Tối Ưu Hóa Môi Trường Nuôi Cấy Trichoderma Hazianum Và Ứng Dụng Chế Phẩm Trong Nông Nghiệp

TỔNG LIÊN ĐOÀN LAO ĐỘNG VIỆT NAM TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÔN ĐỨC THẮNG KHOA KHOA HỌC ỨNG DỤNG  TỐI ƯU HÓA MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY Trichoderma Hazianum VÀ ỨNG DỤNG CHẾ PHẨM TRONG NÔNG NGHIỆP TÓM TẮT Ngày nay, việc sử dụng phân bón vi sinh nông nghiệp ứng dụng rộng rãi vấn đề nguy hại từ phân hóa học gây nên Vì thế, nghiên cứu tạo chế phẩm sinh học phục vụ cho nông nghiệp tiến hành ngày nhiều Và nói đến việc phòng trừ sâu bệnh hại trồng Trichoderma loài nấm quan tâm nhiều Trichoderma loài nấm đối kháng, có khả đối kháng mạnh với nhiều loài vi nấm gây hại trồng Không loài nấm có khả hỗ trợ, cải thiện sinh trưởng Trước thực trạng trên, hướng dẫn Ths Ngô Minh Nhã, sinh viên Phạm Như Ngọc thực đề tài “Tối ưu hóa môi trường nuôi cấy Trichoderma Hazianum ứng dụng chế phẩm nông nghiệp” Đề tài thực Phòng Thí Nghiệm Vi Sinh, Trường CĐ Kinh tế - Công nghệ TP HCM từ ngày 4/10/2009 đến ngày 4/01/2010 Mục tiêu đề tài tạo môi trường tối ưu nuôi cấy Trichoderma Hazianum làm rõ khả phòng nấm bệnh rau Trichoderma Hazianum Hai phương pháp để thực đề tài là: - Tối ưu hóa môi trường bán rắn nuôi cấy Trichoderma Hazianum - Khảo sát tác dụng phòng bệnh rau cải bẹ xanh Trichderma Hazianum Những kết đạt được: - Xác định thành phần môi trường tối ưu nuôi cấy sản xuất chế phẩm Trichoderma Hazianum - Xác định rõ khả phòng bệnh cải bẹ xanh Trichodderma Hazianum ii MỤC LỤC Trang LỜI CẢM ƠN i TÓM TẮT ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT vi DANH MỤC BẢNG vii DANH MỤC HÌNH viii DANH MỤC SƠ ĐỒ ix DANH MỤC BIỂU ĐỒ ix Chương 1: MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích mục tiêu đề tài: 1.3 Ý nghĩa thực tiễn đề tài: Chương 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Đặc điểm sinh học nấm Trichoderma 2.1.1 Vị trí phân loại: 2.1.2 Đặc điểm hình thái 2.1.3 Cấu tạo tế bào, sinh trưởng hình thành bào tử Trichoderma: 2.1.4 Đặc điểm sinh thái, sinh hóa 2.2 Ứng dụng chế phẩm sinh học Trichoderma 2.2.1.Ứng dụng chế phẩm sinh học phục vụ trồng 2.2.2 Ứng dụng chế phẩm sinh học cải tạo đất xử lý phế thải 2.2.3 Nguồn gen để sử dụng chuyển gen 10 2.2.4 Ứng dụng làm chất kiểm soát sinh học 10 2.2.5 Ứng dụng lương thực ngành dệt 11 2.3 Khả kiểm soát sinh học Trichoderma 11 2.3.1 Tương tác với nấm bệnh 11 2.3.2 Tương tác với trồng 15 2.4 Trichoderma Harzianum 20 2.4.1 Phân loại 20 2.4.2 Đặc điểm 20 2.4.3 Các ứng dụng 21 iii 2.5 Nấm Fusarium: 22 2.5.1 Phân loại 22 2.5.2 Đặc điểm 22 2.6 Nấm Sclerotium Rolfsii 24 2.6.1 Phân loại 24 2.6.2 Đặc điểm: 25 2.7 Các nghiên cứu nước nước ứng dụng vi nấm Trichoderma 27 2.7.1 Các nghiên