Nghiên cứu hoạt tính kháng viêm của cao chiết từ một số nấm dược liệu quý

MẪU 14KHCN Mẫu IUH1521 BỘ CÔNG THƢƠNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI KHOA HỌC KẾT QUẢ THỰC HIỆN ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CẤP TRƢỜNG Tên đề tài Nghiên cứu hoạt tín.

Mẫu IUH1521 BỘ CÔNG THƢƠNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI KHOA HỌC KẾT QUẢ THỰC HIỆN ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CẤP TRƢỜNG Tên đề tài: Mã số đề tài: Chủ nhiệm đề tài: Cố vấn đề tài: Đơn vị thực hiện: Nghiên cứu hoạt tính kháng viêm cao chiết từ số nấm dƣợc liệu quý 171.4231 ThS Lâm Khắc Kỷ TS Đinh Minh Hiệp Viện Công nghệ Sinh học - Thực phẩm TP.HỒ CHÍ MINH, 2018 Tp Hồ Chí Minh, … LỜI CẢM ƠN Chúng chân thành gởi cám ơn đến BGH Trường ĐHCN TPHCM tồn thể phịng ban chức hỗ trợ điều kiện pháp lý, kinh phí trang thiết bị phịng thí nghiệm để chúng tơi hồn thành đề tài Chúng tơi gởi lời cám ơn sâu sắc đến Ban lãnh đạo Viện CNSH-TP, tập thể thầy cô Viện em sinh viên CNSH K10 đồng hành suốt thời gian thực đồ án Chúng không quên gởi lời tri ân đến TS Đinh Minh Hiệp mơn Hóa sinh thuộc ĐH TN, ĐH Quốc Gia TPHCM cố vấn hỗ trợ chuyên môn cho thành công đề tài Trân trọng I PHẦN THƠNG TIN CHUNG Thơng tin tổng quát 1.1 Tên đề tài: Nghiên cứu hoạt tính kháng viêm cao chiết từ số nấm dƣợc liệu quý 1.2 Mã số: 171.4231 1.3 Danh sách chủ trì, thành viên tham gia thực đề tài TT Họ tên (học hàm, học vị) Đơn vị cơng tác Vai trị thực đề tài Th.S Lâm Khắc Kỷ Viện Công nghệ Sinh Chủ nhiệm đề tài học- Thực phẩm Lê Trọng Luân Viện Công nghệ Sinh Thành viên học- Thực phẩm 1.4 Đơn vị chủ trì: 1.5 Thời gian thực hiện:  1.5.1 Theo hợp đồng: từ tháng năm 2017 đến tháng năm 2018  1.5.2 Gia hạn (nếu có): từ tháng năm 2018 đến tháng năm 2018  1.5.3 Thực thực tế: từ tháng năm 2017 đến tháng năm 2018 1.6 Những thay đổi so với thuyết minh ban đầu (nếu có): (Về mục tiêu, nội dung, phương pháp, kết nghiên cứu tổ chức thực hiện; Nguyên nhân; Ý kiến Cơ quan quản lý) 1.7 Tổng kinh phí đƣợc phê duyệt đề tài: 40 triệu đồng II Kết nghiên cứu Đặt vấn đề: Nấm dược liệu từ lâu thu nhận sử dụng giới làm nguồn dược liệu Ở Việt Nam, số nấm dược liệu sử dụng từ lâu chủ yếu theo kinh nghiệm y học dân tộc Gần đây, nhà khoa học Việt Nam bắt đầu thu nhận, phân lập, nuôi trồng tiến hành nghiên cứu hợp chất sinh học có hoạt tính từ nấm dược liệu nhằm chủ động tạo nguồn nguyên vật liệu quý nước có sản phẩm có giá trị phục vụ cho sức khỏe cộng đồng Các hoạt tính kháng oxy hóa, kháng sinh, kháng phân bào đề cập số nghiên cứu, nhiên chưa có nghiên cứu cơng bố khả kháng viêm Dựa mơ hình in vitro Bovine serum albumin (BSA) mơ hình nghiên cứu khả bảo vệ biến tính protein - albumin nhiệt theo Mizushima Kobayashi (1968), Trần Quốc Tuấn cs (2014) [4] khảo sát chỉnh sửa phù hợp với điều kiện phịng thí nghiệm, tiến hành thu nhận cao chiết từ sinh khối nấm dược liệu gồm linh chi, vân chi, thượng hoàng, hầu thủ trùng thảo [1][3] theo dung mơi có độ phân cực giảm dần để phân lập riêng hợp chất có nấm theo nhóm dựa vào khả phân cực chúng Sau đó, chúng tơi tiến hành sàng lọc tính kháng viêm in vitro theo phương pháp BSA để tìm phân đoạn cao có tính kháng