Bộ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NGHUYẺN TẤT THÀNH KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC VÀ MÔI TRƯỜNG NGUYEN TAT THANH KHÓA LUẬN TÓT NGHIỆP KHẢO SÁT KHẢ NĂNG PHÂN GIẢI BÀO TỬ NÁM LINH CHI (GANODERMA LUCIDUM)[.]
Bộ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NGHUYẺN TẤT THÀNH KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC VÀ MÔI TRƯỜNG NGUYEN TAT THANH KHÓA LUẬN TÓT NGHIỆP KHẢO SÁT KHẢ NĂNG PHÂN GIẢI BÀO TỬ NÁM LINH CHI (GANODERMA LUCIDUM) TỪ CHỦNG VI KHUẨN LA CTOBA CILL US PLANTAR UM Sinh viên thực hiên: Cao Thanh Hải Chuyên ngành : Cơng nghệ sinh học Y dược Tp Hồ Chí Minh, tháng 08 năm 2018 Bộ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NGUYỄN TẤT THÀNH KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC VÀ MƠI TRƯỜNG csÊHso KHĨA LUẬN TĨT NGHIỆP KHẢO SÁT KHẢ NÃNG PHÂN GIẢI BÀO TỬ NẤM LINH CHI (GANODERMA LUCIDUM) TỪ CHỦNG VI KHUẨN LA CTOBA CILL US PLANTAR UM Sinh viên thực : Cao Thanh Hải Mã số sinh viên : 1311521758 Lóp : 13DSH02 Chuyên ngành : Công nghệ Sinh học Y dược Giáo viên hướng dẫn :ThS Nguyễn Thị Thùy Trang ThS Nguyễn Trung Hiếu TP.HCM, tháng năm 2018 ii LỜI CẢM ƠN Xin trân trọng cảm ơn đến: Ban Giám Hiệu trường Đại học Nguyễn Tất Thành suốt trình học tập em trường tạo điều kiện sở vật chất tốt Cám ơn quý Thầy Cô Giảng viên Bộ môn Công nghệ sinh học tận tâm gửi trao nguồn kiến thức kinh nghiệm quý báu cho chúng em suốt thời gian học tập Đặc biệt, em xin chân thành cám ơn Thầy ThS Nguyền Trung Hiếu cô Nguyễn Thị Thùy Trang tận tâm hướng dẫn cho em để thực đề tài này, truyền đạt tri thức em cịn thiếu xót tạo điều kiện đe cho em thực đề tài cách hiệu Cám ơn cha mẹ đà quan tâm, động viên,chia sẻ cho Các anh chị, bạn nghiên cứu phịng thí nghiệm Sinh hóa - Sinh dược Ký sinh trùng, môn CNSH Y Dược, khoa CNSH hồ trợ nhiệt tình, giúp đờ, dạy em nhiều điều thời gian làm đề tài Tập thể lớp 13DSH02, ln hồ trợ, gắn bó bên em năm giảng đường đại học, quan tâm chia sẻ em khó khăn Em xin chân thành cám ơn! Cao Thanh Hải Khoa Công nghệ Sinh học Môi trường Trường Đại Học Nguyền Tất Thành iii MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN iii MỤC LỤC iv TÓM TẤT vi SUMMARY vii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẨT viii DANH MỤC CÁC HÌNH ix DANH MỤC CÁC BẢNG X ĐẶT VÁN ĐỀ CHƯƠNG TỐNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tồng quan nấm Linh chi đỏ 1.1.1 Giới thiệu nấm linh chi đở 1.1.2 Hình thái cấu tạo nấm Linh chi đỏ 1.1.3 Chu trình phát triển nấm Linh chi 1.1.4 Phân loại loại nấm linh chi 1.2 Tông quan vê probiotic 1.3 Tông quan Lactobacillus plantarum 1.3.1 Đặc điểm 1.4.2 Vai trò 1.4.3 Các nghiên cứu phá lớp vỏbào tử nấm CHƯƠNG NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cúư 10 2.1 Thời gian nơi thực 10 2.2 Nội dung đối tuợng nghiên cứu 10 2.2.1 Nội dung nghiên cứu 10 2.2.2 Đối tượng nghiên cứu 10 2.3 Dụng cụ, hóa chất thiết bị 10 2.3.1 Dụng cụ 10 2.3.2 Hóa chất 11 2.3.3 Thiết bị 11 iv 2.4 Phương pháp nghiên cứu 12 2.4.1 Chuẩn bị mẫu 12 2.4.2 Phân lập nhân sinh khối vi khuẩn 14 2.4.3 Định danh vi khuẩn 15 2.4.3 Lên men bào tử nấm Linh chi vi khuẩn Lactobacillus plantarum 15 2.4.4 Phương pháp định lượng triterpenoid 15 2.5 Bố trí thí nghiệm 17 2.5.1 Thí nghiệm ủ bào tử nấm hấp vô trùng môi trường acid 17 2.5.2 Thí nghiệm lên men bào tử nấm hấp vô trùng vi khuan L plantarum 18 2.5.3 Thí nghiệm lên men bào tử nấm sống vi khuẩn L plantarum 19 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 21 3.1 Phân lập định danh vi khuẩn L plantarum 21 3.2 Ket thí nghiệm ù bào tử nấm hấp vô trùng môi trường acid 22 3.3 Ket thí nghiệm lên men bào tử nấm hấp với vi khuẩn L plantarum 25 3.3 Ket thí nghiệm lên men bào tử nấm sống với vi khuan L plantarum 26 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 28 Kết luận 28 Đe nghị 28 PHỤ LỤC 30 V TÓM TẮT Đe tài: “Khảo sát khả phân giải bào tử nấm Linh chi (Ganoderma lucidum) từ chủng vi khuẩn Lactobacillus plantarunt” thực từ tháng 02/2018 đến 08/2018 phịng thí nghiệm Sinh hóa - Sinh dược - Ký sinh trùng, Khoa Công nghệ sinh học Môi trường, Trường đại học Nguyễn Tất Thành Mục tiêu cùa đề tài đánh giá khả phóng thích triterpennoid bào tử nấm Linh chi (Ganoderma lucidum) lên men vi khuan