TÓI ƯU HÓA MÔI TRƯỜNG NUÔI CÁY Trichoderma Hazianum VÀ ỨNG DỤNG CHÉ PHẨM TRONG NÔNG NGHIỆP

TỔNG LIÊN ĐOÀN LAO ĐỘNG VIỆT NAM TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÔN ĐỨC THẮNG KHOA KHOA HỌC ỨNG DỤNG  TỐI ƯU HĨA MƠI TRƯỜNG NI CẤY Trichoderma Hazianum VÀ ỨNG DỤNG CHẾ PHẨM TRONG NÔNG NGHIỆP Giảng viên hướng dẫn Sinh viên thực ThS NGÔ MINH NHÃ PHẠM NHƯ NGỌC Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 01/2009 Lời cảm ơn Với kết đạt hôm nay, tơi xin gừi lịng tri ân sâu sắc đến:  Ban giám hiệu Trường ĐH Tôn Đức Thắng, Ban chủ nhiệm Khoa Khoa học ứng dụng Bộ môn Công nghệ sinh học, tất quý thầy cô truyền đạt kiến thức cho tơi suốt q trình học trường  Ths Ngô Minh Nhã hết lịng hướng dẫn, giúp đỡ tơi suốt thời gian, trình thực luận văn tốt nghiệp  Các bạn bè thân yêu lớp 09SH chia sẻ vui buồn thời gian học hết lịng hỗ trợ, giúp đỡ chúng tơi thời gian qua  Cuối cùng, xin gửi đến gia đình tơi, ba mẹ tơi, người động viên, chia sẽ, chăm sóc ni dạy tơi đến ngày hôm nay, giúp thêm nghị lực hết đoạn đường qua Xin chân thành cám ơn! Sinh viên thực Phạm Như Ngọc i TÓM TẮT Ngày nay, việc sử dụng phân bón vi sinh nơng nghiệp ứng dụng rộng rãi vấn đề nguy hại từ phân hóa học gây nên Vì thế, nghiên cứu tạo chế phẩm sinh học phục vụ cho nông nghiệp tiến hành ngày nhiều Và nói đến việc phịng trừ sâu bệnh hại trồng Trichoderma lồi nấm quan tâm nhiều Trichoderma lồi nấm đối kháng, có khả đối kháng mạnh với nhiều loài vi nấm gây hại trồng Khơng lồi nấm cịn có khả hỗ trợ, cải thiện sinh trưởng Trước thực trạng trên, hướng dẫn Ths Ngô Minh Nhã, sinh viên Phạm Như Ngọc thực đề tài “Tối ưu hóa mơi trường ni cấy Trichoderma Hazianum ứng dụng chế phẩm nông nghiệp” Đề tài thực Phịng Thí Nghiệm Vi Sinh, Trường CĐ Kinh tế - Công nghệ TP HCM từ ngày 4/10/2009 đến ngày 4/01/2010 Mục tiêu đề tài tạo môi trường tối ưu nuôi cấy Trichoderma Hazianum làm rõ khả phòng nấm bệnh rau Trichoderma Hazianum Hai phương pháp để thực đề tài là: - Tối ưu hóa mơi trường bán rắn nuôi cấy Trichoderma Hazianum - Khảo sát tác dụng phòng bệnh rau cải bẹ xanh Trichderma Hazianum Những kết đạt được: - Xác định thành phần môi trường tối ưu nuôi cấy sản xuất chế phẩm Trichoderma Hazianum - Xác định rõ khả phòng bệnh cải bẹ xanh Trichodderma Hazianum ii MỤC LỤC Trang LỜI CẢM ƠN i TÓM TẮT ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT vi DANH MỤC BẢNG vii DANH MỤC HÌNH viii DANH MỤC SƠ ĐỒ ix DANH MỤC BIỂU ĐỒ ix Chương 1: MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích mục tiêu đề tài: 1.3 Ý nghĩa thực tiễn đề tài: Chương 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Đặc điểm sinh học nấm Trichoderma 2.1.1 Vị trí phân loại: 2.1.2 Đặc điểm hình thái 2.1.3 Cấu tạo tế bào, sinh trưởng hình thành bào tử Trichoderma: 2.1.4 Đặc điểm sinh thái, sinh hóa 2.2 Ứng dụng chế phẩm sinh học Trichoderma 2.2.1.