cứu nước: 27 2.7.2 Các nghiên cứu nước: 27 Chương 3: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 29 3.1 Thời gian địa điểm thực hiện: 29 3.2 Vật liệu thí nghiệm: 29 3.2.1 Hóa chất thiết bị sử dụng: 29 3.2.2 Vật liệu nghiên cứu: 29 3.3 Bố trí thí nghiệm: 30 3.4 Phương pháp nghiên cứu: 30 3.4.1 Phương pháp nuôi cấy chủng Trichoderma Harzianum: 30 3.4.2 Quan sát đại thể nấm Trichoderma Harzianum 33 3.4.3 Quan sát vi thể Trichoderma Harzianum 34 3.4.4 Thử nghiệm khả đối kháng Trichoderma Hazianum với nấm bệnh 34 3.4.5 Tối ưu hóa môi trường nuôi cấy Trichoderma hazianum 35 3.4.6 Phương pháp xác định số tế bào vi sinh vật: 38 3.4.7 Thử nghiệm sản xuất chế phẩm: 41 3.4.8 Khảo sát khả phòng bệnh trồng chế phẩm Trichoderma Harzianum 41 3.5 Xử lý số liệu kết quả: 43 Chương 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 44 4.1 Quan sát đại thể Trichoderma Hazianum : 44 4.2 Quan sát vi thể T Hazianum: 46 4.3 Thử tính đối kháng T.Hazianum với nấm bệnh: 48 4.4 Tối ưu hóa môi trường nuôi cấy nấm Trichoderma Hazianum: 49 4.4.1 Khảo sát ảnh hưởng hàm lượng chitin đến tốc độ sinh trưởng Trichoderma Harzianum môi trường nuôi cấy bán rắn 50 iv 4.4.2 Khảo sát ảnh hưởng hàm lượng trấu đến tốc độ sinh trưởng Trichoderma Harzianum môi trường nuôi cấy bán rắn 50 4.4.3 Khảo sát ảnh hưởng hàm lượng cám đến tốc độ sinh trưởng Trichoderma Harzianum môi trường nuôi cấy bán rắn 51 4.4.4 Khảo sát môi trường tối ưu T Hazianum thực nghiệm 52 4.5 Thử nghiệm sản xuất chế phẩm 55 4.6 Khảo sát khả chống bệnh cải bẹ xanh gây loài nấm bệnh S Rolfsii Fusarium 55 4.6.1 Cải trồng chuẩn bị thí nghiệm: 55 4.6.2 Đánh giá hiệu lực phòng bệnh T Hazianum: 57 4.7 Tính giá thành sản phẩm: 64 Chương 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 65 5.1 Kết luận: 65 5.2 Đề nghị: 65 TÀI LIỆU THAM KHẢO 67 PHỤ LỤC v DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT T Hazianum: Trichoderma Hazianum T.Viride: Trichoderma Viride T Reesei: Trichoderma Reesei T Longibrachiatum: Trichoderma Longibrachiatum T Koningii: Trichoderma Koningii T Hamatum: Trichoderma Hamatum S Rolfsii: Sclerotium Rolfsii T Virens: Trichoderma Virens T Polysporum: Trichoderma Polysporum T Pseudokoningii: Trichoderma Pseudokoningi T Citrinoviride: Trichoderma Citrinoviride R Solani: Rhizoctonia Solani F Solani: Fusarium Solani F Oxysporum: Fusarium Oxysporum F Chlamydosporum: Fusarium Chlamydosporum PGA: Potato glucose agar PDA: Potato dextro agar vi DANH MỤC BẢNG Trang Bảng 2.1 Tác dụng hiệu đề kháng cho trồng loài Trichoderma mang lại 18 Bảng 3.1 Thành phần dinh dưỡng cám gạo 32 Bảng 3.2 Bố trí thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng hàm lượng trấu đến tốc độ sinh trưởng Trichoderma Hazianum 