Bộ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NGUYỄN TẤT THÀNH KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC VÀ MÔI TRƯỜNG NGUYEN TAT THANH KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT KHẢ NĂNG PHÂN GIẢI BÀO TỬ NẤM LINH CHI (Ganoderma lucidum) T[.]
Bộ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NGUYỄN TẤT THÀNH KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC VÀ MÔI TRƯỜNG NGUYEN TAT THANH KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT KHẢ NĂNG PHÂN GIẢI BÀO TỬ NẤM LINH CHI (Ganoderma lucidum) TỪ CHỦNG VI KHUẨN Bacillus subtìlis PHÂN LẬP TỪ MEN VI SINH Sinh viên thực : Phạm Thị Thùy Linh Chuyên ngành TP.HCM, tháng năm 2018 : Công nghệ Sinh học Bộ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NGUYỄN TẤT THÀNH KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC VÀ MƠI TRƯỜNG KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT KHẢ NĂNG PHÂN GIẢI BÀO TỦ NÁM LINH CHI (Ganoderma lucidum) TỪ CHỦNG VI KHUẤN Bacillus subtilis PHÂN LẬP TỪ MEN VI SINH Sinh viên thực : Phạm Thị Thùy Linh Mã sô sinh viên :1411532493 Lớp : 14DSH02 Chuyên ngành : Công nghệ Sinh học Giáo viên hướng dần : ThS Nguyễn Trung Hiếu TP.HCM, tháng năm 2018 LỜI CẢM ƠN Tôi xin chân thành cảm ơn ThS Nguyễn Trung Hiếu, người Thầy trực tiếp giảng dạy, tận tình hướng dần, giúp đỡ, động viên tạo điều kiện đe tơi hồn thành khóa luận Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn chân thành đến quý thầy cô Khoa Công nghệ sinh học Môi trường - Trường Đại học Nguyễn Tất Thành giúp đờ thời gian thực tập Lời cảm ơn sâu sắc tơi gửi đến gia đình tập thể 14DSH02 quan tâm, động viên, tận tình giúp đỡ tơi suốt q trình học tập quãng thời gian thực luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn! Phạm Thị Thùy Linh Khoa Công nghệ Sinh học Môi trường Trường Đại Học Nguyền Tất Thành ii MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii TÓM TẤT V SUMMARY vi DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẤT vii DANH MỤC CÁC HÌNH viii DANH MỤC CÁC BẢNG ix ĐẶT VÁN ĐÈ CHƯƠNG TÓNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tông quan nâm Linh chi 1.1.1 Giới thiệu 1.1.2 Hình thái cấu tạo nấm Linh chi 1.1.3 Chu trình phát triển nấm Linh chi 1.1.4 Thành phần công dụng 1.2 Tồng quan Bacillus subtilis 1.2.1 Giới thiệu 1.2.2 Đặc điểm hình thái 1.2.3 Đặc điếm sinh hóa 1.3 Tình hình nghiên cứu 1.3.1 Các nghiên cứu việc phá bào tử nấm Linh chi giới 1.3.2 Các nghiên cứu việc phá bào tử nấm Linh chi Việt Nam CHƯƠNG NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cứu 2.1 Nội dung đối tuợng nghiên cứu 2.1.1 Nơi thực 2.1.2 Nội dung 2.1.3 Đối tuợng nghiên cứu iii 2.2 Dụng cụ, hóa chất, thiết bị 2.2.1 Dụng cụ 2.2.2 Hóa chất 10 2.2.3 Thiết bị 11 2.3 Phương pháp nghiên cứu 12 2.3.1 Chuẩn bị mẫu .12 2.3.2 Phân lập nhân sinh khối chủng vi khuẩn 12 2.3.2.1 Phân lập chủng vi khuẩn 12 2.3.2.1 Nhân sinh khối vi khuẩn 12 2.4 Lên men phá hủy bào tử nấm Linh chi 13 2.5 Phương pháp định lượng triterpenoid 14 2.5.1 Thí nghiệm ủ bào tử nấm hấp vô trùng môi trường acid base 16 2.5.2 Thí nghiệm lên men bào tử nấm hấp vô trùng