễ với trọng lượng 0,59 ± 0,08 gam/cây, chiều cao cây: 2,29 ± 0,142cm/cây, số lá: 17,40 ± 0,78 lá/thân, chiều dài lá: 1,44 ± 0,07 cm/lá, chiều rộng lá: 0,74 ± 0,03 cm/lá Ở giai đoạn rễ môi trường thuận lợi cho phát triển rễ môi trường MS + 0,1 g/l inositol + 30g đường + 6,5g agar + 0,1 g/l than với chiều dài rễ đạt 1,93 ± 0,1cm/cây, số rễ: 8,1 ± 0,7 rễ/cây 5.2 Kiến nghị Cải thiện quy trình khử mẫu tạo callus để mẫu vào giảm thiểu số lượng nhiễm nấm bệnh Tiếp tục hồn thiện quy trình nhân nhanh in vitro Cúc hoa vàng giai đoạn nghiên cứu nhân nhanh nâng cao hệ số nhân chồi 53 PHỤ LỤC Ảnh hưởng chất điều tiết sinh trưởng đến trình tạo callus Cúc hoa vàng tilesong 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 Total tiletaocal 1,00 2,00 lus 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 Total trongluo 1,00 ngcallus 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 Total Descriptives Std Std N Mean Deviation Error 12 82,08 4,98102 1,44 12 65,83 4,17424 1,20 12 12 12 12 12 84 12 12 12 12 12 12 12 84 12 12 12 12 12 12 12 84 85,00 73,75 76,67 63,75 64,58 73,10 52,50 69,58 80,83 65,83 66,25 57,92 58,33 64,46 1,77 2,38 1,97 1,40 1,39 1,35 1,26 1,65 6,03023 3,76889 4,92366 6,07716 6,89477 9,56603 8,39372 6,55686 6,33652 8,21123 5,27645 6,55686 4,92366 10,83885 ,66217 ,84220 ,70478 ,47459 ,49639 ,51224 ,42430 ,69818 1,74 1,09 1,42 1,75 1,99 1,04 2,42 1,89 1,83 2,37 1,52 1,89 1,42 1,18 0,19 0,24 0,20 0,14 0,14 0,15 0,12 0,08 95% Confidence Minimu Maximu Lower Upper m m 78,9185 85,2481 75,00 90,00 63,1812 68,4855 60,00 70,00 81,1686 71,3554 73,5383 59,8888 60,2026 71,0193 47,1669 65,4173 76,8073 60,6162 62,8975 53,7506 55,2050 62,1121 1,3493 1,8491 1,5222 1,1010 1,0779 1,0204 ,9921 1,4953 88,8314 76,1446 79,7950 67,6112 68,9641 75,1712 57,8331 73,7494 84,8594 71,0505 69,6025 62,0827 61,4617 66,8165 2,1907 2,9193 2,4178 1,7040 1,7087 1,6713 1,5313 1,7983 75,00 70,00 70,00 50,00 55,00 50,00 40,00 60,00 70,00 50,00 60,00 50,00 50,00 40,00 ,99 1,03 1,30 ,92 ,87 ,82 ,85 ,82 95,00 80,00 85,00 70,00 75,00 95,00 65,00 80,00 90,00 75,00 75,00 70,00 65,00 90,00 3,50 3,60 4,00 2,43 2,20 2,23 2,06 4,00 54 Ảnh hưởng chất điều tiết sinh trưởng đến giai đoạn tạo chồi sola 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 Total chieuca 1,00 ocay 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 Total duongki 1,00 nh 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 Total sochoi 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 Total Descriptives Std Deviatio Std N Mean n Error 10 4,60 1,64655 0,52 10 3,60 2,45855 0,78 10 4,90 1,79196 0,57 10 4,00 1,41421 0,45 10 2,70 1,88856 0,60 10 2,60 2,06559 0,65 10 2,50 