Đang tải... (xem toàn văn)
Bộ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NGUYỄN TÁT THÀNH KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC VÀ MÔI TRƯỜNG NGUYEN TAT THANH KHÓA LUẬN TÓT NGHIỆP KHAO SÀT THÁNH PHẢN HOA HỌC CAO ETHYL ACETATE VA HO AT TINH SINH HỌC[.]
Bộ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NGUYỄN TÁT THÀNH KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC VÀ MÔI TRƯỜNG NGUYEN TAT THANH KHÓA LUẬN TÓT NGHIỆP KHAO SÀT THÁNH PHẢN HOA HỌC CAO ETHYL ACETATE VA HO AT TINH SINH HỌC CÂY LAN MỘT LÁ (Nervìlia aragoana) Sinh viên thực :Phan Thị Mỹ Thoa Chuyên ngành TP.HCM, tháng năm 2018 :Công nghệ sinh học Bộ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NGUYỄN TẮT THÀNH KHOA CƠNG NGHỆ SINH HỌC VÀ MƠI TRƯỜNG csGIbo KHĨA LUẬN TÓT NGHIỆP KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC CAO ETHYL ACETATE VÃ HOẠT TÍNH SINH HỌC CÂY LAN MỘT LÁ (Nervilia aragoana) Sinh viên thực : Phan Thị Mỳ Thoa Mã số sinh viên : 1411528106 Lớp : 14DSH02 Chuyên ngành : Công nghệ Sinh học Giáo viên hướng dẫn : PGS.TS Mai Đình Trị TP.HCM, tháng năm 2018 LỜI CẢM ƠN Tôi xin chân thành cảm ơn! Khoa Nông Nghiệp Công Nghệ Cao & Công Nghệ Sinh Học, Trường Đại Học Nguyễn Tất Thành tất thầy, giáo tận tình giúp đỡ tơi suốt q trình học tập PGS TS Mai Đình Trị - Viện Cơng nghệ Hóa học - Viện Hàn Lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam tận tình bảo, truyền đạt nhiều kinh nghiệm quý báu, hồ trợ tạo điều kiện thuận lợi dành cho lời khuyên bo ích Thầy truyền đạt cho tri thức khoa học cần thiết mà gương nghiên cứu khoa học, giúp tơi có hành trang cần thiết bước đường học tập, nghiên cứu Các anh, chị bạn bè phòng Các chất có hoạt tính sinh học - Viện cơng nghệ hóa học, với gia đình ln động viên, khích lệ tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ suốt q trình thực đe tơi có the hoàn thành luận văn tốt Trong suốt q trình làm khóa luận, khó tránh khỏi sai sót, mong thầy bở qua cho tơi Tơi mong nhận ý kiến đóng góp từ thầy, để báo cáo khóa luận tơi hồn thiện Phan Thị Mỳ Thoa Khoa Cơng nghệ Sinh học Môi trường Trường Đại Học Nguyễn Tất Thành ii MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN iỉ MỤC LỤC iii TÓM TẮT V SUMMARY vi DANH MỤC CÁC CHŨ VIẾT TẮT vii DANH MỤC CÁC HÌNH ỉx DANH MỤC CÁC BẢNG X ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TÓNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu họ Orchidaceae 1.1.1 Giới thiệu họ Orchidaceae 1.1.2 Giới thiệu chi Nervilia 1.2 Giói thiệu lan 1.2.1 Phân loại khoa học (Đỗ Huy Bích 2004) 1.2.2 Phân bố sinh thái 1.2.3 Mô tả thực vật (Reddy, Sharma et al 2010) 1.2.4 Các nghiên cứu thành phần hóa học 1.2.5 Hoạt tính sinh học chi Nervilia 14 1.2.5.1 Các nghiên cứu tác dụng dược lý 14 1.2.5.2 Công dụng theo dân gian 15 CHƯƠNG NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cứu 16 2.1 Noi thực 16 2.2 Nội dung nghiên cứu 16 2.3 Hóa chất, dụng cụ thiết bị thí nghiệm 16 iii 2.3.1 Hóa chất 16 2.3.2 Thiết