Nghiên cứu đặc điểm bệnh lý của chó mắc bệnh viêm ruột tiêu chảy do virus parvo type 2 (CPV2) gây ra và đặc điểm sinh học phân tử của một số chủng CPV2 lưu hành tại miền Bắc Việt Nam.

Nghiên cứu đặc điểm bệnh lý của chó mắc bệnh viêm ruột tiêu chảy do virus parvo type 2 (CPV2) gây ra và đặc điểm sinh học phân tử của một số chủng CPV2 lưu hành tại miền Bắc Việt Nam.Nghiên cứu đặc điểm bệnh lý của chó mắc bệnh viêm ruột tiêu chảy do virus parvo type 2 (CPV2) gây ra và đặc điểm sinh học phân tử của một số chủng CPV2 lưu hành tại miền Bắc Việt Nam.Nghiên cứu đặc điểm bệnh lý của chó mắc bệnh viêm ruột tiêu chảy do virus parvo type 2 (CPV2) gây ra và đặc điểm sinh học phân tử của một số chủng CPV2 lưu hành tại miền Bắc Việt Nam.Nghiên cứu đặc điểm bệnh lý của chó mắc bệnh viêm ruột tiêu chảy do virus parvo type 2 (CPV2) gây ra và đặc điểm sinh học phân tử của một số chủng CPV2 lưu hành tại miền Bắc Việt Nam.Nghiên cứu đặc điểm bệnh lý của chó mắc bệnh viêm ruột tiêu chảy do virus parvo type 2 (CPV2) gây ra và đặc điểm sinh học phân tử của một số chủng CPV2 lưu hành tại miền Bắc Việt Nam.Nghiên cứu đặc điểm bệnh lý của chó mắc bệnh viêm ruột tiêu chảy do virus parvo type 2 (CPV2) gây ra và đặc điểm sinh học phân tử của một số chủng CPV2 lưu hành tại miền Bắc Việt Nam.Nghiên cứu đặc điểm bệnh lý của chó mắc bệnh viêm ruột tiêu chảy do virus parvo type 2 (CPV2) gây ra và đặc điểm sinh học phân tử của một số chủng CPV2 lưu hành tại miền Bắc Việt Nam.Nghiên cứu đặc điểm bệnh lý của chó mắc bệnh viêm ruột tiêu chảy do virus parvo type 2 (CPV2) gây ra và đặc điểm sinh học phân tử của một số chủng CPV2 lưu hành tại miền Bắc Việt Nam.Nghiên cứu đặc điểm bệnh lý của chó mắc bệnh viêm ruột tiêu chảy do virus parvo type 2 (CPV2) gây ra và đặc điểm sinh học phân tử của một số chủng CPV2 lưu hành tại miền Bắc Việt Nam.Nghiên cứu đặc điểm bệnh lý của chó mắc bệnh viêm ruột tiêu chảy do virus parvo type 2 (CPV2) gây ra và đặc điểm sinh học phân tử của một số chủng CPV2 lưu hành tại miền Bắc Việt Nam.Nghiên cứu đặc điểm bệnh lý của chó mắc bệnh viêm ruột tiêu chảy do virus parvo type 2 (CPV2) gây ra và đặc điểm sinh học phân tử của một số chủng CPV2 lưu hành tại miền Bắc Việt Nam.Nghiên cứu đặc điểm bệnh lý của chó mắc bệnh viêm ruột tiêu chảy do virus parvo type 2 (CPV2) gây ra và đặc điểm sinh học phân tử của một số chủng CPV2 lưu hành tại miền Bắc Việt Nam.Nghiên cứu đặc điểm bệnh lý của chó mắc bệnh viêm ruột tiêu chảy do virus parvo type 2 (CPV2) gây ra và đặc điểm sinh học phân tử của một số chủng CPV2 lưu hành tại miền Bắc Việt Nam.Nghiên cứu đặc điểm bệnh lý của chó mắc bệnh viêm ruột tiêu chảy do virus parvo type 2 (CPV2) gây ra và đặc điểm sinh học phân tử của một số chủng CPV2 lưu hành tại miền Bắc Việt Nam.Nghiên cứu đặc điểm bệnh lý của chó mắc bệnh viêm ruột tiêu chảy do virus parvo type 2 (CPV2) gây ra và đặc điểm sinh học phân tử của một số chủng CPV2 lưu hành tại miền Bắc Việt Nam.Nghiên cứu đặc điểm bệnh lý của chó mắc bệnh viêm ruột tiêu chảy do virus parvo type 2 (CPV2) gây ra và đặc điểm sinh học phân tử của một số chủng CPV2 lưu