(Luận văn) nghiên cứu nhân giống cây hà thủ ô đỏ (polygonum multiflorum thunb) bằng phương pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM NGUYỄN ĐỨC QUANG lu an NGHIÊN CỬU NHÂN GIỐNG CÂY HÀ THỦ Ô ĐỎ (Polygonum multiflorum Thunb) BẰNG PHƢƠNG PHÁP NUÔI CẤY MÔ TẾ BÀO THỰC VẬT n va Tên đề tài p ie gh tn to w d oa nl KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC ll u nf va an lu : Chính quy oi m Hệ đào tạo Khoa z at nh Khóa : 2012 – 2016 Chuyên ngành : Công nghệ sinh học : CNSH - CNTP z m co l gm @ an Lu Thái Nguyên, 2016 n va ac th si ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM NGUYỄN ĐỨC QUANG lu an NGHIÊN CỬU NHÂN GIỐNG CÂY HÀ THỦ Ô ĐỎ (Polygonum multiflorum Thunb) BẰNG PHƢƠNG PHÁP NUÔI CẤY MÔ TẾ BÀO THỰC VẬT n va Tên đề tài p ie gh tn to w d oa nl KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC ll u nf va an lu : Chính quy oi m Hệ đào tạo z at nh Chuyên ngành: Công nghệ sinh học : CNSH - CNTP Khóa : 2012 – 2016 z Khoa gm @ Ngƣời hƣớng dẫn: PGS.TS Ngơ Xn Bình l m co Th.S Nguyễn Thị Tình an Lu Thái Nguyên, 2016 n va ac th si i LỜI CẢM ƠN Trong suốt trình thực tập viện Nghiên cứu Phát triển Lâm Nghiệp phía bắc, trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên, nhận nhiều giúp đỡ từ ban lãnh đạo, thầy hướng dẫn, bạn bè, gia đình Trước hết tơi xin chân thành cảm ơn thầy PGS.TS Ngơ Xn Bình Th.S Nguyễn Thị Tình tận tình bảo suốt thời gian thực tập Tôi xin chân thành cảm ơn chị Phạm Thị Thảo, cán kỹ thuật phịng thí nghiệm bạn thực tập tạo điều kiện thuận lợi cho q lu trình thực đề tài an Tơi xin chân thành cảm ơn đến thầy cô khoa CNSH & CNTP, Trường va n Đại học Nông Lâm Thái Ngun nhiệt tình giúp đỡ st q trình học tập Và cuối chân thành cảm ơn đến quan tâm sâu sắc từ gia đình, bạn ie gh tn to hồn thành khố luận p bè, bên cạnh động viên, giúp đỡ tơi q trình thực khố luận d oa nl w Thái Nguyên, ngày 27 tháng năm 2016 Sinh viên thực an lu ll u nf va Nguyễn Đức Quang oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si ii DANH MỤC TỪ, CỤM TỪ VIẾT TẮT lu an n va p ie gh tn to : 6-Benzylaminopurine Cs : Cộng CT : Công thức CT NCKH : Cơng trình Nghiên cứu khoa học Đc : Đối chứng IBA : Indole-3-butyric acid Kinetin : 6-Furfurylaminopurine LSD : Least Significant Difference MS : Murashige and Skoog’s MT : Môi trường NAA : α-Naphlene axetic acid TB : Trung Bình TCDL : Tổ chức dược liệu TN : Thí nghiệm d oa nl w BAP ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si iii DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1: Tỷ lệ emodin physcion Bảng 2.2 Một số cơng trình NCKH Hà thủ đỏ 18 Bảng 4.1 Kết ảnh hưởng thời gian khử trùng dung dịch HgCl2 0,1% đến khả tiêu diệt nấm vi khuẩn (sau ngày cấy) 29 Bảng 4.2 Kết ảnh hưởng số môi trường đến khả tạo chồi Hà thủ ô đỏ (sau 20 ngày nuôi cấy) 31 Bảng 4.3 Kết ảnh hưởng tổ hợp BA + NAA đến khả lu nhân nhanh chồi Hà thủ ô đỏ (sau 30 ngày nuôi cấy) .32 an Bảng 4.4 Kết ảnh hưởng tổ hợp BA + NAA + Kin