Phân lập vi nấm kháng vi sinh vật từ đất công viên ở Thành phồ Hồ Chí Minh

CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập - Tự - Hạnh phúc Đơn vị chù trì: Trường Đại học Nguyễn Tất Thành BÁO CÁO TỔNG KÉT ĐÈ TÀI NCKH DÀNH CHO CÁN Bộ - GIẢNG VIÊN 2019 Tên đề tài: PHÂN LẬP VI NÁM KHÁNG VI SINH VẬT TỪ ĐẤT CỊNG VIÊN Ớ THÀNH PHĨ HỒ CHÍ MINH Số hợp đồng: 2020.01,074/HĐ-KHCN Chù nhiệm đe tài: ThS Lê Quang Hạnh Thư Đơn vị công tác: Khoa Dược - Đại học Nguyễn Tất Thành Thời gian thực hiện: 03/2020 - 11/2020 TP Hồ Chí Minh, ngày 22 thảng 09 năm 2020 MỤC LỤC Trang MỤC LỤC DANH MỤC CHỪ VIẾT TẨT iii DANH MỤC BẢNG iv ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỐNG QUAN TÀI LIỆU TỐNG QUAN VỀ VI NÁM SỢI 1.1 Đặc điêm vi nâm sợi 1.2 Nguồn lợi vi nấm sợi đất .3 TỐNG QUAN VÈ HỆ VI NÁM SỢl TRONG ĐÁT 2.1 Nghiên cứu giới 2.2 Nghiên cứu nước CHƯƠNG ĐÓI TƯỢNG - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỦƯ ĐỔI TƯỢNG NGHIÊN cúư, TRANG THIẾT BỊ, HÓA CHẤT 1.1 Đối tượng nghiên cứu 1.2 Dung mơi - hóa chất 1.3 Vi sinh vật thử nghiệm 1.4 Môi trường nuôi cấy 1.5 Trang thiết bị 10 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cứu 10 2.1 Phân lập vi nấm từ mẫu đất 10 2.1.1 Phương pháp thu xử lý mẫu đất 10 2.1.2 Phân lập vi nấm 11 i 12 Định danh vi nấm sợi 11 2.3 Thử nghiệm khảo sát tính kháng khuẩn kháng nấm Candida cùa chất biến dưỡng từ vi nấm 12 2.3.1 Hoạt hóa vi sinh vật thử nghiệm 12 2.3.2 Phưong pháp khảo sát tính kháng khuẩn - kháng nấm Candida 13 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 14 l KẾT QUẢ 14 1.1 Phân lập vi nấm 14 1.2 Định danh vi nấm 14 1.3 Khảo sát hoạt tính kháng vi sinh vật cùa chất biến dưỡng từ vi nấm 15 1.3.1 Hoạt tính kháng khuẩn 21 3.1.3.2 Hoạt tính kháng nấm Candida 23 3.2 BÀN LUẬN 25 3.2.1 Phân lập định danh vi nấm 25 3.2.2 Hoạt tính sinh học cùa chất biến dưỡng từ vi nấm đất 27 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 29 4.1 KÉT LUẬN 29 4.2 ĐÈ NGHỊ 30 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC 1: Môi trường nuôi cấy ii DANH MỤC CHỮ VIÉT TẤT Ec Escherichia coỉi LPCB Lactophenol coton blue MHA Mueller Hinton Agar MRSA Staphylococcus aureus đề kháng methicillin Pa Pseudomonas aeruginosa PDA Potato Dextrose Agar Sa Staphylococcus aureus SDA Sabouraud Dextrose Agar Sf Streptococcus faecalis TSA Tryptic Soy Agar TSB Tryptic Soy Broth Tp.HCM Thành phố Hồ Chí Minh iii DANH MỤC BANG Trang Bang 3.1 Ket định danh vi nấm phân lập từ đất công viên Tp.HCM 14 Bảng 3.2 Vi nấm có hoạt tính kháng khuấn 21 Bảng 3.3 Vi nấm có hoạt tính kháng nấm Candida 24 Bảng 3.4 Tỷ lệ phân bố vi nấm phân lập từ đất công viên Tp.HCM 26 IV DANH MỤC HÌNH Trang Hình 3.1 Một số mẫu Penicillium 15 Hình 3.2 Một số mẫu Aspergillus 16 Hình 3.3 Paecilomyces sp G46 17 Hình 3.4 Trichoderma sp T411 18 Hình 3.5 Mucor sp T13 18 Hình 3.6 Fusarium H22 19 Hình 3.7 Phoma sp T23 19 Hình 3.8 Curvularia sp G26 20 Hình 3.9 Cladosporium sp H57 20 V ĐẶT • VẤN ĐÈ Vi sinh vật sống khắp nơi Trái Đất, nơi mà điều kiện tưởng chừng khắc nghiệt vần thấy có phát trien vi sinh vật Vi sinh vật đất nước có vai trị quan trọng lĩnh vực nông nghiệp, công nghiệp, y tế Hiện nay, tượng đề kháng kháng sinh ngày lan rộng gây nhiều khó khăn cho việc điều trị bệnh nhiễm khuẩn Việc tìm kiếm hoạt chất có tính kháng sinh có nguồn gốc thiên nhiên, đặc biệt từ chùng vi sinh vật, nhiều nhà khoa học quan tâm Trên giới, nhà khoa học tập trung theo hướng tìm kiếm hoạt chất thiên nhiên có tác dụng