bị dụng cụ thí nghiệm 17 2.3.2.1 Thiết bị 17 2.3.2.2 Dụng cụ thí nghiệm 17 2.4 Phương pháp nghiên cứu 18 2.4.1 Phương pháp phân lập họp chất 18 2.4.2 Phương pháp sắc ký lóp mỏng 18 2.4.3 Phương pháp sắc ký cột 18 2.4.4 Phương pháp xác định cấu trúc hóa học hợp chất .19 2.4.5 Phương pháp thử nghiệm hoạt tính sinh họcgây độc tế bào SRB 19 2.4.6 Nguyên liệu 21 2.4.7 Điều chế loại cao 21 2.4.8 Phân lập họp chất từ cao Ethyl acetate 23 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 25 3.1 Ket xử lý mẫu 25 3.2 Kết điều chế cao 25 3.3 Ket sắc ký cột silica gel cao ethyl acetate 25 3.4 Khảo sát câu trúc hóa học họp chat NA3A 26 3.5 Khảo sát cấu trúc hợp chat NA5 .31 3.6 Ket thử hoạt tính gây độc tế bào .36 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 37 TÀI LIỆU THAM KHẢO 39 PHỤ LỤC 41 IV TÓM TẢT Lan một loại thuốc quý sử dụng phổ biến y học dân gian Đe tài “Khảo sát thành phần hóa họ cao ethyl acetate hoạt tính sinh học Lan (Nervilia aragoana)” thực vào 03/2018 đến 07/2018 Phịng Các chất có hoạt tính sinh học - Viện cơng nghệ hóa học, Viện Cơng nghệ Hóa học - Viện Hàn Lâm Khoa Học Công nghệ Việt Nam với mục tiêu khảo sát thành phần hóa học hoạt tính sinh học Lan Những kết đạt sau tháng nghiên cứu: Từ 4,0 kg bột khô Lan lá, thu hái Đaklak, điều chế 280 g cao EtOH 96 %, sau chiết phân bố với dung môi /7-hexane, dichloromethane, ethyl acetate nước thu cao tương ứng n-hexane (110 g), CH2CI2 (25 g), EtOAc (90 g) nước (45 g) Từ cao EtOAc phân lập xác định cấu trúc hợp chất tinh khiết NA3A (rhamnazin-3-glucoside) NA5 (rhamnocitrin-3,4'-ơ-di-/?-glucoside) hai họp chất lần đầu tìm thấy lồi Nervilia aragoana Thử nghiệm hoạt tính gây độc tế bào cao chiết phương pháp SRB nồng độ thử nghiệm 100 pg/mL cao dichloromethane, ethyl acetate EtOH dòng tế bào ung thư vú MCF-7 ung thư gan Hep G2, kết cho thấy phần trăm ức chế tương ứng 11,24, 19,35 12,73 % dòng tế bào ung thư vú MCF-7, phần trăm ức chế với tế bào ung thư gan Hep G2 2,99, 19,50, 2,52% V SUMMARY Single a leaf orchid is one of the rare medicinal plants commonly used in folk medicine The topic of “Surveying high chemical composition Ethyl acetate and bioactive orchids a leaf (Nervilia aragoana)" is performed in 03/2018 to 07/2018 in Room The bioactive substances - Institute of Technology chemistry, Institute of chemical technology - Vietnam Academy of Science and technology with the aim of surveying the chemical composition and biological activity orchids a leaf bridge The results achieved after months of the study: From 4.0 kg of the whole plant of Nervilia aragoana, collected in DakLak provine Were extracted with EtOH 96 %, the extract was evaporated to dryness (280 g) under reduced pressure The ethanol extract was suspended in H2O and partitioned succesively with H-hexane, dichlomethane, ethyl acetate and water to give H-hexane (110 g), dichloromethane (25 g), ethyl acetate (90 g) and water (45 g) extracts, respectivery Further separation and purification of ethyl acetate extract, we isolatedandidentified the structure of two compounds This is the first report of compounds NA3A (rhamnazin-3-glucoside) and NA5 (rhamnocitrin-3,4'-ơ-di-/?