Ứng dụng chế phẩm sinh học phục vụ trồng 2.2.2 Ứng dụng chế phẩm sinh học cải tạo đất xử lý phế thải 2.2.3 Nguồn gen để sử dụng chuyển gen 10 2.2.4 Ứng dụng làm chất kiểm soát sinh học 10 2.2.5 Ứng dụng lương thực ngành dệt 11 2.3 Khả kiểm soát sinh học Trichoderma 11 2.3.1 Tương tác với nấm bệnh 11 2.3.2 Tương tác với trồng 15 2.4 Trichoderma Harzianum 20 2.4.1 Phân loại 20 2.4.2 Đặc điểm 20 2.4.3 Các ứng dụng 21 iii 2.5 Nấm Fusarium: 22 2.5.1 Phân loại 22 2.5.2 Đặc điểm 22 2.6 Nấm Sclerotium Rolfsii 24 2.6.1 Phân loại 24 2.6.2 Đặc điểm: 25 2.7 Các nghiên cứu nước nước ứng dụng vi nấm Trichoderma 27 2.7.1 Các nghiên cứu nước: 27 2.7.2 Các nghiên cứu nước: 27 Chương 3: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 29 3.1 Thời gian địa điểm thực hiện: 29 3.2 Vật liệu thí nghiệm: 29 3.2.1 Hóa chất thiết bị sử dụng: 29 3.2.2 Vật liệu nghiên cứu: 29 3.3 Bố trí thí nghiệm: 30 3.4 Phương pháp nghiên cứu: 30 3.4.1 Phương pháp nuôi cấy chủng Trichoderma Harzianum: 30 3.4.2 Quan sát đại thể nấm Trichoderma Harzianum 33 3.4.3 Quan sát vi thể Trichoderma Harzianum 34 3.4.4 Thử nghiệm khả đối kháng Trichoderma Hazianum với nấm bệnh 34 3.4.5 Tối ưu hóa mơi trường ni cấy Trichoderma hazianum 35 3.4.6 Phương pháp xác định số tế bào vi sinh vật: 38 3.4.7 Thử nghiệm sản xuất chế phẩm: 41 3.4.8 Khảo sát khả phòng bệnh trồng chế phẩm Trichoderma Harzianum 41 3.5 Xử lý số liệu kết quả: 43 Chương 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 44 4.1 Quan sát đại thể Trichoderma Hazianum : 44 4.2 Quan sát vi thể T Hazianum: 46 4.3 Thử tính đối kháng T.Hazianum với nấm bệnh: 48 4.4 Tối ưu hóa mơi trường nuôi cấy nấm Trichoderma Hazianum: 49 4.4.1 Khảo sát ảnh hưởng hàm lượng chitin đến tốc độ sinh trưởng Trichoderma Harzianum môi trường nuôi cấy bán rắn 50 iv 4.4.2 Khảo sát ảnh hưởng hàm lượng trấu đến tốc độ sinh trưởng Trichoderma Harzianum môi trường nuôi cấy bán rắn 50 4.4.3 Khảo sát ảnh hưởng hàm lượng cám đến tốc độ sinh trưởng Trichoderma Harzianum môi trường nuôi cấy bán rắn 51 4.4.4 Khảo sát môi trường tối ưu T Hazianum thực nghiệm 52 4.5 Thử nghiệm sản xuất chế phẩm 55 4.6 Khảo sát khả chống bệnh cải bẹ xanh gây loài nấm bệnh S Rolfsii Fusarium 55 4.6.1 Cải trồng chuẩn bị thí nghiệm: 55 4.6.2 Đánh giá hiệu lực phòng bệnh T Hazianum: 57 4.7 Tính giá thành sản phẩm: 64 Chương 