Nghiên cứu kỹ thuật nâng cao hệ số nhân giống lan kim tuyến anoectochilus roxburghii bằng phương pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM - - ĐÀO BÁ TUYÊN Tên đề tài: “NGHIÊN CỨU KỸ THUẬT NÂNG CAO HỆ SỐ NHÂN GIỐNG LAN KIM TUYẾN (Anoectochilus roxburghii) BẰNG PHƢƠNG PHÁP NUÔI CẤY MÔ TẾ BÀO THỰC VẬT” KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo : Chính quy Chun ngành : Cơng nghệ sinh học Khoa : CNSH - CNTP Khóa học : 2011 - 2015 Giảng viên hƣớng dẫn : PGS.TS Ngô Xuân Bình ThS Nguyễn Thị Tình Khoa CNSH- CNTP - Trƣờng Đại học Nông Lâm Thái Nguyên - 2015 i LỜI CẢM ƠN Qua thời gian làm việc phòng nuôi cấy mô Khoa Công nghệ sinh học Công nghệ thực phẩm đến em hoàn thành đề tài Để đạt kết ngày hôm em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới Ban giám hiệu Trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên, Ban Chủ nhiệm khoa Công Nghệ Sinh học - Công nghệ Thực phẩm thầy cô giáo khoa tạo điều kiện tốt cho em suốt thời gian thực tập Em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới: PGS.TS Ngơ Xn Bình, ThS Nguyễn Thị Tình Ks Lã Văn Hiền tận tình bảo, hướng dẫn em thời gian thực đề tài Cuối cùng, em xin chân thành cảm ơn gia đình, bạn bè hết lịng động viên, giúp đỡ tạo điều kiện vật chất tinh thần cho em trình học tập nghiên cứu Em mong nhận đóng góp ý kiến thầy cô bạn để đề tài em hoàn thiện Em xin chân thành cảm ơn ! Thái Nguyên, ngày tháng năm 2015 Sinh viên thực Đào Bá Tuyên ii DANH MỤC CÁC TỪ, CỤM TỪ VIẾT TẮT BA - Benzylaminopurine Cs Cộng CT Công thức CV Coeficient of Variation Đ/c Đối chứng GA3 Gibberellic acid Kinetin - Furfurylaminopurine LSD Least Singnificant Difference Test MS Murashige & Skoog (1962) MT Môi trường NAA α-naphthalene acetic acid iii DANH MỤC BẢNG Bảng 4.1 Kết ảnh hưởng hàm lượng, thời gian khử trùng HgCl2 đến hiệu vô trùng chồi lan Kim Tuyến (sau 10 ngày nuôi cấy) 30 Bảng 4.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng hàm lượng GA3 đến khả tái sinh chồi lan Kim Tuyến (sau tuần nuôi cấy) 33 Bảng 4.3 Kết nghiên cứu ảnh hưởng GA3 kết hợp với BA đến khả tái sinh chồi lan Kim Tuyến (sau tuần nuôi cấy) 35 Bảng 4.4 Kết nghiên cứu ảnh hưởng hàm lượng BA đến khả nhân nhanh chồi lan Kim Tuyến (sau tuần nuôi cấy) 37 Bảng 4.5 Kết nghiên cứu ảnh hưởng kết hợp nồng độ BA NAA đến khả nhân nhanh chồi lan Kim Tuyến (sau tuần nuôi cấy) 40 Bảng 4.6 Kết nghiên cứu ảnh hưởng hàm lượng Kinetin đến khả nhân nhanh chồi lan Kim Tuyến (sau tuần nuôi cấy) 42 Bảng 4.7 Kết nghiên cứu ảnh hưởng hàm lượng NAA đến khả rễ lan Kim Tuyến (sau tuần nuôi cấy) 45 iv DANH MỤC HÌNH Hình 2.1: Ảnh lan Kim Tuyến Hình 2.2: Hình ảnh hoa lan Kim Tuyến Hình 4.1: Ảnh chồi lan Kim Tuyến sống khơng nhiễm sau khử trùng dung dịch HgCl2 31 Hình 4.2: Ảnh chồi lan Kim Tuyến tái sinh bổ sung hàm lượng GA3 công thức thí nghiệm 34 Hình 4.3: Ảnh chồi lan Kim Tuyến tái sinh sau bổ sung hàm lượng BA cơng thức thí nghiệm 36 Hình 4.4: Ảnh chồi lan Kim Tuyến nhân nhanh bổ sung hàm lượng BA cơng thức thí nghiệm 38 Hình 4.5: Ảnh chồi lan Kim Tuyến nhân nhanh bổ sung hàm lượng NAA cơng thức thí nghiệm 41 Hình 4.6: Ảnh chồi lan Kim Tuyến nhân nhanh bổ sung hàm lượng Kinetin công thức thí nghiệm 43 Hình 4.7: Ảnh rễ lan Kim Tuyến sau bổ sung hàm lượng NAA công thức thí nghiệm 46 v DANH MỤC BIỂU ĐỒ Biểu đồ 4.1: Biểu đồ thể ảnh hưởng hàm lượng, thời gian khử trùng HgCl2 đến tỷ lệ mẫu sống chồi lan Kim Tuyến 31 Biểu đồ 4.2: Biểu đồ thể ảnh hưởng hàm lượng GA3 đến khả tái sinh chồi lan Kim Tuyến 33 Biểu đồ 4.3: Biểu đồ thể ảnh hưởng GA3 kết hợp với BA đến khả tái sinh chồi lan Kim Tuyến 36 Biểu đồ 4.4: Biểu đồ thể ảnh hưởng hàm lượng BA đến khả nhân nhanh chồi lan Kim tuyến 38 Biểu đồ 4.5: Biểu đồ thể ảnh hưởng BA kết hợp với NAA đến khả nhân nhanh chồi lan Kim Tuyến 40 Biểu đồ 4.6: Biểu đồ thể ảnh hưởng Kinetin đến khả nhân nhanh lan Kim Tuyến 43 Biểu đồ 4.7: Biểu đồ thể ảnh hưởng hàm lượng NAA đến khả rễ lan Kim Tuyến 45 vi MỤC LỤC PHẦN 1: MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích đề tài 1.3 Yêu cầu đề tài 1.4 Ý nghĩa đề tài 1.4.1.Ý nghĩa khoa học 1.4.2.Ý nghĩa thực tiễn PHẦN 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Giới thiệu lan kim tuyến 2.1.1 Phân loại 2.1.2 Đặc điểm hình thái 2.1.3 Đặc điểm phân bố 2.1.4 Số lượng quần thể 2.1.5 Giá trị lan Kim Tuyến 2.2 Khái quát nuôi cấy mô tế bào thực vật 10 2.2.1 Khái niệm nuôi cấy mô tế bào thực vật 10 2.2.2 Cơ sở khoa học nuôi cấy mô tế bào thực vật 11 2.3 Điều kiện môi trường nuôi cấy mô tế bào thực vật 13 2.3.1 Điều kiện nuôi cấy mô tế bào thực vật 13 PHẦN 3: ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21 3.1 Đối tượng phạm vi nghiên cứu 21 3.1.1 Đối tượng nghiên cứu 21 3.1.2 Phạm vi nghiên cứu 21 3.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu 21 3.3 Hóa chất, thiết bị dụng cụ ni cấy mô .21 vii 3.3.1 Hóa chất 21 3.3.2 Thiết bị 22 3.3.3 Dụng cụ 22 3.4 Nội dung phương pháp nghiên cứu .22 3.4.1 Nội dung nghiên cứu 22 3.4.2 Phương pháp nghiên cứu 22 PHẦN 4: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 30 4.1 Kết ảnh hưởng hàm lượng, thời gian khử trùng HgCl2 đến hiệu vô trùng vật liệu nuôi cấy chồi lan Kim Tuyến (sau 10 ngày nuôi cấy) .30 4.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng hàm lượng GA3 đến khả tái sinh chồi lan Kim Tuyến (sau tuần nuôi cấy) .32 4.3 Kết nghiên cứu ảnh hưởng GA3 kết hợp với BA đến khả tái sinh chồi lan Kim Tuyến 35 4.4 Kết nghiên cứu ảnh hưởng hàm lượng BA đến khả nhân nhanh chồi lan Kim Tuyến (sau tuần nuôi cấy) 37 4.5 Kết nghiên cứu ảnh hưởng kết hợp nồng độ BA NAA đến khả nhân nhanh chồi lan Kim Tuyến (sau tuần nuôi cấy) 39 4.6 Kết nghiên cứu ảnh hưởng hàm lượng Kinetin đến khả nhân nhanh chồi lan Kim Tuyến 42 4.7 Kết nghiên cứu ảnh hưởng hàm lượng NAA đến khả rễ chồi lan Kim Tuyến (sau tuần nuôi cấy) .44 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 48 5.1 Kết luận .48 5.2 Kiến nghị .48 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHẦN MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Lan Kim Tuyến - Anoectochilus roxburghii (Wall) Lindl, thuộc họ lan – Orchidaceae (Bộ Khoa Học Công Nghệ, 2004) [1] Chúng thường phân bố rộng độ cao từ 500-1600m, xuất nhiều nơi đất giàu mùn, độ ẩm, độ xốp