1,26930 0,40 70 3,56 1,97547 0,24 10 1,23 ,27101 0,09 10 1,62 ,31903 0,10 10 1,34 ,35653 0,11 10 1,22 ,34577 0,11 10 1,10 ,22111 0,07 10 1,32 ,45656 0,14 10 1,13 ,37431 0,12 70 1,28 ,36499 0,04 10 0,10 ,03604 0,01 10 0,08 ,02708 0,01 10 0,12 ,03974 0,01 10 0,08 ,04922 0,02 10 0,09 ,03048 0,01 10 0,09 ,03559 0,01 10 0,10 ,06143 0,02 70 0,09 ,04192 0,01 10 1,00 0,00000 10 1,60 ,69921 0,22 10 2,20 ,63246 0,20 10 1,70 ,67495 0,21 10 1,40 ,69921 0,22 10 1,60 ,69921 0,22 10 1,50 ,70711 0,22 70 1,57 ,69306 0,08 95% Confidence Lower Upper Minimu Maximu Bound Bound m m 3,4221 5,7779 2,00 8,00 1,8413 5,3587 0,00 7,00 3,6181 6,1819 3,00 8,00 2,9883 5,0117 2,00 6,00 1,3490 4,0510 1,00 6,00 1,1224 4,0776 0,00 5,00 1,5920 3,4080 1,00 5,00 3,0861 4,0282 0,00 8,00 1,0361 1,4239 ,80 1,70 1,3918 1,8482 1,00 2,10 1,0850 1,5950 ,90 2,00 ,9727 1,4673 ,80 2,00 ,9418 1,2582 ,80 1,50 ,9934 1,6466 ,50 2,00 ,8622 1,3978 ,50 1,80 1,1930 1,3670 ,50 2,10 ,0732 ,1248 ,03 ,15 ,0606 ,0994 ,05 ,12 ,0946 ,1514 ,08 ,20 ,0448 ,1152 ,04 ,20 ,0662 ,1098 ,05 ,15 ,0645 ,1155 ,04 ,14 ,0541 ,1419 ,04 ,20 ,0840 ,1040 ,03 ,20 1,0000 1,0000 1,00 1,00 1,0998 2,1002 1,00 3,00 1,7476 2,6524 1,00 3,00 1,2172 2,1828 1,00 3,00 ,8998 1,9002 1,00 3,00 1,0998 2,1002 1,00 3,00 ,9942 2,0058 1,00 3,00 1,4062 1,7367 1,00 3,00 55 Ảnh hưởng chất điều tiết sinh trưởng đến phát triển chồi hệ số nhân chồi N sola 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 Total chieuca 1,00 o 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 Total duongki 1,00 nh 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 Total sochoi 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 Total trongluo 1,00 ngchoi 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 Total 10 10 10 10 10 10 10 70 10 10 10 10 10 10 10 70 10 10 10 10 10 10 10 70 10 10 10 10 10 10 10 70 10 10 10 10 10 10 10 70 Mean 6,10 5,40 6,70 5,10 5,00 3,90 3,50 5,10 1,41 1,78 1,51 1,41 1,28 1,63 1,28 1,47 0,10 0,09 0,15 0,11 0,10 0,13 0,07 0,11 1,00 3,60 3,50 2,90 2,60 2,90 2,50 2,71 0,02 0,02 0,04 0,04 0,03 0,03 0,02 0,03 Descriptives Std Deviatio Std n Error ,99443 0,31 1,77639 0,56 2,62679 0,83 2,13177 0,67 1,76383 0,56 1,59513 0,50 1,58114 0,50 2,05116 0,25 ,19692 0,06 ,25734 0,08 ,32472 0,10 ,34785 0,11 ,25298 0,08 ,41647 0,13 ,30111 0,10 ,33971 0,04 ,04517 0,01 ,02601 0,01 ,04274 0,01 ,03498 0,01 ,04551 0,01 ,03843 0,01 ,03129 0,01 ,04436 0,01 0,00000 ,96609 0,31 ,84984 0,27 ,73786 0,23 ,69921 0,22 ,87560 0,28 ,70711 0,22 1,07868 0,13 ,00789 0,00 ,01033 0,00 ,02503 0,01 ,02789 0,01 ,01269 0,00 ,01269 0,00 ,00994 0,00 ,01794 0,00 95% Confidence Lower Upper Minimu Maximu Bound Bound m m 5,3886 6,8114 5,00 8,00 