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 65 5.1 Kết luận: 65 5.2 Đề nghị: 65 TÀI LIỆU THAM KHẢO 67 PHỤ LỤC v DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT T Hazianum: Trichoderma Hazianum T.Viride: Trichoderma Viride T Reesei: Trichoderma Reesei T Longibrachiatum: Trichoderma Longibrachiatum T Koningii: Trichoderma Koningii T Hamatum: Trichoderma Hamatum S Rolfsii: Sclerotium Rolfsii T Virens: Trichoderma Virens T Polysporum: Trichoderma Polysporum T Pseudokoningii: Trichoderma Pseudokoningi T Citrinoviride: Trichoderma Citrinoviride R Solani: Rhizoctonia Solani F Solani: Fusarium Solani F Oxysporum: Fusarium Oxysporum F Chlamydosporum: Fusarium Chlamydosporum PGA: Potato glucose agar PDA: Potato dextro agar vi DANH MỤC BẢNG Trang Bảng 2.1 Tác dụng hiệu đề kháng cho trồng loài Trichoderma mang lại 18 Bảng 3.1 Thành phần dinh dưỡng cám gạo 32 Bảng 3.2 Bố trí thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng hàm lượng trấu đến tốc độ sinh trưởng Trichoderma Hazianum 36 Bảng 3.3 Bố trí thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng hàm lượng chitin đến tốc độ sinh trưởng Trichoderma Hazianum 37 Bảng 3.4 Bố trí thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng hàm lượng cám đến tốc độ sinh trưởng Trichoderma Hazianum 38 Bảng 4.1 Mức biến thiên hàm lượng thành phần môi trường 53 Bảng 4.2 Kết thí nghiệm theo phương pháp thực nghiệm 53 Bảng 4.3 Chi phí lít mơi trường nhấn giống Trichoderma Hazianum 64 Bảng 4.4 Chi phí kg môi trường lên men bán rắn 64 vii DANH MỤC HÌNH Trang Hình 2.1 Khuẩn ty quan sinh bào tử Trichoderma Hình 2.2 Trichoderma Hazianum T-22 phát triển môi trường PDA (vùng màu xanh chứa bào tử) Hình 2.3 Mơi trường ni cấy Trichoderma hóa vàng Hình 2.4 Trichoderma ký sinh Pythium gây bệnh rễ họ đậu (Trichoderma nhuộm màu vàng, Pythium nhuộm màu lục) 12 Hình 2.5 Hệ sợi nấm Trichoderma ký sinh khuẩn ty nấm bệnh 13 Hình 2.6 Sự gia tăng phát triển hệ rễ với thể cạnh tranh T-22 vùng rễ 16 Hình 2.7 Sự gia tăng sản lượng ớt với hạt giống xử lí với T-22 17 Hình 2.8 Khuẩn ty Trichoderma Hazianum 20 Hình 2.9 A Khuẩn lạc Fusarium; B Sợi nấm Fusarium kính hiển vi; C Hiện tượng thối rễ Fusarium gây 24 Hình 2.10 S rolfsii phát triển môi trường thạch đĩa (A); Triệu chứng mục rửa thân nấm kí sinh (B); Nấm gây bệnh thuốc (C); Thơm (D) 26 Hình 3.1 Phương pháp pha loãng mẫu theo dãy thập phân 39 Hình 3.2: Buồng đếm hồng cầu 39 Hình 4.1 Khuẩn lạc T Hazianum sau ngày nuôi cấy 44 Hình 4.2 Khuẩn lạc T Hazianum sau ngày nuôi cấy 45 Hình 4.3 Khuẩn lạc T Hazianum sau ngày nuôi cấy 45 Hình 4.4 Khuẩn lạc T Hazianum sau ngày nuôi cấy 