nghiên cứu một số đặc điểm dịch tễ bệnh cúm gia cầm và khả năng đáp ứng miễn dịch của gà, vịt đối với vacxin cúm h5n1 tại tỉnh bắc ninh

Rất rất hay!

MỞ ĐẦU

1 Tính cấp thiết của đề tài

Bệnh cúm gia cầm (CGC) thể độc lực cao (HPAI - Highly PathgenicAvian Influenza) là một bệnh truyền nhiễm cấp tính do vi rút, lây lan nhanh

và có tỷ lệ chết cao ở gia cầm, được OIE xếp vào những bệnh truyền nhiễmnguy hiểm nhất của động vật

Virus CGC thuộc họ Orthromyxoviridae gây ra, là virus ARN phân

mảnh có khả năng đột biến mạnh, với hai loại kháng nguyên bề mặt H (từ H1đến H16) và N (từ N1 đến N9) đóng vai trò quan trọng trong sinh bệnh học vàmiễn dịch học (Tô Long Thành, 2005, 2009)

Nguyên nhân của HPAI là do virus cúm type A - loại virus có khả nănggây biến chủng rất mạnh Bệnh lây lan nhanh chóng trong các đàn gia cầmvới tỷ lệ lây nhiễm và tỷ lệ chết cao Không những thế bệnh còn có khả nănglây truyền sang các loài động vật khác, đặc biệt nguy hiểm là bệnh có khảnăng lây lan sang người, trường hợp nhiễm nặng có thể gây tử vong Hiện nay

cả thế giới đang phải đối mặt với nguy cơ xảy ra một vụ đại dịch cúm ở người

mà nguyên nhân là do các chủng vi rút cúm gia cầm biến đổi thành nhữngdạng mới thích nghi gây bệnh trên người

Bệnh cúm gia cầm được phát hiện vào năm 1878 tại Italia, sau đó đãxảy ra ở khắp nơi trên thế giới, gây thiệt hại kinh tế rất lớn Ở Việt Nam, từcuối năm 2003 bệnh đã xuất hiện và bùng phát ở nhiều địa phương trong cảnước trong đó có tỉnh Bắc Ninh gây ra những hậu quả nghiêm trọng, ảnhhưởng đến đời sống kinh tế, chính trị - xã hội, làm thiệt hại nặng nề chongành chăn nuôi gia cầm nước ta, nhiều cơ sở chăn nuôi công nghiệp quy môlớn, nhiều trang trại và hộ chăn nuôi gia đình đã bị phá sản

Các biện pháp phòng chống dịch được áp dụng triệt để ngay từ đầu nhưtiêu hủy toàn bộ đàn gia cầm mắc bệnh; cấm buôn bán, vận chuyển gia cầm

bệnh và gia cầm trong vùng có dịch; tiêu độc, khử trùng, tăng cường các biệnpháp an toàn sinh học… đã góp phần khống chế các đợt dịch, song rất tốn kém,gây ô nhiễm môi trường và không mang lại hiệu quả mong muốn trong điềukiện chăn nuôi nông hộ nhỏ lẻ như ở Việt Nam Cho đến nay bệnh cúm giacầm chưa được khống chế hoàn toàn và vẫn tái phát lẻ tẻ ở nhiều địa phương

Tại thời điểm hiện tại, tiêm phòng vaccin cúm gia cầm cho toàn bộ đàngia cầm là một biện pháp được FAO, OIE khuyến cáo như là một công cụ bổxung hữu hiệu trong chiến lược phòng chống bệnh cúm gia cầm Hiện nay,một số quốc gia như Mexicco, Trung Quốc, Pakistan… đã sử dụng vaccin đểphòng chống cúm và đã thu được nhiều kết quả đáng khích lệ Trên cơ sở đó,

từ cuối năm 2005 Việt Nam đã nhập vaccin cúm gia cầm của Trung Quốc đểtriển khai tiêm phòng cho toàn bộ đàn gia cầm và thuỷ cầm trong cả nướctrong đó có tỉnh Bắc Ninh

Việc đánh giá thực trạng chăn nuôi, giám sát sự lưu hành của virus vàđáp ứng miễn dịch của gia cầm đối với vaccin cúm cũng như khảo sát khảnăng bảo hộ của vaccin trong điều kiện thực địa là yếu tố quan trọng gópphần đưa ra những chiến lược phù hợp trong phòng chống và tiến tới thanhtoán dịch cúm gia cầm ở Việt Nam

Xuất phát từ tình hình và yêu cầu thực tế đó, chúng tôi tiến hành thực hiện

đề tài: “Nghiên cứu một số đặc điểm dịch tễ bệnh cúm gia cầm và khả năng đáp ứng miễn dịch của gà, vịt đối với vacxin cúm H5N1 tại tỉnh Bắc Ninh”

Từ kết quả của những nghiên cứu này, hy vọng sẽ giúp các cơ sở chănnuôi gia cầm trong tỉnh Bắc Ninh có thể chủ động xây dựng lịch dùng vacxinphòng bệnh cúm gia cầm hợp lý và khoa học cho đàn gia cầm của mình, đồngthời cũng giúp cho công tác phòng và chống cúm gia cầm ở nước ta ngày mộttốt hơn

2 Mục tiêu và yêu cầu của đề tài

- Xác định được một số đặc điểm dịch tễ bệnh cúm gia cầm ở tỉnh Bắc Ninh

- Đánh giá được khả năng đáp ứng miễn dịch của gà, vịt được tiêm vacxinH5N1 tại tỉnh Bắc Ninh.

- Đánh giá tính khả thi của chương trình tiêm phòng vacxin cho đàn gà,vịt tại tỉnh Bắc Ninh

3 Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của đề tài

- Các kết quả nghiên cứu tại Bắc Ninh có thể dùng làm tài liệu thamkhảo, bổ sung thêm số liệu vào kết quả đánh giá hiệu quả của việc tiêm phòngtrong công tác phòng chống dịch cúm gia cầm ở Việt Nam

- Các kết quả sẽ thu được cũng là cơ sở định hướng và đưa ra những kếhoạch cho công tác phòng dịch và chương trình tiêm phòng vacxin cúm giacầm trong địa bàn tỉnh Bắc Ninh nói riêng và cho cả nước nói chung trongthời gian tiếp theo

4 Địa điểm nghiên cứu

- Các cơ sở và hộ chăn nuôi gia cầm của tỉnh Bắc Ninh

- Chi cục thú y tỉnh Bắc Ninh và một số trạm thú y huyện

- Trung tâm chẩn đoán thú y Trung Ương

5 Thời gian nghiên cứu đề tài.

Từ tháng 12 năm 2010 đến tháng 8 năm 2011

Chương 1TỔNG QUAN TÀI LIỆU

1.1 GIỚI THIỆU CHUNG VỀ BỆNH CÚM GIA CẦM

Bệnh cúm ở gia cầm (Avian Influenza) thường gọi là bệnh cúm gia cầmhoặc bệnh cúm gà, là một bệnh truyền nhiễm gây ra bởi virus cúm type A

thuộc họ Orthomyxoviridae Bệnh thường xảy ra nặng ở gà, vịt, lợn, một số

động vật có vú khác và có thể lây sang người Biểu hiện của bệnh chủ yếu ởđường tiêu hoá và đường hô hấp

Trước đây bệnh còn được gọi là bệnh dịch tả gà (Fowl plague), nhưng

từ Hội nghị Quốc tế lần thứ nhất về bệnh cúm gia cầm tại Beltsville (Mỹ),năm1981 đã thay thế tên này bằng tên bệnh cúm động lực cao ở gia cầm(Highly pathogenic avian influenza viết tắt là HPAI) để chỉ virus cúm typ A

có độc lực mạnh (Cục thú y, 2004) [7]

Bệnh cúm gia cầm HPAI là bệnh truyền nhiễm nguy hiểm, có tốc độlây lan rất nhanh với tỉ lệ chết cao trong đàn gia cầm nhiễm bệnh Virus gâybệnh cúm gia cầm chủ yếu là loại H5, H7 và H9, gây bệnh cho gà, vịt, ngan,ngỗng, đà điểu, các loại chim Virus còn gây bệnh cho cả con người và có thểthành đại dịch, vì thế bệnh cúm gia cầm đang ngày càng trở nên nguy hiểmhơn bao giờ hết (Cục thú y, 2005) [8], (Lê Văn Năm, 2004) [29]

1.2 LỊCH SỬ BỆNH CÚM GIA CẦM

Năm 412 trước công nguyên, Hippocrate đã mô tả về bệnh cúm Năm

1680 một vụ đại dịch cúm đã được mô tả kỹ và từ đó đến nay đã xảy ra 31 vụđại dịch Trong hơn 100 năm qua đã xảy ra 4 vụ đại dịch cúm vào các năm

1889, 1918, 1957, 1968 (Cục thú y, 2004) [7]

Năm 1878 ở Italy đã xảy ra một bệnh gây tử vong rất cao ở đàn gia cầm

và được gọi là bệnh dịch tả gia cầm (Fowl plague), bệnh lần đầu tiên đượcPorroncito mô tả và ông nhìn nhận một cách sáng suốt rằng tương lai sẽ là

một bệnh quan trọng và nguy hiểm Năm1901, Centanni và Savunozzi đã đềcập đến ổ dịch này và xác định được căn nguyên siêu nhỏ qua lọc (Filterableagent) là yếu tố gây bệnh Đến năm 1955 Achafer đã xác định được cănnguyên gây bệnh thuộc nhóm virus cúm typ A thông qua kháng nguyên bềmặt là H7N1 và H7N7 gây chết nhiều gà, gà tây và chim hoang ở Bắc Mỹ,Nam Mỹ, Châu Phi, Trung Cận Đông (Lê Văn Năm, 2004) [29].

Năm1963, virus cúm typ A được phân lập từ gà tây ở Bắc Mỹ do loàithuỷ cầm di trú dẫn nhập virus vào đàn gà Cuối thập kỷ 60, phân typ H1N1thấy ở lợn và có liên quan đến những ổ dịch ở gà tây Mối liên hệ giữa lợn và

gà tây là những dấu hiệu đầu tiên về virus cúm ở động vật có vú có thể lâynhiễm và gây bệnh cho gia cầm Những nghiên cứu đều cho rằng virus cúmtyp A phân typ H1N1 đã ở lợn và truyền cho gà tây, ngoài ra phân typ H1N1

ở vịt còn truyền cho lợn (Cục thú y, 2004) [7]

Năm 1971, Beard đã mô tả khá kỹ virus gây bệnh và đặc điểm bệnh lýlâm sàng của gà trong các ổ dịch cúm gà, gà tây khá lớn xảy ra ở Mỹ màchủng gây bệnh là H7N1 Từ năm 1960 - 1979 bệnh được phát hiện ở Canada,Mehico, Achentina, Braxin, Nam Phi, ý, Pháp, Anh, Hà Lan, Australia,Hồng Kông, Nhật Bản, các nước vùng Trung Cận Đông, các nước thuộc liênhiệp Anh và Liên Xô (Đào Yến Khanh, 2005) [25]

Các công trình nghiên cứu có hệ thống về bệnh cúm gia cầm lần lượtđược công bố ở Australia năm 1975, ở Anh năm 1979, ở Mỹ năm 1983 -

1984, ở Ailen năm 1983 - 1984 về đặc điểm sinh học, bệnh học và dịch tễhọc, các phương pháp chẩn đoán miễn dịch và biện pháp phòng chống bệnh

(Đào Yến Khanh, 2005) [25].

Sự lây nhiễm từ chim hoang dã sang gia cầm đã có bằng chứng từ trướcnăm 1970 nhưng chỉ được công nhận khi xác định được tỉ lệ nhiễm virus cúmcao ở một số loài thuỷ cầm di trú (Cục thú y, 2004) [7]

Từ sau khi phát hiện ra virus cúm typ A, các nhà khoa học thấy rằngvirus cúm có ở nhiều loài chim hoang dã và gia cầm nuôi ở những vùng khácnhau trên thế giới Bệnh xảy ra nghiêm trọng nhất với gia cầm thuộc phân typH5 và H7 như ở Scotland năm 1959 là H5N1, ở Mỹ năm 1983 - 1984 làH5N2 (Cục thú y, 2004) [7].

