Bước đầu nghiên cứu vi nhân giống cây cao su (hevena brasiliensis) bằng phương pháp nuôi cấy mô tế bào tại bình dương

' , TRƯỜNG ĐẠI HỌC THỦ DẦU MỘT ‘ĩ KHOA KHOA HỌC Tự NHIÊN KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC (CAO ĐẲNG) NIÊN KHÓA 2011 - 2014 BƯỚC ĐẦU NGHIÊN CỨU VI NHÂN GIỐNG CÂY CAO SU (Hevea brasiliensis) BẰNG PHƯƠNG PHÁP NUÔI CẤY MÔ TẾ BÀO TẠI TỈNH BÌNH DƯƠNG Chuyên Ngành: SƯ PHẠM SINH HỌC : ThS PHAN VĂN THUẦN Giáo viên hướng dẫn : HUỲNHSinh NGỌC ANH viên thực : 111C840002 MSSV Lớp : C11SH02 Bình Dương, Tháng 05 Năm 2014 LỜI CẢM ƠN Để hồn thành khóa luận trước tiên em xin cảm ơn thầy giáo ThS Phan Văn Thuần tận tình giúp đỡ, hướng dẫn động viên em suốt thời gian qua Em xin chân thành cảm ơn thầy giáo ThS Nguyễn Thanh Thuận bạn Nguyễn Thị Xuân Thùy đồng hành giúp đỡ em Em xin cảm ơn Trường Đại học Thủ Dầu Một, khoa Khoa học Tự nhiên, môn Sinh học tạo điều kiện thuận lợi để khóa luận hồn thành Em xin gửi lời cảm ơn đến quý thầy cô khoa Khoa học Tự nhiên, gia đình bạn sinh viên lớp C11SH02 động viên giúp đỡ nhiệt tình suốt thời gian em thực khóa luận Sinh viên thực Huỳnh Ngọc Anh NHẬN XÉT Của giáo viên hướng dẫn Bình Dương, Ngày tháng năm 2014 NHẬN XÉT Của giáo viên phản biện MỤC LỤC MỤC LỤC i DANH MỤC CÁC BẢNG iv DANH MỤC CÁC HÌNH v DANH MỤC BIỂU ĐỒ .vi DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT vii MỞ ĐẦU 1 Lý chọn đề tài Mục tiêu đề tài Đối tượng phạm vi nghiên cứu Nội dung nghiên cứu Bố cục đề tài Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 LƯỢC SỬ PHÁT TRIỂN CỦA NUÔI CẤY MÔ .5 1.2 NHỮNG ƯU ĐIỂM VÀ HẠN CHẾ CỦA NHÂN GIỐNG INVITRO 10 1.2.1 Ưu điểm nhân giống vơ tính in vitro 10 1.2.2 Hạn chế nhân giống vơ tính in vitro 11 1.3 ỨNG DỤNG CỦA NHÂN GIỐNG INVTRO Ở MỘT SỐ CÂY CÔNG NGHIỆP 12 1.4 VÀI NÉT VỀ CÂY CAO SU .15 1.4.1 Đặc điểm chung họ Cao su 15 1.4.2 Đặc điểm riêng Cao su 17 1.4.2.1 Tên khoa học .17 1.4.2.2 Đặc tính thực vật 17 1.4.2.3 Thành phần hóa học .19 1.4.3 Giá trị kinh tế Cao su 20 Chương VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .22 2.1 VẬT LIỆU NGHIÊN CỨU 22 2.1.1 Trang thiết bị dụng cụ 22 2.1.2 Vật liệu 22 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 2.2.1 Phương pháp nghiên cứu tài liệu 22 2.2.2 Phương pháp nghiên cứu phịng thí nghiệm 23 2.2.2.1 Điều kiện môi trường nuôi cấy 23 2.2.2.2 Nghiên cứu khả khử trùng mẫu 25 2.2.2.3 Nghiên cứu khả tạo cụm chồi điều kiện in vitro 26 2.2.3 Phương pháp xử lý thống kê số liệu 28 Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 29 3.1 THÍ NGHIỆM 1: KHẢO SÁT KHẢ NĂNG KHỬ TRÙNG TỪ MỘT SỐ MẪU CÂY CAO SU 29 3.2 THÍ NGHIỆM 2: NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG KHỬ TRÙNG TỪ CÀNH CỦA CÂY CAO SU 31 3.3 THÍ NGHIỆM 3: NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG PHÁT SINH CHỒI TỪ CÁC MẪU VẬT VÔ TRÙNG