viêm cao Từ đó, theo phương pháp phân tích Liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS)[5] chúng tơi xác định hợp chất đóng vai trò quan trọng việc biểu khả kháng viêm tiềm loại nấm Mục tiêu: - Chiết cao tổng 20 cao phân đoạn từ chủng nấm linh chi, vân chi, thượng hoàng, hầu thủ đông trùng hạ thảo - Khảo sát mơ hình thử nghiệm hoạt tính kháng viêm in vitro để chọn mơ hình ổn định phù hợp với điều kiện chỗ - Áp dụng mơ hình thử nghiệm hoạt tính kháng viêm in vitro 25 cao chiết thu - Phân tích LC/MS để xác định hợp chất có phân đoạn cao có tính kháng viêm in vitro cao Phƣơng pháp nghiên cứu  Thu cao chiết tổng theo phương pháp chiết ngấm kiệt Nguyễn Kim Phi Phụng, 2007  Thu cao chiết phân đoạn theo phương pháp chiết lỏng- lỏng Nguyễn Kim Phi Phụng, 2007  Nghiên cứu tính kháng viêm in vitro theo phương pháp biến tính protein albumin theo Mizushima Kobayashi (1968) có số thay đổi cho phù hợp với điều kiện phịng thí nghiệm theo cơng bố Trần Quốc Tuấn cs 2014  Phân tính định tính hợp chất có phân đoạn có tính kháng viêm cao theo kỹ thuật sắc ký phối phổ LC/MS Tổng kết kết nghiên cứu 4.1 Thu cao tổng Thu cao tổng nấm dược liệu gồm Linh chi, Vân chi, Thượng Hoàng, Hầu thủ Trùng thảo với hiệu suất chiết cao tổng Thượng Hoàng cao 18,08 ± 2,32 4.2 Thu cao phân đoạn Sử dụng dung môi từ không phân cực đến phân cực ethanol (EtOH), petroleum ether (PE), ethyl acetate (EtOAc), n-butanol (n-BuOH)) để thu 20 cao phân đoạn nấm kết cao PE nấm Trùng thảo có hiệu suất cao 59,39 ± 5,74, cao EtOAc nấm Linh chi có hiệu suất 37,00 ± 2,77 4.3 Kết IC50 thể khả bảo vệ biến tính Albumin nhiệt (Tính kháng viêm in vitro) cao tổng Vân chi Nấm Giá trị IC50 Thƣợng hoàng 1167,48 911,79 7,07 Hầu thủ 1084,88 Linh chi - 12,87 Cordycpes Takaomontana 215.666 Theo kết thu được, cao tổng trùng thảo có khả kháng viêm in vitro cao 4.4 Kết IC50 thể khả bảo vệ biến tính Albumin nhiệt (Tính kháng viêm in vitro) 20 cao phân đoạn Nấm Cao PE Vân chi 1184,37 Thƣợng hoàng 1083,21 Hầu thủ 1569,94 Linh chi - Trùng thảo Cao EtOAc 514,78 4,99 Cao BuOH Cao nƣớc - - 7,75 251,70 1106,84 28,66 1327,36 - - 1830,29 4,71 9,69 - 312,84 Kết cho thấy cao EtOAc nấm thượng hồng có khả kháng viêm in vitro cao 4.5 Phân tích hợp chất có cao tổng trùng thảo (cao có khả kháng viêm in vitro cao nhất) Theo kết phân tích Sắc kí đồ MS – ESI phân tích ĐH KH tự nhiên tìm thấy cao tổng Trùng Thảo cho thấy thởi gian lưu phút 18.2 đến 19.1 thu phân đoạn 2’Deoxyadenosin, thởi gian lưu phút 20.5 đến phút 21.4 thu phân đoạn Adenosin thời gian lưu phút 21.9 đến phút 22.4 Cordycepins hợp chất có tính kháng viêm theo cơng bố Zhou X (2008) Đánh giá kết đạt đƣợc kết luận Chúng tiến hành thu cao tổng 20 cao phân đoạn để khoanh vùng hợp chất có tính phân cực tăng dần loại nấm dược liệu dùng phổ biến Chúng tơi nghiên cứu tính kháng viêm 25 cao chiết từ nấm dược liệu để xác định phân đoạn cao chiết có tính khàng viêm cao cao tổng nấm trùng thảo Cordyceps takaomontana Chúng tiến hành phân tích hợp chất có phân đoạn cao trùng thảo có tính kháng viêm cao dựa vào kỹ thuật LC/MS giải thích lý phân đoạn có khả kháng viêm cao chúng chứa hợp chất xác định có tính kháng viêm bao gồm 2’Deoxyadenosin, Adenosin