cao, thống khí Đơi chúng xuất tảng đá ẩm, đoạn thân gỗ mục, gốc đoạn thân gỗ mục Lan Kim Tuyến biết đến nhiều giá trị dược liệu, loại dược liệu quý dùng để điều trị số bệnh như: đau ngực, đau bụng, tiểu đường, viên thận, sốt, liệt dương…và bệnh tim mạch đặc biệt lan Kim Tuyến có khả tiêu diệt khối u (Chun-Nian cs, 2006) [15], (ShuFen Cheng cs, 2009) [21] Hiện với nhu cầu sử dụng ngày tăng với khai thác ạt mà không ý đến việc bảo vệ tái sinh làm cho lan Kim Tuyến vốn phân bố phổ biến tự nhiên bị suy giảm nghiêm trọng Chính lan Kim Tuyến đưa vào danh mục sách đỏ Việt Nam (2007) nghiêm cấm khai thác với mục đích thương mại theo Nghị định số 32/2006/NĐ – CP thuộc nhóm IA, (2007), phân hạng EN A1a,c,d (Bộ Khoa Học Cơng Nghệ, 2004) [1], (Chính Phủ Nước Cộng hòa xã hội chủ nghĩa Việt Nam, 2006) [2] Theo phương pháp nhân giống cổ truyền lan Kim Tuyến nhân giống cách gieo hạt, tách mầm phương pháp nhiều nhược điểm thời gian, nguồn vật liệu ban đầu cần nhiều, hệ số nhân thấp, dễ bị thối hóa qua nhiều hệ, khả lây truyền bệnh cao, chất lượng không đảm bảo, việc nhân giống mang tính thời vụ Nhưng với phát triển khoa học kỹ thuật việc ứng dụng nuôi cấy mô tế bào thực vật nhân giống trở lên phổ biến Nuôi cấy mô tạo trồng bệnh, chất lượng tốt, độ đồng cao, hệ số nhân lớn giữ tính di truyền mẹ Nhận thức vấn đề bảo tồn phát triển loài dược liệu quý – lan Kim Tuyến, tiến hành thực đề tài “ Nghiên cứu kỹ thuật nâng cao hệ số nhân giống lan Kim Tuyến (Anoectochilus roxburghii) phương pháp nuôi cấy mơ tế bào thực vật” 1.2 Mục đích đề tài Nghiên cứu kỹ thuật nâng cao hệ số nhân giống lan Kim Tuyến (Anoectochilus roxburghii) phương pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật 1.3 Yêu cầu đề tài Xác định ảnh hưởng hàm lượng, thời gian khử trùng dung dịch HgCl2 đến hiệu vô trùng vật liệu nuôi cấy chồi lan Kim Tuyến Xác định ảnh hưởng hàm lượng chất kích thích sinh trưởng (GA 3, BA) đến khả tái sinh chồi lan Kim Tuyến Xác định ảnh hưởng hàm lượng chất kích thích sinh trưởng (BA, NAA, Kinetin) đến khả nhân nhanh chồi lan Kim Tuyến Xác định ảnh hưởng hàm lượng chất kích thích sinh trưởng (NAA) đến khả rễ chồi lan Kim Tuyến 1.4 Ý nghĩa đề tài 1.4.1 Ý nghĩa khoa học Kết nghiên cứu xây dựng quy trình kỹ thuật nhân giống lan Kim Tuyến phương pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật Giúp sinh viên biết phương pháp nghiên cứu vấn đề khoa học, xử lý, phân tích số liệu, trình bày báo cáo khoa học 46 Hình 4.7: Ảnh rễ lan Kim Tuyến sau bổ sung hàm lƣợng NAA cơng thức thí nghiệm a-NAA 0mg/l số rễ 1,8 rễ; rễ nhỏ, ngắn b-NAA 0,2mg/l số rễ 2,8 rễ; rễ mập, dài c-NAA 0,5mg/l số rễ 3,2 rễ; rễ mập, dài d-NAA 1mg/l số rễ 3,6 rễ; rễ nhỏ, dài e-NAA 1,5mg/l số rễ rễ; rễ nhỏ, dài Ở công thức có tổng số rễ 109 rễ tương đương 3,6 rễ/cây Từ kết bảng 4.7 cho thấy NAA có hiệu tích cực việc kích thích chồi rễ, tạo rễ bất định Số rễ tăng dần từ công thức đối chứng (0 mg/l NAA) đến công thức (bổ sung NAA 1mg/l) tương ứng đạt 1,8 rễ/cây đến 3,6 rễ/cây Ở công thức nghiên cứu nhận thấy hàm lượng NAA 1,5 mg/l số rễ/cây có xu hướng giảm xuống cịn rễ/cây NAA khơng