Đang tải... (xem toàn văn)
Ml 4! Bộ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NGUYỄN TẤT THÀNH KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC VÀ MÔI TRƯỜNG LUẬN VĂN TÓT NGHIỆP KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC CAO CHIẾT BUTANOL TỪ CÂY CỎ MẦN TRẦU (Eleusine ỉndica[.]
Ml 4! Bộ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NGUYỄN TẤT THÀNH KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC VÀ MƠI TRƯỜNG LUẬN VĂN TĨT NGHIỆP KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC CAO CHIẾT BUTANOL TỪ CÂY CỎ MẦN TRẦU (Eleusine ỉndica (L.) Gaertn) Sinh viên thực hiện: Trần Thị Ngọc Hân Chuyên ngành: Công nghệ Sinh học Tp Hồ Chí Minh, tháng 08 năm 2018 í Bộ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NGUYỄN TẤT THÀNH KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC VÀ MÔI TRƯỜNG csẽQsỡ LUẬN VĂN TÓT NGHIỆP KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC CAO CHIẾT BUTANOL TỪ CÂY CỎ MẦN TRẦU (Eleuslne indica (L.) Gaertn) Sinh viên thực : Trần Thị Ngọc Hân Mã số sinh viên :1411531729 Lớp : 14DSH02 Chuyên ngành : Công nghệ Sinh học Giáo viên hướng dần : TS Phan Nhật Minh Tp Hồ Chí Minh, tháng 08 năm 2018 LỜI CÁM ƠN Trong suốt trình thực khóa luận này, em học hỏi kiến thức, kinh nghiệm nhiều học bơ ích Đó hồn tồn nhờ nhiệt tình giúp đỡ gia đình, thầy cơ, anh chị bạn bè Em xin chân thành gửi lời cảm ơn đến: Gia đình ln ủng hộ, chăm lo động viên vật chất lần tinh thần Thầy Phan Nhật Minh đà tận tình giúp đờ, hướng dẫn tạo điều kiện thuận lợi cho em suốt trình thực khóa luận Q thầy Viện Cơng nghệ Hóa học truyền đạt cho em nhiều kinh nghiệm bổ ích Tất q thầy khoa Công nghệ Sinh học Môi trường truyền dạy kiến thức, kinh nghiệm cho em suốt thời gian em học tập trường Đại học Nguyễn Tất Thành Tập the lóp 14DSH02 đà ln bên cạnh giúp đờ suốt thời gian em học tập trường Cuối cùng, em xin gửi lời cám ơn chân thành đến anh chị Viện Cơng nghệ Hóa học nhiệt tình hướng dẫn, chia sẻ kinh nghiệm ln động viên, ủng hộ giúp em hồn thành khóa luận Em xin trân trọng cảm ơn! Trần Thị Ngọc Hân Khoa Công nghệ Sinh học Môi trường Trường Đại Học Nguyễn Tất Thành 11 MỤC LỤC LỜI CÁM ƠN ii MỤC LỤC iii TÓM TẮT V DANH MỤC BẢNG ix DANH MỤC HÌNH X ĐẶT VÁN ĐỀ CHƯƠNG TỐNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tông quan cỏ mân trâu 1.1.1 Đặc điếm, phân bo cỏ mần trầu 1.1.3 Giá trị cùa cỏ mần trầu đời sống 1.1 3.1 Giá trị dược liệu 1.1 3.2 Giá trị kinh tế 1.2 Các nghiên cứu nước 1.3 Các phương pháp chiết xuất từ dược liệu .6 1.3.1 Chiết phương pháp ngấm kiệt (Percolation) 1.3.2 Chiết phương pháp ngâm dầm (Meceration) 1.4 Phương pháp cô lập hợp chất tinh khiết 1.4.1 Sắc ký lớp mỏng 1.4.2 Sắc ký cột 1.5 Phương pháp xác định cấu trúc hóa học 12 1.5.1 Phổ khối lượng (MS) 12 1.5.2 Phổ cộng hưởng từ (NMR) 12 1.6 Dòng tế bào ung thư gan HepG2 ung thư gan nguyên phát 12 1.7 