36 Bảng 3.3 Bố trí thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng hàm lượng chitin đến tốc độ sinh trưởng Trichoderma Hazianum 37 Bảng 3.4 Bố trí thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng hàm lượng cám đến tốc độ sinh trưởng Trichoderma Hazianum 38 Bảng 4.1 Mức biến thiên hàm lượng thành phần môi trường 53 Bảng 4.2 Kết thí nghiệm theo phương pháp thực nghiệm 53 Bảng 4.3 Chi phí lít môi trường nhấn giống Trichoderma Hazianum 64 Bảng 4.4 Chi phí kg môi trường lên men bán rắn 64 vii DANH MỤC HÌNH Trang Hình 2.1 Khuẩn ty quan sinh bào tử Trichoderma Hình 2.2 Trichoderma Hazianum T-22 phát triển môi trường PDA (vùng màu xanh chứa bào tử) Hình 2.3 Môi trường nuôi cấy Trichoderma hóa vàng Hình 2.4 Trichoderma ký sinh Pythium gây bệnh rễ họ đậu (Trichoderma nhuộm màu vàng, Pythium nhuộm màu lục) 12 Hình 2.5 Hệ sợi nấm Trichoderma ký sinh khuẩn ty nấm bệnh 13 Hình 2.6 Sự gia tăng phát triển hệ rễ với thể cạnh tranh T-22 vùng rễ 16 Hình 2.7 Sự gia tăng sản lượng ớt với hạt giống xử lí với T-22 17 Hình 2.8 Khuẩn ty Trichoderma Hazianum 20 Hình 2.9 A Khuẩn lạc Fusarium; B Sợi nấm Fusarium kính hiển vi; C Hiện tượng thối rễ Fusarium gây 24 Hình 2.10 S rolfsii phát triển môi trường thạch đĩa (A); Triệu chứng mục rửa thân nấm kí sinh (B); Nấm gây bệnh thuốc (C); Thơm (D) 26 Hình 3.1 Phương pháp pha loãng mẫu theo dãy thập phân 39 Hình 3.2: Buồng đếm hồng cầu 39 Hình 4.1 Khuẩn lạc T Hazianum sau ngày nuôi cấy 44 Hình 4.2 Khuẩn lạc T Hazianum sau ngày nuôi cấy 45 Hình 4.3 Khuẩn lạc T Hazianum sau ngày nuôi cấy 45 Hình 4.4 Khuẩn lạc T Hazianum sau ngày nuôi cấy 46 Hình 4.5 Hệ sợi nấm bào tử T Hazianum kính hiển vi 47 Hình 4.6 Sợi nấm có vách ngăn 47 Hình 4.7 Thể bình T Hazianum kính hiển vi 47 Hình 4.8 Mức độ đối kháng T Hazianum Fusarium (+++) 48 Hình 4.9 Mức độ đối kháng T Hazianum S rolfsii (++++) 49 Hình 4.10 Hình bào tử Trichoderma Hazianum ô vuông lớn buồng đếm hồng cầu kính hiển vi 49 Hình 4.11 Cải bẹ xanh sau 15 ngày gieo 56 Hình 4.12 Cải bẹ xanh sau 25 ngày gieo 56 Hình 4.13 Cải bẹ xanh sau 35 ngày gieo 57 Hình 4.14 Triệu chứng bệnh nấm S Rolfsii gây 60 Hình 15 Bệnh Fusarium gây 61 Hình 4.16 So sánh rễ nghiệm thức có nấm bệnh S Rolfsii nghiệm thức có T Hazianum 62 Hình 4.17 So sánh rễ nghiệm thức có nấm bệnh Fusarium nghiệm thức có T Hazianum 62 viii DANH MỤC SƠ ĐỒ Trang Sơ đồ 3.1 Khảo sát khả phòng bệnh trồng chế phẩm Trichoderma Harzianum 42 DANH MỤC BIỂU ĐỒ Trang Biểu đồ 4.1 Ảnh hưởng hàm lượng chitin đến tốc độ sinh trưởng T Hazianum 50 Biểu đồ 4.2 Ảnh hưởng hàm lượng trấu đến tốc độ sinh trưởng T Hazianum 51 Biểu đồ 4.3 Ảnh hưởng hàm lượng cám đến tốc độ sinh trưởng T Hazianum 52 Biểu đồ 4.4 Khảo sát môi trường tối ưu nuôi cấy T Hazianum