Đến nay, dịch cúm gia cầm đã xảy ra ở khắp các châu lục với mức độngày càng nguy hiểm hơn đối với các loài gia cầm và sức khoẻ của cộngđồng, đã thôi thúc Hiệp hội các nhà chăn nuôi gia cầm tổ chức hội thảochuyên đề về bệnh cúm gà Hội thảo lần đầu tiên tổ chức vào năm 1981, lầnthứ 2 tại Ailen năm 1987, lần thứ 3 cũng tại Ailen năm 1992 Từ đó đến naytrong các hội nghị về dịch tễ trên thế giới, bệnh cúm gia cầm luôn là mộttrong những nội dung được coi trọng (Lê Văn Năm, 2004) [29]

1.3 TÌNH HÌNH DỊCH CÚM GIA CẦM

* Tình hình dịch cúm gia cầm trên thế giới

Virus cúm gia cầm phân bố khắp toàn cầu, vì vậy dịch bệnh đã xảy ra ởnhiều nước trên thế giới

Năm 1983 - 1984 ở Mỹ, dịch cúm gà xảy ra do chủng virus H5N2 ở 3bang Pensylvania, Virginia, Newtersey làm chết và tiêu huỷ hơn 19 triệu gà(Phạm Sỹ Lăng, 2004) [26] Cũng trong thời gian này tại Ireland người ta đãphải tiêu huỷ 270 nghìn con vịt tuy không có triệu chứng lâm sàng nhưng đãphân lập được virus cúm chủng độc lực cao (HPAI) để loại trừ bệnh một cáchhiệu quả, nhanh chóng

Năm 1977 ở Minesota đã phát hiện dịch trên gà tây do chủng H7N7.Năm 1986 ở Australia dịch cúm gà xảy ra tại bang Victoria do chủng H5N2.Năm 1997 ở Hồng Kông dịch cúm gà xảy ra do virus cúm typ A subtypH5N1 Toàn bộ đàn gia cầm của lãnh thổ này đã bị tiêu diệt vì đã gây tử vongcho con người (Cục thú y, 2004) [7] Như vậy đây là lần đầu tiên virus cúm

gia cầm đã vượt “rào cản về loài” để lây cho người ở Hồng Kông làm cho 18người nhiễm bệnh, trong đó có 6 người chết.

Năm 2003, ở Hà Lan dịch cúm gia cầm xảy ra với quy mô lớn do chủngH7N7, 30 triệu gia cầm bị tiêu huỷ, 83 người lây nhiễm và 1 người chết, gâythiệt hại về kinh tế hết sức nghiêm trọng (Phạm Sỹ Lăng, 2004) [27]

Từ cuối năm 2003 - 2005 đã có 11 nước và vùng lãnh thổ xuất hiệndịch cúm gia cầm H5N1 gồm Hàn Quốc, Nhật Bản, Thái Lan, Campuchia,Lào, Indonesia, Trung Quốc, Malaysia, Hồng Kông và Việt Nam Ngoài ra có

7 nước và vùng lãnh thổ khác có dịch cúm gia cầm các chủng khác làPakistan, Hoa Kỳ, Canada, Nam Phi, Ai Cập, Cộng hoà Dân chủ Nhân dânTriều Tiên và Đài Loan Vào cuối tháng 3/2005 tại Myanmar đã phát hiệnhàng ngàn gà chết nghi bệnh cúm gia cầm Sau khi dịch cúm gia cầm bùngphát, một số nước công bố khống chế được dịch, một số nước lại bị tái pháttrở lại, đây là lần đầu tiên trong lịch sử dịch cúm gia cầm xảy ra nhanh trêndiện rộng và diễn biến phức tạp ở các nước Châu Á Hiện nay trên thế giớidịch cúm gia cầm đã xảy ra ở 58 nước và vùng lãnh thổ [Theo http:// www.vietnamnet vn ngày 28/11/2006]

* Tình hình dịch cúm gia cầm trong nước

Cuối năm 2003, dịch cúm gia cầm phát tại trại gà giống của Công tyC.P (Thái Lan) ở xã Thủy Xuân Tiên, huyện Chương Mỹ, tỉnh Hà Tây gây

ốm, chết 8000 gà trong 4 ngày Sau đó dịch đã nhanh chóng lây lan ra hầu hếtcác tỉnh trong cả nước Cho đến nay ở Việt Nam cúm gia cầm đã xảy ra thành

4 đợt dịch chủ yếu

- Đợt dịch thứ nhất từ tháng 12/2003 đến 30/3/2004:

Lần đầu tiên trong lịch sử nước ta dịch cúm gia cầm xuất hiện vào cuốitháng 12 năm 2003 ở tỉnh Hà Tây, Long An và Tiền Giang Dịch lây lan rấtnhanh, bình quân mỗi ngày có khoảng 150 - 230 xã của 15 - 20 huyện phát

sinh ổ dịch mới thuộc 57 tỉnh, thành trong cả nước Làm chết và tiêu huỷhàng ngày từ 2 - 3 triệu con gia cầm các loại, có ngày lên đến 4 triệu con(Cục thú y, 2004)[6] Tổng số xã phường có dịch là 2.574 (chiếm 24,6% số xãphường trong cả nước) thuộc 381 quận, huyện, thị xã (chiếm 60%), số gia cầmchết và tiêu huỷ là 43,9 triệu con, chiếm 16,79% tổng đàn, trong đó gà chiếm30,4 triệu con, thuỷ cầm chiếm 13,5 triệu con Ngoài ra cũng có 14,76 triệu conchim cút và các loại chim khác bị chết và tiêu hủy (Phạm Sĩ Lăng, 2005) [16].Thiệt hại ước tính khoảng 1300 tỷ đồng (Nguyễn Tiến Dũng, 2006) [12].

- Đợt dịch thứ hai từ tháng 4 đến tháng 11/2004:

Trong giai đoạn này, dịch phát ra rải rác với quy mô nhỏ ở các hộ giađình chăn nuôi gia cầm; bệnh xuất hiện ở 46 xã, phường tại 32 huyện, quận,thị xã thuộc 17 tỉnh Thời gian cao điểm nhất là tháng 7 sau đó giảm dần, đếntháng 11 cả nước chỉ có 1 điểm phát dịch Tổng số gia cầm tiêu huỷ tronggiai đoạn này là 84.078 con, trong đó 55.999 gà, 8.132 vịt và 19.947 conchim cút (Phạm Sĩ Lăng, 2005) [16]

- Đợt dịch thứ ba từ tháng 12/2004 đến tháng 5/2005:

Trong khoảng thời gian này dịch đã xuất hiện ở 670 xã tại 182 huyệnthuộc 36 tỉnh, thành phố (15 tỉnh phía Bắc, 21 tỉnh phía Nam) Tổng số tiêuhuỷ là 1.847.213 con trong đó số gia cầm tiêu huỷ là 470.495 gà, 825.689vịt, ngan và 551.029 chim cút, bệnh xuất hiện nặng nhất là tỉnh Long An,Tiền Giang, Bạc Liêu, Đồng Tháp (Trần Công Xuân và cộng sự, 2005) [30]

Sau đó dịch lại tái phát từ đầu tháng 10/2005 đến tháng 12/2005: Dịchxảy ra ở cả 3 miền với 285 xã phường của 100 huyện thuộc 24 tỉnh,

thành tái phát Trong đó miền Nam có 3 tỉnh (Bạc Liêu, Đồng Tháp, Long An), miền Trung có 3 tỉnh (Thanh Hóa, Nghệ An, Quảng Trị) và 18 tỉnh thuộc miền Bắc (Hà Nội, Bắc Giang, Hòa Bình, Thái Bình, Hưng Yên, Hải Dương, Phú Thọ, Bắc Ninh, Bắc Kạn, Vĩnh Phúc, Hải Phòng, Sơn La, Quảng

Ninh, Yên Bái, Thái Nguyên, Ninh Bình, Cao Bằng và Hà Giang) Tổng

số gia cầm ốm chết, buộc tiêu huỷ và tiêu hủy tự nguyện là 3.735.620 con,trong đó có 1.245.282 con gà, 2.005.557 vịt, ngan và 484.781 chim cút, bồcâu, chim cảnh Đến ngày 08 tháng 01 năm 2006 tất cả các tỉnh thành trong cảnước đã tạm thời khống chế được dịch và không phát sinh dịch sau 21 ngày(Tô Long Thành, 2006) [27]

- Đợt dịch thứ 4 bắt đầu và kéo dài trong suốt năm 2007

Sau hơn một năm Việt Nam không có dịch thì ngày 19 tháng 12 năm

2006 dịch cúm gia cầm lại tái phát ở các địa phương thuộc 2 tỉnh Bạc Liêu và

Cà Mau đưa Việt Nam lên nguy cơ mới của đại dịch lần thứ 4 (Lê Văn Năm,2007) [21] Dịch không tập trung mà rải rác, lẻ tẻ ở khắp nơi và có thể chianhiều đợt Đợt 1 từ 19/12/2006 đến 7/3/2007 dịch lây lan ra 83 xã phườngcủa 33 quận, huyện thuộc 11 tỉnh, thành gồm Cà Mau, Bạc Liêu, Hậu Giang,Cần Thơ, Trà Vinh, Vĩnh Long, Kiên Giang, Sóc Trăng, Hà Nội, Hải Dương

và Hà Tây Tổng số gia cầm mắc bệnh, chết và tiêu hủy là 103.094 con,trong đã có 13.622 gà; 89.472 ngan, vịt Đợt 2 từ 1/5/2007 đến 23/8/2007,dịch xảy ra đầu tiên tại Nghệ An sau đó lan ra 167 xã, phường của 70quận, huyện thuộc 23 tỉnh thành trong cả nước Tổng số gia cầm mắc bệnh,chết và tiêu hủy là 294.849 con gia cầm trong đó có 21.525 gà bằng 7,31%,264.549 vịt b ằ n g 8 9 , 7 1 % và 8.775 ngan bằng 2,98% Nặng nhất là NamĐịnh với 26 xã phường thuộc 6 huyện thành và Nghệ An 26 xã phường thuộc

5 huyện thành Riêng tỉnh Đồng Tháp dịch đã 3 lần xuất hiện trên đàn giacầm (Bộ Nông nghiệp và phát triển nông thôn, 2007) [3]

- Từ đầu năm 2008 đến nay dịch vẫn xảy ra lẻ tẻ, rải rác với 74 đàngia cầm tại 57 xã, phường của 40 huyện thị thuộc 21 tỉnh phát dịch Tổng sốgia cầm tiêu hủy là 60.090 con, trong đó có 23.498 gà, 36.592 thủy cầm.(Văn Đăng Kỳ, 2008) [32]

Về phân bố địa lý: Các đợt dịch phát ra tập trung ở khu vực Đồng bằng

Sông Cửu Long và Đồng bằng Sông Hồng Những vùng này có nhiều hệthống sông ngòi, kênh rạch, mật độ chăn nuôi cao, tổng đàn gia cầm lớn vàviệc buôn bán, vận chuyển, tiêu thụ gia cầm cao hơn các vùng khác

Về thời gian xảy ra dịch: Dịch phát ra nặng vào vụ Đông Xuân, cao

điểm vào cuối tháng 1 đầu tháng 2 Trong thời gian này thời tiết thay đổi, độ

ẩm cao, nhiệt độ thường xuống thấp, tạo điều kiện thuận lợi cho virus cúm tồntại, phát triển và lây lan Đồng thời giai đoạn này là lúc mật độ chăn nuôi giacầm và hoạt động vận chuyển gia cầm, sản phẩm gia cầm diễn ra sôi độngnhất trong năm cũng là điều kiện thuận lợi cho sự bùng phát và lây lan dịch