đến khả va n nhân nhanh chồi Hà thủ ô đỏ (sau 30 ngày nuôi cấy) 34 tn to Bảng 4.5 Kết ảnh hưởng nồng độ NAA đến khả ie gh rễ Hà thủ ô đỏ (sau 25 ngày nuôi cấy) 36 p Bảng 4.6 Kết ảnh hưởng nồng độ IBA đến khả rễ d oa nl w Hà thủ ô đỏ (sau 25 ngày nuôi cấy) .37 ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si iv DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 2.1 Cây Hà thủ đỏ Hình 2.2 Hình ảnh số sản phẩm từ Hà thủ ô đỏ 20 Hình 4.1 Biểu đồ thể ảnh hưởng thời gian khử trùng dung dịch HgCl2 0,1% đến khả tiêu diệt nấm vi khuẩn .30 Hình 4.2 Biểu đồ thể ảnh hưởng số môi trường đến khả tạo chồi Hà thủ ô đỏ .31 Hình 4.3 Biểu đồ thể ảnh hưởng nồng độ BA + NAA đến lu khả nhân nhanh chồi Hà thủ ô đỏ 33 an Hình 4.4 Biểu đồ thể ảnh hưởng tổ hợp BA + NAA + Kin đến va n khả nhân nhanh chồi Hà thủ ô đỏ 34 tn to Hình 4.5 Biểu đồ thể ảnh hưởng nồng độ NAA đến khả ie gh rễ Hà thủ ô đỏ 36 p Hình 4.6 Biểu đồ thể ảnh hưởng IBA đến khả rễ Hà thủ ô đỏ 38 d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si v MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i DANH MỤC TỪ, CỤM TỪ VIẾT TẮT ii DANH MỤC CÁC BẢNG iii DANH MỤC CÁC HÌNH iv MỤC LỤC v PHẦN 1: MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề lu 1.2 Mục đích yêu cầu nghiên cứu an n va 1.2.1 Mục đích nghiên cứu 1.3 Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài .2 gh tn to 1.2.2 Yêu cầu nghiên cứu ie 1.3.1 Ý nghĩa khoa học p 1.3.2 Ý nghĩa thực tiễn .2 nl w PHẦN TỔNG QUAN TÀI LIỆU d oa 2.1 Giới thiệu chung Hà thủ ô đỏ an lu 2.1.1 Nguồn gốc phân bố .3 va 2.1.2 Đặc điểm hình thái u nf 2.1.3 Tác dụng dược lý ll 2.2 Khái quát nuôi cấy mô tế bào thực vật m oi 2.2.1 Tính tồn (Totipotence) tế bào z at nh 2.2.2 Sự phân hóa phản phân hóa tế bào 2.2.3 Môi trường nuôi cấy mô tế bào thực vật z gm @ 2.2.3.1 Điều kiện nuôi cấy mô tế bào thực vật 2.2.3.2 Thành phần môi trường nuôi cấy mô tế bào thực vật l m co 2.3 Các giai đoạn nuôi cấy mô tế bào 13 2.3.1 Giai đoạn chuẩn bị 13 an Lu 2.3.2 Tái sinh mẫu nuôi cấy 13 n va ac th si vi 2.3.3 Giai đoạn nhân nhanh chồi 14 2.3.4 Tạo hoàn chỉnh 14 2.3.5 Thích ứng in vitro điều kiện tự nhiên 15 2.4 Những vấn đề nuôi cấy mô .15 2.4.1 Sự tạp nhiễm 15 2.4.2 Tính bất định mặt di truyền 16 2.4.3 Việc sản xuất chất gây độc từ mẫu cấy 17 2.4.4 Hiện tượng thuỷ tinh thể 17 2.5 Tình hình nghiên cứu, sản xuất Hà thủ đỏ Việt Nam giới .18 lu 2.5.1 Tình hình nghiên cứu, sản xuất Hà thủ đỏ Việt Nam 18 an n va 2.5.2 Tình hình nghiên cứu, sản xuất Hà thủ ô đỏ giới 20 3.1 Vật liệu phạm vi nghiên cứu 22 gh tn to PHẦN 3: ĐỐI TƢỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 p ie 3.2 Địa điểm thời gian tiến hành nghiên cứu 22 3.3 Hóa chất thiết bị sử dụng .22 nl w 3.3.1 Hóa chất 22 d oa 3.3.2 Thiết bị sử dụng 22 an lu 3.4 Điều kiện nghiên cứu 23 va 3.5 Nội dung nghiên cứu 23 u nf 3.6 Phương pháp nghiên cứu 23 ll 3.6.1 Chuẩn bị môi trường nuôi cấy in vitro 23 m oi 3.6.2 Phương pháp bố trí thí nghiệm 