vi khuẩn B subtỉlis 17 2.5.3 Thí nghiệm lên men bào tử nấm sống vi khuẩn B subtilis 18 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THAO LUẬN 21 3.1 Phân lập định danh chủng vi khuan Bacillus subtilis từ Biosubtyl DL 21 3.2 Ket thí nghiệm ủ bào tử nấm hấp vô trùng môi trường acid base 22 3.3 Ket thí nghiệm lên men bào tử nấm đà hấp vô trùng vi khuan B subtilis 25 3.4 Ket thí nghiệm lên men bào tử nấm song vi khuan B subtilis 26 KẾT LUẬN VÀĐỀ NGHỊ 29 TÀI LIỆU THAM KHAO 30 PHỤ LỤC 32 IV TÓM TẮT Đe tài: “Khảo sát khả phân giải bào tử nấm Linh chi (Ganoderma lucidutn) từ chủng vi khuẩn Bacillus subtilis phân lập từ men vi sinh” thực từ tháng 02/2018 đến 08/2018 phịng thí nghiệm Sinh hóa - Sinh dược - Ký sinh trùng, Khoa Công nghệ sinh học Môi trường, Trường đại học Nguyễn Tất Thành Mục tiêu đề tài đánh giá khả phóng thích triterpennoid bào tử nấm Linh chi lên men vi khuẩn Bacillus subtilis điều kiện môi trường khác Đe tài gồm bốn nội dung chính: Phân lập định danh chủng vi khuan Bacillus subtilỉs từ Biosubtyl DL; Khảo sát khả phóng thích triterpenoid khỏi bào tử nấm hấp vô trùng môi trường acid base; Khảo sát hàm lượng triterpenoid cịn lại bào tử nấm hấp vơ trùng lên men vi khuẩn Bacillus subtilis môi trường nuôi cấy; Khảo sát hàm lượng triterpenoid lại bào tử nấm sống lên men vi khuan Bacillus subtilis mơi trường ni cấy Các thí nghiệm bố trí theo kiêu hồn tồn ngẫu nhiên Ket đạt được: - Phân lập, định danh nhân sinh khối vi khuan Bacillus subtilỉs từ men vi sinh Biosubtyl DL - Môi trường acid base làm tăng khả phóng thích triterpenoid từ bào tử nấm; đó, mơi trường base làm tăng phóng thích triterpenoid ngồi mơi trường nhiều so với acid - Vi khuẩn Bacillus subtilis làm cấu trúc bào tử bền vững nên làm tăng khả phóng thích triterpenoid khởi bào tử, thời gian lên men lâu lượng hoạt chất phóng thích nhiều - Bào tử nấm hấp cho hiệu phóng thích triterpenoid ngồi mơi trường lên men với vi khuẩn cao so với bào tử nấm sống - Hiệu phóng thích triterpenoid từ lơ lên men với vi khuấn cao so với bào tử ủ môi trường acid base V SUMMARY Subject: “Investigation of sporulation ability of Ganoderma lucidum spores from Bacillus subtilis bacteria isolated from probiotics” was performed in 02 - 08/2018 at The laboratory Biochemical - Biopsy - Parasites, Department of Biotechnology and Enviroment, Nguyen Tat Thanh University The target of subject was evaluation of triterpenoid release of Red Lingzhi mushroom spores when fermented with Bacillus subtilis in different environmental conditions The subject consists of four main topics: Isolation, identification and multiplication of Bacillus subtilis from Biosubtyl DL; Investigation of the ability of triterpenoid to be released from sterile fungal spore in acid and base media; Investigation of residual triterpenoid content in aseptic fungal spores with Bacillus subtilis in culture medium; Investigation of residual triterpenoid content in living fungal spores with Bacillus subtilis in culture medium The experiments were arranged in a completely randomized fashion Achievements of research: - Isolation, identificatio