kháng khuấn, kháng nấm chất biến dưỡng từ vi sinh vật Trong nước có số đề tài tương tự thực vùng Tp Cần Thơ, huyện cần Giờ Tuy nhiên, hầu hết nghiên cứu thường ứng dụng để bảo vệ trồng [3,9] Chỉ có số đề tài tiến hành phân lập chủng vi nấm sợi có hoạt tính kháng vi sinh vật gây bệnh người động vật [4] Việc nghiên cứu sàng lọc vi nấm có hoạt tính sinh học từ đất mang ý nghĩa khoa học thiết thực nhằm khai thác nguồn lợi thiên nhiên cách hợp lý Với mục tiêu trên, thực đề tài “PHÂN LẬP VI NẤM CĨ HOẠT TÍNH KHÁNG VI SINH VẬT TÙ NGUỒN ĐẤT Ở CÔNG VIÊN THUỘC TP HỒ CHÍ MINH” Mục tiêu đề tài gồm: - Phân lập vi nấm từ đất vườn so vùng thuộc Tp.HCM - Định danh vi nấm phân lập chủng - Khảo sát hoạt tính kháng khuấn kháng Candida chất biến dưỡng vi nấm sản xuất CHƯƠNG TÓNG QUAN TÀI LIỆU TÓNG QUAN VÈ VI NÁM SỢI 1.1 Đặc điểm CO’ vi nấm sợi Vi nấm xếp loại giới Nam (Fungi) Vi nấm nhóm nấm có kích thước hiển vi thuộc nhóm sinh vật nhân thật (Eukaryote) Vi nấm sinh vật dị dường, có đời sống hoại sinh ký sinh Te bào vi nấm khơng có diệp lục nên khơng tự quang họp có hệ thống enzym dồi (cellulase, protease, catalase ) tham gia chuyển hóa chất Chúng tiết enzym môi trường giúp phân giải hợp chất phức tạp thành họp chất đơn giản đe hấp thu Tùy theo cấu tạo, chia vi nấm thành hai nhóm gồm dạng nấm men (yeast) có cấu trúc đơn bào nấm sợi (hyphae) có cấu trúc đa bào Dựa vào vai trị, nấm đất có the chia thành ba nhóm: [ 18] - Decomposers - nấm hoại sinh: nhóm nấm giúp biến đoi vật liệu hữu chết thành sinh khối nấm, carbon dioxide (CO2) phân tử nhỏ acid hữu Những loại nấm thường sừ dụng chất phức tạp cellulose lignin Chúng cần thiết việc phân hủy cấu trúc vòng carbon số chất gây ô nhiễm Giong vi khuấn, chúng đóng vai trị quan trọng giúp giữ lại chất dinh dưỡng đất - Mutualists - nấm mycorrhizal: nhóm nấm cộng sinh rễ lồi Đẻ đồi lấy chất dinh dưỡng từ cây, vi nấm giúp hịa tan chuyển hóa chất phot pho, nitơ, chất vi lượng có đất khơng khí cho sử dụng - Pathogens hay Parasites - nấm ký sinh gây bệnh: nhóm nấm thường gây giảm suất trồng, gây bệnh gây chết sinh vật chúng xâm chiếm rễ công sinh vật khác Các vi nấm thuộc nhóm thường gặp Verticillium, Pythium Rhizoctonia Chúng gây thiệt hại kinh tế lớn nông nghiệp mồi năm Tuy nhiên, nhiều loài nấm giúp kiểm sốt bệnh chúng thiên địch số loài sâu hại vi nấm gây bệnh khác Theo Elizabeth Tootyll (1984), nấm mốc có khoảng 5.100 giống 50.000 lồi mơ tả, nhiên, ước tính có 100.000 đen 250.000 lồi nấm diện Trải đất 1.2 Nguồn lọi vi nấm sọi đất Nấm mốc có ảnh hưởng xấu đến sống người cách trực tiếp làm hư hỏng, giảm chất lượng thực phấm trước sau thu hoạch, chế biến bảo quản Nấm mốc gây hư hại vật dụng, quần áo gây bệnh cho người, động vật trồng Nhưng bên cạnh đó, vi nấm cịn giữ vai trò quan trọng việc phân giải chất hữu co trả lại độ màu mỡ cho đất trồng Các quy trình chế biến thực phẩm có liên quan đến lên men cần đến có mặt vi sinh vật, có nấm moc Nấm men sử dụng để sản xuất rượu vang hay bia Chúng thêm vào bột để làm bánh mì có độ nở định, số sử dụng để sản xuất mát châu Á, số vi nấm thêm vào đậu nành để tạo số thực phẩm nước tương ủ băng nâm môc Aspergillus (A.oryzae, A.soyae, A.niger, A.terrỉol ) [2] Nấm có lợi với so vi khuẩn có the hình thành mạng lưới bảo vệ xung quanh rễ đe bảo vệ chủ Nấm Trichoderma bảo vệ rề khỏi công vi sinh vật có hại Nấm cịn cung cấp lớp vỏ bảo vệ đế cung cấp nước phot cho rề hạn hán Bên cạnh đó, Trichoderma có khả sinh tổng hợp enzyme ngoại bào