CỦA CÂY CAO SU 34 KẾT LUẬN VÀ KHUYẾN NGHỊ 39 KẾT LUẬN 39 KHUYẾN NGHỊ 39 TÀI LIỆU THAM KHẢO 40 DANH MỤC CÁC BẢNG TT TÊN CÁC BẢNG TRANG Bảng 2.1 Thành phần môi trường Murashige Skoog (1962) 24 Bảng 3.1 Tỉ lệ phần trăm (%) hiệu khử trùng mẫu với chất khử trùng ( HgCl2 0,1% nước javel) 29 Bảng 3.2 Tỉ lệ (%) mẫu vô trùng với chất khử trùng HgCl2 0,1% thời gian khác 32 Bảng 3.3 Khả phát sinh chồi từ mẫu môi trường nuôi cấy 34 DANH MỤC CÁC HÌNH TT TÊN CÁC HÌNH TRANG Hình 3.1 Mẫu in vitro từ hạt cao su 31 Hình 3.2 Mẫu chồi đỉnh chồi nách vô trùng khử trùng HgCl2 0,1% .33 Hình 3.3 Chồi in vitro hình thành sau tuần nuôi cấy môi trường MS 36 Hình 3.4 Sự thích ứng mẫu với mơi trường MS bổ sung mg/L BAP + mg/L IBA 37 Hình 3.5 Chồi in vitro hình thành từ chồi nách sau tuần ni cấy môi trường MS bổ sung BAP 5mg/L + IBA 5mg/L 38 DANH MỤC BIỂU ĐỒ TT TÊN BIỂU ĐỒ TRANG Biểu đồ 3.1 Biểu đồ thể tỉ lệ phần trăm (%) hiệu khử trùng mẫu với chất khử trùng ( HgCl2 0,1% nước javel) .30 DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT ABA : Abscisis acid BA : N6-Benzyl adenine BAP : Benzyl amino purine cs : cộng DNA : Deoxyribonucleotid acid IBA : Indole-3-butyric acid MS : Murashige Skoog (1962) NAA : a - naphthaleneacetic acid IAA : p -indolacetic acid 2,4-D : 2,4-D dichlorophenoxy acetic acid TDZ : Thidiazuron Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 THÍ NGHIỆM 1: KHẢO SÁT KHẢ NĂNG KHỬ TRÙNG TỪ MỘT SỐ MẪU CÂY CAO SU Các mẫu vật khác thu nhận từ hạt cao su Chọn hạt khơ có vỏ cứng phía ngồi cịn ngun vẹn Một số hạt gieo nảy mầm tạo nguồn nguyên liệu khử trùng Hạt tách vỏ cứng phía ngồi, ngâm nước cất vơ trùng đồng hồ làm nguyên liệu Kết thu sau tuần nuôi cấy sau Bảng 3.1 Tỉ lệ phần trăm (%) hiệu khử trùng mẫu với chất khử trùng ( HgCl2 0,1% nước javel) Hiệu khử trùng mẫu Mẫu Hạt Phôi nguyê n Đoạn thân Chồi đỉnh Lá Hạt cắt từ hạt nảy từ hạt nảy mầm ngang mầm mầm Chất khử trùng HgCl2 0,1% (30 phút) 10% 100% 29% 21% 100% 52% 5% 100% 18% 14% 100% 39% Nước javel (tỉ lệ 1:3) Khả khử trùng HgCl 0,1%, 30 phút tốt so với nước javel (tỉ lệ 1:3) tất nguồn mẫu nghiên cứu Đối với loại mẫu hiệu khử trùng phôi, mầm tốt Đối với hạt cịn ngun số loại nấm phát triển phía trong, chất khử trùng khơng vào bên nên hiệu khử trùng thấp Biểu đồ 3.1 Biểu đồ thể tỉ lệ phần trăm (%) hiệu khử trùng mẫu với chất khử trùng ( HgCl2 0,1% nước javel) Kết có nhiều nét tương đồng với kết nghiên cứu Đặng Thị Thanh Thúy với đề tài (2006) “Nhân giống in vitro Giáng hương (Pterocarpus macrocarpus)”, luận văn tốt nghiệp trường Đại học Nông Lâm thành phố Hồ Chí Minh [28] Hạt Giáng hương mang số loại nấm nên hiệu khử trùng hạn chế Hướng nghiên cứu tiếp theo: Nghiên cứu thời gian khử trùng chất khử trùng để tạo tỉ lệ mẫu vô trùng cao đồng thời rút ngắn thời gian để giảm tác dụng chất khử trùng