Cordycepins Kết luận có tính khoa học, tính ứng dụng cao tính chúng tơi để nghiên cứu tạo sản phẩm chức có khả kháng viêm cao từ nấm dược liệu dùng đại trà thị trường, nên sử dụng nguyên liệu nấm Trùng thảo nuôi trồng Việt Nam Kết động lực cho nhà sản xuất nước chủ động nguồn khai thác nguyên liệu chế biến nước hạn chế khai thác bừa bãi, phá hoại nguồn gen q nấm đơng trùng hạ thảo Việt Nam Tóm tắc kết ABTRACT Medical mushroom, Trametes versicolor; Hericium erinaceus; Phellinus linteus; Ganoderma lucidum and Cordyceps takaomontana, are well known as herbal medicines in Vietnam due to their anti-inflammatory activity However, the scientific publications examining the functional compounds extracted from these medical mushrooms remain limited In this study, we used non-polar and polar solvent such as ethanol (EtOH), petroleum ether (PE) , ethyl acetate (EtOAc), n-butanol (n-BuOH) to obtain different substances from each medical mushroom We first identify the extraction efficiency from each mushroom by comparing the ultimate product yielded from each mushroom Next, we investigated the in vitro anti-inflammatory activity of these substances by denaturizing albumin protein Our results showed that Trametes versicolor yielded the highest extraction efficiency with 64.17% following by Phellinus linteus The anti-inflammatory property of Cordyceps Takaomontana was highest with inhibitory capacity of 96.17% at concentration of 500 μg / ml and IC50 value of 197,17 μg / ml Altogether, our study provided a step further to the understanding of anti-inflammatory activity effect of these medical mushrooms in human Từ khóa: Functional compounds extracted, Cordyceps takaomontana, BSA (Bovine serum albumin) TÓM TẮT Hiện nay, nấm dược liệu khai thác sử dụng nhiều nước giới, nhiên cịn chưa có nhiều cơng bố khoa học xác định giá trị ảnh hưởng loại nấm sức khỏe người, có tác dụng kháng viêm cần thiết cho nước có tình trạng viêm nhiễm cao so với giới Việt Nam [2] Trong nội dung nghiên cứu này, tiến hành chiết cao phân đoạn từ mẫu nấm dược liệu nuôi trồng Việt Nam: Vân chi (Trametes versicolor); Hầu thủ (Hericium erinaceus); Thượng hoàng (Phellinus linteus); Linh Chi đỏ (Ganoderma lucidum) Đông trùng hạ thảo (Cordyceps takaomontana) với phương pháp chiết ngấm kiệt phương pháp chiết lỏng – lỏng với dung môi từ không phân cực đến phân cực ethanol (EtOH), petroleum ether (PE), ethyl acetate (EtOAc), n-butanol (n-BuOH)) so sánh hiệu suất chiết cao phân đoạn nấm Sau đó, tiến hành khảo sát khả kháng viêm in vitro cao chiết theo phương pháp gây biến tính protein- albumin Kết thu sau: 1) Hiệu suất chiết cao phân đoạn nấm Vân Chi cao đạt 64,17% 2) Nấm có hoạt tính kháng viêm nấm đông trùng hạ thảo (Cordyceps Takaomontana) cao tổng có khả ức chế 96,168% nồng độ 500 µg/ml đạt giá trị IC50= 197,17 µg/ml Từ khóa: Cao chiết, Cordyceps takaomontana, BSA (Bovine serum albumin) BÁO CÁO CHI TIẾT ĐỀ TÀI NGHIỆN CỨU KHOA HỌC III 3.1 Kết nghiên cứu ( sản phẩm dạng 1,2,3) Yêu cầu khoa học hoặc/và tiêu Tên sản phẩm TT kinh tế - kỹ thuật Đăng ký Đạt đƣợc Cao chiết từ loại nấm 15-25 cao tổng cao dược liệu xác định phân đoạn khả kháng viêm nấm (Linh