Nghiên cứu bảo tồn vốn gen cây ngưu tất achyranthes bidentata blume bằng kĩ thuật nuôi cấy mô tế bào thực vật

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM PHÓ THỊ THUÝ HẰNG NGHIÊN CỨU BẢO TỒN VỐN GEN CÂY NGƯU TẤT (ACHYRANTHES BIDENTATA BLUME) BẰNG KĨ THUẬT NUÔI CẤY MÔ TẾ BÀO THỰC VẬT LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC Thái Nguyên, 2010 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM PHÓ THỊ THUÝ HẰNG NGHIÊN CỨU BẢO TỒN VỐN GEN CÂY NGƯU TẤT (ACHYRANTHES BIDENTATA BLUME) BẰNG KĨ THUẬT NUÔI CẤY MÔ TẾ BÀO THỰC VẬT Chuyên ngành: Di truyền học Mã số: 60.42.70 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC Hướng dẫn khoa học: TS NGUYỄN THỊ TÂM Thái Nguyên, 2010 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn LỜI CẢM ƠN Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn tới TS Nguyễn Thị Tâm tận tình hƣớng dẫn, bảo tạo điều kiện giúp đỡ tơi hồn thành luận văn tốt nghiệp Tơi xin trân thành cảm ơn Th.S Vũ Anh Tuấn, KTV Lƣơng Thị Hồng Vân - mơn Hố hữu - Khoa Hoá học trƣờng Đại học Sƣ phạm tận tình hƣớng dẫn tơi thực số thí nghiệm luận văn Tôi xin cảm ơn KTV Đào Thu Thuỷ (PTN Công nghệ Tế bào thực vật), KTV Trần Thị Hồng (PTN Di truyền học), tạo điều kiện thuận lợi cho tơi tiến hành thí nghiệm Tơi xin cảm ơn Ban chủ nhiệm thầy cô giáo, cán Khoa Sinh KTNN, Khoa Hoá học - Trƣờng Đại học Sƣ phạm Thái Nguyên giúp đỡ tơi q trình học tập thực luận văn Tác giả Phó Thị Thuý Hằng Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình riêng tơi Các số liệu, kết nghiên cứu luận văn trung thực chƣa đƣợc cơng bố Tác giả Phó Thị Thúy Hằng Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn MỤC LỤC Trang Trang phụ bìa Lời cam đoan Lời cảm ơn Mục lục Những chữ viết tắt Danh mục bảng Danh mục hình vẽ, đồ thị MỞ ĐẦU 1 Đặt vấn đề Mục tiêu nghiên cứu 3 Nội dung nghiên cứu Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu chung Ngưu tất 1.1.1 Đặc điểm phân loại 1.1.2 Một số đặc điểm nông sinh học Ngƣu tất 1.1.3 Kĩ thuật trồng, chăm sóc, thu hái bảo quản sau thu hoạch 1.2.Tình hình sản xuất Ngưu tất giới Việt Nam 1.3 Ứng dụng Ngưu tất y học 1.3.1 Cơ sở hố học tính chữa bệnh Ngƣu tất 1.3.2 Một số nghiên cứu ứng dụng Ngƣu tất y học 10 1.4 Ứng dụng phương pháp nuôi cấy mô tế bào thực công tác nhân giống trồng 12 1.4.1 Ƣu nhân giống in vitro 12 1.4.2 Các phƣơng thức nhân giống in vitro 14 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 1.4.3 Một số thành tựu nhân giống trồng kĩ thuật nuôi cấy in vitro 15 1.5 Ứng dụng kĩ thuật PCR - RAPD phân tích đa dạng di truyền 19 Chƣơng VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 23 2.1 Vật liệu……………………………… 23 2.1.1 Vật liệu thực vật 23 2.1.2 `Hoá chất, thiết bị địa điểm nghiên cứu 23 2.2 Phương pháp nghiên cứu 24 2.2.1 Phƣơng pháp nuôi cấy in vitro 24 2.2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu hợp chất saponin rễ Ngƣu tất 28 2.2.3 