amylase, protease có khả kháng số bệnh hại trồng [5, 23, 24, 26, 28] Hợp chất cytosporone chiết tách từ nước dùng lên men nấm Trichoderma sp FKI-6626 Cấu trúc hóa học xác định chủ yếu quang phố NMR khối phổ Hợp chất thể hoạt tính kháng khuẩn chống lại số loài vi khuẩn s.aureus, E.coli, p.aeruginosa vi nâm gây bệnh Candida albicans, Aspergillus oryzae, Mucor racemosu ■ ■ [ 19] Trichoderma viride phân lập từ đất trồng dưa leo trang trại Omar Makram (Beheara Governorate, Ai Cập) vào mùa thu hoạch mùa đông năm 2012/2013 thử nghiệm chất kháng khuẩn, chất chống oxy hoá chống ung thư T viride từ đất trồng dưa chuột gây ức chế phát triển nấm Fusarium solanỉ, Rhizoctonia solani Sclerotium rolfsii Ngoài ra, cao chiết sinh khối nấm đă chứng minh có tỉnh kháng khuấn mạnh chống lại Bacillus subtilis, E.coli Pseudomonas fluorescens [13] Nấm mốc giúp tổng hợp loại kháng sinh (penicillin, griseofulvin), vitamin (nhóm B, riboflavin), enzyme số hoạt chất khác dùng công nghiệp thực phẩm y dược sử dụng rộng rãi giới Các loài nấm song cộng sinh nội sinh tế bào thực vật (endophytes) có khả sản xuất chất biến dưỡng hữu ích cho chiết xuất để sử dụng sản xuất dược phẩm hóa chất nơng nghiệp [12] “Thời kỳ vàng son" kháng sinh Alexandre Fleming lần đầu phát chất ức chế vi khuẩn penicillin từ vi nấm Penicillium notation Emst Boris Chain Howard Walter Florey tinh khiết hóa thành chế pham đe dùng điều trị (1941) Khi người ta định nghĩa "Kháng sinh chất vỉ nấm vi khuẩn tạo ra, bán tổng hợp, tổng hợp, có tác dụng điều trị đặc hiệu với liều thấp ức chế so trình song vi sinh vật đơn bào mà không ảnh hưởng tới vật chủ” (Turpin, Velu 1857) Trong chủng Penicillium phân lập từ đất nơng nghiệp Bắc Iran p.aurantiogriseum lồi có hoạt tính mạnh Bên cạnh đó, chủng khác bao gom p.virỉdỉcatum, p.citrinum p.waksmanii cho thấy hoạt động kháng vi sinh vật đáng ke Candida albicans, Bacillus subtilỉs, s aureus, Salmonella typhi E.coli [17] Một số loại nấm thuộc chi Aspergillus biết đến với khả sản xuất chất chuyển hóa có hoạt tính sinh học khác cho ngành công nghiệp dược phẩm, chẳng hạn acid terrecyclic A thể hoạt tính chống ung thư kháng khuẩn [15, 29]; lovastatin có tác dụng giảm cholesterol sản xuất nấm Aspergillus terreus [14]; echinocandin B sản xuất A.nidulans có tác dụng kháng nấm[l 1]; fumagillin chất chuyển hóa A.fumigatus thể tính kháng ký sinh trùng [26] Một số chủng Aspergillus thể hoạt tính kháng khuẩn chống lại - Có 11 chủng Aspergillus thể hoạt tính kháng khuẩn, trội chùng G51 HI3 Riêng chủng G52 thể hoạt tính kháng s.aureus MRSA; G53 chì hoạt tính kháng vi khuan Gram dương - đặc biệt S.feacalis với vòng ức chế 20 mm; G42 G54 the hoạt tính kháng 04/05 lồi vi khuấn thử nghiệm, đặc biệt vi khuẩn Gram âm E.coli Pseudomonas với vòng ức chế khoảng 11-15 mm Ket cho thấy đa phần chủng Aspergillus nuôi hồn họp nước chiết ngô cao chiết nấm men cho hoạt tính kháng khuẩn rộng tốt - Có 03 chủng Trichoderma the hoạt tính kháng khuẩn Trong đó, chủng T35 cho tác động kháng 04/05 loài vi khuẩn thử nghiệm, đặc biệt S.feacalis s.aureus với vòng ức chế 16 20 mm Các chủng Trichoderma chủ yếu thể hoạt tính kháng vi khuan Gram dương, riêng chủng T35 cho tác động kháng yếu vi khuan Gram âm p.aeruginosa Ket cho thấy Trichoderma nuôi môi trường cao chiết nấm men lại cho hoạt tính kháng khuan tốt - Có 03 chủng chưa định danh thể hoạt tính kháng khuẩn Trong đó, chủng T212 cho hoạt tính kháng khuấn tốt E.coli p.aeruginosa với vòng ức chế 20 