chi, Vân chi, Thượng hồng, Hầu thủ, trùng thảo) Qui trình chiết cao áp Qui trình chiết cao có Qui trình chiết cao có dụng vào chương trình thuyết minh thuyết minh áp dụng giảng dạy đại học đồ án tốt nghiệp đại học trường Bài báo khoa học đăng Bài báo khoa học Đã gởi báo khoa học tạp chí trường đăng tạp chí có tên:” Insight into antitrường inflammatory in vitro Thu 25 cao xác định khả kháng viêm in vitro loại cao chiết activity of functional compounds extracted from Trametes versicolor; Hericium erinaceus; Phellinus linteus; Ganoderma lucidum and Cordyceps takaomontana cultivated in Vietnam” Ghi chú: - Các ấn phẩm khoa học (bài báo, báo cáo KH, sách chuyên khảo…) chấp nhận có ghi nhận địa cảm ơn trường ĐH Công Nghiệp Tp HCMđã cấp kính phí thực nghiên cứu theo quy định - Các ấn phẩm(bản photo)đính kèm trongphần phụ lục minh chứng cuối báo cáo (đối với ấn phẩm sách, giáo trình cần có photo trang bìa, trang trang cuối kèm thơng tin định số hiệu xuất bản) 3.2.Kết đào tạo Họ tên TT Thời gian thực đề tài Tên đề tài Tên chuyên đề NCS Tên luận văn Cao học Đã bảo vệ Nghiên cứu sinh Học viên cao học Sinh viên Đại học Luận văn tốt nghiệp 10/2017 – 4/2018 Đại học (4 Sinh viên) Luận văn tốt nghiệp 10/2017 – 4/2018 Đại học (4 sinh viên) Khảo sát khả kháng viêm in vitro cao tổng cao phân đoạn nấm Cordyceps takaomontana Khảo sát tính kháng viêm in vitro cao tổng cao phân đoạn nấm dược liệu(vân chi, thượng hoàng, hầu thủ) Đã bảo vệ đạt loại Giỏi Đã bảo vệ đạt loại Giỏi Ghi chú: - Kèm photo trang bìa chuyên đề nghiên cứu sinh/ luận văn/ khóa luận bằng/giấy chứng nhận nghiên cứu sinh/thạc sỹ học viên bảo vệ thành công luận án/ luận văn;( thể tạiphần cuối báo cáo khoa học) IV TÌNH HÌNH SỬ DỤNG KINH PHÍ T T Nội dung chi A B Chi phí trực tiếp Th khốn chun mơn Ngun, nhiên vật liệu, Thiết bị, dụng cụ Cơng tác phí Dịch vụ thuê Hội nghị, hội thảo,thù lao nghiệm thu kỳ In ấn, Văn phịng phẩm Chi phí khác Chi phí gián tiếp Quản lý phí Chi phí điện, nước Tổng số V KIẾN NGHỊ Dựa theo kết đạt đề tài nghiên cứu “Nghiên cứu hoạt tính kháng viêm cao chiết từ số nấm dược liệu q”, tiếp tục ni cấy trùng thảo cordyceps takamotana tiến hành nghiên cứu sâu khả kháng viêm chúng mơ hình in vivo thử nghiệm lâm sàng, tiến tới thu sản xuất dạng thực phẩm chức phục vụ cộng đồng VI PHỤ LỤC (liệt kê minh chứng sản phẩm nêu Phần III) Bài báo “Insight into anti-inflammatory in vitro activity of functional compounds extracted from Trametes versicolor; Hericium erinaceus; Phellinus linteus; Ganoderma lucidum and Cordyceps takaomontana cultivated in Vietnam Khóa luận sinh viên tốt nghiệp: Đồ án 1:”Khảo sát khả kháng viêm in vitro cao tổng cao phân đoạn nấm Cordyceps takaomontana Đồ án 2: Khảo sát tính kháng viêm in vitro cao tổng cao phân đoạn nấm dược liệu(vân chi, thượng hoàng, hầu thủ) Qui trình chiết cao ứng dụng giảng dạy mơn thực tập chun đề Hóa sinh – sinh học phân tử lớp DHSH10 DHSH11 25 mẫu cao chiết nấm vân chi, linh chi, hầu thủ, thượng hồng đơng trùng hạ thảo Chủ nhiệm đề tài Tp HCM, ngày tháng năm Phòng QLKH&HTQT Trƣởng (đơn vị) (Họ tên, chữ ký) 25 18.09 17.62 20 15 12.52 12.44 Linh chi Vân chi 10.74 10 Thượng hoàng Hầu thủ C.Takaomontana Biểu đồ1: So