Về loài mắc bệnh: Đợt dịch thứ nhất và thứ hai tỉ lệ gà mắc bệnh cao

hơn vịt, ngan Nhưng đợt dịch thứ 3 đã có sự thay đổi lớn khi các thống kêcho thấy tỉ lệ mắc bệnh, chết và tiêu huỷ ở vịt cao gần gấp 2 lần gà Điều nàycho thấy mầm bệnh đã lây lan, tồn tại trong đàn thuỷ cầm, có thể tăng độc lực

và bột phát thành đợt dịch thứ 3 Tỉ lệ dương tính huyết thanh ở đàn thuỷ cầmtăng từ 15% trong đợt 2 lên 39,6% trong đợt 3

Về loại hình, quy mô và mức độ dịch: Dịch phát ra ở tất cả các loại hình

chăn nuôi, tỉ lệ mắc bệnh cao nhất ở loại hình chăn nuôi hỗn hợp các loài gia

cầm (đặc biệt chăn nuôi gà lẫn với vịt) và giảm dần ở những trại chăn nuôi gà

có số lượng lớn Qui mô của dịch đợt 1 là lớn nhất, trong đợt 2, 3 và 4 mặc dù

dịch vẫn xảy ra ở nhiều tỉnh, thành phố nhưng quy mô giảm đi nhiều (Dự án

sử dụng vacxin ) [9]

* Tình hình dịch cúm gia cầm ở Bắc Ninh

Tại Bắc Ninh, bệnh cúm gia cầm xuất hiện lần đầu tiên vào ngày27/1/2004 tại thành phố Bắc Ninh, rồi nhanh chóng lan sang các huyện kháctrong tỉnh Trận đại dịch gần đây nhất xảy ra vào ngày 14/11/2005 làm chết

và tiêu hủy 44102 con gia cầm trong đó 39666 con gà và 4336 con ngan, vịt

1.4 ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC CỦA VIRUS CÚM TYP A

1.4.1 Đặc điểm cấu tạo, hình thái và cấu trúc

Virus cúm gia cầm thuộc họ Orthomyxoviridae, là họ virus đa hình

thái, có vỏ ngoài, genom là ARN sợi đơn, âm, phân đoạn (Swayne D.E,Suarez D.L, 2000) [48] Trước đây các virus Orthomyxo và Paramyxo đềuđược xếp chung vào một họ là Myxoviridae do chúng có cấu trúc và khả nănggây bệnh giống nhau, nhưng về sau chúng được tách ra thành 2 họ riêng làOrthomyxoviridae và Paramyxoviridae do phát hiện thấy chúng có nhiều đặcđiểm cơ bản không giống nhau Chữ “Myxo” có nghĩa là chất nhầy, nguồngốc của phần này là do phần ngoài của protein của virus có mang các loạiđường và phần ngọn của các mạch nối đường chính là một loại acid: AcidSialic hay còn gọi là acid neuraminidic Chữ “Ortho” có nghĩa là chính thống,nói lên loại Myxovirus được phát hiện và đặt tên trước

Có ba type virus cúm được ký hiệu là A, B và C được phân biệt vớinhau qua bản chất kháng nguyên NP (Nucleoprotein) và M (Matric antigen).Type A gây cúm ở tất cả các loài gia cầm, type B và C gây cúm điển hình ởngười và động vật (Lê Văn Năm, 2004) [18] Tuy nhiên các nhà nghiên cứucũng tìm thấy virus cúm type A ở người, lợn, ngựa và một số động vật có vú khác.Theo Nguyễn Tiến Dũng (2006) [12] thì virus cúm thuộc họ Orthomyxoviridaeđược chia làm 5 giống khác nhau dựa trên cấu trúc kháng nguyên của hai loạiprotein NP và M, đó là Influenza A, Influenza B, Influenza C, Thogotovirus

và Isavirus

Virus cúm gia cầm có kích thước trung bình, đường kính 80-120nm,dài 200 - 300 nm, trọng lượng phân tử 4,6-6,4 Dal Trên kính hiển vi điện tửtương phản âm có dạng gần như hình cầu hoặc các hạt mỏng, một số ít virus

có dạng hình sợi có thể dài hơn một vài nanomet (nm), có vỏ bọc làglycoprotein gồm protein gây ngưng kết hồng cầu (kháng nguyên bề mặt) -

Haemagglutinin (viết tắt là H) và protein enzym có thụ thể - Neuraminidae(viết tắt là N) Đây là kháng nguyên có vai trò quan trọng trong miễn dịch bảo

hộ và có tính đa dạng cao

Kawaoka (1988) và Murphy mô tả khá chi tiết hình thái và cấu trúc củavirus cúm và nhấn mạnh rằng ARN của virus là sợi đơn, âm và chia thành 8đoạn kế tiếp nhau mang 10 mật mã cho 10 loại virion protein khác nhau: HA,

NA, NP, M1, M2, PB1, PB2, PA, NS1 và NS2 Tất cả 8 đoạn của sợi ARN cóthể tách và phân biệt rõ ràng thông qua phương pháp điện di polyacrilamidgel Các protein có vỏ bọc nối 8 đoạn này với nhau, được bọc bên ngoài bằngcác protein và có màng lipit ở ngoài cùng

Người ta lấy hai loại protein bề mặt là H (Haemagglutinin) và N(Neuraminidae) để phân loại virus cúm type A Theo các tác giả Tô LongThành (2004) [24], Ilaria Capua và Stefano Marangon (2004) [31], NguyễnTiến Dũng và cộng sự (2005) [10], Hoàng Thuỷ Long và Nguyễn Thị HồngHạnh (2005) [17], Bùi Quý Huy (2004) [15], Phạm Sĩ Lăng (2005) [16] có 15loại protein H khác nhau về tính kháng nguyên được ký hiệu từ H1 đến H15

và có 9 loại protein N cũng khác nhau về tính kháng nguyên được ký hiệu từN1 đến N9 Theo Lê Văn Năm (2007)[21], Lisa F.P.Ng và cộng sự (2007)[44] có 16 loại protein H và 9 loại protein N Năm 2005, Fouchier và cộng sự[42] đã phân lập được protein H16 từ Hải Âu đen ở Hà Lan và Thuỵ Điển do

đó có tổng cộng là 16 subtype HA (Nguyễn Tiến Dũng, 2006) [12]

Protein Haemagglutinin hay HA là một glucoprotein dưới dạng Trimer.Mỗi monomer gồm hai phần là HA1 và HA2 Hai phần của protein này đượcnối với nhau bằng một chuỗi các acid amine trong đó có arginin Tại vị trí nàycác men cắt protein có sẵn trong cơ thể (trên các màng niêm mạc) của ký chủ

sẽ cắt HA ra làm đôi, tạo điều kiện cho virus bám vào thụ thể của tế bào ký

chủ Do vậy đoạn này được gọi là cleavage site của HA Do các emzymprotease chỉ cắt protein tại các acid amine basic nên nếu vị trí này càng nhiềuacid amine basic thì khả năng bị cắt đôi của HA lại càng cao dẫn đến khảnăng để virus bám vào thụ thể tế bào và bắt đầu quá trình xâm nhập vào tếbào càng lớn Dựa trên cơ sở này người ta đã phân loại virus có độc lực cao làloại virus có nhiều acid amine basic tại vị trí cleavage và ngược lại.

Protein NA chính là một loại enzym có tên là Neuraminidae Khi virusxâm nhập vào cơ thể, các mạch đường của protein HA và thụ thể của tế bào sẽliên kết với nhau, gắn virus vào bề mặt tế bào Sau đó nhờ NA cắt mối liênkết này đi làm cho virus có thể vào bên trong, tiếp theo HA được cắt đôi hoặcnếu không như vậy thì virus sẽ bị rời ra khỏi tế bào

Thành phần hoá học của virus gồm ARN chiếm từ 0,8 - 1,1%, proteinchiếm 70 - 75%, lipid chiếm 20 - 24% và 5 - 8% là hydrocacbon

Thành phần chính protein của virus chủ yếu là glycoprotein Lipid tậptrung ở màng virus và chủ yếu là lipid có gốc photpho, số còn lại là cholesterol,glucolipid và một số ít hydrocacbon gồm các loại men như galactose, mannose,ribose, fructose, glucosamin

Acid nhân của virus cúm gồm 8 đoạn gen có cấu tạo là ARN chuỗi đơn

âm Chính vì bản chất các đoạn gen của virus là các đoạn ARN do đó không

có cơ chế tự sửa chữa khi sao chép sai lệch nên chúng rất dễ bị biến đổi Đây

là điểm đặc biệt nguy hiểm và phức tạp của virus cúm gia cầm mà con ngườikhông thể dự đoán trước được, điều này gây khó khăn cho công tác phòngchống dịch bệnh và đe doạ sức khoẻ con người

Theo Voyles (2002) [50] thì có 8 đoạn ARN sợi đơn, có chiều âm, đặctính này cho phép sự tổng hợp di truyền trong một tế bào bị nhiễm hai haynhiều virus và tạo ra nhiều loại virus mới khác với virus ban đầu

Hình 1.1 Cấu trúc virus cúm A H5N1 Hình 1.2 Virus H5N1 nhìn qua KHV

vi điện tử

1.4.2 Đặc tính kháng nguyên của virus cúm typ A

Các loại kháng nguyên được nghiên cứu nhiều nhất là protein nhân(Nucleoprotein, NP), protein đệm (matrix protein, M1), protein gây ngưng kếthồng cầu (Hemagglutinin, HA) và protein enzim cắt thụ thể (Neuraminidase,NA) NP và M1 là protein thuộc loại hình kháng nguyên đặc hiệu nhóm(genus - specific antigen), ký hiệu là gs kháng nguyên; HA và NA là proteinthuộc loại hình kháng nguyên đặc hiệu typ và dưới typ (typ - specificantigen), ký hiệu là ts kháng nguyên

Một đặc tính quan trọng là virus cúm có khả năng gây ngưng kết hồngcầu của nhiều loài động vật Đó là sự kết hợp giữa mấu lồi kháng nguyên HAtrên bề mặt của virus cúm với thụ thể có trên bề mặt hồng cầu, làm cho hồngcầu ngưng kết với nhau tạo thành mạng ngưng kết thông qua cầu nối virus,

gọi là phản ứng ngưng kết hồng cầu HA (Hemagglutination test).

Kháng thể đặc hiệu của kháng nguyên HA có khả năng trung hòa cácloại virus tương ứng, chúng là kháng thể trung hòa có khả năng triệt tiêu virusgây bệnh Nó có thể phong toả sự ngưng kết bằng cách kết hợp với khángnguyên HA Do vậy thụ thể của hồng cầu không bám vào được để liên kết tạo

thành mạng ngưng kết Người ta gọi phản ứng đặc hiệu KN - KT có hồng cầutham gia là phản ứng ngăn cản ngưng kết hồng cầu HI (Hemagglutinationinhibition test).