23 z at nh PHẦN 4: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 29 4.1 Kết ảnh hưởng thời gian khử trùng dung dịch HgCl2 0,1% z gm @ đến khả tiêu diệt nấm vi khuẩn .29 4.2 Kết ảnh hưởng số môi trường đến khả tạo chồi l m co Hà thủ ô đỏ 31 4.3 Kết ảnh hưởng BA, Kin, NAA đến khả nhân nhanh chồi an Lu Hà thủ ô 32 n va ac th si vii 4.3.1 Kết ảnh hưởng tổ hợp BA + NAA đến khả nhân nhanh chồi Hà thủ ô đỏ .32 4.3.2 Kết ảnh hưởng tổ hợp BA + NAA + Kin đến khả nhân nhanh chồi Hà thủ ô đỏ 34 4.4 Kết ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng đến khả rễ Hà thủ ô đỏ 35 4.4.1 Kết ảnh hưởng nồng độ NAA đến khả rễ Hà thủ ô đỏ 36 4.4.2 Kết ảnh hưởng nồng độ IBA đến khả rễ Hà thủ ô đỏ 37 PHẦN 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 39 lu an 5.1 Kết luận 39 n va 5.2 Đề nghị .39 PHỤ LỤC .43 gh tn to TÀI LIỆU THAM KHẢO 40 p ie PHỤ LUC 46 d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si PHẦN MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Thảo dược nguồn nguyên liệu thực vật quý giá, cung cấp dược liệu để sản xuất chế biến loại thuốc hữu ích phục vụ cho việc chữa bệnh phục hồi sức khỏe cho người Hà thủ đỏ tìm thấy Trung Quốc vào năm 713 sử dụng loại thảo dược trường sinh người Trên giới Hà thủ đỏ có nhiều Trung Quốc, Nhật Bản, Đài Loan Ấn Độ Ở Việt Nam Hà thủ ô đỏ mọc hoang từ tỉnh miền núi từ Nghệ An trở ra, có nhiều Lai Châu, lu Sơn La, Lào Cai, Hà Giang, số tỉnh khác Cao Bằng, Lạng Sơn, Hồ Bình an có số lượng [6] Hà thủ đỏ chủ yếu biết đến vị thuốc bổ, trị suy va n nhược thần kinh, ích huyết, khoẻ gân cốt, đen râu tóc Theo y học cổ truyền, Hà thủ tn to có vị đắng chát, ngọt, tính ấm, có tác dụng bổ gan thận, ích tinh huyết, mạnh ie gh gân xương, nhuận tràng Được dùng để bổ máu, chữa thận suy, gan yếu, thần kinh p suy nhược, thiểu tuần hoàn, ngủ kém, đau lưng mỏi gối, khơ khát táo bón Trong củ Hà thủ đỏ có chứa nhiều chất quan trọng emodin, w oa nl chrysophanol, rhein, physcion, tinh bột, lipit…Trong tự nhiên Hà thủ đỏ d gây trồng hạt hay dây, sau 3-4 năm thu hoạch, lấy củ rửa sạch, bổ lu an thành miếng phơi khơ để làm thuốc Lá dùng làm rau, dây u nf va dùng làm thuốc [2] Theo Chang Lin (2003) Hà thủ ô đỏ nuôi trồng ll nhà kính cho tỉ lệ chất emodin physcion cao tự nhiên oi m [15] Trước nguồn Hà thủ ô đỏ nước ta dồi gần khai z at nh thác mức nạn phá rừng nên lượng Hà thủ ô đỏ bị giảm sút nghiêm trọng, không cung cấp đủ nguồn dược liệu cho việc chế biến sản xuất thuốc chữa bệnh z cho người dân Do đó, việc nhân nhanh số lượng Hà thủ ô đỏ phương pháp @ gm nuôi mô tế bào thực vật để đáp ứng cung cấp nguồn dược liệu cần m co l thiết Xuất phát từ thực tế trên, để góp phần vào công tác nhân giống việc nhân nhanh Hà thủ ô đỏ nhằm nâng cao suất, chất lượng, hiệu sản xuất, an Lu tiến hành nghiên cứu đề tài: “ Nghiên cứu nhân giống Hà thủ ô đỏ (Polygonum multiflorum Thunb) phương pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật ” n va ac th si 38 