thực nghiệm 54 Biểu đồ 4.5 Tỷ lệ bệnh nghiệm thức sau thời gian khảo sát 58 Biểu đồ 4.6 Tỷ lệ bệnh nghiệm thức sau thời gian khảo sát 58 Biểu đồ 4.7 Khối lượng rễ nghiệm thức 63 ix Chương MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Ngộ độc thực phẩm vấn đề cấp thiết quan tâm Trong việc ngộ độc từ rau xanh chiếm tỷ lệ lớn Nguồn gốc vụ ngộ độc việc dùng nhiều hợp chất hóa học để bón tưới cho với mục đích tăng suất phòng trừ vi nấm hay sâu bệnh hại Những hóa chất vốn độc hại nguy hiểm, chúng làm ô nhiễm môi trường, gây ung thư nhiều bệnh khác cho người Trước trạng này, việc nghiên cứu chế phẩm sinh học phòng trừ sâu bệnh điều cần thiết cấp bách Ngày việc sử dụng phương pháp sinh học phòng trừ sâu bệnh vi nấm nhiều nhà khoa học quan tâm nghiên cứu Các tác nhân đáng ý số loại nấm kí sinh có khả đối kháng với số vi nấm gây hại cho trồng, đối kháng với nấm bệnh không gây ảnh hưởng tới trồng Phương pháp vừa giúp tiêu diệt hữu hiệu vi nấm gây bệnh, vừa hiệu vấn đề bảo vệ môi trường Một số loài nấm kháng vi nấm gây bệnh ý Trichoderma Nó có khả đối kháng mạnh với loại nấm bệnh như: Rhizoctonia, Sclerotium, Fusarium gây bệnh lúa, bắp, tiêu Trichoderma vi nấm hoại sinh có khả sản sinh loại enzym ngoại bào hiệu Các chế phẩm enzym từ loài nấm ( enzym chitinase, enzym beta - glucannase, enzym protease) sử dụng trực tiếp phối hợp với thuốc diệt nấm để bảo vệ trái tránh bị thối rửa cải thiện hiệu sử dụng thuốc diệt nấm Chính thế, nhằm nghiên cứu khả ứng dụng chế phẩm Trichoderma nông nghiệp nên thực đề tài “Tối ưu hóa môi trường nuôi cấy Trichoderma Harzianum ứng dụng chế phẩm nông nghiệp” 17 Sanjoy Silva, Bill B Emore and Houston K Huckabay, 1995 Cellulase activity of Trichoderma reesei (RUT-30) on munciple solid waste Applied Biochemistry and Biotechnology, Vol 51-52, p.145-153 Tài liệu internet : 18 Vai trò nấm đối kháng Trichoderma kiểm soát vi sinh vật http://www.khuyennongvn.gov.vn/e-khcn/vai-tro-nam-111oi-khang-trichodermatrong-kiem-soat-cac-sinh-vat 19 http://www.sciencedirect.com/science?_ob=ArticleURL&_udi=B6TC7-476N9G593&_user=10&_rdoc=1&_fmt=&_orig=search&_sort=d&_docanchor=&view=c&_se archStrId=1122996337&_rerunOrigin=google&_acct=C000050221&_version=1&_url Version=0&_userid=10&md5=238adafda2235ec1cc0ebde342233800 20 Đại cương nấm mốc http://www.vocw.edu.vn/content/m10139/latest/ 21 Vai trò hữu dụng nấm chế biến thực phẩm http://www.vocw.edu.vn/content/m10141/latest/ 22 http://www.doctorfungus.org/thefungi/Trichoderma Species.htm 23 http://www.treemail.nl/eurobio/inform/tricho.htm 24 http://images.google.com.vn/imgres?imgurl=http://extension.missouri.edu/explore/ima ges/ipm1029brownpatch06.gif&imgrefurl=http://extension.missouri.edu/publications/ DisplayPub.aspx%3FP%3DIPM10295&usg= hAqICIpS4AldxGZZC379M7hpGI8=&h=180&w=180&sz=21&hl=vi&star t=10&tbnid=TzAxzPG823hVOM:&tbnh=101&tbnw=101&prev=/images%3Fq%3DR hizoctonia%2BSolani%26gbv%3D2%26hl%3Dvi 69 25 http://www.nysaes.cornell.edu/ent/biocontrol/pathogens/trichoderma.html 26 http://www.sinhhocvietnam.com/forum/showthread.php?t=2826 27 http://www.ent.iastate.edu/images/plantpath/soybean/rootrot/fusarium/3185.6fusarium jpg 28 http://images.google.com.vn/imgres?imgurl=http://koolielu.edu.ee/kajarahu/veeb/mitte mikroobsed_toidumurgistused/images/Fusarium.jpg&imgrefurl=http://koolielu.edu.ee/ kajarahu/veeb/mittemikroobsed_toidumurgistused/%3FM%25FCkotoksikoosid:Fusari um&usg= AdvUMwRPkaErh56GeFdkH1I0Sss=&h=960&w=1280&sz=111&hl=vi &start=1&um=1&tbnid=HhiSqgpFBliBrM:&tbnh=113&tbnw=150&prev=/images%3 Fq%3Dfusarium%26hl%3Dvi%26sa%3DG%26um%3D1 29 http://images.google.com.vn/imgres?imgurl=http://www.doctorfungus.org/Thefungi/i mg/fusarium.gif&imgrefurl=http://www.doctorfungus.org/Thefungi/Fusarium.htm&us g= jAMNAwvAZbNQwOGEHnvgEmjKh8A=&h=293&w=450&sz=30&hl=vi&star t=4&um=1&tbnid=khGov4OFGFqgcM:&tbnh=83&tbnw=127&prev=/images%3Fq% 3Dfusarium%26hl%3Dvi%26sa%3DG%26um%3D1 30 http://www.doctorfungus.org/Thefungi/Fusarium.htm&usg= jAMNAwvAZbNQwO GEHnvgEmjKh8A=&h=293&w=450&sz=30&hl=vi&start=4&um=1&tbnid=khGov4 OFGFqgcM:&tbnh=83&tbnw=127&prev=/images%3Fq%3Dfusarium%26hl%3Dvi% 26sa%3DG%26um%3D1 70 PHỤ LỤC Phụ lục Hình ảnh Hình 1.1 Khuẩn lạc Rhizoctonia Solani Hình 1.2 Khuẩn lạc Fusarium Hình 1.3 Khuẩn lạc Sclerotium Rolfsii Hình 1.4 Khuẩn lạc T Hazianum môi trường bán rắn sau ngày nuôi cấy Hình 1.5 Khuẩn lạc T Hazianum môi trường bán rắn sau ngày nuôi cấy Hình 1.6 Khuẩn lạc T Hazianum môi trường bán rắn sau ngày nuôi cấy Phụ lục Kết khảo sát ảnh hưởng hàm lượng chitin môi trường nuôi cấy Trichoderma Hazianum Hàm lượng chitin (g) Số tb ô lớn 109 * CFU/g 248 1,24 257 1,29 287 1,44 262 1,31 273 1,37 285 1,43 297 1,49 284 1,42 312 1,56 288 1,44 318 1,59 298 1,49 328 1,64 319 1,6 337 1,69 301 1,51 273 1,37 357 1,79 1,26 1,37 1,5 1,39 1,45 109 * CFUTB/g 1,54 1,62 1,6 1,58 Phụ lục Kết khảo sát ảnh hưởng hàm lượng trấu môi trường nuôi cấy Trichoderma Hazianum Hàm lượng trấu (g) số tb ô lớn 109 * CFU/g 522 2,61 109 * CFUTB/g 2,6 516 2,58 518 2,59 547 2,74 489 2,45 495 2,48 317 1,59 10 2,66 20 2,46 30 1,67 352 1,76 175 0,88 172 0,86 40 0,87 Phụ lục Kết khảo sát ảnh hưởng hàm lượng cám môi trường nuôi cấy Trichoderma Hazianum Hàm lượng cám (g) Số tb ô lớn 109 * CFU/g 318 1,59 371 1,86 485 2,43 344 1,72 526 2,63 547 2,74 561 2,81 109 * CFUTB/g 1,723 10 2,073 20 2,683 30 2,853 580 2,9 557 2,79 516 2,58 520 2,6 534 2,67 40 2,683 50 2,635 Phụ lục Số liệu khảo sát tỉ lệ bệnh nghiệm thức Số bị