46 Hình 4.5 Hệ sợi nấm bào tử T Hazianum kính hiển vi 47 Hình 4.6 Sợi nấm có vách ngăn 47 Hình 4.7 Thể bình T Hazianum kính hiển vi 47 Hình 4.8 Mức độ đối kháng T Hazianum Fusarium (+++) 48 Hình 4.9 Mức độ đối kháng T Hazianum S rolfsii (++++) 49 Hình 4.10 Hình bào tử Trichoderma Hazianum vng lớn buồng đếm hồng cầu kính hiển vi 49 Hình 4.11 Cải bẹ xanh sau 15 ngày gieo 56 Hình 4.12 Cải bẹ xanh sau 25 ngày gieo 56 Hình 4.13 Cải bẹ xanh sau 35 ngày gieo 57 Hình 4.14 Triệu chứng bệnh nấm S Rolfsii gây 60 Hình 15 Bệnh Fusarium gây 61 Hình 4.16 So sánh rễ nghiệm thức có nấm bệnh S Rolfsii nghiệm thức có T Hazianum 62 Hình 4.17 So sánh rễ nghiệm thức có nấm bệnh Fusarium nghiệm thức có T Hazianum 62 viii DANH MỤC SƠ ĐỒ Trang Sơ đồ 3.1 Khảo sát khả phòng bệnh trồng chế phẩm Trichoderma Harzianum 42 DANH MỤC BIỂU ĐỒ Trang Biểu đồ 4.1 Ảnh hưởng hàm lượng chitin đến tốc độ sinh trưởng T Hazianum 50 Biểu đồ 4.2 Ảnh hưởng hàm lượng trấu đến tốc độ sinh trưởng T Hazianum 51 Biểu đồ 4.3 Ảnh hưởng hàm lượng cám đến tốc độ sinh trưởng T Hazianum 52 Biểu đồ 4.4 Khảo sát môi trường tối ưu nuôi cấy T Hazianum thực nghiệm 54 Biểu đồ 4.5 Tỷ lệ bệnh nghiệm thức sau thời gian khảo sát 58 Biểu đồ 4.6 Tỷ lệ bệnh nghiệm thức sau thời gian khảo sát 58 Biểu đồ 4.7 Khối lượng rễ nghiệm thức 63 ix Tài liệu nước Ainsworth, G S and Sussman, A S 1968 The fungi, an advance treatise Vol III The fungal population Acad press Inc, New York, USA Arie Altman, 1998 Agricutural biotechnology Marcel Dekker Inc- New YorkBasel HongKong, p.263-275 Bertrand, K.G and Jack, J P 1998 Molecular biotechnology principles and nd application of recombinant DNA edition, ASM Press Washington, D C 10 Esposito, E and Silva, M D 1998 Systematics and enviromental application of the genus Trichoderma, Crical reviews in Microbiology 24 (2): 89-98 11 La Grange et al, 1996 Expression of a Trichoderma reesei β-xylanase gene (XYN2) in S.cerevisiae Applied and enviromental Microbiology, p.1036-1044 12 I Grondona, Hermosa, R., Jejeda, M., Gomis, M D., Mateos, P F., Bridge, P I., Monte, E and Garcia-Acha, I 1997 Physiological and biochemical characterization of Trichoderma harzianum, a biocontrol agent against soilborne fungal plant pathogen 13 Harman, G E and Kubicek, C P (ed) 1998 Trichoderma and Gliocladium Vol I Basic biology, taxonomy and genetics p.6-10, 64-69 14 Harman, G E and Kubicek, C P (ed) 1998 Trichoderma and Gliocladium Vol II Enzymes, biological control and commercial applcations, p.131-142 15 Harman, G E., Howell C R., Viterbo, A., Chet, I., Lorito, M 2004 Trichoderma species-opportunistic, avirulent