lu an va Hình 4.6 Biểu đồ thể ảnh hưởng IBA đến khả rễ Hà thủ ô đỏ n Sau 25 ngày nuôi cấy kết thu bảng 4.6 hình 4.6 to Từ kết thu cho thấy: giá trị LSD05 = 0,32 CT thí nghiệm có ie gh tn + Chiều dài TB rễ p sai khác có ý nghĩa so với CT(đ/c) mức độ tin cậy 95% Chiều dài TB rễ nl w công thức thí nghiệm là: CT2 sử dụng 0,1mg/l IBA có chiều dài TB rễ đạt cao oa 2,7cm, tiếp CT3 có chiều dài TB rễ đạt 2,6cm, CT4 có chiều dài TB rễ d đạt 2,5cm CT5 đạt 2,43cm Thấp CT(đ/c) có chiều dài TB rễ đạt 1,9cm va an lu + Số rễ TB/cây u nf Giá trị LSD05 = 0,26 CT thí nghiệm có sai khác so với CT(đ/c) ll mức độ tin cậy 95% Từ kết thu cho thấy: CT2 có số rễ TB/cây cao m oi đạt 3,7 rễ; tiếp đến CT3 CT4 có số rễ đạt 3,43 rễ; CT5 đạt 3,3 rễ; z at nh CT1(đ/c) có số rễ TB/cây đạt thấp 1,7 rễ Như vậy, nồng độ IBA thích hợp bổ sung vào mơi trường để phát sinh rễ tốt z m co l gm @ 0,1mg/l an Lu n va ac th si 39 PHẦN KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 Kết luận Sau tiến hành thí nghiệm đề tài xin đưa số kết luận sau nhân giống Hà thủ ô đỏ phương pháp nuôi cấy mô sau: Thời gian khử trùng mẫu: Mẫu khử trùng dung dịch HgCl2 0,1% 10 phút đạt kết cao với tỉ lệ mẫu sống 80% Mơi trường thích hợp cho tái sinh chồi mơi trường MS có bổ sung Inositol lu 100mg/l + đường 30g/l + agar 5g/l, pH = 5,8 cho tỉ lệ tái sinh chồi 77,78% an Mơi trường thích hợp cho nhân nhanh chồi mơi trường MS có bổ sung Inositol va n 100mg/l + đường 30g/l + agar 5g/l + 4mg/l BA + 0,5mg/l NAA + 0,3mg/l Kin, pH = 5,8 gh tn to đạt hệ số nhân chồi cao 3,9 lần, chồi khoẻ, xanh thẫm Môi trường rễ tốt Hà thủ ô đỏ mơi trường MS có bổ sung p ie Inositol 100mg/l + đường 30g/l + agar 5g/l + 0,1mg/l IBA, pH = 5,8 đạt 3,7 rễ w 5.2 Đề nghị oa nl Do hạn chế mặt thời gian nên đề tài nghiên cứu chưa thực thêm nghiên d cứu ảnh hưởng số yếu tố lên q trình nhân giống Hà thủ đỏ Vì vậy, chúng lu an xin đề nghị số ý kiến sau: u nf va - Nghiên cứu cụ thể tác động riêng lẻ thành phần nước dừa, vitamin, pH, nhiệt độ, ánh sáng… lên tái sinh chồi, tăng sinh cụm chồi tạo rễ Hà thủ ô đỏ ll oi m - Nghiên cứu tác động độc lập thành phần khoáng chất ảnh hưởng đến z at nh sinh trưởng phát triển chồi in vitro Hà thủ ô đỏ z m co l gm @ an Lu n va ac th si 40 TÀI LIỆU THAM KHẢO I Tài liệu tham khảo nƣớc Bài giảng Dược liệu Tập I - 1998 Tr 247-249, Viện trị liệu Tóc Da đầu Đỗ Huy Bích, Đặng Quang Chung, Bùi Xuân Chương, Nguyễn Thượng Dong, Đỗ Trung Đàm, Phạm Văn Hiền, Vũ Ngọc Lộ, Phạm Duy Mai, Phạm Kim Mãn, Đoàn Thị Nhu, Nguyễn Tập, Trần Toàn (2004), Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam, Tập I + II, Nxb Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội Hoàng Thị Kim Hồng (2011), Nghiên cứu khả tái sinh chồi cụm chồi lu nuôi cấy in vitro Hà thủ ô đỏ (polygonum multiflorum thunb), Luận an va văn Thạc sĩ, Trường Đại học khoa học, Đại học Huế n Dương Công Kiên (2003), Nuôi cấy mô thực vật II, Nxb Đại học quốc gia gh tn to TP.HCM Ds Nguyễn