ảnh hưởng tới số rễ mà ảnh hưởng đến chất lượng rễ Cụ thể cơng thức có bổ sung NAA cho chất lượng rễ cao so với 47 không bổ sung NAA Chất lượng rễ tốt thí nghiệm công thức Nếu lựa chọn chất lượng rễ lựa chọn cơng thức (NAA 0,5 mg/l), lựa chon số rễ/cây lựa chọn cơng thức (NAA 1mg/l) Theo tác giả Nguyễn Quang Thạch cs (Nguyễn Quang Thạch cs, 2012) [12] nghiên cứu kỹ thuật nhân giống loài lan Kim Tuyến (Anoectochilus setaceus Blume) đưa kết sau bổ sung NAA 1mg/l cho 4,21 rễ/chồi So với kết nghiên cứu kết tác giả cao kết Nguyên nhân chúng tơi nghiên cứu lồi lan Kim Tuyến (Anoectochilus roxburghii) khác với loài lan Kim Tuyến tác giả nghiên cứu Theo tác giả Phùng Văn Phê cs (Phùng Văn Phê cs, 2009) [7] nghiên cứu đặc điểm hình thái lồi lan Kim Tuyến Anoectochilus setaceus Blume Vườn Quốc gia Tam Đảo, tỉnh Vĩnh Phúc cho biết thơng thường mấu có rễ So với kết nghiên cứu th́ kết tác giả thấp Sự khác biệt sử dụng hàm lượng NAA định để kích thích tạo rễ chồi lan Kim Tuyến Điều chứng minh NAA có hiệu tích cực việc tạo rễ bất định chồi lan Kim Tuyến 48 PHẦN KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 Kết luận Sau thời gian nghiên cứu, khuôn khổ đề tài đưa số kết luận sau: Khử trùng chồi lan Kim Tuyến HgCl2 0,1%, ngâm mẫu 10 phút cho kết mẫu sống không nhiễm cao thí nghiệm đạt 80% Mơi trường tái sinh sử dụng môi trường MS + Inositol 100mg/l + đường 30g/l + GA3 0,3mg/l + BA 0,5mg/l + agar 5,2g/l, pH = 5,6-5,8 cho tỷ lệ mẫu tái sinh cao đạt 93,33 % Môi trường nhân nhanh sử dụng môi trường MS + Inositol 100 mg/l + đường 30g/l + BA 1mg/l + NAA 0,5mg/l + agar 5,2mg/l, pH = 5,6-5,8 cho hệ số nhân nhanh đạt 5,9 lần Môi trường rễ sử dụng môi trường MS + Inositol 100mg/l + đường 30g/l + NAA 1mg/l + agar 5,2g/l, pH = 5,6-5,8 cho khả rễ đạt 3,6 rễ/cây Chất lượng rễ sử dụng môi trường MS + Inositol 100mg/l + đường 30g/l + NAA 0,5mg/l + agar 5,2g/l, pH = 5,6-5,8 cho chất lượng rễ mập, dài 5.2 Kiến nghị Tiếp tục nghiên cứu ảnh hưởng hàm lượng số chất kích thích sinh trưởng đến khả nhân nhanh chồi lan Kim Tuyến Nghiên cứu đưa lan Kim Tuyến trồng tỉnh Thái Nguyên TÀI LIỆU THAM KHẢO I Tài liệu tiếng việt Bộ Khoa Học Công Nghệ (2007), Sách đỏ Việt Nam (phần thực vật), Nxb Khoa học tự nhiên & cơng nghệ, Hà Nội Chính Phủ Nước Cộng hịa xã hội chủ nghĩa Việt Nam (2006), Nghị định số 32/ 2006/NĐ-CP Ngơ Xn Bình, Bùi Bảo Hồn, Nguyễn Thị Th Hà (2003), Giáo trình cơng nghệ sinh học, Nxb Nơng nghiệp, Hà Nội Trịnh Đình Đạt (2009), Công nghệ sinh học (công nghệ di truyền), tập 4, Nxb giáo dục Trần Hợp (1990), Phong lan Việt Nam, tập 2, Nxb Nông nghiệp, Tp HCM Trần Thị Lệ, Trương Thị Bích Phượng, Trần Thị Triêu Hà (2008), Giáo trình Cơng nghệ sinh học thực vật, Nxb Nông nghiệp, Hà Nội Phùng Văn Phê, Nguyễn Trung Thành, Vương Duy Hưng (2009), “Đặc điểm hình thái, phân bố sinh thái loài Lan Kim Tuyến Anoectochilus setaceus Blume Vườn Quốc gia Tam Đảo, tỉnh Vĩnh Phúc”, Tạp chí Khoa học ĐHQGHN, Khoa học Tự nhiên Công nghệ, 26(2010), 104-109 Phùng Văn Phê (2014), Đặc điểm hình thái, phân bố lồi lan Kim Tuyến Anoectochilus setaceus Blume Vườn Quốc gia Xuân Sơn, tỉnh