lên mô, tế bào nhằm thu tỉ lệ mẫu tạo chồi cao Hình 3.1 Mẫu in vitro từ hạt Cao su 3.2 THÍ NGHIỆM 2: NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG KHỬ TRÙNG TỪ CÀNH CỦA CÂY CAO SU Sau tuần, tỉ lệ (%) mẫu chồi đỉnh chồi nách khử trùng với chất khử trùng HgCl2 0,1% thời gian 22 phút, 30 phút 35 phút trình bày Bảng 3.2 Nhìn chung với chất khử trùng HgCl 0,1% thời gian khác cho hiệu khử trùng khác Bảng 3.2 Tỉ lệ (%) mẫu vô trùng với chất khử trùng HgCl2 0,1% thời gian khác Chồi đỉnh Mẫu Chất khử trùng HgCl2 0,1% (22 phút) Chồi nách % mẫu % vô % mẫu % mẫu % vô % mẫu nhiễm trùng chết nhiễm trùng chết 87,5 12,5 41,18 51,47 7,35 12,5 62,5 25 61,54 36,92 1,54 80 20 16 77,33 6,67 HgCl2 0,1% (30 phút) HgCl2 0,1% (35 phút) Dung dịch HgCl2 0,1% khử trùng thời gian 35 phút cho hiệu khử trùng tốt Tỉ lệ phần trăm vô trùng cao hẳn so với khử trùng 22 phút 30 phút Nhưng tỉ lệ phần trăm mẫu chết cao so với khử trùng 22 phút 30 phút Đối với mẫu khử trùng với HgCl2 0,1% thời gian 22 phút ngược lại, tỉ lệ phần trăm mẫu vô trùng thấp so với khử trùng 30 phút 35 phút Mặc khác tỉ lệ phần trăm mẫu nhiễm cao hẵn so với khử trùng 30 phút 35 phút Phần trăm mẫu chết thấp Từ việc phân tích cho thấy tăng thời gian khử trùng kết mẫu vơ trùng cao tỉ lệ mẫu chết tăng lên chất khử trùng làm tổn thương phôi, mô mẫu Đối với chất khử trùng HgCl 0,1% khử trùng với khoảng thời gian khác thời gian thích hợp 30 phút cho tỉ lệ vô trùng cao, mẫu chết mẫu nhiễm Theo Hồng Thị Thế, Nguyễn Thị Phương Thảo, Ninh Thị Thảo (2013) “Quy trình nhân giống in vitro Ba kích (Morinda officenalis How)”, Tạp chí Khoa học Phát triển, tập 11, số 3: 285-292 [26] Cũng thấy hiệu khử trùng có khác chồi đỉnh chồi nách Tuy nhiên kết tốt thu dùng 15 phút Ca(HClO)2 10% phút HgCl2 0,1% Khi hạ nồng độ chất khử trùng xuống thấp tỉ lệ mẫu nhiễm nhiều, khả phát sinh chồi không cao Cây Cao su loại lấy mũ, có nhiều lồi nấm, vi khuẩn ký sinh bên nội sinh bên Hướng phát triển tiếp theo: Tiếp tục thăm dò số chất khử trùng khác cho hiệu khử trùng, khả phát sinh chồi tốt Hình 3.2 Mẫu chồi đỉnh chồi nách vô trùng khử trùng HgCl2 0,1% 3.3 THÍ NGHIỆM 3: NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG PHÁT SINH CHỒI TỪ CÁC MẪU VẬT CỦA CÂY CAO SU Kết nghiên cứu khả phát sinh chồi từ mẫu vô trùng Cao su sau tuần ni cấy mơi trường MS có bổ sung chất điều hòa sinh trưởng BAP 0-1 mg/L bổ sung (5 mg/L BAP + mg/L IBA) trình bày Bảng 3.3 Bảng 3.3 Khả phát sinh chồi từ mẫu môi trường nuôi cấy Môi trường MS + BAP MS + BAP MS + BAP mg/L MS mg/L Mẫu 0,5 mg/L + IBA mg/L Phôi - - - - - - - - - - - nảy mầm + - - - Lá mầm - - - - Hạt cắt ngang - - - - - - - - - - - + - - - - - - - + Hạt - Đoạn thân từ hạt nảy mầm Chồi đỉnh từ hạt Chồi đỉnh cành non Chồi nách cành non Chồi đỉnh cành già Chồi nách cành già Ghi chú: (-): Khơng