ngọc Lan & Bs Nguyễn thượng Chánh, Hà Thủ Ô, Montreal, May ie p 12, 2007 Đỗ Tất Lợi (2004), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, Nxb Y học, Hà Nội Đỗ Tất Lợi (1991), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, Nxb Khoa học Nguyễn Hoàng Nghĩa (1997), Bảo tồn nguồn gen trồng, Nxb Nông Nguyễn Quang Thạch (2009), Cơ sở Công nghệ sinh học-tập 3, Nxb Giáo ll u nf nghiệp Hà Nội va an lu Kỹ Thuật d oa nl w oi m dục z at nh 10 ThS Hồng Khánh Tồn (2005), Hà thủ Ơ bổ máu, làm đen tóc, Sức Khỏe & Đời Sống, VnExpress z Nội l gm @ 11 Đỗ Năng Vịnh (2002), Công nghệ sinh học trồng, Nxb Nông nghiệp, Hà - T2, Nxb Giáo dục m co 12 Vũ Văn Vụ, Nguyễn Mộng Hùng, Lê Hồng Điệp (2009), Công nghệ Sinh học an Lu n va ac th si 41 13 Vũ Văn Vụ, Vũ Thanh Tâm, Hoàng Minh Tân (1998), Sinh lý học thực vật, Nxb Giáo dục II Tài liệu tham khảo nƣớc 14 Behera K K., Pani D and Shahoo S (2010), “Effect of plant growth regulator on in vitro multiplucation of turmeric (Curcumar longa L.cv.Ranga)”, International Journal of Biological Technology, 1(1): 16 - 23 15 Chang Lin L, Nalawadc SM, Mulabagal V, Ych MS Tsay HS (2003), Micropropagation of Polygonum multiflorum Thunb and quantitative analysis of the anthraquinunes emodin and physcion formed in in vitro propagated lu an shoots and plants, Biol Pharn Bull, 1467-1471 ornamental plant by tissue cluture”, Scientia Horticulturae, 14(4), p.335-45 n va 16 Debergh, P & Maene, L (1981), “ A scheme for commercial propagation of gh tn to 17 Jala A and Patchpoonporn W (2012), “Effect of BA, NAA and 2,4-D on p ie micropropagation of Jiaogulan (Gynostemma pentaphyllum makino)”, International Transaction Journal of Enginneering, Management, Applied nl w Sciences & Technologies, 3(4): 363 - 370 d oa 18 Murashige, T (1974), “Plant Propagayion Through Tissue Cultures”, Annual an lu Review of Plant Physiology, 25, p.135-66 va 19 Duong Tan Nhut, Nguyen Phuc Huy, Vu Quoc Luan, Nguyen Van Binh, u nf Nguyen Ba Nam, Le Nu Minh Thuy, Dang Thi Ngoc Ha, Hoang Xuan Chien, ll Trinh Thi Huong, Hoang Van Cuong, Le Kim Cuong and Vu Thi Hien m oi (2011), “Shoot regeneration and micropropagation of Panax vietnamensis Ha z at nh et Grushv from ex vitro leaf-derived callus”, African Journal of Biotechnology, 10(84):19499 - 19504 z gm @ 20 Sen A., Goyal A.K., Ganguly K and Mishra T (2010), “In vitro multiplication of Curcuma Longa Linn.- an important medicinal zingiber”, m co l Journal of Plant Science, 4: 21 - 24 21 Shahinozzaman M., Faruq M O., Azad M A K and Amin M N (2013), an Lu “Studies on in vitro propagation of an important medicinal plant - Curcuma n va ac th si 42 zedoaria Roscoe using rhizome explants”, Persian Gulf Crop Protection Available online, 2( 4): 1- 22 Sharma G.J., Sinha S.K and Chirangini P (2005), “In vitro propagation and microrhizome induction in Kaempferia galanga Linn and Kaempferia rotunda Linn.”, Indian Journal of Biotechnology, 4: 404 - 408 23 