Phản ứng ngưng kết hồng cầu (HA) và phản ứng ngăn cản ngưng kếthồng cầu (HI) được sử dụng trong chẩn đoán cúm gia cầm

Theo Ito và Kawaoka (1998) [56], (Q) sự phức tạp trong diễn biếnkháng nguyên của virus cúm là sự biến đổi và trao đổi trong nội bộ gen dẫnđến sự biến đổi liên tục về tính kháng nguyên (Horimoto và cộng sự, 1995)[55] (Q) Có 2 cách biến đổi kháng nguyên của virus cúm:

- Đột biến điểm (đột biến ngẫu nhiên hay hiện tượng trôi trượt, lệch lạc

về kháng nguyên - Antigenic drift) Đây là kiểu đột biến xảy ra liên tụcthường xuyên trong quá trình tồn tại của virus mà bản chất là do có sự thayđổi nhỏ về trình tự nucleotit của gen mã hóa, đặc biệt đối với kháng nguyên H

và kháng nguyên N Kết quả là tạo ra các phân type cúm hoàn toàn mới cótính thích ứng với loài vật chủ khác nhau và có mức độ độc lực gây bệnh khácnhau Chính nhờ sự biến đổi này mà virus cúm A tạo nên 16 biến thể gen HA(H1- H16) và 9 kháng nguyên N (N1 - N9) (Cục thú y, 2005) [8] (Q)

- Đột biến tái tổ hợp di truyền (hiện tượng thay ca - Antigenic Shift).Hiện tượng tái tổ hợp gen ít xảy ra hơn so với hiện tượng đột biến điểm Hiệntượng này chỉ xảy ra khi 2 hoặc nhiều loại virus cúm khác nhau cùng nhiễmvào một tế bào chủ do sự trộn lẫn 2 bộ gen của virus Điều này tạo nên sự saikhác cơ bản về bộ gen của virus cúm đời con so với virus bố mẹ Khi hiệntượng tái tổ hợp gen xuất hiện có thể sẽ gây ra các vụ dịch lớn cho người vàđộng vật với mức độ nguy hiểm không thể lường trước được Vụ dịch năm

1918 - 1919 làm chết 40 - 50 triệu người mà tác nhân gây bệnh là virus H1N1

từ lợn lây sang người kết hợp với virus cúm người tạo ra chủng virus mới có

độc lực rất mạnh (Phạm Sỹ Lăng, 2004) [27].(Q)

Do hạt virus cúm A có cấu trúc là 8 đoạn gen nên về lý thuyết từ 2 virus

có thể xuất hiện 256 kiểu tổ hợp của virus thế hệ sau (Cục thú y, 2004) [7].(Q)

Khi nghiên cứu về đặc tính kháng nguyên của virus cúm thấy giữa cácbiến thể tái tổ hợp và biến chủng subtyp về huyết thanh học không hoặc rất ít

có phản ứng chéo Đây là điểm trở ngại lớn cho việc nghiên cứu nhằm tạo ravacxin cúm để phòng bệnh cho người và động vật (Ito và cộng sự, 1998 [57];Kawoaka.I, 1991 [58]).(Q)

Khi xâm nhập nhiễm vào cơ thể động vật, virus cúm A kích thích cơthể sản sinh ra kháng thể đặc hiệu, trong đó quan trọng hơn cả là kháng thể

kháng HA, chỉ có kháng thể này mới có vai trò trung hòa virus và cho bảo hộ

miễn dịch Một số kháng thể khác có tác dụng kìm hãm sự nhân lên của virus,kháng thể kháng M2 ngăn cản chức năng M2, không cho quá trình bao góivirus xảy ra (Lu.X và cộng sự, 1999) [61]; (Seo.S và cộng sự, 2001) 67].(Q)

1.4.3 Quá trình nhân lên và gây bệnh của virus

Virus xâm nhập vào tế bào nhờ chức năng của protein HA thông quahiện tượng ẩm bào (endocytosis) qua cơ chế trung gian tiếp hợp thụ thể Thụthể liên kết tế bào của virus cúm có bản chất là axit sialic sẽ cắm sâu vàoglycoprotein hay glycolipit của vỏ virus

Trong khoang ẩm bào, khi nồng độ pH được điều hòa để giảm xuốngmức thấp thì các enzim peptidase và enzim protease của tế bào tấn công và cắtrời protein HA trên màng virus, làm hợp nhất màng tế bào và virus, giảiphóng nucleocapsid Các nucleocapsid đi vào trong nguyên sinh chất rồi vàotrong nhân tế bào, chuẩn bị thực hiện quá trình tổng hợp ARN là nguyên liệu

hệ gen cho các virion mới

Ngay sau quá trình trên, hệ thống enzim sao chép của virus lập tức tạonên các ARN thông tin (mARN) Các phân đoạn ARN hệ gen được “mũ hóa”

ở 10 - 13 nucleotit đầu 5’ với nguyên liệu lấy từ ARN tế bào nhờ vào hoạttính enzim PB2 của virus Quá trình tổng hợp mARN đặc hiệu của virus cóthể bị kìm hãm bởi Actinomycin D hoặc các hợp chất Amanitin Các mARNsau sao chép trong nhân được chuyển vận ra nguyên sinh chất, được riboxomtrợ giúp tổng hợp nên protein cấu trúc và protein nguyên liệu Protein H, N,M2, ở lại trong nguyên sinh chất, được vận chuyển xuyên qua hệ thống võngmạc nội mô (RE) và hệ golgi sau đó được cắm lên màng tế bào nhiễm ProteinNS1, NP, M1 được chuyển vận vào nhân để bao bọc đệm lấy nguyên liệuARN hệ gen mới được tổng hợp [13, 44].(D)

Từ sợi ARN âm đơn của virus ban đầu thông qua cơ chế bổ xung thìmột đoạn ARN dương toàn vẹn được tạo thành Sợi dương mới này lại làmkhuôn để tổng hợp nên sợi âm ARN mới làm nguyên liệu Một số sợi âmARN mới làm nguyên liệu để lắp ráp virion mới, số khác lại làm khuôn đểtổng hợp ARN theo cơ chế như với sợi ARN của virus đầu tiên

Các sợi ARN hệ gen được tạo ra là một sợi hoàn chỉnh về độ dài vàđược các protein đệm (NS1, M1, NP) bao gói tạo nên ribonucleocapsid(nucleoriboprotein) ngay trong nhân tế bào nhiễm, sau đó được chuyển vận ranguyên sinh chất rồi được chuyển vận đến vị trí màng tế bào có sự biến đổiđặc hiệu với virus

Cuối cùng là sự kết hợp của tổ hợp nucleoriboprotein với các proteincấu trúc (HA, NA, M2) tạo nên các hạt virus hoàn chỉnh mới và được giảiphóng ra khỏi tế bào nhiễm theo hình thức nảy chồi

Quá trình xâm nhập, phân chia và phát triển của virus diễn ra liên tụclàm cho số lượng hạt virus tăng lên theo cấp số nhân Tế bào chủ không bịdung giải, nhưng sẽ chết đi do mất trạng thái cân bằng vốn có, đồng thời bịđầu độc bởi các sản phẩm sinh ra Tế bào đích bị phá huỷ hàng loạt Sự suygiảm hô hấp khiến sức đề kháng của cơ thể giảm sút rõ rệt, làm kế phát các

bệnh vi khuẩn, virus khác (Alexander, 1993) [45].(Q)

1.4.4 Đặc tính nuôi cấy và lưu giữ virus cúm gà

Virus cúm gia cầm phát triển tốt trong xoang niệu nang của phôi trứng

gà ấp 9-11 ngày Tiêm 0,1-0,3 ml huyễn dịch bệnh phẩm như não, phổi, ruột,khí quản vào xoang niệu mô của phôi gà 9-11 ngày tuổi, hàn kín lại rồi tiếptục cho ấp ở 370C trong vòng 2-3 ngày Một số ít chủng virus có độc lực cao

có thể làm chết phôi trong vòng 18-24 giờ, nước trứng thu hoạch để ở 40C quamột đêm, virus nhân lên trong nước trứng có hiện tượng ngưng kết hồng cầu

gà Nếu không gây ngưng kết thì cần lấy nước trứng nói trên tiêm lần sau chophôi trứng gà 9-11 ngày tuổi Khả năng gây bệnh của virus rất cao nếu bảoquản nước phôi đó ở nhiệt độ -700C hoặc khi cho đông khô (Lê Văn Năm,2004) [28].(Q)

Virus cúm gà cũng phát triển tốt trong tế bào xơ phôi gà (CEF) và tếbào thận chó MDCK (Madin- Darby Canine Kidney cell) với điều kiện môitrường nuôi cấy tế bào không chứa trypsin (Lê Văn Năm, 2004) [28].(Q)

1.4.5 Độc lực của virus cúm gia cầm

Độc lực hay còn gọi là khả ăng gây bệnh của virus hay của một sinhvật Tuy nhiên cần chú ý phân biệt giữa độc lực với khả năng gây nhiễm vàtính dễ lây ở chổ độc lục là khả năng gây ra vết thương, các triệu chứng vàkhả năng gây nguy hiểm đến tính mạng sống của ký chủ Virus H5N1 có tínhlây nhiễm cho người thấp nhưng khi ở người đã bị nhiễm thì phát bệnh rấtnặng và có tỷ lệ tử vong cao, tức là nó có độc lực cao đối với con người Độclực của virus có thể xác định bằng 2 phương pháp:

- Độc lực của virus cúm thường được xác định thông qua trình tự cácnucleotide của cleavage site Do các enzym protease chỉ cắt protein tại cácacid amine basic nên nếu vị trí này càng nhiều acid amine basic thì khả năng

bị cắt đôi của HA càng lớn, dẫn đến khả năng để virus bám vào thụ thể tế bào

và bắt đầu xâm nhập vào tế bào càng lớn Dựa vào đó người ta phân loại viruscúm có độc lực cao là loại virus cúm có nhiều acid amine basic tại vị trícleavage site và ngược lại virus cúm có độc lực thấp là loại có ít acid aminebasic tại vị trí cleavage site.

- Phương pháp thứ hai thực tế là các xét nghiệm trong phòng thínghiệm nhưng được tiến hành trên động vật Các nhà khoa học sử dụngphương pháp gây bệnh cho gà 3 - 6 tuần tuổi bằng cách tiêm tĩnh mạch nướctrứng đã được gây nhiễm virus Sau đó đánh giá mức độ nhiễm bệnh của gà

để cho điểm (chỉ số IVPI- Intra Venous Pathogenicity Index) Điểm tối đa là 3điểm và đó là virus có độc lực cao nhất Theo quy định của Tổ chức Thú yThế giới (OIE), virus nào có chỉ số IVPI từ 1,2 trở lên thuộc loại có độc lựccao, ngược lại nếu chỉ số này dưới 1,2 thì virus được coi là nhóm có độc lựcthấp (Dẫn theo Nguyễn Tiến Dũng, 2004 [12]; OIE, 1992 [67]).(Q) Ngoài ra,trên thực tế trong nhiều trường hợp bệnh lý, một số virus cúm được coi là cóđộc lực trung bình

* Nhóm virus có độc lực cao(HPAI):

Tại hội thảo Thế giới đầu tiên về bệnh cúm gà năm 1981 Bankowski vàcộng sự đã công bố rằng virus cúm gà có kháng nguyên bề mặt H7 thuộc loạivirus có độc lực cao Nhưng ở Pensylvania (Mỹ) người ta đã chứng kiến trậndịch cúm gà đã gây chết 75% số đầu con, nhưng khi phân lập virus gây bệnh

là H5N2 lại không có kháng nguyên bề mặt H7 Điều này đã gây nhiều tranhcãi giữa các nhà khoa học Để giải quyết vấn đề này các nhà khoa học đã dựavào các chỉ số sau đây để khẳng định virus cúm gà có độc lực cao - HPAIV(Hight Pathogenic Avian Influenza Virus): sau 10 ngày tiêm tĩnh mạch 0,2 mlnước trứng gà đã gây nhiễm virus được pha loãng với tỷ lệ 1/10 cho gà mẫncảm từ 3 - 6 tuần tuổi phải làm chết từ 75% - 100% số gà thực nghiệm Đồngthời virus gây bệnh cúm (có thể là type phụ) phải làm chết từ 20% số gà mẫn

cảm thực nghiệm và phát triển tốt trên tế bào xơ phôi trong môi trường nuôicấy không có trypsin (Lê Văn Năm, 2004)[19](T).

Virus độc lực cao gây bệnh nhanh, thời gian ủ bệnh ngắn, tỷ lệ gia cầmmắc bệnh chết cao, diễn biến phức tạp và có xu hướng lây lan nhanh ở tất cảcác loại gia cầm từ 4 tuần tuổi trở lên trên vùng địa lý rộng lớn với biểu hiệntiêu chảy, hô hấp, thần kinh và giảm đẻ rất nặng

* Nhóm virus có độc lực trung bình:

Là những chủng virus gây dịch cúm gà với triệu chứng lâm sàng rõ rệtnhưng gây chết gà không quá 15% số gà bị nhiễm bệnh tự nhiên hoặc khônggây quá 20% số gà mẫn cảm thực nghiệm

* Nhóm virus có độc lực thấp(LPAI):

Là những virus phát triển tốt trong cơ thể gà nhưng không gây ra dịchcúm với các triệu chứng lâm sàng và không tạo ra bệnh tích đại thể, tốc độ lâylan chậm, tỷ lệ ốm và chết không đáng kể (Lê Văn Năm,2005)[20](T) Tuynhiên đây là mối nguy hiểm rất lớn cho ngành chăn nuôi gia cầm và đe dọatính mạng con người do chúng có khả năng biến chủng để tạo thành một loạivirus mới có độc lực cao hơn và nguy hiểm hơn

Trong thực tế người ta chia virus cúm gà ra làm 2 loại: Loại virus cóđộc lực thấp - LPAI (Light Pathogenic Avian Influenza) Loại virus có độclực cao - HPAI (Highly Pathogennic Avian Influenza)

Cho đến nay người ta thừa nhận chỉ có 2 biến chủng virus có cấu trúckháng nguyên H5, H7 được coi là loại có độc lực cao gây bệnh ở gia cầm,nhưng không phải tất cả các chủng mang gen H5, H7 đều gây bệnh(Horimoto.T và cộng sự, 1995) [55].(Q)

Thực tế chứng minh rằng các chủng có độc lực thấp trong quá trình lưuhành trong thiên nhiên và trong đàn thủy cầm có thể đột biến nội gen hoặc độtbiến tái tổ hợp để trở thành các chủng có độc lực cao - HPAI (Collins RA vàcộng sự, 2002 [52]; Mo.I.P và cộng sự, 1997 [64]).(Q)

Theo Mary J Pantin-Jackwood và cộng sự (2008) [31],(Q) tất cả cácvirus cúm phân lập được của Việt Nam trong năm 2005 - 2007 không chỉ cóđộc lực cao với gà, mà còn gia tăng đáng kể độc lực đối với vịt so với cácvirus phân lập trước đó Sự tăng độc tính này là hệ quả của sự gia tăng virusnhân lên trong các cơ quan nội tạng và sự tăng thích nghi ở diện rộng hơn củavirus đối với các cơ quan nội tạng Sự thay đổi độc tính của các virus đanglưu hành có ảnh hưởng lớn tới dịch tễ học của virus vỡ công tác khống chế

1.4.6 Phân loại virus

Theo Nguyễn Tiến Dũng (2008) [15],(Q) virus cúm gia cầm được phânloại như sau:

* Phân loại theo kháng nguyên:

Khi dùng phản ứng kết tủa trên thạch hoặc kết hợp bổ thể, người ta thấy

có 3 nhóm virus khác nhau và đặt tên cho 3 nhóm virus là A, B và C Vàonăm 1941 Hirst đã phát hiện thấy virus cúm có khả năng ngưng kết hồng cầu,khi ông quan sát việc thu hoạch virus sau khi cấy trên trứng gà có phôi và khảnăng này bị kháng thể kháng virus cúm ngăn trở hay ức chế Dùng phản ứngnày người ta thấy virus cúm typ A lại có nhiều loại khác nhau Trên cơ sở kếtquả của phản ứng ức chế ngưng kết hồng cầu, khi phát hiện ra rằng kháng thểkháng ngưng kết hồng cầu là kháng thể được tạo ra để chống lại protein HAnhưng không ức chế toàn bộ các virus typ A Từ đó virus typ A được chiathành các typ phụ (subtype) trên cơ sở có phản ứng HI đặc hiệu

Cho đến năm 2004, tổng số subtyp chia theo khả năng ngưng kết hồngcầu là 16 Với protein NA, người ta phát hiện ra 9 loại NA có tính khángnguyên khác nhau và được đặt tên là từ N1 cho đến N9 Virus cúm typ A làkết quả của sự tổ hợp giữa 2 loại protein này Chính vì vậy chúng ta có viruscúm đặt tên là HxNy (x có giá trị từ 1 đến 16 và y có giá trị từ 1 đến 9) Việcphân loại virus như trên do Ủy ban định danh quốc tế về virus tiến hành

Các loại virus cúm có cùng danh hiệu nhưng không chắc có cùng nguồn

gốc và về gen di truyền chúng có sự khác nhau, nói cách khác là rất đa dạng.Với virus cúm H5N1 đang gây bệnh đại dịch cho gia cầm, có nguồn gốc từChâu Á và được gọi tên đầy đủ là “ virus H5N1 dòng Châu Á” nhằm phânbiệt với các loại H5N1 khác Virus H5N1 dòng Châu Á lại được phân loại chitiết hơn nữa Có 2 kiểu phân loại virus H5N1 dòng Châu Á (theo quy định củaWHO) đó là:

- Phân loại theo kiểu gen: Virus cúm dòng Châu Á phải có 2 đoạn

RNA chịu trách nhiệm tổng hợp Protein HA và NA có nguồn gốc từ viruscúm H5N1 phân lập từ ngỗng ở Quảng Đông (Trung Quốc) vào năm 1996.Tùy theo nguồn gốc của 6 đoạn gen còn lại mà người ta đặt tên kiểu gen choloại virus đó

- Phân loại theo nhóm kháng nguyên (clade): do sự biến đổi di truyền

liên tục nên protein HA của virus cúm H5N1 dòng Châu Á có tính khángnguyên thay đổi

Thí dụ: làm phản ứng HI (ức chế ngưng kết hồng cầu) giữa virus chủngA/Goose/Guangdong/1/96 với kháng thể kháng chính nó, ta có hiệu giá khángthể HI là 8log2 chẳng hạn Lấy một virus khác (H5N1 dòng Châu Á) làm phảnứng với kháng thể này, hiệu giá kháng thể là 7 log2 người ta vẫn cho virus đó

là cùng nhóm kháng nguyên Tuy nhiên, nếu hiệu giá kháng thể lệch 2log trởlên thì virus sẽ thuộc nhóm kháng nguyên khác

1.4.7 Sức đề kháng của virus cúm gia cầm

Virus cúm gia cầm tương đối nhạy cảm với các chất hóa học nhưformalin, ete, sodium desoxycholat, hydroxylamone

Virus không bền vững với nhiệt độ: Ở 50- 600C chỉ trong vài phút làvirus mất hết độc tính, ở 700C virus nhanh chóng bị tiêu diệt Ở nhiệt độ thấpvirus có thể tồn tại trong phân ít nhất là 3 tháng Trong nước, virus có thểsống tới 4 ngày ở nhiệt độ 300C và trên 30 ngày ở nhiệt độ 00C Đặc biệt là

virus có thể tồn tại không hạn định ở nơi nguyên liệu bị đông lạnh Trong điềukiện lạnh 40C virus vẫn giữ được khả năng gây bệnh trong phân tới 30- 35ngày và 7 ngày ở nhiệt độ 200C Virus giữ tính gây bệnh lâu nhất trong vòng

48 giờ trên bề mặt các vật thể(Bean và cộng sự, 1982)[34](T)

Trong phủ tạng gà, virus tồn tại từ 24- 39 ngày Ánh nắng chiếu trựctiếp virus sống được 40 giờ còn trong điều kiện ánh sáng chiếu ở mức bìnhthường sống được 15 ngày Theo WHO (2004)[52](T) nghiên cứu gần đâynhất thấy rằng virus H5N1 phân lập từ vịt có thể sống sót được 6 ngày ở nhiệt

độ 370C

Do cấu trúc vỏ ngoài của virus là lipit nên chúng mẫn cảm với các chấtdung môi và chất tẩy rửa như formaldehyde, axit,  - propiolacton, ethanol.Sau khi tẩy vỏ, các hóa chất như phenolic, NH4+, axit loãng, natrihypochlorit

và hydroxylanine có thể phá hủy virus cúm gia cầm Người ta thường dùngcác hóa chất này như các chất sát trùng hữu hiệu để tẩy uế chuồng trại, dụng

cụ và các thiết bị chăn nuôi [16].(D)

* Miễn dịch không đặc hiệu:

Miễn dịch không đặc hiệu có vai trò quan trọng khi miễn dịch đặc hiệuchưa phát huy tác dụng Khi mầm bệnh (virus cúm) xâm nhập và cơ thể giacầm, ngay lập tức chúng sẽ gặp phải rất nhiều những hàng rào bảo vệ ngăncản làm giảm số lượng và khả năng gây bệnh của virus Những hàng rào bảo

vệ đó chính là yếu tố miễn dịch đầu tiên của cơ thể gia cầm Chúng rất pháttriển, bao gồm:

- Hàng rào vật lý như da, niêm mạc và các dịch tiết có tác dụng bảo vệ

cơ thể ngăn cản tác nhân gây bệnh xâm nhập vào cơ thể

- Khi mầm bệnh qua hàng rào da và niêm mạc nó gặp phải hàng ràohóa học là kháng thể dịch thể tự nhiên không đặc hiệu

+ Bổ thể: Bổ thể có tác dụng làm tan màng vi khuẩn, làm tăng khả năngthực bào của đại thực bào (opsonin hóa), ngoài ra bổ thể cũng có vai trò nhấtđịnh trong cơ chế đáp ứng miễn dịch đặc hiệu (nhiều trường hợp sự tương tácgiữa kháng nguyên và kháng thể cần sự có mặt của bổ thể) (Nguyễn Như Thanh,1997) [30].(Q)

+ Interferol (IFN): Do nhiều loại tế bào tiết ra nhưng nhiều nhất là tếbào diệt tự nhiên (NK) Khi Interferol được sản sinh ra, nó gắn vào tế bào bêncạnh và cảm ứng tế bào đó sản sinh ra protein AVP (anti virus protein), do đókhi virus xâm nhập vào tế bào nhưng không nhân lên được

- Hàng rào tế bào gồm:

+ Tiểu thực bào, quan trọng nhất là bạch cầu đa nhân trung tính chiếm

60 - 70% tổng số bạch cầu ở máu ngoại vi, nó thực bào những phân tử nhỏ và

vi khuẩn ngoài tế bào

+ Đại thực bào là các tế bào lớn có khả năng thực bào, khi được hoạthóa nó sẽ nhận biết và loại bỏ các vật lạ, ngoài ra nó còn giữ vai trò quantrọng trong sự trình diện kháng nguyên tới tế bào T và kích thích tế bào T sảnsinh ra IL - 1 Đại thực bào còn tiết ra interferol có hoạt tính kháng virus,lysozyme và các yếu tố khác có tác dụng kích thích phản ứng viêm

+ Các tế bào diệt tự nhiên (NK) là một quần thể tế bào lâm ba cầu cónhiều hạt với kích thước lớn Các tế bào này có khả năng tiêu diệt các tế bào

đã bị nhiễm virus và các tế bào đích đã biến đổi, nó còn tiết ra interferol làmtăng khả năng thực bào của đại thực bào

* Miễn dịch đặc hiệu:

Khi kháng nguyên xâm nhập vào cơ thể, cơ thể sẽ sản sinh ra kháng thểđặc hiệu để loại trừ kháng nguyên đó Kháng thể đặc hiệu có thể là kháng thểdịch thể (miễn dịch dịch thể) hoặc có thể là kháng thể tế bào - limpho T (miễndịch tế bào).