Phƣơng pháp sinh học phân tử 29 2.2.4 Phƣơng pháp xử lí tính tốn số liệu 33 Chƣơng KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 34 3.1 Nghiên cứu nhân giống Ngƣu tất trồng thử nghiệm đồng ruộng 34 3.1.1 Nghiên cứu khử trùng hạt 34 3.1.2 Ảnh hƣởng riêng rẽ chất KTST đến khả nhân chồi sinh trƣởng chồi Ngƣu tất ống nghiệm 36 3.1.3 Ảnh hƣởng α-NAA tới tạo rễ Ngƣu tất ống nghiệm 42 3.1.4 Ảnh hƣởng tổ hợp chất KTST đến khả nhân chồi sinh trƣởng Ngƣu tất ống nghiệm 44 3.1.5 Kết đƣa môi trƣờng tự nhiên 49 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 3.2 Hàm lƣợng saponin tổng số rễ Ngƣu tất in vitro trồng đồng ruộng trồng hạt 51 3.3 Sử dụng kĩ thuật RAPD đánh giá hệ gen Ngƣu tất in vitro trồng hạt 53 3.3.1.Kết tách chiết ADN tổng số 53 3.3.2 Kết phản ứng RAPD 54 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 59 TÀI LIỆU THAM KHẢO 60 PHỤ LỤC 64 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn NHỮNG CHỮ VIẾT TẮT ĐC: Đối chứng HS: Hệ số IBA: Axit 3-indolebutiric KLK: Khối lƣợng khơ KTST: Kích thích sinh trƣởng PCR: Polimease Chain Reaction (phản ứng chuỗi Polimease) TĐST: Tốc độ sinh trƣởng TN: Thí nghiệm Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn DANH MỤC CÁC BẢNG trang Bảng 2.1 Thành phần môi trƣờng MS 23 Bảng 2.2 Trình tự nucleotit đoạn mồi ngẫu nhiên………… 32 Bảng 3.1 Kết khử trùng hạt Ngƣu tất 34 Bảng 3.2 Ảnh hƣởng riêng rẽ BAP kinetin đến khả nhân chồi Ngƣu tất ống nghiệm …………………… 38 Bảng 3.3 Ảnh hƣởng riêng rẽ BAP kinetin đến tốc độ sinh trƣởng Ngƣu tất ống nghiệm ……………………… 40 Bảng 3.4 Ảnh hƣởng α-NAA đến hình thành rễ Ngƣu tất ống nghiệm (sau 30 ngày) 42 Bảng 3.5 Ảnh hƣởng tổ hợp chất KTST đến khả nhân chồi Ngƣu tất ống nghiệm 44 Bảng 3.6 Ảnh hƣởng tổ hợp chất KTST đến tốc độ sinh trƣởng Ngƣu tất ống nghiệm………………………………… 46 Bảng 3.7 Kết đƣa Ngƣu tất môi trƣờng tự nhiên 49 Bảng 3.8 Theo dõi số tiêu sau 30 ngày đƣa vƣờn ƣơm… 50 Bảng 3.9 Một số tiêu theo dõi rễ in vitro rễ trồng hạt thu hoạch 50 Bảng 3.10 Hàm lƣợng hợp chất saponin rễ in vitro trồng hạt 52 Bảng 3.11 Tổng số phân đoạn ADN xuất mẫu ngƣu tất phân tích với mồi ngẫu nhiên………………………………… 55 Bảng 3.12 Số phân đoạn ADN đa hình thu đƣợc từ mẫu Ngƣu tất với tƣờng mồi nghiên cứu……………………………………… Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên 56 http://www.lrc-tnu.edu.vn DANH MỤC CÁC HÌNH Trang Hình 3.1 Biểu đồ so sánh ảnh hƣởng thời gian khử trùng đến tỷ lệ bình khơng nhiễm tỷ lệ hạt nảy mầm hạt Ngƣu tất Hình 3.2 Ảnh hƣởng thời gian khử trùng đến tỷ lệ nảy mầm phát triển chồi mầm Ngƣu tất Hình 3.3 Biểu đồ so sánh khả nhân chồi BAP kinetin 35 36 39 Hình 3.4 Biểu đồ so sánh tốc độ sinh trƣởng BAP kinetin… 41 Hình 3.5 Ảnh hƣởng riêng rẽ BAP kinetin đến khả nhân chồi tốc độ sinh trƣởng chồi Ngƣu tất ống nghiệm Hình 3.6 Hình ảnh rễ Ngƣu tất mơi trƣờng có α-NAA 41 43 Hình 3.7 Biểu đồ ảnh hƣởng tổ hợp chất KTST đến khả nhân chồi Ngƣu tất