Phú Thọ Đặng Ngọc Phúc, Nguyễn Thanh Tùng, Dương Thị Thùy Châu, Trương Thị Bích Phượng (2011), “Nhân giống in vitro Sa Nhân tím (Amomum longiligulare T.L.Wu)”, Tạp chí Cơng nghệ Sinh học, 9(4A), 689-698 10 Trương Thị Bích Phượng, Phan Ngọc Khoa (2013) nhân giống in vitro lan Kim Tuyến Anoectochilus roxburghii (Wall.) Lindl 11 Nguyễn Quang Thạch, Nguyễn Thị Lý Anh, Phạm Kim Ngọc, Trần Văn Minh, Nguyễn Thị Phương Thảo, Giáo trình Cơ sở công nghệ sinh học (2009), Nxb Giáo dục Việt Nam 12 Nguyễn Quang Thạch, Phí Thị Cẩm Miện (2012), “Nghiên cứu kỹ thuật nhân giống loài lan Kim Tuyến (Anoectochilus setaceusBlume) in vitro bảo tồn nguồn dược liệu quý”, Tạp chí Khoa học Phát triển, 10(4), 597-603 13 Đỗ Năng Vịnh (2002), Công nghệ sinh học trồng, Nxb Nông nghiệp, Hà Nội 14 Vũ Văn Vụ, Nguyễn Mộng Hùng, Lê Hồng Điệp (2008), Công nghệ sinh học, Nxb Giáo dục II Tài liệu tiếng anh 15 Chun-Nian He, Chun-Lan Wang, Shun-Xing Guo, Jun-Shan Yang and Pei-Gen Xiao (2006), “A Novel Flavonoid Glucoside from Anoectochilus roxburghii (Wall.) Lindl”, Integrat Plant Biol, 48(3), 359−363 16 Doris C N Chang, L C Chou, G.C Lee (2007), “New Cultivation Methods for Anoectochilus formosanus Hayata”, Orchid Science and Biotechnology, 1(2), 56-60 17 Hao-Yuan Cheng, Wen-Chuan Lin, Fu-Mei Kiang, Long-Yuan Wu and Wen-Huang Peng (2003), “Anoectochilus formosanus attenuates amnesia induced by scopolamine in rats”, J Chin Med 14(4) 235-245 18 Kiet Van Nguyen (2004), “Effect of environmental conditions on in vitro and ex vitro growth of jewel orchid Anoectochilus formosanus Hayata, thesis for the degree of Doctor of Philosophy in Agriculture”, The Graduate School of Chungbuk National University 19 Lazarus Agus Sukamto, Endah Dwi Rahayu and Edhi Sandra (2011), “Characteristics between Anoectochilus setaceus and Anoectochilus formosanus by application of TDZ in vitro”, International Conference of Science and Technology (AICST), ISBN No 978 979 16415 20 N Ahamed Sherif, J H Franklin Benjamin, S Muthukrishnan, T Senthil Kumar and M V Rao (2012), “Regeneration of plantlets from nodal and shoot tip explants of Anoectochilus elatus Lindley, an endangered terrestrial orchid”, African Journal of Biotechnology,11(29), 7549-7553 21 Shu-Fen Cheng and Doris Chi-Ning Chang (2009), “Growth responses and changes of active components as influenced by elevations and orchid mycorrhizae on Anoectochilus formosanus Hayata”, Botanical Studies, 50(2009), 459-466 22 Yih-Juh Shiau, Abhay P Sagare, Uei-Chin Chen, Shu-Ru Yang, and Hsin-Sheng Tsay (2001), “Conservation of Anoectochilus formosanus Hayata by artificial cross-pollination and in vitro culture of seeds”, Bot Bull Acad Sin 43(2002), 123-130 PHỤ LỤC Các thành phần môi trƣờng MS (Murashige Skoog, 1962) Thành phần khoáng đa lƣợng Nồng độ (mg/l) NH4NO3 1650 KNO3 1900 CaCl2.2H2O 440 MgSO4.7H2O 370 KH2PO4 170 Thành phần khoáng vi lƣợng Nồng độ (mg/l) MnSO4.H2O 23,3 ZnSO4.7H2O 8,6 H3BO3 6,2 KI 0,83 Na2MoO4.2H2O 0,25 CuSO4.5H2O 0,025 CoCl2.6H2O 0,025 Na2EDTA 37,3 FeSO4.7H2O 27,8 Vitamin Nồng độ (mg/l) Thiamin HCl 0,1 Nicotinic Axit 0,5 Pyridoxine