- Miễn dịch đặc hiệu dịch thể: Do tế bào limpho B đảm nhiệm, nó tiết

ra các loại globulin miễn dịch (Ig) gồm có 3 lớp chính là IgM, IgG, IgA IgGcủa gia cầm lớn hơn của động vật có vú nên thường được gọi là IgY

Các limpho bào bắt nguồn từ tế bào nguồn ở tủy xương đi tới túiFabricius(Fab), ở đây chúng được huấn luyện để trở thành các limpho B, sau

đó di tản đến các cơ quan limpho ngoại biên, chúng khu trú ở các tâm điểmmầm và vùng tủy của lách, hạch bạch huyết

Mỗi tế bào B đều có một kháng thể khác nhau trên bề mặt của nó Khi

tế bào B đã có thể sản sinh IgM trên bề mặt thì nó cũng có thể có khả năngsản sinh một kháng thể khác lớp khác, nhưng dù là lớp nào thì tất cả khángthể do tế bào đó sản sinh ra đều có khả năng nhận biết cùng loại khángnguyên ấy mà thôi Tức là vùng Fab của phân tử kháng thể không thay đổi màchỉ có vùng Fc là khác nhau tùy vào lớp kháng thể

Trong hạch lâm ba các limpho B có thể gặp một kháng nguyên và đượcnhận biết bởi các kháng thể có trên bề mặt của chúng Sau khi đã nhận biếtkháng nguyên và được kích thích bởi các cytokines do tế bào T tiết ra, chúngđược biệt hóa thành tương bào (plasma) để sản sinh kháng thể

Đáp ứng của kháng thể khi gặp kháng nguyên lần đầu tiên được gọi làđáp ứng tiên phát (sơ cấp) Sau khi xuất hiện vài ngày, hàm lượng kháng thểtrong máu mới tăng và các kháng thể đầu tiên chủ yếu là IgM Đáp ứng tiênphát cũng có thể có IgG nhưng với hàm lượng thấp

Kháng thể dịch thể chỉ có tác dụng với virus khi nó còn ở ngoài tế bào,lớp IgM và IgG kết hợp với virus với sự tham gia của bổ thể làm tiêu diệt

virus, 2 lớp kháng thể này còn ngăn virus không cho kết hợp với Recepter của

tế bào tương ứng, ngăn cản sự hòa màng giữa vỏ virus và màng tế bào

Lớp IgA có trong niêm mạc, nó diệt virus ngay trong hàng rào niêmmạc, không cho virus xâm nhập vào trong Khi virus sinh ra kháng thể thìkháng thể có tính đặc hiệu cao giúp ta định typ virus gây bệnh bằng các phảnứng huyết thanh học

Một số limpho B sau khi nhận biết kháng nguyên sẽ thành thục thànhlimpho B nhớ, hiệu quả làm cho đáp ứng miễn dịch lần 2 đối với khángnguyên nhanh hơn, mạnh hơn lần 1 và lớp kháng thể thường là IgG

- Miễn dịch đặc hiệu qua trung gian tế bào: Quá trình đáp ứng miễndịch đặc hiệu qua trung gian tế bào do tế bào limpho T đảm nhiệm Cáclimpho bào bắt nguồn từ tủy xương di chuyển đến tuyến ức, tại đó chúng

được huấn luyện, biệt hóa thành tiền limpho T, rồi thành limpho T chưa chín,

rồi thành limpho T chín Từ tuyến ức chúng di tản đến các cơ quan limphongoại vi như các hạch lâm ba, các mảng Payer ở ruột hoặc tới lách Khi đạithực bào đưa thông tin đến các limpho T, chúng tiếp nhận, biệt hóa trở thànhnguyên bào limpho T rồi thành tế bào mẫn cảm với kháng nguyên có chứcnăng như một kháng thể đặc hiệu và gọi là kháng thể tế bào

* Những yếu tố ảnh hưởng đến sự hình thành kháng thể:

Sự hình thành kháng thể và quá trình đáp ứng miễn dịch phụ thuộc rấtnhiều yếu tố như trạng thái sức khoẻ của cơ thể, điều kiện ngoại cảnh, sự chămsóc nuôi dưỡng Nhưng quan trọng hơn cả là phụ thuộc vào bản chất khángnguyên Một số yếu tố ảnh hưởng đến sự hình thành kháng thể như sau:

- Bản chất kháng nguyên: Kháng nguyên có bản chất là protein và cótính kháng nguyên cao sẽ kích thích sinh kháng thể tốt

- Đường xâm nhập của kháng nguyên: Thường đường xâm nhập tốtnhất là dưới da và trong bắp thịt

- Liều lượng kháng nguyên: Lượng kháng nguyên đưa vào vừa đủ sẽ

kích thích cơ thể sản sinh miễn dịch ở mức tối đa mà không gây ức chế và têliệt miễn dịch.

- Số lần đưa kháng nguyên vào cơ thể: Tiêm nhắc lại vacxin có tácdụng tốt, kháng thể sinh ra nhiều hơn và được duy trì trong thời gian lâu hơn

- Chất bổ trợ: Chất bổ trợ trong vacxin có tác dụng giữ và duy trì lượngkháng nguyên lâu trong cơ thể nhờ đó tạo kích thích miễn dịch liên tục, đềuđặn các cơ quan có thẩm quyền miễn dịch tạo ra kháng thể ở mức cao và duytrì được lâu hơn Những chất bổ trợ thường dùng là keo phèn, nhũ dầu, dầuthực vật, saponin

1.5 DỊCH TẾ HỌC BỆNH CÚM GIA CẦM

1.5.1 Đối tượng và lứa tuổi mắc bệnh

Bệnh cúm gia cầm xảy ra với tất cả các dòng, giống gia cầm như gà,vịt, ngan, ngỗng, gà tây, đà điểu, chim cút, chim cảnh cũng như các loài chimhoang dã, nhưng ở gà công nghiệp và gia cầm nuôi tập trung thường có biểuhiện nặng hơn Gia cầm ở mọi lứa tuổi đều có nguy cơ mắc bệnh cúm nhưngchủ yếu ở gia cầm từ 4- 66 tuần tuổi Ở nước ta, Lê Văn Năm(2004)[19](T)

đã phát hiện bệnh cúm gia cầm xảy ra sớm nhất ở gà là 26 ngày tuổi, vịt là 28ngày tuổi, ngan Pháp là 24 ngày tuổi, tuổi mắc bệnh muộn nhất ở gà là 10tháng, vịt là 18 tháng và ngan là 14 tháng Gia cầm dễ bị bệnh và có tỷ lệ chếtcao nhất ở những nơi bệnh phát ra lần đầu và ở tuổi sắp đẻ hoặc đang trongthời kỳ đẻ cao nhất

1.5.2 Mùa vụ và phương thức lây truyền

Bệnh xảy ra quanh năm, không phụ thuộc vào mùa vụ nhưng chủ yếu và

dễ phát hơn vào lúc giao thời từ mùa thu sang mùa đông hoặc có các yếu tốstress gây hại làm giảm sức đề kháng của gia cầm, thường vào các tháng 11,

12, 1, 2 và tháng 3 hàng năm, đặc biệt vào cuối tháng 1 đầu tháng 2, tỷ lệ mắcbệnh cao nhất ở đàn có quy mô từ 100-5000 con (25,6% đợt 2 và 33,21% đợt

3) và giảm dần ở những trại chăn nuôi có số lượng lớn hơn (Phạm Sỹ Lăng,2005)[16](T).

Bệnh lây lan do truyền ngang, chủ yếu do tiếp xúc trực tiếp giữa giacầm khỏe mạnh và gia cầm bệnh, qua thức ăn, nước uống, các dụng cụ chănnuôi, các phương tiện vận chuyển, qua phân rác có chứa virus cúm Ở trứngnhiễm virus bị vỡ trong tủ ấp sẽ gây nhiễm cho gà mới nở (OIE,2002)[45](T).Đặc biệt người ta đã tính được rằng trong 1 gam phân gà mắc bệnh cúm có đủlượng virus để gây bệnh cho 1 triệu gà khác (APHIS, 2002)[33](T)

Đối với gia cầm nuôi, nguồn dịch đầu tiên thường thấy là: Từ các loài

gia cầm nuôi khác nhau trong cùng một trang trại hoặc các trang trại khác liền

kề như vịt lây sang gà; từ gia cầm nhập khẩu; từ chim di trú đặc biệt thuỷ cầmđược coi là đối tượng chính dẫn nhập virus vào quần thể đàn gia cầm nuôi

Tỷ lệ lưu hành bệnh cao hơn đối với các đàn gia cầm nằm trên đường

di trú của các loài thủy cầm, các đàn gia cầm nuôi nhốt trong các trang trại,vịt được nuôi vỗ béo tại các cánh đồng gần trang trại

Các ổ dịch cúm thường có nguy cơ xuất hiện cao ở các mùa có hoạtđộng của thủy cầm di trú Phần lớn các ổ dịch đều ghi nhận có sự tiếp xúc vớithủy cầm tại thời điểm phát dịch đầu tiên

Chỉ 1 - 2 ngày sau khi xâm nhiễm vào cơ thể, virus cúm gia cầm đượcđào thải ra ngoài môi trường qua phân, nước mũi và miệng Virus tồn tại khálâu trong vật chất hữu cơ như trong phân 30- 35 ngày ở 40C và 7 ngày ở 200C.Trong các nguồn thức ăn, nước uống bị ô nhiễm, virus có khả năng tồn tạihàng tuần mà vẫn có độc lực và khả năng gây bệnh cho gia cầm Trong điềukiện bảo quản đông lạnh virus tồn tại không hạn định Đây là những nguồnbệnh chính, nguy hiểm và tiềm tàng để không chỉ gia cầm mà các động vật có

vú khác cũng rất dễ bị phơi nhiễm, đặc biệt là con người

Ở gia cầm bị phơi nhiễm, thời kỳ ủ bệnh trung bình từ vài giờ đến 3ngày, phổ biến nhất là từ 1 - 3 ngày, đôi khi có trường hợp kéo dài từ 14 - 20ngày, tỷ lệ chết giao động từ 15 - 100% số gia cầm mắc bệnh.

* Ký chủ lưu giữ hay mang mầm bệnh

Đây là loại ký chủ thường nhiễm nhưng không phát bệnh hoặc chỉ phátbệnh rất nhẹ hoặc chỉ những con non mới mắc bệnh còn các con vật trưởngthành khi nhiễm virus thì chỉ tạo ra miễn dịch Trong trường hợp bệnh cúm,

các loài chim hoang dã và thuỷ cầm được coi là ký chủ lưu giữ hay mangmầm bệnh.

Tuy nhiên, còn phụ thuộc vào độc lực của virus vì đối với virus cúmH5N1 trong thực tế đã gây bệnh với tỷ lệ chết rất cao ở thuỷ cầm

Virus cúm đã phân lập ở hầu hết các loài chim hoang dã như vịt trời,thiên nga, hải âu, mòng biển, vẹt các loại, chim thuộc họ sẻ, diều hâu Tầnsuất và số lượng virus phân lập được ở loài thuỷ cầm đều cao hơn các loàikhác Vịt từ khi bị nhiễm đến khi bắt đầu thải virus trong vòng 30 ngày(Bùi Quang Anh và Văn Đăng Kỳ, 2004) [1](T)

Thuỷ cầm đặc biệt là vịt, chim bờ biển, hải âu được coi là ký chủ mangmầm bệnh tự nhiên của virus cúm gia cầm (Wedster và cộng sự, 1992) [51].(T)

Tất cả các loài virus cúm type A được biết cho đến nay đều phát hiệnthấy ở loài lông vũ và thuỷ cầm hoang dại được coi là ký chủ mang trùngquan trọng nhất của virus cúm (Fouchier và cộng sự) [41].(T)

Do đặc điểm cấu tạo gen của virus cúm gia cầm trong các loài dã cầmkhiến cho các loài này khi mang virus là nguồn gieo rắc virus cho các loàikhác đặc biệt là gia cầm

* Ký chủ hứng chịu (Bị tràn ngập, bị đổ lên đầu - Spillover host)

Đây là loại ký chủ chủ mẫn cảm với virus cúm và thải virus ra môitrường xung quanh làm lây nhiễm cho các cá thể khác Loại ký chủ nàythường phát bệnh rất nặng khi bị nhiễm nhưng lại không thể lưu giữ lâu dàimầm bệnh trong cùng một loài vì khi bị nhiễm virus thì chúng sẽ bị tiêu diệt.Nói cách khác là nếu loài động vật này không tiếp xúc với ký chủ lưu giữ thìmầm bệnh (Virus) tự nhiên sẽ tự tiêu vong trong loài ký chủ lưu giữ

Các loài gia cầm cạn như gà, gà tây, gà lôi, trĩ, đà điểu… thường đượccoi là ký chủ hứng chịu của virus cúm và bệnh thường phát ra rất nặng ở loàinày, đồng thời lượng virus sinh ra cũng rất lớn.