Các phương pháp đánh giá hoạt tính gây độc tế bào ung thư 14 1.7.1 Phương pháp MTT 14 1.7.2 Phương pháp SRB 15 CHƯƠNG NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CÚƯ 17 2.1 Thời gian địa điểm nghiên cứu 17 2.2 Nội dung nghiên cứu 17 iii 2.3 Trang thiết bị dụng cụ 17 2.4 Hóa chất 19 2.5 Nguyên liệu nghiên cứu 19 2.6 Phuơng pháp nghiên cứu 20 2.6.1 Phương pháp cô lập 20 2.6.1.1 Sắc ký lớp mỏng 20 2.6.1.2 Sắc ký cột 20 2.6.2 Phương pháp xác định cấu trúc hóa học 21 2.6.3 Phương pháp thử hoạt tính sinh học 21 CHƯƠNG KÉT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 22 3.1 Xử lý nguyên liệu 22 3.2 Điều chế cao tống cao phân đoạn 22 3.2.1 Điều chế cao ethanol (cao tổng) 22 3.2.2 Điều chế cao phân đoạn cao chiết butanol 24 3.3 Phân lập họp chất tinh khiết 25 3.3.1 Phân lập chất từ cao A 25 3.3.2 Khảo sát phân đoạn cao A6 26 3.3.2.1 Khảo sát phân đoạn cao A6.5 27 3.3.2.2 Khảo sát phân đoạn cao A6.3 30 3.4 Xác định cấu trúc hóa học họp chất tinh khiết .32 3.4.1 Hợp chất MT02 32 3.4.1.1 Các tính chất MT02 32 3.4.1.2 Xác định cấu trúc MT02 32 3.4.2 Hợp chất MT04 35 3.4.2.1 Các tính chất cùa MT04 35 3.4.2.2 Xác định cấu trúc hợp chất MT04 35 3.5 Ket thử hoạt tính sinh học 38 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 39 TÀI LIỆU THAM KHẢO 41 PHỤ LỤC 43 IV TÓM TẮT Đe tài “Khảo sát thành phần hóa học cao chiết butanol từ cỏ mần trầu (Eleusine indica (L.) Gaertn)” thực từ ngày 28/01/2018 đến ngày 30/06/2018 Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Mục tiêu nghiên cứu Tìm hiếu tổng quan cỏ mần trầu Phương pháp nghiên cứu tách chiết thành phần hóa học cỏ mần trầu Phân lập chất tinh khiết cao chiết butanol từ cỏ mần trầu, khảo sát thành phần hóa học chất phân lập phương pháp phố đại Góp phần nghiên cứu thành phần hóa học cỏ mần trầu Phương pháp nghiên cứu Tạo cao chiết với dung môi butanol từ cỏ mần trầu Khảo sát hoạt tính sinh học cao chiết butanol lên dòng tế bào HepG2 Sử dụng phương pháp sắc ký để phân lập họp chất có cao butanol từ cỏ mần trầu Sau đó, nhờ phương pháp phổ nghiệm đại xác định cấu trúc chất phân lập Ket nghiên cứu Cô lập 02 họp chất tinh khiết từ phân đoạn cao butanol: • MT02: Apigenin 8-C-^-D-glucopyranoside (Vitexin) • MT04: l,3-dihydroxy-6,7-dimethoxyxanthone Hoạt tính sinh học: Cao chiết /?-Butanol từ cỏ mần trầu khơng có hoạt tính kháng ung thư gan dòng tế bào HepG2 V SUMMARY “Investigate the chemical composition of butanol extract from (Eleusineindica (L.) Gaertn)” was conducted from 28/01/2018 to 30/06/2018 at the Vietnam Academy of Science and Technology Research objectives Learn overview of Eleusine indica (L.) Gaertn Research methods of extraction of chemical components from Eleusine indica (L.) Gaertn Isolate of the purified substances in butanol from Eleusine indica (L.) Gaertn, Investigate of the chemical composition of the substances isolated by modem