plant symbionts Nature review 2: 43-56 16 Papavizas, 1985 Trichoderma and Gliocladium: Biology, ecology, and potential for biocontrol Ann Rev Phytopath 23: 23-54 68 17 Sanjoy Silva, Bill B Emore and Houston K Huckabay, 1995 Cellulase activity of Trichoderma reesei (RUT-30) on munciple solid waste Applied Biochemistry and Biotechnology, Vol 51-52, p.145-153 Tài liệu internet : 18 Vai trò nấm đối kháng Trichoderma kiểm soát vi sinh vật http://www.khuyennongvn.gov.vn/e-khcn/vai-tro-nam-111oi-khang-trichodermatrong-kiem-soat-cac-sinh-vat 19 http://www.sciencedirect.com/science?_ob=ArticleURL&_udi=B6TC7-476N9G593&_user=10&_rdoc=1&_fmt=&_orig=search&_sort=d&_docanchor=&view=c&_se archStrId=1122996337&_rerunOrigin=google&_acct=C000050221&_version=1&_url Version=0&_userid=10&md5=238adafda2235ec1cc0ebde342233800 20 Đại cương nấm mốc http://www.vocw.edu.vn/content/m10139/latest/ 21 Vai trò hữu dụng nấm chế biến thực phẩm http://www.vocw.edu.vn/content/m10141/latest/ 22 http://www.doctorfungus.org/thefungi/Trichoderma Species.htm 23 http://www.treemail.nl/eurobio/inform/tricho.htm 24 http://images.google.com.vn/imgres?imgurl=http://extension.missouri.edu/explore/ima ges/ipm1029brownpatch06.gif&imgrefurl=http://extension.missouri.edu/publications/ DisplayPub.aspx%3FP%3DIPM10295&usg= hAqICIpS4AldxGZZC379M7hpGI8=&h=180&w=180&sz=21&hl=vi&star t=10&tbnid=TzAxzPG823hVOM:&tbnh=101&tbnw=101&prev=/images%3Fq%3DR hizoctonia%2BSolani%26gbv%3D2%26hl%3Dvi 69 25 http://www.nysaes.cornell.edu/ent/biocontrol/pathogens/trichoderma.html 26 http://www.sinhhocvietnam.com/forum/showthread.php?t=2826 27 http://www.ent.iastate.edu/images/plantpath/soybean/rootrot/fusarium/3185.6fusarium jpg 28 http://images.google.com.vn/imgres?imgurl=http://koolielu.edu.ee/kajarahu/veeb/mitte mikroobsed_toidumurgistused/images/Fusarium.jpg&imgrefurl=http://koolielu.edu.ee/ kajarahu/veeb/mittemikroobsed_toidumurgistused/%3FM%25FCkotoksikoosid:Fusari um&usg= AdvUMwRPkaErh56GeFdkH1I0Sss=&h=960&w=1280&sz=111&hl=vi &start=1&um=1&tbnid=HhiSqgpFBliBrM:&tbnh=113&tbnw=150&prev=/images%3 Fq%3Dfusarium%26hl%3Dvi%26sa%3DG%26um%3D1 29 http://images.google.com.vn/imgres?imgurl=http://www.doctorfungus.org/Thefungi/i mg/fusarium.gif&imgrefurl=http://www.doctorfungus.org/Thefungi/Fusarium.htm&us g= jAMNAwvAZbNQwOGEHnvgEmjKh8A=&h=293&w=450&sz=30&hl=vi&star t=4&um=1&tbnid=khGov4OFGFqgcM:&tbnh=83&tbnw=127&prev=/images%3Fq% 3Dfusarium%26hl%3Dvi%26sa%3DG%26um%3D1 30 http://www.doctorfungus.org/Thefungi/Fusarium.htm&usg= jAMNAwvAZbNQwO GEHnvgEmjKh8A=&h=293&w=450&sz=30&hl=vi&start=4&um=1&tbnid=khGov4 