Lactobacillus plantarums điều kiện môi trường khác Đe tài gồm hai nội dung chính: Định danh vi khuan Lactobacillus plantarum; Khảo sát khả phóng thích triterpenoid khỏi bào tử nấm điều kiện ủ acid, lên men bào tử nấm sống hấp với vi khuan Lactobacillus plantarum Các thí nghiệm bố trí theo kiểu hồn tồn ngẫu nhiên Ket đạt được: - Định danh nhân sinh khối chùng Lactobacillus plantarum - Vi khuẩn Lactobacillus plantarum làm yếu cấu trúc bào tử nấm sống chết lên men, thời gian lên men tăng hiệu phóng thích triterpenoid mơi trường nuôi cấy nhiều - Bào tử nấm sống chết cho hiệu lên men khác biệt không đáng kể - Môi trường acid acetic lactic acid có ảnh hưởng đến khả phóng thích triterpenoid môi trường nuôi ủ vi SUMMARY The project title “Investigation of sporulation ability Ganoderma lucidum from the bacterium Lactobacillus plantarum isolated from probiotics” was was performed in - 7/2018 at The laboratory Biochemical-Biopsy-Parasites, Department of Biotechnology and Enviroment, Nguyen Tat Thanh University with the target evaluates the ability of sporulation Red Lingzhi mushroom (Ganoderma lucidum) from the bacterium Lactobacillus plantarum isolated from probiotics The project consists of two content: The topic consists of two main topics: Identification of Lactobacillus plantarurn; Survey ability triterpenoid release fungal spores out in acid conditions brewed, fermented fungal spores and steaming with live bacteria Lactobacillus plantarums The experiments were arranged in a completely randomized fashion Results obtained after months of study: - Identification and multiplication of Lactobacillus plantarum - Lactobacillus plantarum bacteria weaken the fungal spore structure or die when fermented, the longer the fermentation time, the more efficient release of triterpenoid into the culture medium - Fungal spores live and die for efficient fermentation negligible difference - The acetic acid and lactic acid environment influences the ability of triterpenoid to be released into the vii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẤT OD: Optical density (mật độ quang phô) ƯV-VIS: Ultraviolet - Visible: Phổ tử ngoại - Khả kiến WOO: Môi trường sinh chitinase cải tiến woo cộng L plantarum Lactobacillus plantarum CFU: Colony forming unit (Đơn vị hình thành khuẩn lạc) ĐC: Đối chứng HL: Hàm lượng TB: Trung bình ctv: Cộng tác viên TB: Trung bình viii DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1: Quả thể nấm Linh chi đở Hình 1.2: Cấu trúc the G lucidum Hình 1.3: Chu kỉ phát trien nấm Linh chi Hình 1.4: Chu kì G lucidium Hình 1.5: Phân loại nấm linh chi theo màu sắc Hình 1.6: Hình ảnh vi mơ hình ảnh dịng Lactobacillus plantarum Hình 1.7: Lactobacillus plantarum nhuộm gram Hình 2.1: Các thiết bị thí nghiệm Hình 2.2: Bào từ nấm xử lý bang javel cồn Hình 2.3: Mầu nấm đuợc xử lý NaOH 0,01 M 24 Hình 2.4: Mầu bào tử sau lên men ly tâm 5000 vịng/5 phút Hình 3.1: Hình thái vi khuan L plantarum phân lập Hình 3.2: Ket định danh vi khuan L plantarum phân lập ix DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1: Thí nghiệm ủ bào tử nấm hấp vơ trùng mơi trường acid Bảng 2.2: Thí nghiệm lên men bào tử nấm hấp vô trùng vi khuan L plantarum Bảng 2.3: Thí nghiệm lên men bào tử nấm sống vi khuẩn L plantarum Bảng 3.1: Hàm lượng triterpenoid phóng thích mơi trường ủ bào tử nấm hấp vô trùng mơi trường acid Bảng 3.2: Nồng độ triterpenoid cịn lại bào tử nấm bào tử nấm hấp vô trùng môi trường acid Bảng 3.3: Nồng độ triterpenoid bào tử nấm hấp vô trùng môi trường nuôi cay Woo vi khuan L plantarum Bảng 3.4: Nồng độ triterpenoid bào tử nấm song lên men vi khuẩn L.plantarum môi trường nuôi cay Woo X ... hợp với chủng vi sinh vật tự nhiên có lợi đường ruột khơng tốn thêm chi phí tách bỏ Vì tơi tiến hành đe ? ?Khảo sát khả phân giải bào tử nấm Linh chi (Ganoderma lucidum) từ chủng vi khuấn Lactobacillus. .. KHÓA LUẬN TÓT NGHIỆP KHẢO SÁT KHẢ NÃNG PHÂN GIẢI BÀO TỬ NẤM LINH CHI (GANODERMA LUCIDUM) TỪ CHỦNG VI KHUẨN LA CTOBA CILL US PLANTAR UM Sinh vi? ?n thực : Cao Thanh Hải Mã số sinh vi? ?n : 1311521758... quan nấm Linh chi đỏ 1.1.1 Giới thiệu nấm linh chi đở 1.1.2 Hình thái cấu tạo nấm Linh chi đỏ 1.1.3 Chu trình phát triển nấm Linh chi 1.1.4 Phân loại loại nấm linh