- glucoside) from the species Nervilia aragoana These were examined for cytotoxic activity using SRB methods At the concentration of 100 pg/mL the /7-hexane, dichlomethane, ethyl acetate and ethanol extracts exhibited inhibitory activity against two human cancer cell lines MCF-7, Hep G2 cytotoxic activity with values 11,24, 19,35 12,73 % (MCF-7) and 2,99, 19,50, 2,52 % (Hep G2) respectivery VI DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT SKC: Sắc ký cột SKLM: Sắc ký lớp mỏng UV: Tia cực tím H2SO4: Sulfuric acid Ea: Ethyl acetate BuOH: Zĩ-Butanol EtOH: Ethanol C: Chloroform DMSO: Dimethyl Sulfoxide Me: Methanol NMR: Pho cộng hưởng từ hạt nhân (Nuclear Magnetic Resonance) 'H-NMR: Pho cộng hưởng từ hạt nhân proton (H1) (Hydro (1) Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy) l3C-NMR: Phổ cộng hưởng từ hạt nhân cacbon (C13) (Carbon (13) Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy) DEPT: Pho DEPT (Distortionless Enhancement by Polarization Transfer) ơ: Độ dịch chuyến hóa học HSQC: Pho tương tác dị hạt nhân qua liên kết (Heteronuclear Single Quantum Correlation) HMBC: Pho tương tác dị hạt nhân qua nhiều liên kết (Heteronuclear Multiple Bond Coherence) %: Phần trăm J: Hang so ghép spin mg: milligram V11 g: gam mm: millimeter ml: milliliter LPS: lipopolysaccharide ALI: Viêm phoi cap PTLC: Sac ký lớp mỏng điều chế MS: Khôi phô (Mass Spectrometer) ppm: Một phần triệu (Part per million) Hz: Hertz MHz: Mega Hertz pm: Micrometer d: Mũi đôi (Doublet) dd: Mũi đôi đôi (Doublet of doublet) m: Mũi da (Multiplet) s: Mũi đơn (Singlet) MCF-7: Ung thư vú Hep G2: Ung thư gan CH2CI2: Dichloromethane FeCh: Sắt (III) clorua SRB: Sulforhodamine B viii DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Nervilia fordii Hình 1.2 Nervilia plicata Hình 1.3 Hình ảnh sổ lồi thuộc chi Nervilia Hình 2.1 Sắc ký lớp mỏng TLC Hình 2.2 Silica gel dùng cho sắc ký cột Hình 3.1 Cấu trúc hóa học tương quan HMBC hợp chat NA3A Hình 3.2 Cấu trúc hóa học tương quan HMBC hợp chat NA5 Sơ đồ 2.1 Quy trình điều chế loại cao Sơ đồ 2.2 Quy trình lập chất IX ... DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NGUYỄN TẮT THÀNH KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC VÀ MÔI TRƯỜNG csGIbo KHÓA LUẬN TÓT NGHIỆP KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC CAO ETHYL ACETATE VÃ HOẠT TÍNH SINH HỌC CÂY LAN MỘT LÁ... Các chất có hoạt tính sinh học - Viện cơng nghệ hóa học, Viện Cơng nghệ Hóa học - Viện Hàn Lâm Khoa Học Cơng nghệ Việt Nam với mục tiêu khảo sát thành phần hóa học hoạt tính sinh học Lan Những... 41 IV TÓM TẢT Lan một loại thuốc quý sử dụng phổ biến y học dân gian Đe tài ? ?Khảo sát thành phần hóa họ cao ethyl acetate hoạt tính sinh học Lan (Nervilia aragoana)? ?? thực vào 03/2018 đến 07/2018