and multiplication Bacillus subtilis from Biosubtyl DL probiotics - The acid and base environment increases the ability to release triterpenoids from fungal spores; Besides, the base environment increases the release of triterpenoids to the environment more than acid - Bacillus subtilis causes unstable spore structure to increase the ability of triterpenoid to liberate from the spore, the longer the fermentation time, the greater the release activity - The fungal spores are steamed to effectively release triterpenoids into the environment when fermented with bacteria higher than those of the living fungus - Efficacy of triterpenoid release from fermented batches with bacteria is higher than that of fungal spores only in acid or base media VI DANH MỤC CÁC CHŨ VIẾT TẮT WOO: Môi trường sinh chitinase cải tiên woo cộng ƯV-VIS: Ultraviolet - Visible: Pho tử ngoại - Khả kiến OD: Optical density (mật độ quang pho) CFU: Colony forming unit (mật độ tế bào) MRS: De Man - Rogosa - Shapre B subtilis: Bacillus subtilis ctv: Cộng tác viên ĐC: Đối chứng HL: Hàm lượng TB: Trung bình atm: Atmosphere TBHL: Trung bình hàm lượng Vll DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Nấm Linh chi (Ganodertna lucidunì) Hình 1.2 Phân loại loại nấm Linh chi theo màu sắc Hình 1.3 Vi khuân Bacillus subtilic Hình 2.1 Biosubtyl DL Hình 2.2 Một so thiết bị dùng thí nghiệm Hình 2.3 Mầu lên men bào tử nấm Linh chi vi khuan B subtilis Hình 2.4 Các mẫu thí nghiệm sau ly tâm Hình 3.1 Đìa phân lập vi khuẩn Hình 3.2 Vi khuẩn Bacillus subtilis kính hiến vi quang học (100X) Hình 3.3 Thử nghiệm oxidase (A) thừ nghiệm catalase (B) Hình 3.4 Bieu đồ so sánh hàm lượng triterpenoid/khối lượng khô (mg/g) phóng thích mơi trường ủ acid base nghiệm thức theo ngày Hình 3.5 Biểu đồ so sánh hàm lượng triterpenoid/khối lượng khơ (mg/g) cịn lại bào tử nấm ủ với môi trường acid base nghiệm thức theo ngày Hình 3.6 Biểu đồ so sánh hàm lượng triterpenoid/khối lượng khơ (mg/g) cịn lại bào tử nấm hấp vô trùng lên men vi khuẩn môi trường nuôi cấy nghiệm thức theo ngày Hình 3.7 Biểu đồ so sánh hàm lượng triterpenoid/khối lượng khơ (mg/g) cịn lại bào tử nấm sống lên men vi khuấn cùa nghiệm thức theo ngày viii DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1 Thí nghiệm ủ bào tử nấm hấp vô trùng môi trường acid base Bảng 2.2 Thí nghiệm lên men bào từ nấm hấp vơ trùng vi khuấn B.subtilis Bảng 2.3 Thí nghiệm lên men bào tử nấm sống vi khuẩn B subtilis IX ... tài: ? ?Khảo sát khả phân giải bào tử nấm Linh chi (Ganoderma lucidutn) từ chủng vi khuẩn Bacillus subtilis phân lập từ men vi sinh? ?? thực từ tháng 02/2018 đến 08/2018 phịng thí nghiệm Sinh hóa - Sinh. .. CÔNG NGHỆ SINH HỌC VÀ MÔI TRƯỜNG KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT KHẢ NĂNG PHÂN GIẢI BÀO TỦ NÁM LINH CHI (Ganoderma lucidum) TỪ CHỦNG VI KHUẤN Bacillus subtilis PHÂN LẬP TỪ MEN VI SINH Sinh vi? ?n thực... nên cần thiết hết Chính vi thế, tiến hành đề tài: ? ?Khảo sát khả phân giải bào tử nấm Linh chi (Ganoderma lucidum) từ chủng vi khuẩn Bacillus subtìlìs phân lập từ? ?? men vi sinh? ?? CHƯƠNG TÔNG QUAN