4,1292 6,6708 3,00 9,00 4,8209 8,5791 3,00 10,00 3,5750 6,6250 2,00 9,00 3,7382 6,2618 3,00 8,00 2,7589 5,0411 2,00 6,00 2,3689 4,6311 2,00 6,00 4,6109 5,5891 2,00 10,00 1,2691 1,5509 1,00 1,70 1,5959 1,9641 1,30 2,10 1,2777 1,7423 1,00 2,10 1,1612 1,6588 1,00 2,20 1,0990 1,4610 1,00 1,80 1,3321 1,9279 1,00 2,30 1,0646 1,4954 ,80 1,80 1,3904 1,5524 ,80 2,30 ,0697 ,1343 ,05 ,20 ,0704 ,1076 ,05 ,13 ,1234 ,1846 ,09 ,20 ,0880 ,1380 ,07 ,18 ,0698 ,1350 ,01 ,17 ,1035 ,1585 ,08 ,18 ,0506 ,0954 ,04 ,13 ,0986 ,1198 ,01 ,20 1,0000 1,0000 1,00 1,00 2,9089 4,2911 2,00 5,00 2,8921 4,1079 2,00 5,00 2,3722 3,4278 2,00 4,00 2,0998 3,1002 2,00 4,00 2,2736 3,5264 2,00 4,00 1,9942 3,0058 2,00 4,00 2,4571 2,9715 1,00 5,00 ,0124 ,0236 ,01 ,03 ,0146 ,0294 ,01 ,04 ,0181 ,0539 ,01 ,09 ,0200 ,0600 ,01 ,09 ,0159 ,0341 ,01 ,05 ,0159 ,0341 ,01 ,05 ,0119 ,0261 ,01 ,04 ,0222 ,0307 ,01 ,09 56 Ảnh hưởng môi trường nuôi cấy tới sinh trưởng phát triển N trongluo 1,00 ngcay 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 Total chieuca 1,00 o 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 Total sola 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 Total chieudail 1,00 a 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 Total chieuron 1,00 gla 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 Total 10 10 10 10 10 10 10 70 10 10 10 10 10 10 10 70 10 10 10 10 10 10 10 70 10 10 10 10 10 10 10 70 10 10 10 10 10 10 10 70 Mean 0,42 0,37 0,59 0,30 0,23 0,18 0,33 0,35 2,24 2,33 2,21 1,69 1,55 1,55 2,30 1,98 16,50 20,50 17,40 16,70 17,00 9,10 11,70 15,56 1,24 1,46 1,44 1,01 1,16 1,31 1,31 1,28 0,57 0,60 0,74 0,52 0,52 0,60 0,50 0,58 Descriptives Std Std Deviation Error ,12019 0,04 ,14339 0,05 ,08731 0,03 ,13139 0,04 ,04625 0,01 ,05255 0,02 ,12860 0,04 ,13118 0,02 ,43836 0,14 ,37419 0,12 ,37550 0,12 ,41753 0,13 ,35355 0,11 ,28382 0,09 ,47610 0,15 ,50646 0,06 5,14782 1,63 6,04152 1,91 2,45855 0,78 4,73873 1,50 3,74166 1,18 1,66333 0,53 3,09300 0,98 5,31237 0,63 ,15666 0,05 ,22026 0,07 ,20656 0,07 ,22828 0,07 ,14298 0,05 ,17920 0,06 ,22336 0,07 ,23877 0,03 ,17926 0,06 ,09727 0,03 ,08787 0,03 ,15055 0,05 ,16454 0,05 ,28284 0,09 ,16131 0,05 ,18051 0,02 95% Confidence Lower Upper Minimu Maximu Bound Bound m m ,2110 ,3830 ,11 ,50 ,3114 ,5166 ,24 ,73 ,3745 ,4995 ,30 ,60 ,2980 ,4860 ,20 ,63 ,2219 ,2881 ,20 ,34 ,1674 ,2426 ,13 ,30 ,2740 ,4580 ,13 ,56 ,3067 ,3693 ,11 ,73 1,9214 2,5486 1,56 3,00 2,0643 2,5997 1,80 3,00 1,9414 2,4786 1,60 3,00 1,3913 1,9887 1,10 2,50 1,2971 1,8029 1,20 2,30 1,3470 1,7530 1,00 1,90 1,9594 2,6406 1,80 3,00 1,8602 2,1018 1,00 3,00 12,8175 20,1825 10,00 28,00 16,1782 24,8218 15,00 32,00 15,6413 19,1587 13,00 21,00 13,3101 20,0899 10,00 23,00 14,3234 19,6766 10,00 21,00 7,9101 10,2899 7,00 12,00 9,4874 13,9126 8,00 18,00 14,2905 16,8238 7,00 32,00 1,1269 1,3511 1,00 1,56 1,3064 1,6216 1,14 1,80 1,2922 1,5878 1,20 1,80 ,8467 1,1733 ,60 1,30 1,0577 1,2623 1,00 1,40 1,1818 1,4382 1,00 1,60 1,1502 1,4698 1,00 1,60 1,2192 1,3331 ,60 1,80 ,4448 ,7012 ,30 ,82 ,5284 ,6676 ,46 ,72 ,6761 ,8019 ,60 ,89 ,4123 ,6277 ,34 ,80 ,3973 ,6327 ,30 ,80 ,3977 ,8023 ,20 1,00 ,3846 ,6154 ,30 ,80 ,5348 ,6209 ,20 1,00 57 Ảnh hưởng chất điều tiết sinh trưởng đến phát triển rễ N chiéudai 1,00 re 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 Total sore 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 Total 10 10 10 10 10 10 60 10 10 10 10 10 10 60 Mean 1,6000 1,6150 1,9300 ,6400 ,3300 ,5700 1,1142 3,4000 2,4000 8,1000 2,7000 1,1000 3,9000 3,6000 Descriptives Std Deviatio Std n Error ,87813 ,27769 ,49332 ,15600 ,32335 ,10225 ,42740 ,13515 ,37133 ,11743 ,35292 ,11160 ,79148 ,10218 1,95505 ,61824 1,26491 ,40000 2,42441 ,76667 1,82878 ,57831 1,19722 ,37859 2,92309 ,92436 2,94123 ,37971 95% Confidence Lower Upper Minimu Maximu Bound Bound m m ,9718 2,2282 ,50 3,00 1,2621 1,9679 ,50 2,20 1,6987 2,1613 1,30 2,40 ,3343 ,9457 0,00 1,50 ,0644 ,5956 0,00 1,00 ,3175 ,8225 ,20 1,20 ,9097 1,3186 0,00 3,00 2,0014 4,7986 1,00 7,00 1,4951 3,3049 1,00 5,00 6,3657 9,8343 4,00 12,00 1,3918 4,0082 0,00 5,00 ,2436 1,9564 0,00 3,00 1,8089 5,9911 1,00 11,00 2,8402 4,3598 0,00 12,00 58 TÀI LIỆU THAM KHẢO a Tài liệu Tiếng Việt Đỗ Huy Bích, Đặng Quang Chung, Bùi Xuân Chương, Nguyễn Thượng Dong, Đỗ Trung Đàm, Phạm Văn Hiển, Vũ Ngọc Lộ, Phạm Duy Mai, Phạm Kim Mãn, Đoàn Thị Nhu, Nguyễn Tập, Trần Toàn (2004) Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam, Tập I+II, NXB Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội Đỗ Tất Lợi (2004) Những thuốc vị thuốc Việt Nam Hà Nội: NXB Y học Lê Trần Bình (1997), Cơng nghệ sinh học thực vật cải tiến trồng, NXB Nông nghiệp Hà Nội Lê Trần Đức (1997), Cây thuốc Việt Nam, NXB Nơng Nghiệp Hà Nội Ngơ Xn Bình (chủ biên) (2005) Nuôi cấy mô tế bào thực vật sở lý luận ứng dụng NXB khoa học kỹ thuật Nguyễn Thị Lý Anh (2014) Bài giảng công nghệ nuôi cấy mô tế bào thực vật Nguyễn Văn Uyển tác giả (1995), Nuôi cấy mô thực vật phục vụ công tác giống trồng, NXB Nơng Nghiệp, Hà Nội Góp phần nghiên cứu phân loại họ cúc (Asteraceae dumort), 1984 Phân loại học thực vật, thực vật học bậc cao, Đại học trung học chuyên nghiệp,1978 b Tài liệu tiếng Anh Murrshige T., Skoog F., (1962) “A revised medium for rapid growth and bioassay with tobacco tissue cultures.” Plant physiol, 15: 473-479 Morel and Martin (1952), C.R.Acad,Sci: 235, 1324-1325 59