Virus gây bệnh cho phổ ký chủ rộng hơn Thông thường ở vịt (ký chủlưu giữ), virus cúm chỉ gây bệnh ở một phạm trù nào đó (vịt non chẳng hạn)

và tập trung vào đường ruột, thì ở loài ký chủ hứng chịu (gia cầm cạn) virusgây bệnh ở mọi lứa tuổi và nhân lên ở mọi cơ quan nội tạng của gia cầm cạn

Tuy vậy, ở gia cầm như đã nói ở trên còn có các loại virus gọi là độclực thấp (LPAI) không gây bệnh lâm sàng Nhưng các loại virus này khi lâynhiễm chuyển tiếp qua nhiều đời gia cầm sẽ trở thành loại virus có độc lựccao (HPAI) Trong khi đó ở ký chủ lưu giữ mầm bệnh, virus hầu như ổn định

về mặt di truyền Vì vậy, người ta đưa ra thuyết về sự ngưng trệ tiến hoá(Evolutionary stosis) của virus cúm ở loài thuỷ cầm, nhưng trên ký chủ hứngchịu chúng tiến hoá (đột biến) rất mạnh Đây là lí do giải thích tại sao các nhàkhoa học cho rằng cần phải tiêu diệt hết gia cầm mắc bệnh cúm bất kể bịnhiễm subtype nào vì sợ rằng chúng sẽ sinh ra những chủng virus mới trongkhi sự lưu hành virus cúm trong đàn vịt không đáng lo ngại như đàn gà

* Ký chủ lệch

Là loài động vật hiếm khi bị nhiễm virus nhưng khi bị nhiễm sẽ phátbệnh rất nặng và không hoặc bài thải rất ít virus để lây nhiễm cho các cá thểxung quanh Hiện nay, con người và một số động vật có vú khác được coi là

ký chủ lệch của virus cúm H5N1 Sự phân chia này không mang tính tuyệt đối

vì khi một virus cúm H5N1 có khả năng lây từ người sang người thì conngười lại trở thành ký chủ hứng chịu Mặt khác, với cúm H3N2, hiện đang lưuhành gây bệnh cúm thông thường ở người thì con người lại trở thành ký chủlưu trữ H3N2 hoặc nằm giữa ký chủ lưu trữ và ký chủ hứng chịu Tuy vậy, sựphân chia này chỉ có tác dụng phân biệt, diễn tả và quản lý bệnh theo từnggiai đoạn tiến triển của dịch Nhưng với dịch cúm do H5N1 gây ra hiện nay,

vịt không phải là ký chủ lưu trữ vì khi bị nhiễm chúng cũng phát bệnh và tỷ lệchết rất cao Đây là điều đặc biệt mới đối với bệnh cúm gia cầm.

1.5.4 Sự lưu hành virus cúm trên đàn gia cầm

Trong công tác chẩn đoán và phòng chống dịch cúm gia cầm, việc giámsát sự lưu hành virus là một nhiệm vụ quan trọng, bắt buộc với mục tiêu pháthiện sớm và kịp thời nhưng đàn gia cầm mang trùng để có những biện pháphiệu quả nhằm tiêu diệt mầm bệnh

Trên Thế giới, đã có nhiều Quốc gia xuất hiện dịch cúm gia cầm, cónhiều nước áp dụng chiến lược tiêm phòng vaccin, có nước tiến hành tiêu huỷtoàn bộ gia cầm theo bán kính rộng khi có gia cầm mắc bệnh hoặc có sự lưuhành virus thường được thực hiện một cách rất thường xuyên

Tại Việt Nam, ngay từ lần đầu tiên xuất hiện dịch (2003 - 2004), virusgây bệnh được xác định thuộc type A H5N1 nhưng trước đó chúng ta không

số liệu về loại virus và sự lưu hành trong đàn gia cầm ở Việt Nam (NguyễnTiến Dũng, 2005) [11].(T) Sau khi đợt dịch này kết thúc, tháng 3 và 4 năm

2004, Nguyễn Tiến Dũng và cộng sự (2005) [11](T) đã tiến hành lấy mẫu

1002 mẫu huyết thanh và ổ nhớp của 130 hộ chăn nuôi gia cầm thuộc 13 xãcủa tỉnh Thái Bình để nghiên cứu về sự lưu hành virus cúm Kết quả cho thấyxét nghiệm huyết thanh tìm kháng thể kháng virus cúm gia cầm H5N1 bằngphương pháp HI đã có 60,8% ở vịt, 23,6% ở ngan và 4,8% ở gà dương tínhvới huyết thanh và ông khẳng định rằng mặc dù dịch lâm sáng đã hết nhưng

tỷ lệ nhiễm virus H5N1 còn rất cao sau đợt dịch đầu năm 2004, điều này nóilên virus vẫn tiếp tục tồn tại và lưu hành trong đàn gia cầm Cũng theo ông,khi nghiên cứu ở miền Bắc nước ta thấy tỷ lệ nhiễm virus ở các hộ nuôi vịthoặc vịt lẫn gà có nguy cơ nhiễm virus 69,5%, cao gấp 8 lần so với các hộ chỉchăn nuôi gà với 8,4%

Vịt thường tạo ra kháng thể virus cúm sau khi bị nhiễm từ 5 - 6 ngày.Như vậy, tỷ lệ vịt có kháng thể là gián tiếp thể hiện tỷ lệ nhiễm virus trongđàn vịt Tỷ lệ này thường tăng dần bắt đầu vào tháng 11 và đạt đỉnh cao vàotháng 3 hàng năm Như vậy, mùa đông là mùa vịt bị mắc virus cúm H5N1 gâybệnh và gây chết cho vịt nên số liệu về huyết thanh có thể không phản ánhđúng thực tế nhiễm virus.

Năm 2005, Trương Văn Dung và cộng sự [9](T) đã lấy 60 mẫu huyếtthanh và 60 mẫu ổ nhớp để kiểm tra sự lưu hành virus cúm trước khi tiêm thửnghiệm vacxin phòng cúm gia cầm ở 3 đàn vịt tại Bắc Ninh Kết quả chothấy, tất cả các mẫu ổ nhớp đều cho kết quả âm tính còn mẫu huyết thanh có19/60 mẫu dương tính với kháng thể bằng 31,7% thuộc 1 trong 3 đàn bằng33,3% Kiểm tra 100 mẫu huyết thanh và 100 mẫu ổ nhớp của 2 đàn gà tại HàTây trước tiêm thử nghiệm và đều cho kết quả âm tính

Năm 2007, theo báo cáo của Bộ Nông nghiệp và phát triển nông thôn[3](T) đã kiểm tra 8.278 mẫu được lấy tại 78 cơ sở, điểm giết mổ và chợ buônbán gia cầm sống trên cả nước, kết quả cho thấy tỷ lệ lưu hành virus là 7,96%.Cũng theo Bộ Nông nghiệp thì virus vẫn lưu hành trên đàn gia cầm và bệnhdịch sẽ bùng phát bất cứ lúc nào khi có đủ điều kiện Có thể thấy rằng vịt có

tỷ lệ mang trùng cao hơn rất nhiều so với đàn ngan, đặc biệt là so với gà

1.6 TRIỆU CHỨNG, BỆNH TÍCH CỦA BỆNH CÚM GIA CẦM

1.6.1 Triệu chứng lâm sàng

Mặc dù bệnh cúm gia cầm thể độc lực cao (HPAI) là thể cực kỳ nguyhiểm nhưng các biểu hiện triệu chứng lâm sàng của bệnh thường không đồngnhất mà diễn biến rất đa dạng và phức tạp Không có triệu chứng lâm sàngđặc trưng cho bệnh cúm gia cầm thể độc lực cao nhưng phải chú ý ngay lậptức đến nó khi thấy tỷ lệ gia cầm bệnh chết cao (Cục thú y, VSF-CICDA,2007)[7](T) Bệnh cúm gia cầm xảy ra phụ thuộc vào nhiều yếu tố

như độc lực, số lượng virus, loài nhiễm bệnh, mật độ chăn nuôi, tiểu khí hậuchuồng nuôi Các gia cầm non thường có biểu hiện bệnh nặng hơn.

Thời gian ủ bệnh ngắn thường chỉ vài giờ đến 21 ngày, theo Tổ chứcThú y thế giới thời gian này có thể tới 28 ngày (Nguyễn Tiến Dũng, 2004)[12].(Q)

Gia cầm bệnh thường sốt rất cao, có thể lên đến 44 - 450C Các triệu chứng về

hô hấp thường xuất hiện đầu tiên và khá điển hình như hen khẹc, lắc đầu, vẩy

mỏ, khó thở, chảy nước mũi, nước mắt Tiếp theo là mí mắt viêm, sưng mọng,phù mặt, phù đầu Mào và tích dầy lên do phù thũng, tím tái, xuất huyết Thịt

gà bị bệnh thâm tím Xuất huyết dưới da chân là đặc điểm đặc trưng của bệnhcúm gia cầm

Ngoài các triệu chứng trên còn thấy các triệu chứng về thần kinh như đilại không bình thường, siêu vẹo, run rẩy, mệt mỏi, nằm li bì tụm đống Gia cầmtiêu chảy mạnh, phân loãng trắng, trắng xanh Gia cầm đang đẻ thì tỉ lệ đẻ giảmrất nhanh Bệnh lây lan nhanh, gia cầm chết đột ngột Với chủng virus độc lựccao (HPAI) tỉ lệ chết từ 15 - 100%, với chủng virus độc lực thấp (LPHI) tỉ lệchết thấp hơn và mức độ biểu hiện triệu chứng cũng nhẹ hơn Tuy nhiên, khi có

sự bội nhiễm hoặc điều kiện chăn nuôi bất lợi, tỉ lệ tử vong có thể tới 60 - 70%

với các biểu hiện triệu chứng nặng hơn (Lê Văn Năm, 2004) [28].(Q)

1.6.2 Bệnh tích

* Bệnh tích đại thể:

Theo Lê Văn Năm (2004) [28],(Q) mức độ biến đổi bệnh tích đại thểbệnh cúm gia cầm cũng đa dạng và rất khác nhau trong cùng một đàn, phụthuộc rất nhiều vào độc lực virus, quá trình diễn biến của bệnh Những biếnđổi mang tính tổng quan như sau:

Mào và tích thâm tím, phù nề, xuất huyết dưới da và rìa tích Xuấthuyết dưới da ống chân thành vệt, nốt

Khí quản viêm xuất huyết, chứa nhiều đờm Túi khí phù nề, thành túikhí dầy và có nhiều fibrin bám dính Phổi viêm cata, xuất huyết đến viêm

fibrin làm phổi dính vào lồng ngực.