mm Chủng H14 H34 cho tác động yếu vi khuan Gram dương với vòng ức chế 07-11 mm Như vậy, chủng thể hoạt tính kháng vi khuan Gram âm đáng kể gồm 09/11 chủng Aspergillus 01 chủng chưa định danh T212; chủng cho tác động yếu đến trung bình gồm 02 chủng Penicillum 01 chủng Trichoderma Cả 27 chùng vi nấm the hoạt tính kháng vi khuẩn Gram dương vi khuan S.feacalis S.aureus hai Hoạt tính kháng MRSA xuất chủ yếu 10/11 chúng Aspergillus, rải rác 03 chủng Penỉcillium, 01 chùng Trichoderma 01 chủng chưa định danh H34 3.1.3.2 Hoạt tính kháng nấm Candida Ket khảo sát hoạt tính kháng nấm Candida chất biến dưỡng chủng vi nấm sản xuất ghi nhận bảng 3.3 23 Bảng 3.3 Vi nấm có hoạt tính kháng nấm Candida STT Chủng nấm Penicilliutn T33 Penicillium T34 Aspergillus G51 Trichoderma H32 G36 G38 G44 G47 G49 10 H17 11 H19 12 H34 Đường kính vịng úc chế (mm) Candida Candida Candida albicans glabrata tropicalis Môi trường 2 2 2 2 2 21 20 16 10 15 12 11 09 13 10 10 11 22 25 20 10 08 09 16 12 - 28 28 12 19 18 18 15 15 13 13 18 15 16 14 20 - 18 Nhận xét: Như vậy, 09/12 chủng thê hoạt tính kháng c albicans chủng Candida thường gây bệnh lâm sàng Các chủng cho tính kháng c.albicans noi bật gom Pencillium T33, Penicillium T34 chủng chưa định danh H34 Cả 12 chủng thể hoạt tính kháng c.glabrata C.tropỉcalis hai - chủng Candida gây bệnh lâm sàng tỉ lệ đề kháng thuốc cao Các chủng có khả kháng C.glabrata/Ctropicalis nơi trội gồm Pencỉllỉum T33, Penicillium T34, Trichoderma H32 04 chủng chưa định danh G36, G38, D49, H34 Bên cạnh đó, kết cho đa phần chủng vi nấm thể hoạt tính kháng Candida rộng tốt hon nuôi cấy môi trường hồn họp nước chiết ngơ cao nấm men 24 Như vậy, có 03 chủng vi nấm vừa thể tính kháng khuấn vừa thể tính kháng nấm Candida gồm Penicillium T33, Aspergillus G51 chủng chưa định danh H34 3.2 BÀN LUẬN Từ 15 mẫu đất thu thập công viên Tao Đàn, cơng viên Gia Định cơng viên Hồng Văn Thụ, phân lập 103 chủng vi nấm thuộc 09 chi 3.2.1 Phân lập định danh vi nấm Các nghiên cứu giới cho thấy nhiều loài vi nấm đất, tiêu biếu như: Aspergillus, Mucor, Penicỉllium, Trichoderma, Fusarium, Rhizopus, Verticỉllỉum Bên cạnh đó, lồi vi nấm đất phân bố khác tùy theo vùng địa lý khí hậu, ví dụ Mucor Penicillium thường xuất đất vùng ơn đới hay vùng có khí hậu mát mẻ, Aspergillus có đất vùng nhiệt đới [30] Từ mầu đất thuộc Tp.HCM phân lập 103 chủng vi nấm gồm 34 chủng từ công viên Tao Đàn, 38 chủng từ công viên Gia Định 31 chủng từ cơng viên Hồng Văn Thụ Có 69/103 chủng định danh đến tên chi - thuộc 09 chi gồm: Penicillium (37 chủng), Aspergillus (17 chủng), Trichoderma (06 chủng), Mucor (03 chủng), Fusarium (02 chủng), Phoma (01 chủng), Curvularia (01 chủng), Paeciỉomyces (01 chủng), Cladosporium (01 chủng) 34/103 chủng không đủ sở đề định danh So với nghiên cứu vi nấm sợi nước, vi nấm sợi đất nội thành Tp.HCM chiếm tỉ lệ xuất cao gom Aspergillus, Penicillium, Trichoderma Ket tương đồng với nghiên cứu vi nấm đất số tỉnh miền Nam cần Giờ, cần Thơ, Bình Dương Bên cạnh đó, phân lập chi nấm khác Paecỉlomyces, Phoma, Curvularia Đây diem khác biệt nhỏ hệ vi nấm đất Tp.HCM so với vùng đất khác Nguyên nhân khác biệt có the điều kiện tho nhưỡng khí hậu khác vùng miền 25 Bảng 3.4 Tỷ lệ phân bố vi nấm phân lập từ đất công viên Tp.HCM Chi nấm STT Số lượng Tỉ lệ(%) Địa điểm Penicillium 37 35,92 T, G, H Aspergillus 17 16,51 T, G,H Trichoderma 06 5,83 T, G, H Mucor 03 2,91 T, G,H Fusarium 02 1,94 G, H Phoma 01 0,97 T Curvularia 01 0,97 G