sánh hiệu suất chiết cao tổng nấm dược liệu Nhận xét: Biểu đồ cho thấy hiệu suất chiết cao chiết cao tổng nấm thượng hoàng cao (18.09%) Như vậy, khả nấm thượng hoàng chứa lượng lớn chất có khả tan cồn với khối hạt xay nhỏ mịn xơ sau xay nát (hình 1) làm tăng khả tiếp xúc dung mơi, từ làm tăng khả chiết rút Hình 1: Khối nguyên liệu sau xay nát 16 Hình 2: Cao tổng thu loại nấm dược liệu 2.4.2 Kết chiết cao phân đoạn Bảng Hiệu suất chiết cao phân đoạn nấm dƣợc liệu 17 Hiệu suất chiết cao (%) 70 59.39 60 50.13 50 37 40 30 20.58 17.2 20 10 8.8 27.63 7.76 21.79 18.13 18.9 21.7 14.53 14.62 12.1 10.09 13.19 8.69 19.57 2.99 Linh chi Thượng hoàng Vân chi Cao PE Cao EtOAc Cao BuOH Hầu thủ C.Takaomontana Cao nước Biểu đồ V: So sánh hiệu suất chiết cao phân đoạn nấm dược liệu Dựa biểu đồ so sánh hiệu suất chiết cao phân đoạn nấm, dễ dàng nhận thấy hiệu suất chiết cao phân đoạn Cordyceps takaomontana nuôi trồng cho sinh khối cao Đặc biệt cao cồn cao nước xem hai nguồn tổng để phân tích hợp chất khảo nghiệm hoạt tính sinh học 2.4.3 Kết khảo sát tính kháng viêm in vitro + Kết khảo sát tính kháng viêm in vitro đối chứng Diclofenac Dicloefenac NSAID mạnh sử dụng điều trị bệnh viêm có nguồn gốc khơng chưa steroid, có khả liên kết với protein huyết tương tới 99% (do phần trăm ức chế biến tính BSA nhiệt cao loại thuốc khác [7] Hoạt lực ức chế biến tính BSA nhiệt đối chứng Diclofenac nồng độ khảo sát :0;25; 50; 100; 200; 400; 500 μg/ml Kết thực nghiệm biểu diễn đồ thị bên dưới: 18 Đồ thị.1: Phần trăm ức chế biến tính BSA nhiệt Diclofenac Đồ thị.2: Phần trăm ức chế biến tính BSA nhiệt cao tổng Cordyceps takaomontana 19 Đồ thị.3: Phần trăm ức chế biến tính BSA nhiệt cao EtOAc Thượng hồng Theo kết bảng đồ thị 2, khả ức chế hợp chất có cao cồn (cao tổng) Cordyceps takaomontana nồng độ 500 µg/ml 96.07 % cao EtOAc nấm thượng hoàng 97.43% cao khác nhỏ chất chuẩn 100%, cho phép tính tốn giá trị IC50 chúng 2.4.4 Kết khảo sát tính kháng viêm in vitro cao tổng nấm Bảng Giá trị IC50 trình khảo sát tính kháng viêm in vitro cao tổng Nấm Giá trị IC50 Vân chi 1167,48 Thƣợng hoàng 911,79 7,07 Hầu thủ 1084,88 12,87 Linh chi - Chú thích : - : Cao chiết có khả ức chế 50% nồng độ khảo sát 20 Cordycpes Takaomontana 215.666 2.4.5 Kết khảo sát tính kháng viêm in vitro cao phân đoạn nấm Bảng Giá trị IC50 q trình khảo sát tính kháng viêm in vitro caophân đoạn Nấm Cao PE Vân chi 1184,37 Thƣợng hoàng 1083,21 Hầu thủ 1569,94 Linh chi - Trùng thảo Cao EtOAc Cao BuOH Cao nƣớc - - 514,78 7,75 251,70 4,99 1106,84 28,66 1327,36 - - 1830,29 4,71 9,69 - 312,84 Chú thích : - : Cao chiết có khả ức chế 50% nồng độ khảo sát 0: Cao chiết khơng có khả ức chế biến tính BSA nồng độ khảo sát Nhận xét: Bảng số liệu cho ta thấy giá trị IC50 cao tổng nấm C takaomontana cao EtOAc nấm thượng hoàng 215.666 251,70 4,99 nồng độ 500µg/ml Kết chứng tỏ cao cồn nấm C.takaomontana cao EtOAc nấm thượng hồng có chứa chất có khả ức chế biến tính albumin nhiệt cao Trong đó, đặc biệt ý đến giá trị IC50 cao cồn nấm C takaomontana cho thấy khả kháng viêm vượt trội Trên kết thu này, để làm sáng tỏ thêm khả kháng viêm in vitro cao cồn nấm C.takaomontana mẫu gửi sang trung tâm phân tích Trường Đại