ống nghiệm……… Hình 3.8 Biểu đồ ảnh hƣởng tổ hợp chất KTST đến tốc độ sinh trƣởng Ngƣu tất ống nghiệm………… Hình 3.9 Ảnh hƣởng tổ hợp chất KTST đến khả nhân chồi tốc độ sinh trƣởng Ngƣu tất ống nghiệm 45 47 Hình 3.10 Một số hình ảnh đƣa mơi trƣờng tự nhiên…… 48 51 Hình 3.11 Một số phản ứng định tính hợp chất saponin……… 53 Hình 3.12 Hình ảnh số giai đoạn tách chiết hợp chất saponin 53 Hình 3.13 Hình ảnh điện di kiểm tra độ tinh ADN………… 54 Hình 3.14 Điện di sản phẩm PCR-RAPD gel agarose 1,8% mồi OPP15 OPP19…………………………………………… Hình 3.15 Điện di sản phẩm PCR-RAPD gel agarose 1,8% mồi OPH04 OPN05…………………………………………… Hình 3.16 Điện di sản phẩm PCR-RAPD gel agarose 1,8% mồi OPF10 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên 57 57 58 http://www.lrc-tnu.edu.vn mồi khác nhau, số phân đoạn ADN nhận có khác nhau, dao động từ 6-9 phân đoạn Tổng số phân đoạn nhận mồi với năm mẫu Ngưu tất phân tích 180 Kết thể bảng 3.11 Bảng 3.11 Tổng số phân đoạn ADN xuất mẫu Ngưu tất phân tích với mồi ngẫu nhiên Mồi NT1 NT2 NT3 NT4 NT5 Tổng phân đoạn OPF10 6 6 30 OPH04 9 9 45 OPN05 9 9 45 OPP15 6 6 30 OPP19 6 6 30 Tổng 36 36 36 36 36 180 Bảng 3.11 cho thấy, số mồi phân tích, số phân đoạn ADN nhân mẫu Ngưu tất thu nhiều hai mồi: mồi OPH04 0PN05 (45 phân đoạn) có mồi có số phân đoạn ADN đươc nhân (30 phân đoạn) OPF10, OPP15, OPP19 Tuy nhiên, mẫu khác số phân đoạn thu khơng có biến động, tất mẫu thu 36 phân đoạn ADN Điều thể đồng phản ứng PCR chất lượng ADN mẫu Ngưu tất Tính đa hình phân đoạn ADN Tính đa hình thể xuất hay không xuất phân đoạn so sánh mẫu với mồi Kết tổng hợp bảng 3.12 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 55 Qua bảng 3.12 cho thấy, tổng số phân đoạn ADN mẫu Ngưu tất phân tích với mồi ngẫu nhiên 36 phân đoạn Trong đó, số phân đoạn đa hình phân đoạn khơng đa hình 36 phân đoạn (chiếm 100%) Các mồi cịn lại khơng nhân đa hình phân đoạn ADN tỷ lệ đa hình % (bảng 3.12) Các mồi nghiên cứu thiết kế dựa sai khác trình tự nucleotit từ kết đa hình đơn hình phân đoạn ADN cho thấy khơng có sai khác ADN mẫu Ngưu tất nghiên cứu Kết phù hợp phân tích hàm lượng thơng tin đa hình (giá trị PIC), giá trị PIC mồi Bảng 3.12 Số phân đoạn ADN đa hình thu từ mẫu Ngưu tất với mồi phân tích Mồi Tổng số phân đoạn Số phân đoạn đa Số phân đoạn đơn PIC ADN hình hình OPF10 6 OPH04 9 OPN05 9 OPP15 6 OPP19 6 Tổng 36 30 Với mồi ngẫu nhiên ADN nhân thể rõ thông qua hình ảnh điện di gel agarose 1,8% Mồi OPP15 OPP19: Quan sát ảnh điện di cho thấy vùng phân tích từ 250 bp tới 1500 bp hai mồi xuất phân đoạn ADN nhân Tuy nhiên, mẫu Ngưu tất nghiên cứu khơng thấy có khác biệt số phân đoạn ADN quan sát kích thước phân đoạn hồn tồn giống (hình 3.14) Như vậy, hai mồi ngẫu nhiên không cho tính đa hình ADN mẫu Ngưu tất nghiên cứu Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 56 NT1 NT2 NT3 NT4 NT5 M NT1 NT2 NT3 NT4 NT5 OPP15 OPP19 1500bp 250bp Hình 3.14 Điện di sản phẩm PCR-RAPD gel agarose 1,8% mồi OPP15 OPP19 Mồi OPH04 mồi OPN05:: Tương tự hai mồi trên, mồi OPH04 mồi OPN05 khơng cho tính đa hình phân đoạn ADN nhân Cụ thể, mồi OPH04 phạm vi vùng phân tích số phân đoạn ADN nhân lên phân đoạn với kích thước khoảng 250-1500bp Mồi OPN05 nhân phân đoạn với kích thước dao động lớn 250 – 3000bp (hình 3.15) Cả hai mồi khơng có khác biệt số phân đoạn kích thước phân đoạn ADN nhân lên mẫu Ngưu tất sử dụng Hình 3.15 Điện di sản phẩm PCR-RAPD gel agarose 1,8% mồi OPH04 OPN05 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 57 Mồi OPF10: Không cho thấy tình đa hình phân đoạn ADN nhân Trong phạm vi vùng phân tích mẫu Ngưu tất xuất phân đoạn ADN với kích thước tương đương nằm khoảng 250 tới 1200 bp (hình 3.16) M NT1 NT2 NT3 NT4 NT5 OPF10 1000bp 250bp Hình 3.16 Điện di sản phẩm PCR-RAPD gel agarose 1,8% mồi OPF10 Kết phản ứng RAPD với mồi ngẫu nhiên bước đầu cho thấy khơng có xuất phân đoạn cho tính đa hình Điều chứng tỏ, hệ gen in vitro khơng có thay đổi so với hệ gen trồng hạt Như vậy, môi trường sử dụng nuôi cấy in vitro đảm bảo ổn định hệ gen in vitro sử dụng để nhân nhanh Ngưu tất Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 58 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ Công thức khử trùng hạt Ngưu tất là: Hạt tráng lần nước cất khử trùng, tráng dung dịch ethanol 70% 45 giây, sau cho hạt ngâm dung dịch javen 60%, lắc 15 phút rửa hạt lần nước cất khử trùng trước cấy lên môi trường Mơi trường thích hợp cho nhân nhanh Ngưu tất là: MS + kinetin 1,5mg/l + α-NAA 0,4mg/l + 9,0g aga + 200ml nước dừa + 30g saccharose + 2g than hoạt tính Kết đưa Ngưu tất môi trường tự nhiên: giá thể tốt cho Ngưu tất đất mùn + trấu hun (1:1) Các in vitro có sinh trưởng phát triển tốt, đặc điểm hình thái khơng có khác biệt so với trồng tự nhiên đưa vườn ươm Khi thu hoạch, rễ in vitro có đặc điểm hình thái giống rễ trồng hạt Khơng có thay đổi hàm lượng saponin tổng số rễ in vitro rễ trồng hạt Hàm lượng saponin khoảng 3,9% khối lượng khô Kết thực phản ứng RAPD với mồi ngẫu nhiên sau: phạm vi vùng phân tích có 36 phân đoạn ADN nhân khơng có phân đoạn cho tính đa hình, số lượng phân đoạn nhân mồi dao động từ đến phân đoạn Như vậy, không xuất sai khác ADN trồng hạt nuôi cấy in vitro Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 59 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu Tiếng Việt Nguyễn Thái An (2008) "Nghiên cứu thành phần saponin tinh dầu vị thuốc phương tiêu giao tán" Tạp chí Dược học, số 389, tr.27-30 Nguyễn Thế Anh, Trần Văn Minh (2007), “Vi nhân giống Pơmu (Forkienia hodginsii (Dunn) A Henry & H H Thomas)”, Những vấn đề nghiên cứu khoa học sống, Nxb KH&KT Hà Nội, tr.647-647 Lê Trần Bình, Lê Thị Muội (1998), Phân lập gen chọn dòng chống chịu ngoại cảnh bất lợi lúa, Nxb Đại học Quốc gia, Hà Nội Nguyễn Việt Cường, Phạm Đức Tuấn (2007), “Ứng dụng thị phân tử (RAPD ADN lục lạp) nghiên