OFGFqgcM:&tbnh=83&tbnw=127&prev=/images%3Fq%3Dfusarium%26hl%3Dvi% 26sa%3DG%26um%3D1 70 PHỤ LỤC Phụ lục Hình ảnh Hình 1.1 Khuẩn lạc Rhizoctonia Solani Hình 1.2 Khuẩn lạc Fusarium Hình 1.3 Khuẩn lạc Sclerotium Rolfsii Hình 1.4 Khuẩn lạc T Hazianum mơi trường bán rắn sau ngày ni cấy Hình 1.5 Khuẩn lạc T Hazianum môi trường bán rắn sau ngày ni cấy Hình 1.6 Khuẩn lạc T Hazianum môi trường bán rắn sau ngày nuôi cấy Phụ lục Kết khảo sát ảnh hưởng hàm lượng chitin môi trường nuôi cấy Trichoderma Hazianum Hàm lượng chitin (g) Số tb ô lớn 109 * CFU/g 248 1,24 257 1,29 287 1,44 262 1,31 273 1,37 285 1,43 297 1,49 284 1,42 312 1,56 288 1,44 318 1,59 298 1,49 328 1,64 319 1,6 337 1,69 301 1,51 273 1,37 357 1,79 1,26 1,37 1,5 1,39 1,45 109 * CFUTB/g 1,54 1,62 1,6 1,58 Phụ lục Kết khảo sát ảnh hưởng hàm lượng trấu môi trường nuôi cấy Trichoderma Hazianum Hàm lượng trấu (g) số tb ô lớn 109 * CFU/g 522 2,61 109 * CFUTB/g 2,6 516 2,58 518 2,59 547 2,74 489 2,45 495 2,48 317 1,59 10 2,66 20 2,46 30 1,67 352 1,76 175 0,88 172 0,86 40 0,87 Phụ lục Kết khảo sát ảnh hưởng hàm lượng cám môi trường nuôi cấy Trichoderma Hazianum Hàm lượng cám (g) Số tb ô lớn 109 * CFU/g 318 1,59 371 1,86 485 2,43 344 1,72 526 2,63 547 2,74 561 2,81 109 * CFUTB/g 1,723 10 2,073 20 2,683 30 2,853 580 2,9 557 2,79 516 2,58 520 2,6 534 2,67 40 2,683 50 2,635 Phụ lục Số liệu khảo sát tỉ lệ bệnh nghiệm thức Số bị nhiễm bệnh Nghiệm thức NGÀY NGÀY NGÀY NGÀY 12 NGÀY 15 NGÀY NT2 3,5 11 15 17 19,5 NT3 7,5 12 17 20,5 20,5 NT4 0,5 2,5 3 3 NT5 1,5 3 3 NT6 2,5 4,5 4,5 4,5 4,5 4,5 Phụ lục Tỷ lệ bị nhiễm bệnh nghiệm thức Tỷ lệ bị nhiễm bệnh (%) Nghiệm thức NGÀY NGÀY NGÀY NGÀY 12 NGÀY 15 NGÀY NT2 20 30 50 75 85 95 NT3 25 40 55 80 95 100 NT4 10 20 25 25 25 25 NT5 15 25 30 30 30 30 NT6 25 30 30 30 30 30 Phụ lục Khối lượng rễ sau thí nghiệm nghiệm thức Nghiệm thức NT1 NT2 NT3 NT4 NT5 NT6 Khối lượng rễ 7,39 2,09 3,73 5,99 6,59 6,29 Phụ lục Ảnh hưởng hàm lượng trấu đến tốc độ sinh trưởng T Hazianum thể phần mềm thống kê ANOVA Table for CFU by HAM LUONG TRAU Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 7.35177E18 1.47035E18 328.72 0.0000 Within groups 2.68375E16 4.47292E15 Total (Corr.) 7.37861E18 11 Multiple Range Tests for CFU by HAM LUONG TRAU -Method: 95.0 percent LSD HAM LUONG TRAU Count Mean Homogeneous Groups -50 8.05E8 X 40 8.675E8 X 30 1.6725E9 X 20 2.46E9 X 2.595E9 XX 10 2.6625E9 X -Contrast Difference +/- Limits -0 - 10 -6.75E7 1.6365E8 - 20 1.35E8 1.6365E8 - 30 *9.225E8 1.6365E8 - 40 *1.7275E9 1.6365E8 - 50 *1.79E9 1.6365E8 10 - 20 *2.025E8 1.6365E8 10 - 30 *9.9E8 1.6365E8 10 - 