học Khoa học tự nhiên phân tích thành phần hợp chất LC/MS 2.4.6 Phân tích hợp chất có khả bảo vệ biến tính BSA nhiệt phƣơng pháp LC- MS Từ kết phân tích mẫu cao tổng nấm Cordyceps takaomontana thực phịng phân tích trung tâm – trường Đại học Khoa Học Tự Nhiên – Tp.HCM thu kết sau: 21 Hình 4: Sắc kí đồ ion tổng cao tổng Nhận xét: Theo kết phân tích sắc ký đồ hình thu phổ phổ chiếm 50% hợp chất khơng mục tiêu Các phổ cịn lại chiếm gần 40% Hình 5: Sắc kí đồ MS – ESI thời gian lưu 18.2-19.1 phút Kết phân tích thể hình cho thấy từ phút 18.2 phút 19.1 thu phân đoạn có trọng lượng phân tử 2’Deoxyadenosin, hợp chất có tính kháng viêm theo cơng bố Zhou X (2008) 22 Hình 6: Sắc kí đồ MS – ESI thời gian lưu 20.5-21.4 phút Kết phân tích hình cho thấy từ phút 20.5 phút 21.4 thu phân đoạn có trọng lượng phân tử Adenosin-hợp chất có tính kháng viêm theo cơng bố Zhou X (2008) Hình 7: Sắc kí đồ MS – ESI thời gian lưu 21.9-22.4 phút Hình cho Kết phân tích từ phút 21.9 phút 22.4 thấy phân đoạn có trọng lượng phân tử Cordycepins-hợp chất có tính kháng viêm theo công bố Zhou X (2008) 23 Bảng 4: phân tích hợp chất hữu tƣơng ứng có cao tổng Compound RT (phút) 10.3 – 11.8 Tài liệu Hợp chất CTPT 2-Mercapto4,5dmethuylthiazole C5H7NS2 C12H12N3O2 19.6 – 20.5 Phthalic Anhydride Cytosine Uridine 20.5 – 21.4 21.4 – 21.9 21.9 – 22.4 - 318.2992 C8H4O3 149.0222 C8H11N6O2 C9H13N2O6 192.1361 223.1010 245.0780 C10H13N5O3Na 274.2725 - 230.2476 C10H13N5O3Na 274.2754 2’Deoxyadenosine 146.023 18.2 – 19.1 2’Deoxyadenosine tham khảo m/z - Adenosine Phthalic Anhydride Cordycepin , 2’Deoxyadenosine 24 Error! Reference source not found Error! Reference source not found Thư viện NIST Error! Reference source not found 339.1754 C10H14N5O4 268.1070 - 148.0734 181.0997 226.1230 248.1049 319.1934 C8H4O3 149.0210 - 177.0537 226.1223 C10H14N5O3 Thư viện NIST 252.1071 Error! Reference source not found Thư viện NIST Error! Reference source not found 23.8 – 24.8 - - 275.1583 304.2984 189.1650 212.1804 Triethlamine C6H15N 239.1560 - - 259.1673 Thư viện NIST Chú thích: -: Khơng xác định Theo kết phân tích cho thấy cao EtOH nấm Cordyceps takaomontana có đầy đủ hợp chất sinh học quý codycepin, adenosine, acid amine… phù hợp với nghiên cứu trước Theo hình 2.3 cho thấy thành phần cordycepin, adenosine… nằm khoảng 40% tổng hợp chất chứa cao tổng Từ kết phân tích cho thấy cao EtOH chứa hợp chất có tiềm kháng viêm cordycepin, adenosine dẫn xuất chúng đồng thời phát thêm nhiều hợp chất không mục tiêu Điều phù hợp với công bố (Zhou X, 2008) 2.5 Đánh giá kết đạt đƣợc kết luận Kết nghiên cứu chiết suất thành công 25 cao chiết phân đoạn khảo nghiệm khả kháng viêmin vitro (theo mơ hình biến tính BSA nhiệt) cao phân đoạn thuộc nấm dược liệu gồm Linh chi, Vân chi, Thượng hoàng, Hầu thủ Cordyceps takaomontana (đơng trùng hạ thảo) Trong đó, khả kháng viêm in vitro cao 25 mẫu ghi nhận cao cồn mẫu nấm Cordyceps Takamontana với giá trị IC50 = 215,66 2,10 nồng độ 500 g/ml Kết phân tích sắc ký lỏng khối phổ cho thấy cao tổng Cordyceps Takamontana có chứa số hợp chất có khả kháng viêm cordycepin, adenosine… Đề tài nghiên cứu đáp ứng yêu cầu theo hợp đồng Bao gồm thu nhận 25 cao kèm theo số