HCl 0,5 Glyxine 2,0 PHỤ LỤC Kết xử lý số liệu Bảng 4.1: Kết ảnh hƣởng hàm lƣợng, thời gian khử trùng HgCl2 đến khả tạo vật liệu vô trùng chồi lan Kim Tuyến SINGLE EFFECT ANOVA FOR UNBALANCED DATA FILE HGCL22 27/ 5/** 15:55 PAGE anh huong cua ham luong,thoi gian hgcl2 khu trung ANOVA FOR SINGLE EFFECT - CT$ -VARIATE TREATMENT MS - DF RESIDUAL MS - DF F-RATIO F-PROB TLMS 2268.7 11 8.3331 24 272.25 0.000 TLMN 4905.8 11 8.3340 24 588.65 0.000 ANOVA FOR SINGLE EFFECT - TIME$ -VARIATE TREATMENT MS - DF RESIDUAL MS - DF F-RATIO F-PROB TLMS 4369.4 497.47 33 8.78 0.001 TLMN 6702.8 1235.1 33 5.43 0.009 ANOVA FOR SINGLE EFFECT - CT$*TIME$ -VARIATE TREATMENT MS - DF RESIDUAL MS - DF F-RATIO F-PROB TLMS 2268.7 11 8.3331 24 272.25 0.000 TLMN 4905.8 11 8.3340 24 588.65 0.000 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE HGCL22 27/ 5/** 15:55 PAGE anh huong cua ham luong,thoi gian hgcl2 khu trung MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS TLMS TLMN 0.000000 100.000 0.000000 100.000 3 3.33333 90.0000 20.0000 80.0000 80.0000 16.6667 30.0000 10.0000 36.6667 60.0000 70.0000 10.0000 20.0000 3.33333 10 43.3333 40.0000 11 60.0000 6.66667 12 10.0000 0.000000 SE(N= 3) 1.66664 1.66673 5%LSD 24DF 4.86446 4.86472 MEANS FOR EFFECT TIME$ TIME$ NOS TLMS TLMN 0.000000 0.000000 5ua ham luong,thoi gian hgcl2 khu trung F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ |TIME$ |CT$*TIME| (N= 36) SD/MEAN | | |$ | NO BASED ON BASED ON % | | | | OBS TOTAL SS RESID SS | | | | TLMS 36 31.111 26.809 2.8867 9.3 0.0000 0.0010 0.0000 TLMN 36 43.056 39.339 2.8869 6.7 0.0000 0.0092 0.0000 Bảng 4.2: Kết ảnh hƣởng hàm lƣợng GA3 đến khả tái sinh chồi lan Kim Tuyến BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLTS FILE GA33 22/ 5/** 15:35 PAGE anh huong cua ham luong GA3 den kha nang tai sinh choi lan kim tuyen VARIATE V003 TLTS LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF SQUARES MEAN F RATIO PROB SQUARES ER LN ============================================================================= CT$ 660.000 10 333.333 33.3333 * RESIDUAL 2640.00 19.80 0.000 * TOTAL (CORRECTED) 14 2973.33 212.381 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE GA33 22/ 5/** 15:35 PAGE anh huong cua ham luong GA3 den kha nang tai sinh choi lan kim tuyen MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS TLTS 46.6667 56.6667 3 83.3333 76.6667 63.3333 SE(N= 3) 3.33333 5%LSD 10DF 10.5035 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE GA33 22/ 5/** 15:35 PAGE anh huong cua ham luong GA3 den kha nang tai sinh choi lan kim tuyen F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE TLTS GRAND MEAN STANDARD (N= SD/MEAN | 15) DEVIATION NO BASED ON BASED ON OBS TOTAL SS RESID SS 14.573 5.7735 15 65.333 C OF V |CT$ % | | | | | | 8.8 0.0001 Bảng 4.3: Kết ảnh hƣởng GA3 kết hợp với BA đến khả tái sinh chồi lan Kim Tuyến BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLTS FILE GA3+BA 22/ 5/** 15:50 PAGE anh huong cua GA3 ket hop voi BA den kha nang tai sinh choi lan kim tuyen VARIATE V003 TLTS LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= CT$ * RESIDUAL 1240.00 310.000 10 333.333 33.3333 9.30 0.002 * TOTAL (CORRECTED) 14 1573.33 112.381 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE GA3+BA 22/ 5/** 15:50 PAGE anh huong cua GA3 ket hop voi BA den kha nang tai sinh choi lan kim tuyen MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS TLTS 76.6667 83.3333 3 93.3333 86.6667 66.6667 SE(N= 3) 3.33333 5%LSD 10DF 10.5035 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE GA3+BA 22/ 5/** 15:50 PAGE anh huong cua GA3 ket hop voi BA den kha nang tai sinh choi lan kim tuyen F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE TLTS GRAND MEAN STANDARD (N= SD/MEAN | 15) DEVIATION NO BASED ON BASED ON OBS TOTAL SS RESID SS 10.601 5.7735 15 81.333 C OF V |CT$ % | | | | | | 7.1 0.0023 Bảng 4.4: Kết ảnh hƣởng hàm lƣợng BA đến khả nhân nhanh chồi lan Kim Tuyến BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNN FILE NNL 27/ 5/** 0:25 PAGE anh huong cua BA den kha nang nhan nhanh choi lan kim tuyen VARIATE V003 HSNN LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= CT$ 19.2640 * RESIDUAL 4.81600 ****** 0.000 10 333351E-01 333351E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 19.2973 1.37838 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE NNL 27/ 5/** 0:25 PAGE anh huong cua BA den kha nang nhan nhanh choi lan kim tuyen MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS HSNN 1.66667 3.13333 3 4.26667 4.73333 4.46667 SE(N= 3) 5%LSD 10DF 0.333342E-01 0.105037 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE NNL 27/ 5/** 0:25 PAGE anh huong cua BA den kha nang nhan nhanh choi lan kim tuyen F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE HSNN GRAND MEAN STANDARD (N= SD/MEAN | 15) DEVIATION NO BASED ON BASED ON OBS TOTAL SS RESID SS 15 3.6533 1.1740 C OF V |CT$ % 0.57737E-01 | | | | | | 1.6 0.0000 Bảng 4.5: Kết ảnh hƣởng BA kết hợp với NAA đến khả nhân nhanh chồi lan Kim Tuyến BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNN FILE NNL2 27/ 5/** 0:42 PAGE anh huong cua su ket hop BA voi NAA den kha nang nhan nhanh kim tuyen VARIATE V003 HSNN LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= CT$ 2.63067 * RESIDUAL 657667 197.30 0.000 10 333335E-01 333335E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 2.66400 190286 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE NNL2 27/ 5/** 0:42 PAGE anh huong cua su ket hop BA voi NAA den kha nang nhan nhanh kim tuyen MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS HSNN 4.76667 4.93333 3 5.23333 5.93333 5.53333 SE(N= 3) 5%LSD 10DF 0.333334E-01 0.105035 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE NNL2 27/ 5/** 0:42 PAGE anh huong cua su ket hop BA voi NAA den kha nang nhan nhanh kim tuyen F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE HSNN GRAND MEAN STANDARD (N= SD/MEAN | 15) DEVIATION NO BASED ON BASED ON OBS TOTAL SS RESID SS 15 5.2800 0.43622 C OF V |CT$ % 0.57735E-01 | | | | | | 1.1 0.0000 Bảng 4.6: Kết ảnh hƣởng hàm lƣợng Kinetin đến khả nhân nhanh chồi lan Kim Tuyến BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNN FILE KINETIN 22/ 5/** 16:15 PAGE anh huong cua kinetin den kha nang nhan nhanh choi lan kim tuyen VARIATE V003 HSNN LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= CT$ 15.0240 * RESIDUAL 3.75600 ****** 0.000 10 333331E-01 333331E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 15.0573 1.07552 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE KINETIN 22/ 5/** 16:15 PAGE anh huong cua kinetin den kha nang nhan nhanh choi lan kim tuyen MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS HSNN 1.63333 3.53333 3 4.53333 4.13333 3.73333 SE(N= 3) 5%LSD 10DF 0.333332E-01 0.105034 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE KINETIN 22/ 5/** 16:15 PAGE anh huong cua kinetin den kha nang nhan nhanh choi lan kim tuyen F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE HSNN GRAND MEAN STANDARD (N= SD/MEAN | 15) DEVIATION NO BASED ON BASED ON OBS TOTAL SS RESID SS 15 3.5133 1.0371 C OF V |CT$ % 0.57735E-01 | | | | | | 1.6 0.0000 Bảng 4.7: Kết ảnh hƣởng hàm lƣợng NAA đến khả rễ lan Kim Tuyến BALANCED ANOVA FOR VARIATE SR FILE RA RE 22/ 5/** 16:20 PAGE anh huong cua NAA den kha nang re lan kim tuyen VARIATE V003 SR LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= CT$ 5.51600 * RESIDUAL 1.37900 413.70 0.000 10 333334E-01 333334E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 5.54933 396381 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE RA RE 22/ 5/** 16:20 PAGE anh huong cua NAA den kha nang re lan kim tuyen MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS SR 1.83333 2.83333 3 3.26667 3.63333 3.06667 SE(N= 3) 5%LSD 10DF 0.333334E-01 0.105035 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE RA RE 22/ 5/** 16:20 PAGE anh huong cua NAA den kha nang re lan kim tuyen F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE SR GRAND MEAN STANDARD (N= SD/MEAN | 15) DEVIATION NO BASED ON BASED ON OBS TOTAL SS RESID SS 15 2.9267 0.62959 C OF V |CT$ % 0.57735E-01 | | | | | | 2.0 0.0000 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan số liệu kết nghiên cứu trong luận văn hồn tồn trung thực chưa cơng bố cơng trình nghiên cứu Các số liệu, kết nghiên cứu cơng trình nghiên cứu khác tham khảo trích dẫn tài liệu tham khảo đầy đủ Thái Nguyên, ngày XÁC NHẬN CỦA GVHD tháng năm 2015 NGƢỜI VIẾT CAM ĐOAN Đồng ý cho bảo vệ kết Sinh Viên trước hội đồng khoa học! GVHD GVHD XÁC NHẬN CỦA GV CHẤM PHẢN BIỆN Giáo viên chấm phản biện xác nhận sinh viên sửa chữa sai sót sau Hội đồng chấm yêu cầu! (Ký, họ tên) ... quý – lan Kim Tuyến, tiến hành thực đề tài “ Nghiên cứu kỹ thuật nâng cao hệ số nhân giống lan Kim Tuyến (Anoectochilus roxburghii) phương pháp ni cấy mơ tế bào thực vật? ?? 1.2 Mục đích đề tài Nghiên. .. quát nuôi cấy mô tế bào thực vật 2.2.1 Khái niệm nuôi cấy mô tế bào thực vật Nuôi cấy mô tế bào thực vật phạm trù khái niệm chung cho tất loại ni cấy ngun liệu thực vật hồn tồn vi sinh vật môi... học nuôi cấy mô tế bào thực vật 11 2.3 Điều kiện môi trường nuôi cấy mô tế bào thực vật 13 2.3.1 Điều kiện nuôi cấy mô tế bào thực vật 13 PHẦN 3: ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP