Thành phần hóa học phân đoạn ethylacetat từ lá Mạn kinh tử lá đơn (Vitex rotundifolia L.f., Verbenaceae)

35g phân đoạn EtOAc từ lá Mạn kinh tử lá đơn được phân tách thành 17 phân đoạn. Từ các phân đoạn này, bằng các kĩ thuật sắc kí, kết tinh phân đoạn đã phân lập được 5 chất: V1 (830,56mg), V2 (23mg), V3 (30mg), V4 (45,39mg), V5 (17mg). Trong đó, đã xác định được cấu trúc các chất V1 (casticin), V3 (luteolin-7-O-β- glucopyranosid), V4 (luteolin-6-C-βglucopyranosid), V5 (sitosterol-3-O-β-glucosid).

Tạp chí Khoa học & Cơng nghệ Số 84 Thành phần hóa học phân đoạn ethylacetat từ Mạn kinh tử đơn (Vitex rotundifolia L.f., Verbenaceae) Bùi Hoàng Minh1,*, Trần Hùng2, Nguyễn Thị Xuân Diệu2 Đại học Nguyễn Tất Thành Đại học Y Dược Tp HCM *buihoangminhgaga@gmail.com Tóm tắt 35g phân đoạn EtOAc từ Mạn kinh tử đơn phân tách thành 17 phân đoạn Từ phân đoạn này, kĩ thuật sắc kí, kết tinh phân đoạn phân lập chất: V1 (830,56mg), V2 (23mg) , V3 (30mg), V4 (45,39mg), V5 (17mg) Trong đó, xác định cấu trúc chất V1 (casticin), V3 (luteolin-7-O-β- glucopyranosid), V4 (luteolin-6-C-βglucopyranosid), V5 (sitosterol-3-O-β-glucosid) Riêng V2 xác định cấu trúc Đồng thời nhiều phân đoạn từ sắc kí cột tải phân đoạn EtOAc phân lập thêm chất khác ® 2018 Journal of Science and Technology - NTTU Đặt vấn đề Mạn kinh tử đơn từ lâu sử dụng điều trị, đặc biệt bệnh liên quan đến rối loạn nội tiết tố nữ nước châu Á, có Việt Nam Những nghiên cứu khoa học gần cho thấy Mạn kinh tử đơn cho tác động tương tự estrogen mà có khả chống oxy hoá, kháng viêm, chống lại tế bào ung thư hiệu quả, đặc biệt hợp chất flavonoid Chính vậy, “ ghiên cứu thành phần hoá học ph n đoạn EtOAc Mạn kinh tử đơn” thực với mục đích chiết xuất, phân lập xác định cấu trúc chất phân lập để làm tiền đề cho nghiên cứu sâu hóa học, kiểm nghiệm dược lí Mạn kinh tử đơn sau Nguyên liệu phương pháp nghiên cứu 2.1 Nguyên liệu Lá Mạn kinh tử đơn thu hái bờ biển thành phố Tuy Hòa, Phú Yên vào tháng 02/2017 Dược liệu xay nhỏ cho phù hợp với yêu cầu thí nghiệm 2.2 Phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Thử tinh khiết - Độ ẩm Theo qui định DĐVN IV, phụ lục 9.6 - Định lượng Đại học Nguyễn Tất Thành Nhận 13.09.2018 Được duyệt 29.10.2018 Cơng bố 25.12.2018 Từ khóa Vitex rotundifolia, chiết xuất, phân lập, flavonoid Theo phương pháp xác định hàm lượng chất chiết theo qui định DĐVN IV, phụ lục 10.12 với độ cồn 96%, 70%, 50% để xác định độ cồn tối ưu cho trình ngấm kiệt 2.2.2 Chiết xuất phân lập - Chiết xuất Dược liệu ngấm kiệt với độ cồn khảo sát, cô thu cao cồn Cao cồn sau phân tán nước lắc phân bố với CHCl3, EtOAc sau áp suất giảm, thu cao phân đoạn tương ứng Chọn cao EtOAc tiếp tục đối tượng nghiên cứu - Phân lập Sử dụng kĩ thuật sắc kí cột (quá tải, cổ điển…) kết tinh phân đoạn dung môi thích hợp để thu chất tinh khiết - Kiểm tinh khiết Chất phân lập sắc kí mỏng với hệ dung môi khác Chất cần xác định độ tinh khiết phát UV 254nm, UV 365nm màu với thuốc thử vanillin-sulfuric Chất xem tinh khiết cho vết gọn với Rf khoảng từ 0,25- 0,75 2.2.3 Xác định cấu trúc Phối hợp song song liệu phổ MS NMR để xác định cấu trúc chất phân lập Trong đó: + Phố MS đo chế độ ion âm (ESI-) + Phổ NMR đo với kĩ thuật 1-D, 2-D (1H-, 13C-, Tạp chí Khoa học & Cơng nghệ Số 85 DEPT, HSQC, HMBC, COSY) Mẫu hòa tan dung mơi thích hợp MeOD, DMSO với chất chuẩn nội TMS; thực máy ADVANCE 500 (Bruker) Phòng Cấu trúc, Viện Hóa học, Viện Khoa học Cơng nghệ Việt Nam, số 18 Hồng Quốc Việt, Hà Nội Độ dời hóa học tính theo thang δ (ppm) với δTMS = 0,00 độ phân cực tăng dần: CHCl3, EtOAc Sau cô áp suất giảm, khối lượng cao thu 128,9g (CHCl3) 39,3g (EtOAc) 3.2.2 Phân lập Sắc kí cột phân đoạn EtOAc Cao EtOAc chọn đối tượng nghiên cứu với hệ dung mơi phân tích EtOAc – MeOH – HCOOH (8:2:0,1) Vì cao EtOAc phức tạp nên phân thành phân đoạn đơn giản sắc kí cột tải với thơng tin: + Cột thủy tinh trung tính, thành dày, kích thước cột x 50cm, rửa sạch, sấy khơ; + Pha tĩnh: 250g silica gel, cỡ hạt trung bình (40-63μm), giảm hoạt với 10% nước cất 1100C ; + Nhồi cột khơ, có bơm hút chân không cho ổn định; + Mẫu: 35g phân đoạn EtOAc, nạp mẫu khô; + Pha động: chạy gradient với dung môi n-Hex, tăng dần tỉ lệ n-Hex-EtOAc đến 3:7 tăng đến 100% EtOAc; sau dùng hệ EtOAc-MeOH, tăng dần tỉ lệ MeOH; + Kiểm tra phân đoạn sắc kí lớp mỏng với hệ dung môi EtOAc-MeOH-HCOOH (8:2:0,5), phát cách soi UV 254nm, UV 365nm, phun TT VS Theo dõi sắc kí đồ gộp phân đoạn hứng có sắc kí đồ giống nhau, cô quay để thu phân đoạn khác Kết quả: Từ 35g phân đoạn EtOAc loại tạp, qua sắc kí cột nhanh thu 17 phân đoạn khác Tiếp tục để bay tự nhiên có phân đoạn có kết tủa màu vàng, 12 phân đoạn khác dạng dầu rắn Các phân đoạn có kết tủa tiếp tục phân lập để thu chất tinh khiết Kết trình bày Bảng 3, Hình Kết bàn luận 3.1 Thử tinh khiết 3.1.1 Độ ẩm Bảng Kết độ ẩm Mạn kinh tử đơn Trung bình 9,19% 9,06% 8,82% 9.02% Độ ẩm Mạn kinh tử đơn qua thực nghiệm 9.02 (