Paecilomyces 01 0,97 G Cladosporium 01 0,97 H 10 Chưa đủ sở định danh 34 33,01 T, G,H Penicillium xuất 12/15 mẫu đất Tỷ lệ Penicillium phân lập (35,92%) cao so với chi vi nấm khác Như vậy, Penỉcillium chi nấm trội thường trực đất Điều phù họp với nghiên cứu giới vi nấm đất Aspergillus nhóm nấm lớn Từ kết kết phân lập cho thấy Aspergillus chi nấm bật hệ vi nấm đất Tp.HCM chiếm 16.51% Dựa vào đặc điểm khóm nấm đặc điểm hiển vi đặc trưng định danh 15 chủng đến tên loài gom A.niger, A.fumigatus, A.flavus 02 chủng đến tên chi Trichoderma chi nấm bật hệ vi nấm đất thuộc Tp.HCM, chiếm 5,83% Thời gian lấy mầu phân lập vi nấm thực tháng - giai đoạn mùa mưa với đặc điếm khí hậu nhiệt độ cao, mưa nhiều Ket quà nghiên cứu phù hợp với nghiên cứu nước cho thấy Trichoderma thường xuất vùng đất ấm ướt [30] Bên cạnh cịn có Mucor, Fusarium, Cladosporium, Curvularìa, Paecilomyces Phoma phân lập từ đất thuộc Tp.HCM Ket phù họp với nghiên cứu giới nghiên cứu Admetz, Oudermans Koning, Waksman vi nấm đất 26 Như vậy, kết phân lập định danh chứng tò hệ vi nấm đất thuộc Tp.HCM đa dạng phù hợp với nghiên cứu hệ vi nấm đất the giới Sự khác biệt hệ vi nấm đất thuộc Tp.HCM khu vực giới có the khác biệt điều kiện tho dưỡng, địa lý khí hậu Hiện nay, nghiên cứu hệ vi nấm thuộc Tp.HCM nói riêng khu vực nói chung Việt Nam cịn Do đó, kết nghiên cứu góp phần nhằm triển khai hướng tìm lồi vi nấm đất có tác dụng sinh học tốt 3.2.2 Hoạt tính sinh học ciia chất biến dưỡng từ vi nấm đất Nhiều nghiên cứu cho thấy Penicỉlỉiutn the hiện tính kháng khuân tốt vi khuân Gram dương (Staphyloccocus aureus, S.epidermidis, Bacillus subtilis ), Gram âm (Klebsiella pneumoniae, Salmonella typhimurium, Shigella flexneri, Salmonella typhi, Escherichia coli ) kháng nâm Candida albicans [17, 21] Trong khn kho báo cáo, có 10/37 chủng Penỉcillium thể tính kháng khuân chủ yếu vi khuẩn Gram dương gồm s.aureus, MRSA S.faecalis Có 02/37 chủng Penicillium tính kháng nấm tốt 03 chủng Candida thử nghiệm Trong đó, đặc biệt chủng T33 vừa thể hoạt tính kháng khuẩn, vừa thể hoạt tính kháng nấm Candida Hoạt tính kháng khuẩn kháng nấm Penỉcillium phân lập từ đất thuộc Tp.HCM giống với nghiên cứu the giới Sự khác biệt Penỉcỉllium phân lập từ đất thuộc Tp.HCM thể tác động kháng yếu p.aeruginosa E.coli Có 11/17 vi nấm thuộc chi Aspergillus the tính kháng khuẩn, có 07 chủng cho tác động kháng khuẩn 05 loài vi khuẩn thử nghiệm Ket thực nghiệm cho thấy Aspergillus chùng vi nấm tiềm có khả sản xuất chất biển dưỡng cho hoạt tính kháng khuẩn tot Ket giong với nghiên cứu K Stefan Svahn Ấn Độ [27] Có 03/06 chủng Trichoderma cho tác động kháng khuẩn vi khuẩn gram dương Trong đó, chủng T35 cho tác động kháng khuẩn 04/05 vi khuẩn thử nghiệm kháng s.aureus mạnh Chủng H32 thể tính kháng Cglabrata tốt Có khác biệt 27 Trichoderma phân lập từ đất thuộc Tp.HCM tác động E.coli [13, 19] Chủng TD2-12 chưa định danh the tính kháng khuẩn mạnh vi khuẩn gram âm gồm p.aeruginosa E.coli Đây chùng vi nấm tiềm có khả sản xuất chất biến dưỡng cho hoạt tính tốt 07/34 chủng chưa định danh thể tác động kháng nấm tốt C.tropicalis gồm chủng G36, G38, G44, G47, G49, H19 H34 Trong đó, chủng H34 vừa the hoạt tính kháng khuẩn vi khuẩn gram dương vừa thể hoạt tính kháng Candida Như vậy, kết thử nghiệm kháng khuẩn kháng nấm chủng vi nấm phân lập từ đất thuộc Tp.HCM có phù hợp định với nghiên cứu vi nấm đất giới Sự khác biệt hoạt tính sinh học có the khác biệt chủng loài vi nấm điều kiện tho dường, địa