Viêm xuất huyết đường ruột, đặc biệt vùng hậu môn, van hồi manhtràng, dạ dày tuyến và niêm mạc tá tràng

Bao tim tích nước vàng, xuất huyết màng bao tim, mỡ vành tim, cơ tim.Lách biến màu lốm đốm vàng, rắn chắc hơn bình thường Tụy khô ròn,xuất huyết

Viêm xuất huyết buồng trứng, ống dẫn trứng, nhiều trường hợp trứngnon dập vỡ, xoang bụng tích nước vàng lợn cợn

Xuất huyết màng treo ruột, màng bao dạ dày tuyến, dạ dày cơ, màng xươnglồng ngực có thể coi là đặc điểm riêng của bệnh cúm gia cầm (Lê Văn Năm,2004) [29].(Q)

* Bệnh tích vi thể:

Các biến đổi đặc trưng về tổ chức học bao gồm: Phù nề, xung huyết,xuất huyết và thâm nhập bạch cầu đơn nhân ở cơ vân, cơ tim, lách, phổi, mào,tích, gan, thận, mắt và thần kinh Ngoài tế bào bạch cầu đơn nhân còn có tếbào đặc trưng cho phản ứng viêm hoại tử (Lê Văn Năm, 2004) [28]

1.7 CHẨN ĐOÁN BỆNH CÚM GIA CẦM

Để chẩn đoán bệnh cúm gia cầm trước tiên cần căn cứ vào các đặc điểm dịch

tễ của bệnh(chẩn đoán dịch tễ học), các biểu hiện triệu chứng lâm sàng (chẩn đoán lâm sàng) và dựa vào các dấu hiệu bệnh tích của bệnh khi mổ khám Tuy nhiên, các phương pháp chẩn đoán trên chỉ cho những kết luận sơ bộ về bệnh Để chẩn đoán bệnh cúm gia cầm chính xác thì việc phân lập và định danh virus là rất quan trọng và cần thiết

* Phân lập virus

Bệnh phẩm có thể là dịch ngoáy hầu họng, dịch ổ nhớp hoặc các tổ

chức phổi, khí quản, não, gan, lách, tim Mẫu sau khi lấy được bảo quản trongdung dịch PBS ở 40C và phải phân lập trong vòng 48 giờ, nếu muốn bảo quảndài hơn phải giữ ở - 700C.

Theo Bùi Quang Anh và CS (2004) [2],(Q) phương pháp phân lập virusthường sử dụng là tiêm truyền qua phôi trứng 9 - 11 ngày hoặc môi trường tếbào dòng thận chó MDCK

Tiêm 0,1- 0,2 ml mẫu vào túi niệu của phôi gà 9-11 ngày tuổi Phôiđược ấp ở nhiệt độ 370C trong 2-3 ngày Một số ít chủng virus có độc lực cao

có thể gây chết phôi khoảng 18- 24 giờ, nước trứng thu hoạch được để ở nhiệt

độ 40C qua một đêm Virus nhân lên trong nước trứng có hiện tượng gâyngưng kết hồng cầu gà Nếu không có hiện tượng gây ngưng kết hồng cầu gàthì có thể lấy nước trứng thu được tiêm lần sau cho phôi gà Mẫu nước trứnglấy ra từ phôi gà được kiểm tra bằng phản ứng HA để xác định virus

Để giám định virus phân lập được, dùng phản ứng HI với kháng huyết

thanh chuẩn của các phân typ virus cúm gia cầm.

Để phát hiện virus cúm typ A, có thể dùng phản ứng miễn dịch khuếchtán với các kháng huyết thanh dương tính đặc hiệu với virus cô đặc để pháthiện một hoặc nhiều typ kháng nguyên có các protein vỏ hoặc nhân

Cô đặc virus được tiến hành bằng ly tâm với tốc độ cao, cho thêm dungdịch axit hydrochloric 1M vào dung dịch niệu mô đến khi pH xấp xỉ 4 để kếttủa virus Làm lạnh dung dịch ở 00C trong 1 giờ, tiếp đó ly tâm nhẹ để dungdịch được làm trong và loại bỏ phần dịch váng ở trên bề mặt Virus đã cô đặcđược làm treo trong dung dịch đệm bằng muối Sodium lauryl sarcosinate với

pH = 9 và glyxerin 0,5M

* Định danh virus

Để định danh virus phân lập được có thể dùng phản ứng HI, NI hoặcdùng phản ứng RT - PCR với các cặp mồi chuẩn để xác định kháng nguyên H

và N.

Để xác định kháng thể kháng virus cúm trong huyết thanh, có thể dùngphản ứng ngăn trở ngưng kết hồng cầu HI, ELISA, phản ứng khuyếch tántrong thạch (AGP)

1.8 PHÒNG BỆNH

1.8.1 Kiểm soát dịch bệnh

Bệnh cúm gia cầm cũng như các bệnh truyền nhiễm nói chung, quátrình sinh dịch có 3 khâu quan trọng là nguồn bệnh, yếu tố truyền lây, độngvật cảm nhiễm và có sự liên hệ giữa 3 khâu Nếu thiếu 1 trong 3 khâu, đặc biệt

là khâu thứ nhất thì bệnh không thể xảy ra Nếu có đủ 3 khâu nhưng không có

sự liên hệ giữa 2 trong 3 khâu thì bệnh cũng không thể xảy ra Để đạt đượchiệu quả cao trong công tác phòng chống dịch bệnh cúm gia cầm thì cần phảithực hiện đồng bộ các biện pháp sau:

Đối với nguồn bệnh: Tiêu hủy triệt để gia cầm nhiễm bệnh, thực hiện

tốt công tác vệ sinh khử trùng để tiêu diệt mầm bệnh Tăng cường công tácgiám sát phát hiện bệnh Khi phát hiện thấy gia cầm mang virus phải tiêu hủyngay

Đối với yếu tố truyền lây: Thực hiện tốt kiểm dịch vận chuyển, kiểm

dịch gia cầm nhập khẩu, không vận chuyển gia cầm từ các nước hoặc các khuvực có dịch vào địa phương Thực hiện nuôi nhốt, nuôi cách ly, hạn chế người

và phương tiện ra vào khu vực chăn nuôi Không nuôi chung các loại gia cầm(gà, vịt, ngan) trong cùng chuồng nuôi Ngăn chặn sự xâm nhập và tiếp xúc

của dã cầm với gia cầm Quản lý chặt chẽ việc buôn bán, giết mổ gia cầm, quy

hoạch khu vực buôn bán, giết mổ gia cầm riêng Thực hiện tốt công tác vệsinh, khử trùng, tiêu độc Tuyên truyền hướng dẫn các biện pháp chăn nuôi antoàn sinh học, các biện pháp phòng chống dịch cúm gia cầm để người chănnuôi và nhân dân tự giác, chủ động thực hiện

Đối với động vật cảm thụ: Tích cực tuyên truyền để thay đổi dần tập

quán chăn nuôi nhỏ lẻ sang chăn nuôi trang trại, chăn nuôi công nghiệp Quyhoạch khu vực chăn nuôi gia cầm ra xa khu dân cư Xây dựng chuồng trạiđúng tiêu chuẩn kỹ thuật, không gây ô nhiễm môi trường Thực hiện tốt quytrình vệ sinh thú y Chăm sóc nuôi dưỡng tốt để nâng cao sức đề kháng tự

nhiên cho gia cầm.

Trong điều kiện chăn nuôi gia cầm của Việt Nam hiện nay, để kiểm soátdịch cúm gia cầm, một biện pháp rất quan trọng là tạo miễn dịch chủ độngbằng cách tiêm vacxin cho đàn gia cầm

Như vậy, để kiểm soát dịch cúm gia cầm có hiệu quả, cần thực hiệnđồng bộ các biện pháp để tác động vào cả 3 khâu của quá trình sinh dịch,trong đó có biện pháp tiêm vacxin cho đàn gia cầm

1.8.2 Vacxin phòng bệnh cúm gia cầm

Đại dịch cúm do virus độc lực cao subtype H5N1 gây ra hiện nay đã vàđang lưu hành nhanh chóng qua một loạt các nước ở Châu á trong đó có Việt Nam, đang trở thành mối quan tâm quốc tế đặc biệt Số lượng lây nhiễm viruscúm H5N1 ở người đã được công bố ngày càng tăng lên và thường dẫn đến tửvong Điều đó hòi hỏi phải có biện pháp khống chế dịch bệnh một cách nhanhchóng nhằm giảm thiểu tối đa sự bùng phát dịch bệnh trên đàn gia cầm cũng như ở cộng đồng con người

Khi dịch cúm gia cầm xảy ra ở vùng có mật độ nuôi cao, nơi mà các biện pháp an toàn sinh học nghiêm ngặt cho thấy không phù hợp với hệ thống chăn nuôi hiện đại thì tiêm chủng vacxin được coi là giải pháp hàng đầu

để khống chế sự lây lan dịch bệnh (Ilaria Capua và Stefano Marangon, 2004)[31](T) Các biện pháp khống chế, kiểm soát dịch bệnh truyền thống tập trungvào tiêu hủy, khử trùng tiêu độc đòi hỏi loại bỏ trên quy mô lớn những đàn nhiễm bệnh và những đàn tiếp xúc với virus cúm Những chính sách này đã cho kết quả rất tốt nhưng đặc biệt tốn kém, không triệt để trong tình trạng hiện nay Đặc biệt ở nước ta mật độ chăn nuôi gia cầm cao, chăn nuôi nông

hộ vẫn rải rác trong các thôn xóm, khó kiểm soát dẫn đến phải tiêu diệt hàng triệu con gia cầm các loại, gây ảnh hưởng đến vấn đề môi trường và thiệt hại lớn về kinh tế cho người chăn nuôi (Trương Văn Dung và cộng sự, 20050[9](T)

Tiêm phòng vacxin là một chiến lược hỗ trợ có thể được cân nhắc khibệnh đã lây lan ra một phạm vi nào đó mà nó đã vượt quá sự kiểm soát của cơquan chuyên môn thú y hoặc vượt quá mức chi phí dự kiến cho các chiếndịch tiêu hủy rộng lớn Tiêm phòng cũng có thể được cân nhắc ở giai đoạnsớm hơn khi cơ sở hạ tầng và năng lực của ngành thú y được ghi nhận là kém

và không đủ sức ngăn chặn sự lây lan dịch bệnh (Tô Long Thành,2007)[28](T)

Theo FAO và OIE thì sử dụng các loại vacxin phòng cúm do OIE phêchuẩn có thể bảo hộ tốt chống lại bệnh lâm sàng ở gà bằng cách làm giảm tỷ

lệ chết và các thiệt hại về kinh tế khác Việc sử dụng đúng vacxin cho đàn giacầm sẽ làm giảm lượng virus bài thải ra môi trường, ngừng hẳn sự bài thảivirus vào ngày 13 - 18 sau khi tiêm, phòng được sự lây lan virus cường độc

do tiếp xúc, phòng hộ chống lại virus luôn thay đổi và tăng sức đề kháng của

gà chống lại sự lây nhiễm virus cúm gia cầm

Như vậy virus ô nhiễm môi trường ít nên giảm nguy cơ lây nhiễmsang đàn gia cầm khác đồng thời làm giảm nguy cơ lây nhiễm cho conngười và giảm cơ hội cho virus biến chủng tạo thành chủng virus cúm mới

ở người (Trương Văn Dung và cộng sự, 2005)[9](T)

Các tổ chức y tế Quốc tế đã khảo sát sự lây lan của virus cúm dọc Đôngnam Châu á và kết luận rằng virus đã ”đóng chốt ” rất sâu ở khắp nơi, không

có hy vọng tiêu diệt mà chỉ có thể khống chế nó (Tô Long Thành, 2004)[26](T)

Khi mầm bệnh vẫn còn tiềm ẩn và dịch cúm A (H5N1) ở người vẫn còntiếp tục xuất hiện ở một số địa phương và đang có dấu hiệu diễn biến phức tạp Đồng thời với việc thực hiện đồng bộ các biện pháp về sinh học, vệ sinh môi trường (tiêu độc, khử trùng) trong phòng chống dịch cúm gia cầm thì việc