40 *1.795E9 1.6365E8 10 - 50 *1.8575E9 1.6365E8 20 - 30 *7.875E8 1.6365E8 20 - 40 *1.5925E9 1.6365E8 20 - 50 *1.655E9 1.6365E8 30 - 40 *8.05E8 1.6365E8 30 - 50 *8.675E8 1.6365E8 40 - 50 6.25E7 1.6365E8 -* denotes a statistically significant difference Phụ lục Ảnh hưởng hàm lượng cám đến tốc độ sinh trưởng T Hazianum thể phần mềm thống kê ANOVA Table for CFU by HAM LUONG CAM Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 1.95129E18 3.90259E17 7.38 0.0152 Within groups 3.17113E17 5.28521E16 Total (Corr.) 2.26841E18 11 Multiple Range Tests for CFU by HAM LUONG CAM -Method: 95.0 percent LSD HAM LUONG CAM Count Mean Homogeneous Groups -0 1.7225E9 X 10 2.0725E9 XX 50 2.635E9 XX 20 2.6825E9 X 40 2.6825E9 X 30 2.8525E9 X -Contrast Difference +/- Limits -0 - 10 -3.5E8 5.62536E8 - 20 *-9.6E8 5.62536E8 - 30 *-1.13E9 5.62536E8 - 40 *-9.6E8 5.62536E8 - 50 *-9.125E8 5.62536E8 10 - 20 *-6.1E8 5.62536E8 10 - 30 *-7.8E8 5.62536E8 10 - 40 *-6.1E8 5.62536E8 10 - 50 -5.625E8 5.62536E8 20 - 30 -1.7E8 5.62536E8 20 - 40 0.0 5.62536E8 20 - 50 4.75E7 5.62536E8 30 - 40 1.7E8 5.62536E8 30 - 50 2.175E8 5.62536E8 40 - 50 4.75E7 5.62536E8 - denotes a statistically significant difference Phụ lục 10 Ảnh hưởng hàm lượng chitin đến tốc độ sinh trưởng T Hazianum thể phần mềm thống kê ANOVA Table for CFU by HAM LUONG CHITIN Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 2.23978E17 2.79972E16 1.93 0.1729 Within groups 1.3035E17 1.44833E16 Total (Corr.) 3.54328E17 17 Multiple Range Tests for CFU by HAM LUONG CHITIN -Method: 95.0 percent LSD Level Count Mean Homogeneous Groups -0 1.2625E9 X 1.3725E9 XX 2 1.395E9 XX 1.4525E9 XX 1.5E9 XX 1.54E9 X 1.575E9 X 1.595E9 X 1.6175E9 X -Contrast Difference +/- Limits -0 - -1.1E8 2.72244E8 - -1.325E8 2.72244E8 - -1.9E8 2.72244E8 - -2.375E8 2.72244E8 - *-2.775E8 2.72244E8 - *-3.55E8 2.72244E8 - *-3.325E8 2.72244E8 - *-3.125E8 2.72244E8 - -2.25E7 2.72244E8 - -8.E7 2.72244E8 - -1.275E8 2.72244E8 - -1.675E8 2.72244E8 - -2.45E8 2.72244E8 - -2.225E8 2.72244E8 - -2.025E8 2.72244E8 - -5.75E7 2.72244E8 - -1.05E8 2.72244E8 - -1.45E8 2.72244E8 - -2.225E8 2.72244E8 - -2.E8 2.72244E8 - -1.8E8 2.72244E8 - -4.75E7 2.72244E8 - -8.75E7 2.72244E8 - -1.65E8 2.72244E8 - -1.425E8 2.72244E8 - -1.225E8 2.72244E8 - -4.E7 2.72244E8 - -1.175E8 2.72244E8 - -9.5E7 2.72244E8 - -7.5E7 2.72244E8 - -7.75E7 2.72244E8 - -5.5E7 2.72244E8 - -3.5E7 2.72244E8 - 2.25E7 2.72244E8 - 4.25E7 2.72244E8 - 2.E7 2.72244E8 -* denotes a statistically significant difference Phụ lục 11 Số liệu tối ưu hóa mơi trường ni cấy T Hazianum thực nghiệm thể phần mềm thống kê Analysis