liệu hiệu suất chiết cao Khảo nghiệm khả kháng viêm in vitrocủa 25 cao chiết chọn mẫu cao có khả kháng viêm in vitro tốt Kết phân tích thêm LC/MS khơng nằm nội dung hợp đồng ban đầu 25 DANH MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO  Tài liệu nước [1] Lê Thị Anh Đào, Nguyễn Trương Kiến Khương, Lê Huyền Thuý Ái, Đinh Minh Hiệp, Trương Bình Ngun, (2010) Phát lồi nấm ký sinh côn trùng Cordyceps pseudomilitaris Hywel – Jones & Sivichai, 1994 vùng núi Langbian Đà Lạt, Việt Nam.Tạp chí Công nghệ Sinh học, 8(3B): p 1507 – 1511 [2] Nguyễn Kim Phi Phụng, (2007) Phương pháp cô lập hợp chất hữu NXB Đại học Quốc gia Tp Hồ Chí Minh, p 34-35 [3] Phạm Quang Thu, Lê Thị Xuân, (2011) Phân bố nấm Đông trùng hạ thảo (Isaria tenuipes (Peck) Samson) Việt Nam.Tạp chí Nơng nghiệp Phát triển Nông thôn, 9: p 93 - 97 [4] Trần Quốc Tuấn cộng sự, (2014), Chuẩn hóa mơ hình sàng lọc in-vitro hợp chất kháng viêm dựa khả ức chế biến tính albumin bị nhiệt [5] Ca Thị Út, (2012).Chiết xuất phân đoạn xác định hoạt tính sinh khối nấm Cordyceps sp Khóa luận cử nhân Sinh học ĐH Khoa học Tự nhiên TP.HCM  Tài liệu nước [6] Alberto M., Zampini I., and Isla M., (2009) Inhibition of cyclooxygenase activity by standardized hydroalcoholic extracts of four Asteraceae species from the Argentine Puna Brazilian Journal of Medical and Biological Research, 42(9): p 787-790 [7] Aseri Ajay D D., Nayak Anjali, Katewa Jitesh, ((2013) Protein binding: a study of interaction between diclofenac sodium and bovine serum albumin,.Asian Journal of Pharmaceutical Research and Development, (3): p 137-140 26 [8] Baboo Prasad S.,Aeri V., (2013) In vitro anti-inflammatory activity of Raupya (Silver) Bhasma.Journal of Chemical & Pharmaceutical Research, 5(9) [9] Choi R J., Ngoc T M., Bae K., Cho H.-J., Kim D.-D., Chun J., Khan S., and Kim Y S., (2013) Anti-inflammatory properties of anthraquinones and their relationship with the regulation of P-glycoprotein function and expression European Journal of Pharmaceutical Sciences, 48(1): p 272-281 [10] Feghali C A.,Wright T M., (1997) Cytokines in acute and chronic inflammation.Front Bioscience, 2(1): p d12-d26 [11] Fylaktakidou K C., Hadjipavlou-Litina D J., Litinas K E., and Nicolaides D N., (2004) Natural and synthetic coumarin derivatives with anti-inflammatory/antioxidant activities Current pharmaceutical design, 10(30): p 3813-3833 [12] Hariram Nile S.,Won Park S., (2013) Optimized methods for in vitro and in vivo anti-inflammatory assays and its applications in herbal and synthetic drug analysis Mini reviews in medicinal chemistry, 13(1): p 95-100 [13] Holliday J C.,Cleaver M P., (2008) Medicinal value of the caterpillar fungi species of the genus Cordyceps (Fr.) Link (Ascomycetes) A review International Journal of Medicinal Mushrooms, 10(3) [14] Karthik K., Kumar B R P., Priya V R., Kumar S K., and Rathore R S B., (2013) Evaluation of anti-inflammatory activity of canthium parviflorum by in-vitro method Indian Journal of Research in Pharmacy and Biotechnology, 1(5): p 729 [15] Kim K.-M., Kwon Y.-G., Chung H.-T., Yun Y.-G., Pae H.-O., Han J.-A., Ha K.-S., Kim T.-W., and Kim Y.