có khả phát sinh chồi (+): Có khả phát sinh chồi Qua trình nghiên cứu, nhận thấy khả phát sinh chồi mẫu vô trùng môi trường khác tùy loại mẫu tùy vào môi trường Hầu hết môi trường mẫu sống thời gian 1-2 tuần đầu, sau chuyển sang màu xám đen chết Ở phôi mầm, số mẫu ban đầu sau tuần Nhưng q trình tạo chồi khơng diễn Để mẫu tạo chồi cần có q trình cân chất điều hịa sinh trưởng bên ngồi mơi trường nội sinh bên mô Cao su Ở môi trường MS, chồi nách sau tuần ni cấu có dấu hiệu cảm ứng, mẫu xù xì, phồng rộp có màu trắng, chồi nách có tượng nhú lên Nhưng sau tuần mẫu xạm đen có dấu hiệu ngừng phát triển Đối với mẫu chồi đỉnh từ hạt nảy mầm lại có khả phát sinh chồi mơi trường MS Hình 3.3 Chồi in vitro hình thành sau tuần nuôi cấy môi trường MS Quá trình tạo chồi nhận thấy rõ môi trường MS bổ sung BAP mg/L + IBA mg/L mẫu vật chồi nách Sau tuần ni cấy bắt đầu có dấu hiệu cảm ứng Sau tuần nuôi cấy mẫu bắt đầu bung nhiều chồi nhỏ từ mắt cành Ở chồi đỉnh khơng có tượng Hình 3.4 Sự thích ứng mẫu với môi trường MS bổ sung mg/L BAP + mg/L IBA Thêm vào đó, sau tuần nuôi cấy, chồi nách từ môi trường MS không phát sinh chồi sau chuyển môi trường MS bổ sung BAP mg/L + IBA mg/L trình tạo chồi bắt đầu Hình 3.5 Chồi in vitro hình thành từ chồi nách sau tuần nuôi cấy môi trường MS bổ sung BAP mg/L + IBA mg/L Khả tái sinh chồi từ chồi nách chồi đỉnh khác loại khác Kết nghiên cứu chúng tơi có nhiều nét tương đồng với kết Lê Văn Tường Huân cs nghiên cứu đối tượng Chanh dây với đề tài cấp “Nhân giống vơ tính in vitro Chanh dây (Pasiflora edulis Sims) sử dụng đoạn thân mang chồi nách” [9] Chồi nách cho hệ số nhân chồi khả phát sinh chồi tốt so với chồi đỉnh KẾT LUẬN VÀ KHUYẾN NGHỊ KẾT LUẬN Trên sở kết nghiên cứu thu được, rút số kết luận sau: - Nồng độ chất khử trùng thời gian tối ưu cho khử trùng mẫu từ chồi đỉnh chồi nách Cao su HgCl2 0,1%, 30 phút Tỉ lệ chồi đỉnh vô trùng 62,5%, chồi nách vô trùng 36,92% - Trong môi trường bổ sung chất điều hịa sinh trưởng, mơi trường có bổ sung mg/L BAP + mg/L IBA môi trường thích hợp cho khả phát sinh chồi in vitro - Mẫu tốt cho trình phát sinh chồi chồi nách cành non cành già KHUYẾN NGHỊ Cây Cao su loài mang lại giá trị kinh tế cao cho người dân tỉnh Bình Dương mà cịn lợi xuất Việt Nam Nghiên cứu nhân giống in vitro đáp ứng nguồn giống đảm bảo chất lượng phục vụ cho việc trồng trọt quy mơ lớn Do thời gian có hạn chúng tơi chưa thể hồn thiện quy trình vi nhân giống Cao su, chúng tơi khuyến nghị tiếp tục có nghiên cứu sau: - Tiếp tục thăm dò chất khử trùng cho hiệu tốt - Tiếp tục nghiên cứu tổ hợp chất điều hòa sinh trưởng khác cho hệ số nhân chồi tốt - Nghiên cứu môi trường tạo rễ cho chồi in vitro - Nghiên cứu điều kiện tự nhiên thích hợp để chuyển in vitro vườn ươm TÀI LIỆU THAM KHẢO TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT Nguyễn Bá (1997), “Thực vật chuyển gene môi trường”, Sinh học ngày nay, Dịch từ La Recherch Đái Duy Ban, Lê Thanh Hịa (1996), Cơng nghệ sinh học vật nuôi trồng, Nxb Nông nghiệp, Hà Nội Đái Duy Ban, Lữ Thị Cẩm Vân (1994), Những thành tựu khoa học kỹ thuật đưa vào sản xuất, Chuyên đề: Công nghệ gene sản xuất vacxin hệ mới, Trung tâm thông tin tư liệu, Trung tâm Khoa học tự nhiên Công nghệ Quốc gia, Nxb Nông nghiệp, Hà Nội Nguyễn Khoa Chi (1985), Cây Cao su - Kỹ Thuật trồng - Chăm sóc - Chế biến, Nxb Nông nghiệp Võ Văn Chi (2003), Từ điển thực vật thông dụng, Tập 2, Nxb Khoa học Kỹ thuật Nguyễn Cảnh Chính (2011), “Nghiên cứu khả nhân giống vơ tính Chè đắng (llex kaushue S.Y Hu) phương pháp giâm cành”, Luận văn thạc sĩ nông nghiệp, Trường Đại học Nông nghiệp Hà Nội Nguyễn Hữu Định (2005), “Nghiên cứu nhân giống vơ tính Tiêu (Piper nigrum) phương pháp nuôi mô”, Luận văn tốt nghiệp, Ngành Công nghệ Sinh học, Trường Đại học Nông Lâm thành phố Hồ Chí Minh Trần Thị Thuý Hoa, Lê Mậu Tuý, Phạm Hải Dương, Vũ Văn Trường Lại Văn Lâm (2001), Tuyển chọn giống cao su khuyến cáo giai đoạn 19992001 Trong kết hoạt động khoa học năm 2000 Nxb Nông nghiệp Lê Văn Tường Huân cs (2013), “Nhân giống vơ tính in vitro Chanh dây (Pasiflora edulis Sims) sử dụng đoạn thân mang chồi nách”, Tạp chí Cơng nghệ Sinh học, số 8(3) 10 Võ Thị Thu Hồng (2011), “Phương pháp xác định giá trị vườn cao su chuẩn bị vào tiến hành cổ phần hóa nơng trường cao su trực thuộc tổng công ty cao su Đồng Nai”, Luận văn tốt nghiệp, Ngành quản trị kinh doanh, Trường Đại học Kỹ thuật Cơng nghệ thành phố Hồ Chí Minh 11 Nguyễn Ngọc Hải (1997), Công nghệ sinh học công nghiệp, Nxb Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội 12 Nguyễn Hữu Hổ (2004), Kỹ thuật nuôi cấy mô tế bào thực vật, Khoa Công nghệ Sinh học, Trường Đại học mở bán cơng thành phố Hồ chí minh 13 Phạm Hoàng Hộ (2003), Cây cỏ Việt Nam, Quyển II, Nxb Trẻ 14 Nguyễn Thị Huệ (1997), Cao su - Kiến thức tổng quát kỹ thuật nông nghiệp, Nxb Trẻ 15 Nguyễn Hoàng Lộc (1993), “Ứng dụng kỹ thuật nhân giống in vitro nuôi cấy mô tế bào thực vật vào việc nhân nhanh trồng có giá trị kinh tế”, Thơng tin Khoa học, Sở Khoa học - Công nghệ Môi trường Thừa Thiên Huế 16 Nguyễn Hoàng Lộc (1998), Bài giảng nuôi cấy mô tế bào thực vật, Khoa sinh học, Trường Đại học Khoa học, Đại học Huế 17 Nguyễn Đức Lượng, Nguyễn Thị Thủy Tiên (2002), Công nghệ tế bào, Nxb Y học, Hà Nội 18 Phan Cự Nhân, Trần Đình Miên (1997), Tìm hiểu cơng nghệ sinh học đại, Nxb Giáo dục, Hà Nội 19 Trần Duy Quý (1997), Các phương pháp chọn tạo giống trồng, Nxb Nơng nghiệp, Hà Nội 20 Hồng Thị Sản, Hoàng Thị Bé (2005), Phân loại học thực vật, Bộ giáo dục đào tạo - dự án đào tạo giáo viên THCS, Nxb Đại học Sư phạm 21 Văn Mai Sơn (2001), Những thành tựu khoa học công nghệ Cao su ứng dụng miền Đông Nam bộ, Nxb Nông nghiệp 22 Nguyễn Thị Kim Thanh, Dương Huyền Trang (2008), “Nghiên cứu kỹ thuật nhân giống vơ tính Lơ hội (Aloe vera L.) phương pháp ni cấy in vitro”, Tạp chí Khoa học Phát triển 2008: Tập VI, Số 6: 514-521, Khoa Nông học, Trường Đại học Nông nghiệp Hà Nội 23 Nguyễn Đức Thành (2000), Nuôi cấy mô tế bào thực vật - Nghiên cứu Ứng dụng, Nxb Nông nghiệp, Hà Nội 24 Phan Văn Thuần (2008), “Nghiên cứu nhân giống vơ tính in vitro hoa Păng-Xê (Viola tricolor L.) ”, Luận văn thạc sĩ khoa học Sinh học, Trường Đại học Khoa học-Đại học Huế 25 Đoàn Thị Ái Thuyền, TS Thái Xuân Du Đỗ Xuân Giáp (2003), “Bước đầu nghiên cứu nhân giống số hồ tiêu virus (Piper nigrum L.)”, Viện Sinh học nhiệt đới 26 Hoàng Thị Thế, Nguyễn Thị Phương Thảo, Ninh Thị Thảo (2013) “Quy trình nhân giống in vitro Ba kích (Morinda officenalis How)”, Tạp chí Khoa học Phát triển, Tập 11, số 3: 285-292 27 Đinh Xuân Thức (2008), Bài giảng công nghiệp dài ngày, Dự án hợp tác Việt Nam - Hà Lan, Trường Đại học Nông Lâm Huế 28 Đặng Thị Thanh Thúy (2006), “Nhân giống in vitro Giáng hương (Pterocarpu macrocarpus)”, luận văn tốt nghiệp, trường Đại học Nông Lâm thành phố Hồ Chí Minh 29 Nguyễn Văn Uyển tác giả (1984), Nuôi cấy mô thực vật phục vụ cơng tác giống trồng, Nxb TP Hồ Chí Minh 30 Nguyễn Văn Uyển (1993), Nuôi cấy mô tế bào thực vật phục vụ công tác giống trồng, Nxb Nơng nghiệp, Hà Nội TÀI LIỆU NƯỚC NGỒI 31 Atique Akbar M and Shyamal Roy K (2006), “Effects of liquid medium on rooting and acclimation of regenerated microshoots of banana (Musa sapientum L.) cs Sagar”, Plant Tissue Culture & Biotech, 16(1), pp 11-18 32 Rober N T., Dennis J G (2000), Plant Tissue Culture Concept and Laboratory Exercise, CRC Press, New York TÀI LIỆU INTERNET 33 http://www.lrc-hueni.edu.vn/dongy/show_target.plx?url=/thuocdongy/C/ Caosu.htm&key=&char=C 34 http://vi.wikipedia.org/wiki/Cao_su_(cây) 35 http://www.cesti.gov.vn/th-gi-i-d-li-u/phat-tri-n-cay-cao-su-vi-t-nam.html 36 http://khcnbinhduong.gov.vn/?s=AV&CateID=NTlC5Xa3Q0KidJk3391DZ Q%3D%3D&ArtID=SOmCLtSw9y%2FgwJR6nbvY1A%3D%3D 37 http://idoc.vn/tai-lieu/trien-vong-nhan-giong-vo-tinh-cho-cay-ca-phe.html ... Thidiazuron MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Nuôi cấy mô tế bào thực vật lĩnh vực bao gồm nhiều kỹ thuật khác nuôi cấy in vitro như: Nuôi cấy phôi, quan, tế bào protoplast Vi? ??c đời kỹ thuật nuôi cấy mô tế bào thực... nghiên cứu vi nhân giống Cao su (Hevea brasiliensis ) phương pháp nuôi cấy mô tế bào tỉnh Bình Dương. ” Mục tiêu đề tài Thăm dị điều kiện khử trùng mơi trường thích hợp để tạo cụm chồi Cao su (Hevea... nét cao su - Chương Vật liệu phương pháp nghiên cứu (7 trang) Chúng tơi trình bày vật liệu phương pháp nghiên cứu bao gồm: Trang thiết bị, dụng cụ vật liệu nghiên cứu, phương pháp nghiên cứu