Thành phần hóa học phân đoạn ethylacetat từ lá mạn Kinh tử lá đơn (Vitex rotundifolia L.f. Verbenaceae).pdf

CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập - Tự - Hạnh phúc Đơn vị chủ trì: Trường Đại học Nguyễn Tất Thành BÁO CÁO TÔNG KÉT ĐÈ TÀI NCKH DÀNH CHO CÁN Bộ - GIẢNG VIÊN 2016-2017 THÀNH PHẢN HÓA HỌC PHÂN ĐOẠN ETHYLACETAT TỪ LÁ MẠN KINH TỬ LÁ ĐƠN (Vìtex rotundifolia L.f Verbenaceae) Sổ hợp đồng: Chú nhiệm đề tài: BÙI HOÀNG MINH Đơn vị công tác: KHOA DƯỢC - ĐH NGUYỀN TẤT THÀNH Thời gian thực hiện: 01/03/2017 - 01/12/2017 MỤC LỤC MỤC LỤC i DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHŨ VIÉT TẮT iii DANH MỤC BẢNG BIỂU iv DANH MỤC HÌNH ẢNH V ĐẶT VÁN ĐÈ CHƯƠNG TÓNG QUAN TÀI LIỆU NGHIÊN cứu 1.1 TÔNG QUAN VÈ THỤC VẬT HỌC 1.1.1 Họ Verbenaceae 1.1.2 Chi Vitex 1.1.3 Loài Vitex rotundifolia L.f 1.2 TÓNG QUAN VỀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC 1.3 TÁC DỤNG DƯỢC LÝ 13 1.3.1 1.3.2 1.3.3 1.3.4 1.3.5 1.3.6 1.3.7 1.3.8 1.3.9 Kháng viêm 13 ửc chế tiết prolactin 13 Điều trị hội chứng tiền kinh nguyệt (PMS) .14 Khả khảng khuân 14 Khả kháng virus 15 Chống dị ứng hen suyễn .15 ửc che tế bào ung thư 16 Tác động lên thành mạch 17 Khả chong oxy hóa 17 1.4 CÔNG DỤNG TRONG Y HỌC CÔ TRUYỀN 17 1.4.1 Tỉnh vị, tác dụng 17 1.4.2 Công dụng 17 1.5 MỘT SÓ BÀI THUỐC VÀ CHÉ PHẨM TÙ MẠN KINH TỬ LÁ ĐƠN 18 1.5.1 Một so thuốc 18 1.5.2 Chế phẩm 18 CHƯƠNG NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cứu 19 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN cứu 19 2.1.1 Nguyên liệu 19 2.1.2 Dụng cụ, trang thiết bị 19 2.1.3 Dung mơi hóa chất 19 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cứu 19 2.2.1 Xác định độ ẩm 19 2.2.2 2.2.3 2.2.4 2.2.5 Khảo sát hàm lượng chất chiết 19 Chiết xuất lắc phản bố 19 Phản lập tinh che 20 Kiểm tra độ tinh khiết xác định cẩu trúc chất phân lập 20 CHƯƠNG KÉT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 21 3.1 NGHIÊN CỬU CHIẾTXƯÂT VÀ PHÂN LẬP 21 3.1.1 Xác định độ âm 21 3.1.2 Khảo sát hàm lượng chất chiết 21 3.1.3 Chiết xuất 21 3.1.4 Khảo sát hệ dung môi cho phân tích 22 3.1.5 Phân lập 22 3.2 XÁC ĐỊNH Độ TINH KHIẾT VÀ CẤU TRÚC CÁC CHÁT PHÂN LẬP ĐƯỢC 29 3.2.1 3.2.2 3.2.3 3.2.4 3.2.5 Chất Vì .29 Chất v2 31 Chất Vỉ 31 Chất v4 35 Chất v5 39 CHƯƠNG KÉT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 41 4.1 KÉT LUẬN 41 4.2 ĐỀ NGHỊ 41 TÀI LIỆU THAM KHẢO 42 ii DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIÉT TẮT CHCỈ3 COSY CTPT d DCM EtOAc H2O HCOOH HMBC HPLC HSQC IFN-Y IL LPS MeOH MRSA MS n-BuOH n-Hex NMR PE PMS PTK TT vs uv chloroform Collerated Spectroscopy - (phổ) tưong quan 'H-'H Công thức phân tử doublet dichloromethan ethyl acetat nước cất acid formic Heteronuclear Multiple Bond Correlation High Performance Liquid Chromatography Heteronuclear Single Bond Correlation Interferon gamma Interleukin Lipopolysaccharide methanol Methicillin-resistant S.aureus Mass Spectrometry - Phổ khối n-butanol n-hexan Nuclear Magnetic Resonance - Cộng hưởng từ hạt nhân petroleum ether Premenstrual Syndrome - hội chứng tiền kinh nguyệt Phân tử khối singlet thuốc tử vanilin-sulfuric ultraviolet - tử ngoại 111 DANH MỤC BẢNG BIỂU Bảng Một số thành phần hóa học có phận Vitex rotundifolia L.f 12 Bảng 3.1 Bảng thống kê độ ẩm bột dược liệu 23 Bảng 3.2 Kết khảo sát hàm lượng chất chiết theo độ cồn 27 Bảng 3.3 Kết phân đoạn thu từ sắc ký cột nhanh 24 Bảng 3.4 Kết phân đoạn thu từ sắc ký cột cổ điển phân đoạn 10 27 Bảng 3.5 Số liệu phổ NMR V3 32 Bảng 3.6 Bảng so sánh phổ NMR V3 Cynarosid 34 Bảng 3.7 Số liệu phổ NMR V4 35 Bảng 3.8 Bảng so sánh dừ liệu phổ NMR V4 V3 36 Bảng 3.9 Bảng so sánh phổ NMR V4 Isoorientin 38 iv DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 1.1 Hình thái lồi Vitex rotundifolia L.f [30] Hình 1.2 Một số phận loài Vỉtex rotundifolia L.f Hình 1.3 Vỉtex rotundifolia L.f thường mọc bên bãi biển Hình 1.4 Cấu trúc hóa học flavonoid Vitex rotundifolia L.f Hình 1.5 Cấu trúc hóa học diterpen Vitex rotundifolia L.f Hình 1.6 Cấu trúc hóa học iridoid Vitex rotundifolia L.f 10 Hình 1.7 Cấu trúc hóa học lignan Vitex rotundifolia L.f 11 Hình 1.8 Cấu trúc hóa học glycosid Vitex rotundifolia L.f 12 Hình 1.9 Một số chế phẩm từ Vitex rotundifolia L.f 18 Hình 3.1 Sơ đồ kết quy trình chiết xuất từ cao Mạn kinh tử đơn 22 Hình 3.2 Sắc ký đồ phân đoạn EtOAc 22 Hình 3.3 Sắc ký đồ hệ dung môi chạy cột hệ n-Hex-EtOAc 23 Hình 3.4 Sắc ký đồ phân đoạn thu từ sắc ký cột phân đoạn ethyl acetat 25 Hình 3.5 Sắc ký đồ phân đoạn 10 26 Hình 3.6 Sắc ký đồ dung môi chạy cột hệ CHCh-MeOH 26 Hình 3.7 Sắc ký đồ phân đoạn thu phân đoạn 10 28 Hình 3.8 Sơ đồ kết phân lập, tinh khiết hóa từ phân đoạn EtOAc loại tạp 29 Hình 3.9 Sắc ký đồ so sánh V1 với chất chuẩn casticin 30 Hình 3.10 Sắc ký đồ đối chiểu V1 với cao EtOAc FĐ 30 Hình 3.11 Cấu trúc hóa học V] 31 Hình 3.12 Sắc ký đồ V2 với hệ dung môi khác 31 Hình 3.13 Sắc ký đồ V3 với hệ dung môi khác 32 Hình 3.14 Cấu trúc hóa học tương tác hóa học V3 34 Hình 3.15 Sắc ký đồ V4 với hệ dung môi khác 35 Hình 3.16 Cấu trúc hóa học tương tác hóa học V4 38 Hình 3.17 Sắc ký đồ so sánh V5 với chất chuẩn 39 Hình 3.18 Sắc ký đồ đối chiểu V5 với phân đoạn 10 39 Hình 3.19 Cấu trúc hóa học V5 40 V TÓM TẮT KÉT QUẢ NGHIÊN cứu Sản phẩm thực đạt - Xác định cấu trúc chất phân lập - 01 Báo cáo tổng kết kết nghiên cứu đề tài - 01 Bài báo khoa học đăng Sản phẩm đăng ký thuyết minh - Thu tối thiểu chất để tiến hành nghiên cứu tác dụng dược lý - 01 Báo cáo tổng kết kết nghiên cứu đề tài - 01 Bài báo khoa học đăng Thòi gian đăng ký : từ ngày 01/03 đến ngày 01/12 Thòi gian nộp báo cáo: ngày 18/01/2018 VI ĐẬT VÂN ĐÈ Chi Vitex thuộc họ Verbenaceae bao gồm gần 250 loài phân bổ phổ biến khu vực khí hậu nhiệt đới lẫn ơn đới Trong đó, nhiều lồi người sử dụng làm thuốc từ lâu đời y học đại nghiên cứu, chứng minh có tác động dược lý giá trị, đặc biệt kháng viêm, chống dị ứng, cân nội tiết tố estrogen nữ; gần ức chế phát triển tế bào ung thư [9], Vitex agnus-castus mọc chủ yếu vùng biển Địa Trung Hải, biết đến với tên gọi “chaste tree’’ nghĩa “cây sạch”, xuất phát từ việc thầy tu từ thời Trung Cổ sử dụng với mục đích giảm ham muốn tình dục Lồi nghiên cứu, bào chế thành thành phẩm thuốc từ thập niên cuối thể kỷ 20 điều trị nhiều bệnh mụn trứng cá, rối loạn tiêu hóa, rối loạn kinh nguyệt, đặc biệt hội chứng tiền kinh nguyệt (premenstrual syndrome - PMS) Châu Âu, Bắc Mỹ [20] Ở Việt Nam, Mạn kinh tử đơn (Vitex rotundifolia L.fỤ, dân gian sử dụng để trị nhức đầu, quáng gà số bệnh da mẩn ngứa, mụn nhọt, phát ban nhà khoa học chứng minh có tác dụng điều trị hội chứng tiền kinh nguyệt hiệu tương tự Vitex agnus-castus [15] Bên cạnh đó, từ năm 2011-2013, nhiều báo cáo khoa học cho thấy thành phần hóa học, đặc biệt flavonoid lồi có khả ức chế phát triển tế bào ung thư [9, 23, 25, 32] Đây tín hiệu đáng mừng Vỉtex rotundifolia L.f mọc phổ biến nước ta, đặc biệt tỉnh duyên hải Miền Trung Với nguồn nguyên liệu dồi dào, sằn có, quan tâm nghiên cứu phát triển thành chế phẩm thuốc nguồn nguyên liệu đóng góp khơng nhỏ cho y học đại nói riêng nhiệm vụ chăm sóc sức khỏe cho nhân dân nói chung mà người có xu hướng quay lại với phương thuốc từ thảo dược thiên nhiên tác dụng phụ Tuy nhiên, cịn nghiên cứu Vitex rotundifolia L.f lồi có tiềm lớn tương tự Vitex agnus-castus Châu Âu, Bắc Mỹ Nhằm khai thác hiệu nguồn dược liệu này, đề tài đặt nhằm mục đích: - Chiết xuất phân lập hợp chất có phân đoạn EtOAc Mạn kinh tử đơn, đặc biệt flavonoid; - Xác định cấu trúc chất phân lập được, với mục tiêu cung cấp hiểu biết thành phần hóa học loài Mạn kinh tử đơn mọc từ Duyên hải Miền Trung Việt Nam làm tiền đề cho nghiên cứu sâu hóa học, kiểm nghiệm, dược lý thuốc sau CHƯƠNG TỒNG QUAN TÀI LIỆU NGHIÊN cứu 1.1 TỐNG QUAN VÈ THỤC VẶT HỌC 1.1.1 Họ Verbenaceae Dạng sống: Cây gồ to hay nhỏ, bụi có dây trườn hay cỏ, cành non thường có tiết diện vng Lá: Lá mọc đối, đơi mọc vịng, khơng có kèm Lá đơn nguyên hay có thùy kép chân vịt (Vitex), gân hình lơng chim Hoa: Hoa mọc riêng lẻ hay tụ thành chùm, gié, xim, đơi có dạng ngù cành hay nách Hoa thường khơng đều, lưỡng tính Đài dính đáy, chia thành 4-5 thùy Cánh hoa dính tạo thành hình ống hay hình chng, phía xịe thành 4-5 thùy thường thành môi; ống tràng thẳng hay cong Bộ nhị gồm nhị, trội đơi giảm cịn nhị (Stachytarpheta) hoa cịn đủ nhị (Tectona) Nhị đính ống tràng xen kẽ với cánh hoa thị ngồi hoa Bao phấn mở dọc hay mở lồ đỉnh Bộ nhụy: nỗn dính liền thành bầu trên, ô thường bị vách giả ngăn thành ơ, mồi đựng nỗn, đính nỗn trung trụ Đơi số bầu tăng lên (Duranta) Vịi nhụy đỉnh bầu Quả: Quả nang hay hạch Hạt: Hạt thường khơng có nội nhũ [4, 10] Ở Việt Nam, Verbenaceae gồm 27 chi với 130 loài [4] 1.1.2 Chi Vitex Chi Vitex thuộc họ cỏ roi ngựa (Verbenaceae) Từ vỉtex xuất phát từ chừ la tinh viere, nghĩa buộc, cột phần lớn nhánh thuộc chi dẻo dùng để làm dây cột bỉnh linh, đẹn [3] Dạng sống: Cây gồ, nhờ hay bụi Lá: Lá mọc đối, kép chân vịt với 3-5 chét [10], chét; chét nguyên, có cưa, khơng cuống hay có cuống [3, 10], Hoa: Cụm hoa xim khơng cuống hay có cuống, tạo thành chùy hay ngù nách lá; bắc to hay nhở, rụng sớm hay tồn Hoa màu trắng, vàng hay lam nhạt Đài hoa hình chng, cụm có ngắn, đơi có thùy Tràng nhỏ, có mơi; dài hay ngắn; mơi có thùy; mơi có thùy, thùy dài Nhị 4, trội, thường thị; nhị đính gốc tràng, bao phấn có hai ơ, thường rẽ cong Bầu có ơ, ln ln có noãn, dạng sợi dài nhụy; đầu nhụy chẻ đơi Quả: Quả hạch hình cầu, hình trứng hay trứng ngược; đài rộng ra, tồn quanh phần cuối quả; vỏ ngồi nạc, vỏ cứng hóa gồ, thường có Hạt: Hạt cịn 1-2, hỉnh trái xoan ngược hay thn, khơng có phôi nhũ; mầm nạc, rề mầm [3, 10] Chi Vitex gồm 250 loài, phân bố vùng nhiệt đới tới ơn đới (ít) Ớ nước ta có 15 lồi, có nhiều lồi sử dụng làm thuốc [3]: - Bình linh (Vitexpinnata L.) Bình linh cánh (Vitex pinnata L var ptilota Phamh.) Bình linh lục lạc (Vitexsumatrana Miq var urceola King et Gamble) Bình linh nghệ (Vitex ajugaeflora Dop) Bình linh nhằn, đẹn nhằn (Vitex helogiton K Schum) Đẹn dài lông mịn (Vitex pierteana Dop) Đẹn lông (Vitex canescens Kurz) Mạn kinh, đẹn ba (Vitex trifolia L.) Ngũ trảo (Vitex negundo L.) Mạn kinh tử đơn (Vitex rotundifolia L.f.) Quan âm núi (Vitex quinata Lour.) San trắng, chân vịt (Vitex peduncularis Wall Ex Schauner) 1.1.3 Loài Vitex rotundifolia L.f Tên khoa học: Vitex rotundifolia L.f Tên đồng nghĩa [9]: Vitex trifolia var simplicifolia Cham Vitex trifolia var ovata (Thunb.) Makina Vitex trifolia var unifoliata Schauer Vitex ova ta Thunb Tên thường gọi: Mạn kinh tử đơn, Màn kinh tử, Từ bi biển, Mạn kinh đơn, Mạn kinh nhỏ, Bình linh xoan [3, 5] Tên nước ngồi: beach vitex, monk's pepper, roundleaf chastetree, single-leaf chaste tree [9, 14] 1.1.3.1 Vị trí bang phân loại thực vật Theo hệ thống phân loại Takhatajan Phạm Hoàng Hộ, vị trí lồi Vitex rotundifolia L.f xếp sau: Ngành Ngọc Lan (Magnoliophyta) Lớp Ngọc Lan (Magnoliopsida) Phân Lớp Hoa Môi (Lamiidae) Bộ Hoa môi (Lamiales) Họ Cỏ roi ngựa (Verbenaceae) Chi Vitex Loài Vitex rotundifolia L.f [6] ... xuất phân lập hợp chất có phân đoạn EtOAc Mạn kinh tử đơn, đặc biệt flavonoid; - Xác định cấu trúc chất phân lập được, với mục tiêu cung cấp hiểu biết thành phần hóa học lồi Mạn kinh tử đơn mọc từ. .. nhằn (Vitex helogiton K Schum) Đẹn dài lông mịn (Vitex pierteana Dop) Đẹn lông (Vitex canescens Kurz) Mạn kinh, đẹn ba (Vitex trifolia L.) Ngũ trảo (Vitex negundo L.) Mạn kinh tử đơn (Vitex rotundifolia. .. trifolia var unifoliata Schauer Vitex ova ta Thunb Tên thường gọi: Mạn kinh tử đơn, Màn kinh tử, Từ bi biển, Mạn kinh đơn, Mạn kinh nhỏ, Bình linh xoan [3, 5] Tên nước ngoài: beach vitex, monk''s