spectroscopy Contribute to the study of the chemical compositions of Eleusine indica (L.) Gaertn Research Methods Extract with butanol solvent ỸromEleusine indica (L.) Gaertn Investigate of the bioactivity of the butanol extracts on the HepG2 Use chromatographic methods to isolate the compounds contained in butanol extract from Eleusine indica (L.) Gaertn.Then, use spectral methods to determine the structure of the isolates Research results Isolated 02 compounds from butanol extract: • MT02: Apigenin 8-C-/?-D-glucopyranoside (Vitexin) • MT04: l,3-dihydroxy-6,7-dimethoxyxanthone Bioactive: n-butanol extract from Eleusine indica (L.) Gaertn did not have activity against hepatocellular carcinoma HepG2 VI DANH MỤC CÁC CHŨ VIẾT TẮT pg microgram pm micromet ALT Alanin amino transferace AST Aspartate amino trasferace CCL4 cc motif chemokine ligand CHCh Chloroform Cm centimet C-NMR Carbon Nuclear Magnetic Resonance COSY Correlationspectroscopy d Doublet DEPT Distortionless enhancement by polarization transfer DMSO Dimethyl sulfoxide (CH?)2SO DPPH 2,2-Diphenyl-1 -picrylhydrazyl EtOH Ethanol G gram GSH Glutathione HMBC Heteronuclear Mulitiple Bond Coherence H-NMR Hydro Nuclear Magnetic Resonance HR-ESI-MS High Resolution ElectroSpray lonsation Mass Spectrometry HSQC Heteronuclear Single Quantum Correlation IC50 Inhibitory Concentration 50% J Coupling constant Kg kilogram M Multiplet MDA Malondialdehyde MeOH Methanol Mg miligram V11 MHz Mega Hertz Mm milimet mp Melting point MS Mass spectroscopy MTT 3-[4,5-dimetylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyltetrazol brom NCI National Cancer Institute Nm nanomet NMR Nuclear magnetic resonance ppm Part per milion s Singlet SKC Sac ký cột SKLM Sac ký lớp mỏng T triplet TLC Thin layer chromatography Ỗ Chemical shift viii DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1 Kết khảo sát phân đoạn A Bảng 3.2 Ket khảo sát phân đoạn A6 Bảng 3.3 Kết khảo sát cao phân đoạn A6.5 Bảng 3.4 Kết khảo sát cao phân đoạn A6.3 Bảng 3.5 Dừ liệu phố hợp chat MT02 so sánh với tài liệu tham khảo Bảng 3.6 Dừ liệu phổ hợp chat MT04 so sánh với tài liệu tham khảo Bảng 3.7 Kết thử hoạt tính gây độc tế bào cao chiết butanol IX ... chiết thành phần hóa học cỏ mần trầu Phân lập chất tinh khiết cao chiết butanol từ cỏ mần trầu, khảo sát thành phần hóa học chất phân lập phương pháp phố đại Góp phần nghiên cứu thành phần hóa học. .. TRƯỜNG ĐẠI HỌC NGUYỄN TẤT THÀNH KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC VÀ MÔI TRƯỜNG csẽQsỡ LUẬN VĂN TÓT NGHIỆP KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC CAO CHIẾT BUTANOL TỪ CÂY CỎ MẦN TRẦU (Eleuslne indica (L. ) Gaertn) Sinh... cao chiết butanol từ cỏ mần trầu (Eleusine indica (L. ) Gaertn)? ??với hy vọng làm sáng tỏ thêm thành phần hóa học cỏ mần trầu nhằm góp phần nhỏ việc đánh giá tài nguyên cỏ mần trầu sử dụng cách có