hành tại miền Bắc Việt Nam.Nghiên cứu đặc điểm bệnh lý của chó mắc bệnh viêm ruột tiêu chảy do virus parvo type 2 (CPV2) gây ra và đặc điểm sinh học phân tử của một số chủng CPV2 lưu hành tại miền Bắc Việt Nam.Nghiên cứu đặc điểm bệnh lý của chó mắc bệnh viêm ruột tiêu chảy do virus parvo type 2 (CPV2) gây ra và đặc điểm sinh học phân tử của một số chủng CPV2 lưu hành tại miền Bắc Việt Nam.Nghiên cứu đặc điểm bệnh lý của chó mắc bệnh viêm ruột tiêu chảy do virus parvo type 2 (CPV2) gây ra và đặc điểm sinh học phân tử của một số chủng CPV2 lưu hành tại miền Bắc Việt Nam.Nghiên cứu đặc điểm bệnh lý của chó mắc bệnh viêm ruột tiêu chảy do virus parvo type 2 (CPV2) gây ra và đặc điểm sinh học phân tử của một số chủng CPV2 lưu hành tại miền Bắc Việt Nam.Nghiên cứu đặc điểm bệnh lý của chó mắc bệnh viêm ruột tiêu chảy do virus parvo type 2 (CPV2) gây ra và đặc điểm sinh học phân tử của một số chủng CPV2 lưu hành tại miền Bắc Việt Nam.

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM VÕ VĂN HẢI NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM BỆNH LÝ CỦA CHÓ MẮC BỆNH VIÊM RUỘT TIÊU CHẢY DO VIRUS PARVO TYPE (CPV2) GÂY RA VÀ ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC PHÂN TỬ CỦA MỘT SỐ CHỦNG CPV2 LƯU HÀNH TẠI MIỀN BẮC VIỆT NAM LUẬN ÁN TIẾN SĨ NHÀ XUẤT BẢN HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP - 2023 HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM VÕ VĂN HẢI NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM BỆNH LÝ CỦA CHÓ MẮC BỆNH VIÊM RUỘT TIÊU CHẢY DO VIRUS PARVO TYPE (CPV2) GÂY RA VÀ ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC PHÂN TỬ CỦA MỘT SỐ CHỦNG CPV2 LƯU HÀNH TẠI MIỀN BẮC VIỆT NAM nuôi Ngành: Bệnh lý học chữa bệnh vật Mã số: 64 01 02 Người hướng dẫn: PGS.TS Bùi Trần Anh Đào PGS.TS Lê Văn Phan HÀ NỘI - 2023 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi, kết nghiên cứu trình bày luận án trung thực, khách quan chưa dùng để bảo vệ lấy học vị Tôi xin cam đoan giúp đỡ cho việc thực luận án cám ơn, thông tin trích dẫn luận án rõ nguồn gốc Hà Nội, ngày tháng năm 2023 Tác giả luận án Võ Văn Hải i LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian học tập, nghiên cứu hoàn thành luận án, nhận hướng dẫn, bảo tận tình thầy giáo, giúp đỡ, động viên bạn bè, đồng nghiệp gia đình Nhân dịp hồn thành luận án, cho phép tơi bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc PGS.TS Bùi Trần Anh Đào, PGS.TS Lê Văn Phan tận tình hướng dẫn, dành nhiều cơng sức, thời gian tạo điều kiện cho suốt q trình học tập thực đề tài Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành tới Ban Giám đốc, Ban Quản lý đào tạo, Bộ môn Bệnh lý thú y, Khoa Thú y - Học viện Nông nghiệp Việt Nam, Phịng thí nghiệm trọng điểm cơng nghệ sinh học VNUA tận tình giúp đỡ tơi q trình học tập, thực đề tài hồn thành luận án Tôi xin chân thành cảm ơn tập thể lãnh đạo, cán viên chức Hệ thống thú y 2Vet giúp đỡ tạo điều kiện cho tơi suốt q trình thực đề tài Xin chân thành cảm ơn gia đình, người thân, bạn bè, đồng nghiệp tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ tơi mặt, động viên khuyến