-M., (2003) Metanol extract of Cordyceps pruinosa inhibits in vitro and in vivo inflammatory mediators by suppressing activation NF-κB pharmacology, 190(1): p 1-8 27 Toxicology and applied [16] Li W.-G., Zhang X.-Y., Wu Y.-J., and Tian X., (2001) Antiinflammatory effect and mechanism of proanthocyanidins from grape seeds Acta Pharmacologica Sinica, 22(12): p 1117-1120 [17] Reis F S., Barros L., Calhelha R C., Ćirić A., Van Griensven L J., Soković M., and Ferreira I C., (2013) The metanolic extract of Cordyceps militaris (L.) Link fruiting body shows antioxidant, antibacterial, antifungal and antihuman tumor cell lines properties Food and Chemical Toxicology, 62: p 91-98 [18] Georges H., Jarecki I., Netter P., Magdalou J., and Lapicque F., (1999) Glycation of human serum albumin by acylglucuronides of nonsteroidal anti-inflammatory drugs of the series of phenylpropionates Life sciences, 65(12): p PL151-PL156 [19] Liu Z., Li P., Zhao D., Tang H., and Guo J., (2011) Anti-inflammation effects of Cordyceps sinensis mycelium in focal cerebral ischemic injury rats Inflammation, 34(6): p 639-644 [20] Santangelo C., Varì R., Scazzocchio B., Di Benedetto R., Filesi C., and Masella R., (2007) Polyphenols, intracellular signalling and inflammation.Annali-istituto superiore di sanita, 43(4): p 394 [21] Xiao J., Liang Z., and Liu A., (2003) The technical route and condition of polysaccharides extraction and isolation from Paecilomyces gunnii Journal of Mountain Agriculture and Biology, 22(2): p 140-145 28 PHỤ LỤC Kết phân tích mẫu cao tổng (EtOH) nấm Cordyceps takaomontana thực phịng phân tích trung tâm - trƣờng Đại học Khoa Học Tự Nhiên - Tp.HCM Trường Đại học Khoa học Tự Nhiên Phòng TN PTTT 227 Nguyễn Văn Cừ, F.4, Q.5, TpHCM Cộng Hòa Xã Hội Chủ Nghĩa Việt Nam Độc Lập – Tự Do – Hạnh Phúc ♦♦♦ Dạng mẫu: Tên mẫu: Cordyceps takaomontana Chỉ tiêu phân tích: Chỉ tiêu STT CTPT Kết 01 m-Hydroxynorephedrine C9H10H13NO2 PH 02 n-Hexadecanoic acid C16H32O2 PH 03 Hexadecanoic acid, ethyl ester C18H36O2 PH 04 Oleic acid C18H34O2 PH 05 Linoleic acid C18H32O2 PH 06 Ethyl Stearate C20H40O2 PH 07 Isooctyl phthalate C24H38O4 PH 08 para - Ethoxyamphetamine C11H17NO PH 09 - Methoxyamphetamine C10H15NO PH Phƣơng pháp HPLC-MS *Lưu ý: Kết có giá trị mẫu gởi PH: phát Tp.HCM, Ngày 06 tháng 04 năm 2018 Người Phân Tích ThS Nguyễn Khắc Mạnh 29 PHẦN III PHỤ LỤC ĐÍNH KÈM Hợp đồng thực đề tài nghiên cứu khoa học Thuyết minh đề tài phê duyệt Quyết định nghiệm thu Hồ sơ nghiệm thu (biên họp, phiếu đánh giá, bảng tổng hợp điểm, giải trình, phiếu phản biện) Sản phẩm nghiên cứu (bài báo, vẽ, mơ hình….) 30 ... kết đạt đề tài nghiên cứu ? ?Nghiên cứu hoạt tính kháng viêm cao chiết từ số nấm dược liệu quý? ??, tiếp tục nuôi cấy trùng thảo cordyceps takamotana tiến hành nghiên cứu sâu khả kháng viêm chúng mơ... loại nấm dược liệu dùng phổ biến Chúng nghiên cứu tính kháng viêm 25 cao chiết từ nấm dược liệu để xác định phân đoạn cao chiết có tính khàng viêm cao cao tổng nấm trùng thảo Cordyceps takaomontana... sau cao nước Sau chiết cao, ta thu nhận chủng nấm cao chiết sau: cao tổng (cao cồn), cao PE, cao EtOAc, cao BuOH, cao nước Xử lý kết Cao cồn :%H = Mcao / Msk * 100% Cao phân đoạn :%H = Mcao / Mcao