of Variance for CFU - Type III Sums of Squares -Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value -MAIN EFFECTS A:x1 0.00005 0.00005 0.00 0.9798 B:x2 0.00845 0.00845 0.12 0.7442 C:x3 0.5832 0.5832 8.44 0.0439 RESIDUAL 0.2763 0.069075 -TOTAL (CORRECTED) 0.868 -All F-ratios are based on the residual mean square error Analysis of Variance for CFU - Type III Sums of Squares -Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value -MAIN EFFECTS A:x1 0.00005 0.00005 B:x2 0.00845 0.00845 C:x3 0.5832 0.5832 INTERACTIONS AB AC BC ABC 0.0098 0.09245 0.17405 0.0 1 1 0.0098 0.09245 0.17405 0.0 RESIDUAL 0.0 -TOTAL (CORRECTED) 0.868 -All F-ratios are based on the residual mean square error Table of Least Squares Means for CFU with 95.0 Percent Confidence Intervals -Stnd Lower Upper Level Count Mean Error Limit Limit -GRAND MEAN 2.37 x1 10 2.3725 0.0 2.3725 2.3725 15 2.3675 0.0 2.3675 2.3675 x2 25 2.3375 0.0 2.3375 2.3375 35 2.4025 0.0 2.4025 2.4025 x3 2.64 0.0 2.64 2.64 2.1 0.0 2.1 2.1 x1 by x2 10 25 2.375 0.0 2.375 2.375 10 35 2.37 0.0 2.37 2.37 15 25 2.3 0.0 2.3 2.3 15 35 2.435 0.0 2.435 2.435 x1 by x3 10 2.535 0.0 2.535 2.535 10 2.21 0.0 2.21 2.21 15 2.745 0.0 2.745 2.745 15 1.99 0.0 1.99 1.99 x2 by x3 25 2.46 0.0 2.46 2.46 25 2.215 0.0 2.215 2.215 35 2.82 0.0 2.82 2.82 35 1.985 0.0 1.985 1.985 Multiple Range Tests for CFU by x1 -Method: 95.0 percent LSD x1 Count LS Mean Homogeneous Groups -15 2.3675 X 10 2.3725 X -Contrast Difference +/- Limits -10 - 15 *0.005 0.0 -* denotes a statistically significant difference Multiple Range Tests for CFU by x2 -Method: 95.0 percent LSD x2 Count LS Mean Homogeneous Groups -25 2.3375 X 35 2.4025 X -Contrast Difference +/- Limits -25 - 35 -0.065 0.654884 -* denotes a statistically significant difference Multiple Range Tests for CFU by x3 -Method: 95.0 percent LSD x3 Count LS Mean Homogeneous Groups -7 2.1 X 2.64 X -Contrast Difference +/- Limits -5 - *0.54 0.376963 -* denotes a statistically significant difference ... chất: - MgSO4 7H2O - KH2PO4 - Glucose - Agar Thiết bị: - Cân điện tử loại số lẻ - Nồi hấp khử trùng autoclave, hiệu HYRAYAMA - Máy microwave, loại LG microwave OVEN - Tủ sấy - Tủ cấy vi sinh - Tủ... kháng cho trồng loài Trichoderma mang lại [15] T.virens G-6, G- 6-5 G-11 T.harzianum T-39 T.harzianum T-39 T.Asperellum T-203 T.harzianum NF-9 Bông vải Cây đậu Cà chua, hồ tiêu, thuốc lá, rau diếp,... liệu, dụng cụ: - Ống nghiệm - Đĩa petri - Khay nhựa - Que cấy - Đèn cồn - Mơi trường PGA có bổ sung khống: - Môi trường bán rắn 3.4.1.2 Phương pháp thực hiện:  Pha môi trường PGA: [3] - Để chuẩn