khích tơi hồn thành luận án./ Hà Nội, ngày tháng Tác giả luận án Võ Văn Hải ii năm 2023 MỤC LỤC Trang Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục chữ viết tắt vi Danh mục bảng viii Danh mục hình ix Trích yếu luận án xi Thesis abstract xiii Phần Mở đầu 1.1 Tính cấp thiết đề tài nghiên cứu 1.2 Mục tiêu nghiên cứu 1.2.1 Mục tiêu tổng quát .2 1.2.2 Mục tiêu cụ thể 1.3 Phạm vi nghiên cứu 1.3.1 Đối tượng nghiên cứu 1.3.2 Thời gian nghiên cứu 1.3.3 Địa điểm nghiên cứu 1.4 Các đóng góp đề tài 1.5 Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài 1.5.1 Ý nghĩa khoa học .3 1.5.2 Ý nghĩa thực tiễn .3 Phần Tổng quan tài liệu 2.1 Đặc điểm sinh học vi rút parvo 2.1.1 Cấu tạo chung 2.1.2 Vị trí xếp loại .5 2.1.3 Nguồn gốc chủng CPV2 .5 2.2 Bệnh viêm ruột tiêu chảy vi rút parvo chó 2.2.1 Dịch tễ học iii 2.2.2 Bệnh học 2.2.3 Triệu chứng lâm sàng 10 2.2.4 Bệnh tích 11 2.2.5 Chẩn đoán 16 2.2.6 Điều trị .18 2.2.7 Phòng bệnh 21 2.3 Các nghiên cứu nước giới 23 2.3.1 Các nghiên cứu nước 23 2.3.2 Các nghiên cứu giới 27 Phần Nội dung phương pháp nghiên cứu 36 3.1 Nội dung nghiên cứu 36 3.1.1 Nghiên cứu đặc điểm bệnh lý chó mắc bệnh viêm ruột tiêu chảy CPV2 36 3.1.2 Nghiên cứu đặc điểm sinh học phân tử chủng vi rút parvo phân lập 36 3.2 Đối tượng vật liệu nghiên cứu 36 3.3 Phương pháp nghiên cứu 38 3.3.1 Phương pháp thu thập số liệu trực tiếp phòng khám 38 3.3.2 Phương pháp xác định chó mắc bệnh viêm ruột tiêu chảy CPV2 38 3.3.3 Phương pháp làm xét nghiệm huyết học sinh hóa máu chó bị bệnh viêm ruột tiêu chảy CPV2 40 3.3.4 Phương pháp mổ khám quan sát biến đổi bệnh lý đại thể .41 3.3.5 Phương pháp làm tiêu bệnh lý vi thể 42 3.3.6 Phương pháp nhuộm hoá mô miễn dịch 45 3.3.7 Phương pháp PCR 48 2.3.8 Phương pháp điện di kiểm tra sản phẩm PCR 50 2.3.9 Phương pháp giải trình tự gen xây dựng phả hệ 50 3.4 Phương pháp xử lý số liệu 51 Phần Kết thảo luận .52 4.1 Kết nghiên cứu đặc điểm bệnh lý CPV2 chó 52 4.1.1 Tỷ lệ mắc viêm ruột tiêu chảy CPV2 chó theo địa phương 52 iv 4.1.2 Tỷ lệ chó mắc viêm ruột tiêu chảy CPV2 theo lứa tuổi 53 4.1.3 Tỷ lệ chó mắc viêm ruột tiêu chảy CPV2 theo giống 55 4.1.4 Tỷ lệ chó mắc viêm ruột tiêu chảy CPV2 theo giới tính 55 4.1.5 Tỷ lệ chó mắc viêm ruột tiêu chảy CPV2 theo tình trạng tiêm chủng .56 4.2 Kết nghiên cứu số tiêu sinh lý, sinh hóa máu chó mắc bệnh viêm ruột tiêu chảy CPV2 58 4.3 Kết nghiên cứu triệu chứng lâm sàng, bệnh tích chó mắc bệnh viêm ruột tiêu chảy CPV2 62 4.3.1 Kết nghiên cứu triệu chứng lâm sàng chó mắc bệnh viêm ruột tiêu chảy CPV2 62 4.3.2 Kết nghiên cứu bệnh tích đại thể vi thể chó mắc bệnh viêm ruột tiêu chảy CPV2 64 4.4 Kết xác định phân bố vi rút parvo số quan chó mắc bệnh 73 4.5 Kết phân tích số đặc tính sinh học phân tử CPV2 gây bệnh chó số tỉnh Miền Bắc Việt Nam 78 4.5.1 Kết phân tích trình tự nucleotide acid amin gen VP2 78 4.5.2 Kết phân tích trình tự nucleotide acid amin gen CPV2 95 Phần Kết luận kiến nghị 108 5.1 Kết luận 108 5.1.1 Đặc điểm bệnh lý chó mắc viêm ruột tiêu chảy CPV2 108 5.1.2 Kết phân tích đặc điểm sinh học phân tử CPV2 108 5.2 Kiến nghị 109 Danh mục cơng trình cơng bố