cứu đa dạng di truyền xây dựng vườn cóc hành”, Tạp chí NN&PTNT, số 19, tr.69-75 Mai Đăng Đẩu (2005), “Nghiên cứu, thiết kế, chế tạo hệ thống thiết bị chiết xuất dược liệu hoàn thiện quy trình cơng nghệ chiết xuất saponin từ Ngưu tất” Tạp chí Cơng Nghệ Sinh học, số 35, tr.25-31 Lê Xuân Đắc, Lê Thị Xuân, Nông Văn Hải, Lê Trần Bình CS (2004), "Nhân nhanh bảo tồn màng tang (Litsea verticiliata) tìm thấy vườn Quốc gia Cúc Phương kĩ thuật nuôi cấy mô tế bào thực vật" Tạp chí Cơng nghệ Sinh học, 2(4) tr 479-486 Trần Văn Định, Trần Văn Minh (2007), “Nghiên cứu kỹ thuật nuôi cấy đỉnh sinh trưởng bảo tồn phát triển nguồn gen thông đỏ (Taxus Wallichiana Zucc.)”, Những vấn đề nghiên cứu khoa học sống, Nxb KH&KT Hà Nội, tr 689-691 Phạm Văn Hiển, Vũ Hoài Sâm, Nguyễn Trần Hy (2005), “Sử dụng công nghệ tế bào thực vật để phục tráng, nhân nhanh xây dựng hệ thống sản xuất giống Ba Kích Ngưu tất” Tạp chí Cơng Nghệ Sinh học, số 48, tr.356-362 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 60 Nguyễn Văn Lan, Trịnh An Vĩnh (1976), Kĩ thuật trồng số dược liệu, tập 2, Nxb Nông nghiệp 10 Nguyễn Phú Lịch, Nguyễn Thị Tâm, Lê Ngọc Cơng (2007), « Bước đầu nghiên cứu nhân giống hao hoa vàng (Artemisia annual L.) kỹ thuật ni cấy in vitro », Tạp chí Khoa học & Công nghệ - Đại học Thái Nguyên, 42(2),76-79 11 Đinh Đoàn Long, Lê Huy Hàm, Đỗ Năng Vịnh, Hà Thị Thúy, Bernd Bueter (2004), « Nhân giống vơ tính in vitro dịng Kava (Pipe methusticum G Forster) có hoạt tính sinh học cao », Những vấn đề nghiên cứu Khoa học sống, Nxb KH &KT Hà Nội, tr.536 – 50 12 Đỗ Tất Lợi (1999), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, NxbXB Y học 13 Lê Đình Lương, Quyền Đình Thi (2002), Kĩ thuật di truyền ứng dụng, Nxb Đại học Quốc Gia, Hà Nội 14 Chu Hoàng Mậu (2005), Cơ sở phương pháp sinh học phân tử, Nxb Đại học Sư phạm 15 Chu Hoàng Mậu, Nguyễn Thị Hoa Lan (2005), « Đa dạng di truyền số giống lạc trồng (Archis hypogaea L.) », Những vấn đề nghiên cứu Khoa học sống, Nxb Hà Nội, tr.1304-1307 16 Chu Hoàng Mậu, Nguyễn Thị Ngọc Lan, Nguyễn Vũ Thanh Thanh, Nguyễn Thị Vân Anh (2007), « Sự đa dạng kiểu gen kiểu hình số giống lúa cạn địa phương miền núi » Những vấn đề nghiên cứu Khoa học sống, Nxb KH&KY Hà Nội, tr.759-762 17 Khưu Hoàng Minh, Trần Văn Minh (2007), « Vi nhân giống trai Nam Bộ (Fagarea cochinchinensis A Chev) », Những vấn đề nghiên cứu khoa học sống, Nxb KH&KT Hà Nội, tr 763-765 18 Lê Thị Muội, Lê Trần Bình, Hồ Hữu Nhị (1997), Cơng nghệ Sinh học cải tiến giống trồng, Nxb Nông nghiệp Hà Nội Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 61 19 Phan Hải Nam (2005), “Nghiên cứu ảnh hưởng thuốc hạ huyết áp Ngưu tất, Hoè hoa, Linh Chi (NHL) số cholesterol triglycerit máu bệnh nhân tăng huyết áp có rối loạn lipit máu”.Tạp chí Y học Việt Nam,số 5, tr.178-185 20 Hoàng Thị Sản, Phân loại thực vật, Nxb Giáo Dục 21 Phạm Xuân Sinh (2006), Dược học cổ truyền, NXB