lý Hiện nay, giới nhà khoa học tìm kiếm hoạt chất thiên nhiên có tác dụng kháng khuấn, kháng nấm chất biến dưỡng từ vi sinh vật Nghiên cứu cho kết có 27/103 chùng thể tác động kháng khuẩn 12/103 chủng the tác động kháng nấm Candida Trong đó, có 10 chủng Penicillium, 11 chủng Aspergillus, 03 chủng Trichoderma 03 chủng chưa định danh thể tác động kháng khuẩn; 02 chủng Penỉcỉllium, 01 chủng Aspergillus, 01 chủng Trichoderma 08 chủng chưa định danh thể tác động kháng Candida Đáng ý chủng Penicillỉum T33, Aspergillus G51 chủng H34 vừa thể tính kháng khuẩn vừa the tính kháng Candida Như vậy, chủng vi nấm tiềm cho khả sản xuất chất biến dường có hoạt tính sinh học tốt 28 CHƯƠNG KÉT LUẬN VÀ ĐÈ NGHỊ 4.1 KẾT LUẬN Từ mẫu đất thuộc Tp.HCM phân lập 103 chủng vi nấm gồm 34 chủng từ công viên Tao Đàn, 38 chủng từ công viên Gia Định 31 chủng từ công viên Hoàng Văn Thụ Trong 103 chủng vi nấm phân lập, 69 chủng định danh đến tên chi 34 chủng khơng đủ sở để định danh Có 69 chủng định danh đến tên chi - thuộc 09 chi gồm: Penicillium (37 chủng), Aspergillus (17 chủng), Trichoderma (06 chủng), Mucor (03 chủng), Fusarium (02 chủng), Phoma (01 chủng), Curvularia (01 chủng), Paecỉlomyces (01 chủng) Cladosporium (01 chủng) Ket khảo sát hoạt tính kháng vi sinh vật 05 vi khuẩn thử nghiệm 03 chúng Candida 103 chủng vi nấm phân lập được, sau: + 27/103 chủng cho hoạt tính kháng khuấn Trong đó, có 10 chủng Penicillium, 11 chủng Aspergillus, 03 chủng Trichoderma 03 chủng chưa định danh + 12/103 chùng cho hoạt tính kháng nấm Candida Trong đó, 02 chúng Penicillium, 01 chủng Aspergillus, 01 chủng Trichoderma 08 chủng chưa định danh + 03/103 chủng vừa kháng khuẩn vừa kháng Candida gồm Penicỉllium T33, Aspergillus G51 chủng H34 Hệ vi nấm đất thuộc Tp.HCM đa dạng phù hợp với nghiên cứu hệ vi nấm đất giới, chủ yếu chủng Penỉcillium, Aspergillus Trichoderma Qua khảo sát sơ hoạt tính kháng khuẩn kháng Candida cho thấy số chủng vi nấm tiềm có khả sản xuất chất biến dưỡng thể hoạt tính sinh học tốt 29 4.2 ĐỀ NGHỊ Neu có điều kiện nghiên cứu, đề nghị đề tài tiếp tục theo hướng sau: Tiếp tục định danh chủng vi nấm cịn lại phương pháp thường quy (nếu có the) kỳ thuật phân tử Định danh đến tên lồi chủng vi nấm cho hoạt tính tốt kỳ thuật phân tử Thực nuôi cấy vi nấm lượng lớn Đong thời, khảo sát điều kiện ni cấy thích hợp để vi nấm sản xuất chất biến dường thể hoạt tính kháng vi sinh vật Chiết tách xác định thành phần hóa học chất biến dưỡng có hoạt tính kháng vi sinh vật từ vi nấm 30 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt ĐỒ Lương Ngọc Châu, Nguyền Anh Dũng (2015), "Khả đoi kháng nấm Trichoderma spp với nấm Sclerotium spp gây bệnh thối thân, lan Mokara Dendrobium", Tạp chí Đại học Thù Dầu Một, (25), tr 17-23 Huỳnh Tấn Đạt, Nguyền Hồng Phúc cộng (2013), Tìm hiếu quy trình sản xuất nước tương theo phương pháp lên men, Trường ĐH Công nghiệp Thực phẩm TP.HCM, tr 20 Trần Thị Minh Định, Trần Thị Thanh Thủy (2013), "Nghiên cứu điều kiện ni cấy thích hợp để chủng Aspergillus terreus phân lập từ rừng ngập mặn cần Giờ sinh tổng hợp chất kháng sinh", Tạp chí Khoa học ĐHSP TPHCM, tr 119125 Nguyễn Thị Hà (2014), "Phân lập tuyển chọn số chùng nấm sợi có hoạt tính kháng khuẩn quận Ninh Kiều, Tp cần thơ", Tạp chí Khoa học trường Đại học Cần Thơ, tr 7-11 Phạm Thị Ánh Hồng, Đinh Minh Hiệp cộng (2005), "Điều tra khảo sát phân bố chủng nấm Trichođerma Thành phố Hồ Chí Minh tỉnh Đông Nam Bộ", Hội nghị tông kết NCCB KHTN khu vực