Subhuti Dharmananda PhD (2006), Potential rare reactions to He Shou Wu (Polygonum multiflorum), Institude for Traditional medicine, Portland, Oregon lu an n va p ie gh tn to d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si 43 PHỤ LỤC Một số kết ảnh thí nghiệm lu Môi trường WPM Môi trường B5 Môi trường MS an Hình 4.1 Ảnh hƣởng số mơi trƣờng đến khả tạo chồi Hà thủ ô đỏ (sau 20 ngày nuôi cấy) n va p ie gh tn to d oa nl w lu BA 2,5mg/l + NAA 0,2mg/l ll u nf va an BA + NAA 0,0mg/l oi m z at nh z @ BA 4mg/l + NAA 0,5mg/l gm BA 4,5mg/l + NAA 1mg/l m co l Hình 4.2 Ảnh hƣởng hàm lƣợng BA + NAA đến khả nhân nhanh chồi Hà thủ ô đỏ (sau 30 ngày nuôi cấy) an Lu n va ac th si 44 BA + NAA + IBA 0,0mg/l BA 4mg/l + NAA 0,5mg/l + Kin 0,5mg/l lu an n va ie gh tn to p BA 4mg/l + NAA 0,5mg/l + Kin 1mg/l BA 4mg/l + NAA 0,5mg/l + Kin 0,3mg/l d oa nl w Hình 4.3 Ảnh hƣởng hàm lƣợng BA + NAA + Kin đến khả nhân nhanh chồi Hà thủ ô đỏ (sau 30 ngày nuôi cấy) ll u nf va an lu oi m z at nh NAA 0,0mg/l NAA 0,1mg/l NAA 0,15mg/l z m co l gm @ an Lu n va ac th si 45 NAA 0,25mg/l NAA 0,5mg/l Hình 4.4 ảnh hƣởng NAA đến khả rễ Hà thủ ô đỏ (sau 25 ngày nuôi cấy) lu an n va p ie gh tn to IBA 0,1mg/l IBA 0,15mg/l d oa nl w IBA 0,0mg/l ll u nf va an lu oi m IBA 0,5mg/l z at nh IBA 0,25mg/l z Hình 4.5 ảnh hƣởng IBA đến khả rễ Hà thủ ô đỏ (sau 25 ngày nuôi cấy) m co l gm @ an Lu n va ac th si 46 PHỤ LUC KẾT QUẢ XỬ LÝ SỐ LIỆU TN1: Ảnh hƣởng thời gian khử trùng dung dịch HgCl2 0,1% đến khả diệt nấm vi khuẩn BALANCED ANOVA FOR VARIATE MSKN FILE DKM 19/ 5/16 10: :PAGE VARIATE V003 MSKN SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 3478.25 869.564 146.70 0.000 * RESIDUAL 10 59.2741 5.92741 * TOTAL (CORRECTED) 14 3537.53 252.681 BALANCED ANOVA FOR VARIATE MN FILE DKM 19/ 5/16 10: :PAGE VARIATE V004 MN lu an LN SOURCE OF VARIATION DF LN SOURCE OF VARIATION DF n va p ie gh tn to SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 7306.13 1826.53 308.38 0.000 * RESIDUAL 10 59.2300 5.92300 * TOTAL (CORRECTED) 14 7365.36 526.097 BALANCED ANOVA FOR VARIATE MC FILE DKM 19/ 5/16 10: :PAGE VARIATE V005 MC LN SOURCE OF VARIATION DF d oa nl w SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 2417.61 604.402 101.97 0.000 * RESIDUAL 10 59.2741 5.92741 * TOTAL (CORRECTED) 14 2476.88 176.920 - an lu ll u nf va TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE DKM 19/ 5/16 10: :PAGE MEANS FOR EFFECT CT CT NOS MSKN MN MC 35.5567 64.4433 0.000000 46.6700 53.3300 0.000000 3 80.0000 20.0000 0.000000 64.4467 13.3300 22.2233 60.0000 11.1133 28.8867 oi m z at nh z SE(N= 3) 1.40563 1.40511 1.40563 5%LSD 10DF 4.42920 4.42755 4.42920 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE DKM 19/ 5/16 10: :PAGE gm @ F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 15.896 2.4346 4.2 0.0000 22.937 2.4337 7.5 0.0000 13.301 2.4346 23.8 0.0000 | | | | m co an Lu MSKN MN MC GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 