liên quan đến luận án 111 Tài liệu tham khảo .112 Phụ lục 128 v DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt & aa Ala Arg Asn Asp CCoV CDV CPV CPV2 FFP Gln Glu Gly HA Nghĩa tiếng Việt Và Amino acid (A xít amin) Alanine Arginine Asparagine Aspartic acid Canine corona virus Canine distemper virus Canine parvo virus (vi rút parvo gây bệnh chó) Canine parvo virus type (vi rút parvo type gây bệnh chó) Canine rota virus Cộng Cysteine Diamino benzindin (cơ chất DAB) Dulbecco’s modified Eagle’s medium (môi trường DMEM) Deoxyribonucleic acid (Axit deoxyribonucleic) Ethylene Diamine Tetracetic Acid (A xít etylenediaminetetraacetic) Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay (phương pháp miễn dịch gắn enzyme) Fresh Frozen Plasma (Huyết tươi đông lạnh) Glutamine Glutamic acid Glycine Haemagglutination (Phản ứng ngưng kết hồng cầu) HE His IHC Ile IV Leu Lys Met Haematoxylin - Eosin (Thuốc nhuộm tiêu bệnh lý) Histidine Immuno Histochemistry (Hóa mơ miễn dịch tổ chức) Isoleucine Tiêm tĩnh mạch Leucine Lysine Methionine CRoV Cs Cys DAB DMEM DNA EDTA ELISA vi Chữ viết tắt NPO nt PCR Pro Phe RNA RT-PCR s SC Ser Tyr Thr Nghĩa tiếng Việt Nil per os (Phương pháp cho ăn không qua miệng) Nucleotide Polymerase Chain Reaction (Phản ứng chuỗi polymerase) Proline Phenylalanine Ribonucleic acid (A xít ribonucleic) Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction (Phản ứng chuỗi trùng hợp có dùng enzym phiên mã ngược) giây Tiêm da Serine Tyrosin Threonine Trp Val VRTC Tryptophan Valine Viêm ruột tiêu chảy vii DANH MỤC BẢNG TT Trang Tên bảng 3.1 Thông tin mẫu bệnh phẩm sử dụng nghiên cứu .37 3.2 Hệ thống máy chuyển đúc mẫu tự động 43 3.3 Hệ thống nhuộm lần 45 3.4 Hệ thống nhuộm lần 47 3.5 Thành phần phản ứng PCR 49 3.6 Thông tin cặp mồi sử dụng nghiên cứu 49 4.1 Tỷ lệ chó mắc viêm ruột tiêu chảy CPV2 theo địa phương .52 4.2 Tỷ lệ chó mắc viêm ruột tiêu chảy CPV2 theo lứa tuổi 54 4.3 Tỷ lệ chó mắc bệnh viêm ruột tiêu chảy CPV2 theo giống .55 4.4 Tỷ lệ chó mắc bệnh viêm ruột tiêu chảy CPV2 theo giới tính 56 4.5 Tỷ lệ chó mắc bệnh viêm ruột tiêu chảy CPV2 theo tình trạng tiêm vắc xin 57 4.6 Chỉ tiêu sinh lý máu chó mắc viêm ruột tiêu chảy CPV2 (n=36) .59 4.7 Chỉ tiêu sinh hóa máu chó mắc viêm ruột tiêu chảy CPV2 (n=36) 61 4.8 Triệu chứng lâm sàng chó mắc bệnh viêm ruột tiêu chảy CPV2 62 4.9 Bệnh tích đại thể chó mắc bệnh viêm ruột tiêu chảy CPV2 .66 4.10 Bệnh tích vi thể số quan chó mắc viêm ruột tiêu chảy CPV2 69 4.11 Kết phát tế bào dương tính với kháng nguyên CPV2 74 4.12 Thông tin mẫu bệnh phẩm sử dụng nghiên cứu .79 4.13 Tỷ lệ (%) tương đồng trình tự nucleotide (nt) gen VP2 12 chủng vi rút parvo nghiên cứu với với chủng vi rút parvo tham chiếu khác 81 4.14 Tỷ lệ (%) tương đồng trình tự amino acid (aa) gen VP2 12 chủng vi rút parvo nghiên cứu với với chủng vi rút parvo tham chiếu khác 82 4.15 Tỷ lệ tương đồng trình tự nucleotide (nt) (dưới đường chéo) amino acid (aa) (trên đường chéo) chủng CPV2 nghiên cứu với chủng CPV2 tham chiếu khác 100 4.16 So sánh trình tự nt aa chủng CPV2 nghiên cứu với chủng CPV2 tham chiếu khác 101 viii