Y học Hà Nội 22 Nguyễn Thị Sơn, Nguyễn Thị Bay (2007), “Nghiên cứu tác dụng trà hạ mỡ Ngưu tất bệnh nhân rối loạn lipit máu”, Tạp chí Y học TP Hồ Chí Minh, tập 11, phụ số 2/2007 23 Nguyễn Thị Tâm, Nguyễn Minh Quế (2009), Nghiên cứu qui trình bảo tồn nguồn gen dẻ Trùng Khánh – Cao Bằng kỹ thuật in vitro, Báo cáo HN CNSHTQ; Nxb ĐHTN, 335-339 24 Bùi Văn Thắng, Đinh Thị Phòng, Lê Thị Muội (2003), “Đánh giá tính đa dạng số giống lạc tập đoàn giống chịu bệnh gỉ sắt kĩ thuật RAPD”, Hội nghị công nghệ Sinh học tồn quốc, tr 805 – 809 25 Lị Thị Mai Thu, Chu Hoàng Mậu, Nguyễn Thị Ngọc Lan, Nguyễn Vũ Thanh Thanh, Nguyễn Thị Bình (2008), « Nghiên cứu đa dạng di truyền số giống lúa cạn có khả chịu hạn khác » Tạp chí Khoa học Công nghệ, Đại học Thái Nguyên, số 3(47), tr.57-62 26 Nguyễn Hải Tuất, Ngô Kim Khôi (1996), Xử lí thống kê kết nghiên cứu thực nghiệm nơng lâm ngư nghiệp máy vi tính, Nxb Nông Nghiệp, Hà Nội 27 Đỗ Năng Vịnh, Công nghệ tế bào thực vật ứng dụng, Nxb Nông nghiệp Hà Nội 2005 28 Nguyễn Thị Kim Uyên, Trần Văn Minh (2007), « Dịng hóa Thanh hao (Artemisia annua L.) in vitro », Những vấn đề nghiên cứu Khoa học sống, Nxb KH&KT Hà Nội, tr.872-875 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 62 29 Ngô Thị Xuyên (2000), “Nghiên cứu tuyến trùng nốt sưng gây hại Ngưu tất số tỉnh phía Bắc Việt Nam”, Tạp chí bảo vệ thực vật ISSN (3) 34-37 30 Bộ Y tế, “Định hướng chiến lược cơng tác chăm sóc bảo vệ sức khoẻ nhân dân đến năm 2000 2020” Tạp chí Dược học, 8, 2(1996) 31 http/www.Thaythuoccuaban.com/vịthuốc/ngưutất.htm 32 http:/caythuocquy info 33 http:/ www.ykhoanet.com/NCKH/duoc04.HTM 34 http:/ www.vienduoclieu org.vn/nghiencuukhoahoc-1986-2001.htm 35 http:/vi.wikipedia org/wiki/saponin 36 http:/dost.danang.gov.vn 37 http:/www.yhoccotruyen.hunedsoft.com 38 http:/caythuocvn.com/Dlieuhoc/Duoclieu/Nguutat.htm#Thanhphanhoahoc Tài liệu Tiếng Anh 39 Gawel DNA Jarret, (1991), Genomic DNA Isolation Plant Mol Biol Rep, 12, pp 215-220 http:// www weihenstephan.de/pbpz/bambara/htm/dna.htm 40 Innis M A., Gelfand D H., Sninsky J J, White T J (1990) “PCR protocol: Aguile to methods and ampilication” Academic Press, pp 482 41 Welsh J., McClelland M (1990), “Fingerprinting genomes using PCR with arbitrary primer”, Nucl axit Res,16; pp 5511-5515 42 William J G K., Kubelik A E., Levak K J., Rafalski J A., Tingey S V.(1990), “ADN polymorphisms amplified by arbitrary primers are useful as genetic merers”, Nucleic axit Res, 18, pp 6531 – 6535 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 63 PHỤ LỤC Bảng phụ Xử lí số liệu khử trùng hạt lơ lơ (sử dụng hàm t-Test: Paired Two Sample for Means) Lô lô 96,15 50,14 t-Test: Paired Two Sample for Means 95,98 50,78 97,14 50,79 Lô lô Mean 96,15 50,791 Variance 0,1256 0,1434 Observations 10 10 Pearson Correlation 0,094494 97,25 51,3 Hypothesized Mean Difference 95,32 54,02 df 95,96 42,98 t Stat 41,03859 P(T