57.335 15 32.443 15 10.222 l VARIATE n va ac th si 47 TN2: Ảnh hƣởng số môi trƣờng đến khả tạo chồi Hà thủ ô đỏ BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLCB FILE QQ 15/ 5/16 17:29 :PAGE VARIATE V003 TLCB LN SOURCE OF VARIATION SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 602.464 301.232 12.20 0.008 * RESIDUAL 148.119 24.6864 * TOTAL (CORRECTED) 750.583 93.8228 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE QQ 15/ 5/16 17:29 :PAGE MEANS FOR EFFECT CT CT DF NOS 3 lu TLCB 77.7800 66.6700 57.7800 an n va SE(N= 3) 2.86859 5%LSD 6DF 9.92292 F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - gh tn to ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE QQ 15/ 5/16 17:29 :PAGE p ie VARIATE STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 9.6862 4.9685 7.4 0.0083 | | | | d oa nl w TLCB GRAND MEAN (N= 9) NO OBS 67.410 ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si 48 TN3: Ảnh hƣởng tổ hợp BA + NAA đến khả nhân nhanh chồi Hà thủ ô đỏ BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNC FILE BA+NAA 19/ 5/16 10:37 :PAGE VARIATE V003 HSNC LN SOURCE OF VARIATION SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 6.19111 1.23822 96.90 0.000 * RESIDUAL 12 153334 127778E-01 * TOTAL (CORRECTED) 17 6.34444 373203 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE BA+NAA 19/ 5/16 10:37 :PAGE MEANS FOR EFFECT CT CT DF NOS 3 3 3 lu an n va HSNC 1.80000 2.50000 2.20000 2.70000 3.63333 3.03333 p ie gh tn to SE(N= 3) 0.652631E-01 5%LSD 12DF 0.201098 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE BA+NAA 19/ 5/16 10:37 :PAGE VARIATE GRAND MEAN (N= 18) NO OBS 18 2.6444 d HSNC oa nl w F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.61090 0.11304 4.3 0.0000 | | | | ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si 49 TN4: ảnh hƣởng của tổ hợp BA + NAA + Kin đến khả nhân nhanh chồi Hà thủ ô đỏ BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNC FILE BG 19/ 5/16 11: :PAGE VARIATE V003 HSNC LN SOURCE OF VARIATION SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 8.36933 2.09233 149.45 0.000 * RESIDUAL 10 140000 140000E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 8.50933 607810 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE BG 19/ 5/16 11: :PAGE MEANS FOR EFFECT CT CT DF NOS 3 3 lu an n va HSNC 1.73333 3.90000 3.56667 3.26667 2.90000 ie gh tn to SE(N= 3) 0.683131E-01 5%LSD 10DF 0.215257 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE BG 19/ 5/16 11: :PAGE p F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE HSNC STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.77962 0.11832 3.8 0.0000 | | | | d oa nl w GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 3.0733 ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si 50 TN5: Ảnh hƣởng nồng độ NAA đến khả rễ Hà thủ ô đỏ BALANCED ANOVA FOR VARIATE CDTBR FILE NAA 16/ 5/16 10:24 :PAGE VARIATE V003 CDTBR LN SOURCE OF VARIATION DF LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 6.43600 1.60900 141.97 0.000 * RESIDUAL 10 113334 113334E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 6.54933 467810 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SRTB FILE NAA 16/ 5/16 10:24 :PAGE VARIATE V004 SRTB lu an n va CT p NOS 3 3 CDTBR 1.40000 3.26667 3.10000 2.70000 2.56667 SRTB 1.46667 2.96667 3.43333 3.56667 3.70000 oa nl w ie gh tn to SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 10.0427 2.51067 235.37 0.000 * RESIDUAL 10 106667 106667E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 10.1493 724952 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE NAA 16/ 5/16 10:24 :PAGE MEANS FOR EFFECT CT - d SE(N= 3) 0.614638E-01 0.596287E-01 5%LSD 10DF 0.193675 0.187892 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE NAA 16/ 5/16 10:24 :PAGE va an lu F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.68397 0.10646 4.1 0.0000 0.85144 0.10328 3.4 0.0000 ll | | | | oi m z at nh CDTBR SRTB GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 2.6067 15 3.0267 u nf VARIATE z m co l gm @ an Lu n va ac th si 51 TN6: Ảnh hƣởng nồng độ IBA đến khả rễ Hà thủ ô đỏ BALANCED ANOVA FOR VARIATE CDTBR FILE QU 16/ 5/16 11:21 :PAGE VARIATE V003 CDTBR LN SOURCE OF VARIATION DF LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 1.16267 290667 8.90 0.003 * RESIDUAL 10 326667 326667E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 1.48933 106381 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SRTB FILE QU 16/ 5/16 11:21 :PAGE VARIATE V004 SRTB lu an n va CT p NOS 3 3 CDTBR 1.90000 2.70000 2.60000 2.50000 2.43333 SRTB 1.70000 3.70000 3.43333 3.43333 3.30000 oa nl w ie gh tn to SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 7.74400 1.93600 90.75 0.000 * RESIDUAL 10 213334 213334E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 7.95733 568381 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE QU 16/ 5/16 11:21 :PAGE MEANS FOR EFFECT CT - d SE(N= 3) 0.104350 0.843275E-01 5%LSD 10DF 0.328810 0.265719 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE QU 16/ 5/16 11:21 :PAGE va an lu F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.32616 0.18074 7.4 0.0027 0.75391 0.14606 4.7 0.0000 ll | | | | oi m z at nh CDTBR SRTB GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 2.4267 15 3.1133 u nf VARIATE z m co l gm @ an Lu n va ac th si 52 PHỤ LỤC MÔI TRƢỜNG Các thành phần môi trƣờng MS (Murashige Skoog, 1962) Thành phần khoáng đa lƣợng Nồng độ (mg/l) lu NH-4NO3 1650 KNO3 1900 CaCl2.2H2O 440 MgSO4.7H2O 370 KH2PO4 170 an Thành phần khoáng vi lƣợng Nồng độ (mg/l) n va 23,3 ZnSO4.7H2O 8,6 H3BO3 6,2 KI 0,83 Na2MoO4.2H2O 0,25 CuSO4.5H2O 0,025 CoCl2.6H2O oa 0,025 d nl w p ie gh tn to MnSO4.H2O lu 37,3 an Na2EDTA 27,8 u nf va FeSO47H2O Nồng độ (mg/l) Vitamin 0,5 z at nh Glyxine oi Pyridoxine HCl 0,1 m Nicotinic Axit ll Thiamin HCl 0,5 2,0 z m co l gm @ an Lu n va ac th si