phía Nam năm 2005, tr 17-19 Phạm Thị Ngọc Lan, Hoàng Dương Thu Hương (2015), "Phân lập tuyển chọn chủng nấm mốc hịa tan phosphate vơ từ đất rừng ngập mặn Thừa Thiên - Huê.", Hội nghị Khoa học toàn quốc Sinh thải Tài nguyên sinh vật lần thứ 6, tr 1165-1171 Phạm Thị Ngọc Lan, Võ Thị Thanh Nhàn (2014), "Tuyển chọn số chủng nấm mốc sinh tong hợp Chitinase phân lập từ đất.", Tạp chí Khoa học Cơng nghệ trường ĐH Khoa học Huế, 1(1), tr 41-47 Nguyền Thiện Phú, Vũ Thị Phương (2016), "Phân lập, tuyển chọn chủng nấm sợi có khả tạo Lovastatin từ rừng ngập mặn cần Giờ.", Tạp chí khoa học ĐHSP TPHCM, (87), tr 113-126 Trần Thị Thúy (2013), Nghiên cứu tuyển chọn sản xuất chế phẩm đơn dòng nấm đối khảng Trichodertna phòng trừ tác nhân gãy bệnh thối đen ca cao, Trường ĐH Khoa Học Tự Nhiên, tr 35-38 10 Võ Thị Bích Viên (2009), Khảo sát đặc diêm sinh học số chủng nấm sợi thuộc chi Aspergillus Penicilỉium từ rừng ngập mặn cần Giờ TP Hồ Chỉ Minh, Trường Đại học Sư phạm TP HCM, tr 80 Tài liệu nước 11 Aly A, Debbab A, Proksch p (2011), "Fifty years of drug discovery from fungi", Fungal Divers, pp 3-19 12 Amy R (1998), Protocols for an All Taxa Biodiversity Inventory of Fungi in a Costa Rican Conservation Area, Parkway Publishers, pp 116, 120 13 Awad N E, Kassem H A, Hamed M A, El-Feky A M, et al (2018), "Isolation and characterization of the bioactive metabolites from the soil derived fungus Trichoderma viride", Mycology, 9(1), pp 70-80 14 Bizukojc M, Pawlak M, Boruta T, Gonciarz J (2012), "Effect of pH on biosynthesis of lovastatin and other secondary metabolites by Aspergillus terreus ATCC 20542", JBiotechnol, 162 (2-3), pp 253-261 15 Bok J w, Hoffmeister D, Maggio-Hall L A, Murillo R, et al (2006), "Genomic mining for Aspergillus natural products", Chern Biol, 13 (1), pp 31-37 16 Cavalcanti MA, Oloveria LG, Fernandes MJ, DM L (2006), "Filamentous fungi isolated from soil in districts of the Xingó region", Acta Botanica Brasilica, pp 831-837 17 E Gharaei-Fathabad, Tajick-Ghanbary M, Shahrokhi N (2014), "Antimicrobial Properties of Penicillium Species Isolated from Agricultural Soils of Northern Iran", Research Journal of Toxins, 6(1), pp 1-7 18 Elaine R Ingham, Andrew R Moldenke, Clive A Edwards (2000), Soil biology primer, the Soil and Water Conservation Society (SWCS), pp 15-17 19 Ishii T, Nonaka K, Suga T, Masuma R, et al (2013), "Cytosporone s with antimicrobial activity, isolated from the fungus Trichoderma sp FKI-6626", Bioorg Med Chern Lett, 23 (3), pp 679-681 20 Karaoglu s A, Ulker s (2006), "Isolation, identification and seasonal distribution of soilborne fungi in tea growing areas of lyidere-Ikizdere vicinity (Rize- Turkey)", J Basic Microbiol, 46 (3), pp 208-218 21 Kaur H, Onsare J G, Sharma V, Arora D s (2015), "Isolation, purification and characterization of novel antimicrobial compound 7-methoxy-2,2-dimethyl-4octa-4',6'-dienyl-2H-napthalene-l-one from Penicillium sp and its cytotoxicity studies", AMB Express, 5(1), pp 2, 5, 22 Khalid M, Yang w J, Kishwar N, Rajput z I, et al (2006), "Study of cellulolytic soil fungi and two nova species and new medium", J Zhejiang Univ Sei B, (6), pp 460, 461 23 Lowenfels J., w L (2006), A Gardener’s Guide to the Soil Food Web, Chapter 3: Bacteria., Timber Press, pp 24 Magdoff F, Van Es H (2009), Building Soils for Better Soil: Sustainable Soil Management, Chapter 4: The Living Soil (3rd edition), Sustainable Agriculture Research and Education (SARE) program, pp 37-45 25 Pal s, Ghosh s K (2014), "Diversity of soil fungi in North 24 Parganas and their antagonistic potential against Leucinodes orbonalis Guen (Shoot and fruit borer of brinjal)", Environ Monit Assess, 186 (12), pp 8707-8716 26 Sanchez DG (2012), Fumagillin and Structrually Related Molecules as Source of New Drugs, pp 126-142 27 Svahn K s, Gõransson u, El-Seedi H, Bohlin L, et al (2012), "Antimicrobial activity of filamentous fungi isolated from highly antibiotic-contaminated river sediment", Infection Ecology & Epidemiology, pp 11591 28 Sylvia D.M., Hartel P.G., Fuhrmann J.J., Zuberer D A (2005), Principles and Applications of Soil Microbiology (2nd edition), Edited by David M Sylva, Pearson Prentice Hall, Upper Saddle River: New Jersey 29 Turbyville T J, Wijeratne E M, Whitesell L, Gunatilaka A A (2005), "The anticancer activity of the fungal metabolite terrecyclic acid A is associated with modulation of multiple cellular stress response pathways", Mol Cancer Ther,4(W),w 1569-1576 30 Watanabe T (2002), Pictorial Atlas of Soil and Seed Fungi: morphologies of culturedfungi and key to species, CRC PRESS, pp 1-2 PHỤ LỤC 1: Môi trường nuôi cấy - Môi trường Sabouraud Dextrose Agar (SDA) Tryptone 05 g Peptone 05 g Glucose 40 g Agar 15 g Nước cất 01 lít - Mơi trường Potato Dextrose Agar (PDA) Khoai tây 200 g Glucose 20 g Agar 15 g Nước cất 01 lít - Mơi trường Potato Dextrose Agar (PDA) chloramphenicol 0,1% Khoai tây 200 g Glucose 20 g Agar 15 g Nước cất 01 lít Hấp tiệt trùng nhiệt độ 121°c/latm 20 phút, để nguội đến khoảng 60°C thêm chloramphenicol đạt nồng độ 0,1% - Môi trường Tryptic Soy Broth (TSB) Casein 15 g Soybean Meal 05 g NaCl 05 g Nước cất 01 lít - Mơi trường Tryptic Soy Agar (TSA) Casein 15 g Soybean Meal 05 g NaCl 05 g Agar 15 g Nước cất 01 lít - Mơi trường Potato Carrot Agar (PCA) Khoai tây 200 g Cà rốt 250 g Agar 15 g H2O 01 lít - Môi trường Czapeck Dox Saccharose 30 g NaNƠ3 03 g K2HPO4 01 g KC1 0,5 g MgSƠ4.7H2O 0,5 g FeSƠ4.7H2O 0,5 g Agar 15 g Nước cất 01 lít - Môi trường Mueller Hinton Agar (MHA) Beef 300 g Casein acid hydrolysate 17,5g Starch 1,5 g Agar 17 g Nước cat 01 lit - Môi trường cao nam men Yeast extract 20 g Succrose 150 g H2O 01 lit - Nước chiết ngô (Phương pháp Ligett Kofflet) Lấy 10 kg ngơ hạt ngâm 16 lít nước nóng 50°C Chọn dụng cụ ngâm để ngập bề mặt lóp ngơ khoảng 03 - 05cm Sau 48 giừ nhiệt độ 50°C lấy lọc roi lấy bã lần thứ hai với 10 lít nước nóng 50°C Sau 48 giừ nhiệt độ 50°C lại lọc đế lấy nước chiết lần thứ hai Trộn hai dịch lọc lại với Dùng NaOH điều chình pH đến 8,0 để tạo điều kiện kết tủa protein Hấp tiệt trùng nhiệt độ 121°c/latm 20 phút, lọc bỏ kết tủa lấy nước dùng đe làm môi trường Cứ 01 kg ngô thường thu 1,3 lít nước ngơ - Mơi trường hồn hợp nước chiết ngô cao nấm men: Pha môi trường cao nấm men thay nước cất nước chiết ngô ... “PHÂN LẬP VI NẤM CĨ HOẠT TÍNH KHÁNG VI SINH VẬT TÙ NGUỒN ĐẤT Ở CƠNG VI? ?N THUỘC TP HỒ CHÍ MINH? ?? Mục tiêu đề tài gồm: - Phân lập vi nấm từ đất vườn so vùng thuộc Tp.HCM - Định danh vi nấm phân lập. .. gom 34 chủng từ công vi? ?n Tao Đàn, 38 chủng từ công vi? ?n Gia Định 31 chủng từ công vi? ?n Hoàng Văn Thụ 1.2 Định danh vi nấm Bảng 3.1 Ket định danh vi nấm phân lập từ đất công vi? ?n Tp.HCM STT Chi... H34 3.2 BÀN LUẬN Từ 15 mẫu đất thu thập công vi? ?n Tao Đàn, công vi? ?n Gia Định công vi? ?n Hồng Văn Thụ, chúng tơi phân lập 103 chủng vi nấm thuộc 09 chi 3.2.1 Phân lập định danh vi nấm Các nghiên