nhiễm bệnh Nghiệm thức NGÀY NGÀY NGÀY NGÀY 12 NGÀY 15 NGÀY NT2 3,5 11 15 17 19,5 NT3 7,5 12 17 20,5 20,5 NT4 0,5 2,5 3 3 NT5 1,5 3 3 NT6 2,5 4,5 4,5 4,5 4,5 4,5 Phụ lục Tỷ lệ bị nhiễm bệnh nghiệm thức Tỷ lệ bị nhiễm bệnh (%) Nghiệm thức NGÀY NGÀY NGÀY NGÀY 12 NGÀY 15 NGÀY NT2 20 30 50 75 85 95 NT3 25 40 55 80 95 100 NT4 10 20 25 25 25 25 NT5 15 25 30 30 30 30 NT6 25 30 30 30 30 30 Phụ lục Khối lượng rễ sau thí nghiệm nghiệm thức Nghiệm thức NT1 NT2 NT3 NT4 NT5 NT6 Khối lượng rễ 7,39 2,09 3,73 5,99 6,59 6,29 Phụ lục Ảnh hưởng hàm lượng trấu đến tốc độ sinh trưởng T Hazianum thể phần mềm thống kê ANOVA Table for CFU by HAM LUONG TRAU Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 7.35177E18 1.47035E18 328.72 0.0000 Within groups 2.68375E16 4.47292E15 Total (Corr.) 7.37861E18 11 Multiple Range Tests for CFU by HAM LUONG TRAU -Method: 95.0 percent LSD HAM LUONG TRAU Count Mean Homogeneous Groups -50 8.05E8 X 40 8.675E8 X 30 1.6725E9 X 20 2.46E9 X 2.595E9 XX 10 2.6625E9 X -Contrast Difference +/- Limits -0 - 10 -6.75E7 1.6365E8 - 20 1.35E8 1.6365E8 - 30 *9.225E8 1.6365E8 - 40 *1.7275E9 1.6365E8 - 50 *1.79E9 1.6365E8 10 - 20 *2.025E8 1.6365E8 10 - 30 *9.9E8 1.6365E8 10 - 40 *1.795E9 1.6365E8 10 - 50 *1.8575E9 1.6365E8 20 - 30 *7.875E8 1.6365E8 20 - 40 *1.5925E9 1.6365E8 20 - 50 *1.655E9 1.6365E8 30 - 40 *8.05E8 1.6365E8 30 - 50 *8.675E8 1.6365E8 40 - 50 6.25E7 1.6365E8 -* denotes a statistically significant difference Phụ lục Ảnh hưởng hàm lượng cám đến tốc độ sinh trưởng T Hazianum thể phần mềm thống kê ANOVA Table for CFU by HAM LUONG CAM Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 1.95129E18 3.90259E17 7.38 0.0152 Within groups 3.17113E17 5.28521E16 Total (Corr.) 2.26841E18 11 Multiple Range Tests for CFU by HAM LUONG CAM -Method: 95.0 percent LSD HAM LUONG CAM Count Mean Homogeneous Groups -0 1.7225E9 X 10 2.0725E9 XX 50 2.635E9 XX 20 2.6825E9 X 40 2.6825E9 X 30 2.8525E9 X -Contrast Difference +/- Limits -0 - 10 -3.5E8 5.62536E8 - 20 *-9.6E8 5.62536E8 - 30 *-1.13E9 5.62536E8 - 40 *-9.6E8 5.62536E8 - 50 *-9.125E8 5.62536E8 10 - 20 *-6.1E8 5.62536E8 10 - 30 *-7.8E8 5.62536E8 10 - 40 *-6.1E8 5.62536E8 10 - 50 -5.625E8 5.62536E8 20 - 30 -1.7E8 5.62536E8 20 - 40 0.0 5.62536E8 20 - 50 4.75E7 5.62536E8 30 - 40 1.7E8 5.62536E8 30 - 50 2.175E8 5.62536E8 40 - 50 4.75E7 5.62536E8 - denotes a statistically significant difference Phụ lục 10 Ảnh hưởng hàm lượng chitin đến tốc độ sinh trưởng T Hazianum thể phần mềm thống kê ANOVA Table for CFU by HAM LUONG CHITIN Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 2.23978E17 2.79972E16 1.93 0.1729 Within groups 1.3035E17 1.44833E16 Total (Corr.) 3.54328E17 17 Multiple Range Tests for CFU by HAM LUONG CHITIN -Method: 95.0 percent LSD Level Count Mean Homogeneous Groups -0 1.2625E9 X 1.3725E9 XX 2 1.395E9 XX 1.4525E9 XX 1.5E9 XX 1.54E9 X 1.575E9 X 1.595E9 X 1.6175E9 X -Contrast Difference +/- Limits -0 - -1.1E8 2.72244E8 - -1.325E8 2.72244E8 - -1.9E8 2.72244E8 - -2.375E8 2.72244E8 - *-2.775E8 2.72244E8 - *-3.55E8 2.72244E8 - *-3.325E8 2.72244E8 - *-3.125E8 2.72244E8 - -2.25E7 2.72244E8 - -8.E7 2.72244E8 - -1.275E8 2.72244E8 - -1.675E8 2.72244E8 - -2.45E8 2.72244E8 - -2.225E8 2.72244E8 - -2.025E8 2.72244E8 - -5.75E7 2.72244E8 - -1.05E8 2.72244E8 - -1.45E8 2.72244E8 - -2.225E8 2.72244E8 - -2.E8 2.72244E8 - -1.8E8 2.72244E8 - -4.75E7 2.72244E8 - -8.75E7 2.72244E8 - -1.65E8 2.72244E8 - -1.425E8 2.72244E8 - -1.225E8 2.72244E8 - -4.E7 2.72244E8 - -1.175E8 2.72244E8 - -9.5E7 2.72244E8 - -7.5E7 2.72244E8 - -7.75E7 2.72244E8 - -5.5E7 2.72244E8 - -3.5E7 2.72244E8 - 2.25E7 2.72244E8 - 4.25E7 2.72244E8 - 2.E7 2.72244E8 -* denotes a statistically significant difference Phụ lục 11 Số liệu tối ưu hóa môi trường nuôi cấy T Hazianum thực nghiệm thể phần mềm thống kê Analysis of Variance for CFU - Type III Sums of Squares -Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value -MAIN EFFECTS A:x1 0.00005 0.00005 0.00 0.9798 B:x2 0.00845 0.00845 0.12 0.7442 C:x3 0.5832 0.5832 8.44 0.0439 RESIDUAL 0.2763 0.069075 -TOTAL (CORRECTED) 0.868 -All F-ratios are based on the residual mean square error Analysis of Variance for CFU - Type III Sums of Squares -Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value -MAIN EFFECTS A:x1 0.00005 0.00005 B:x2 0.00845 0.00845 C:x3 0.5832 0.5832 INTERACTIONS AB AC BC ABC 0.0098 0.09245 0.17405 0.0 1 1 0.0098 0.09245 0.17405 0.0 RESIDUAL 0.0 -TOTAL (CORRECTED) 0.868 -All F-ratios are based on the residual mean square error Table of Least Squares Means for CFU with 95.0 Percent Confidence Intervals -Stnd Lower Upper Level Count Mean Error Limit Limit -GRAND MEAN 2.37 x1 10 2.3725 0.0 2.3725 2.3725 15 2.3675 0.0 2.3675 2.3675 x2 25 2.3375 0.0 2.3375 2.3375 35 2.4025 0.0 2.4025 2.4025 x3 2.64 0.0 2.64 2.64 2.1 0.0 2.1 2.1 x1 by x2 10 25 2.375 0.0 2.375 2.375 10 35 2.37 0.0 2.37 2.37 15 25 2.3 0.0 2.3 2.3 15 35 2.435 0.0 2.435 2.435 x1 by x3 10 2.535 0.0 2.535 2.535 10 2.21 0.0 2.21 2.21 15 2.745 0.0 2.745 2.745 15 1.99 0.0 1.99 1.99 x2 by x3 25 2.46 0.0 2.46 2.46 25 2.215 0.0 2.215 2.215 35 2.82 0.0 2.82 2.82 35 1.985 0.0 1.985 1.985 Multiple Range Tests for CFU by x1 -Method: 95.0 percent LSD x1 Count LS Mean Homogeneous Groups -15 2.3675 X 10 2.3725 X -Contrast Difference +/- Limits -10 - 15 *0.005 0.0 -* denotes a statistically significant difference Multiple Range Tests for CFU by x2 -Method: 95.0 percent LSD x2 Count LS Mean Homogeneous Groups -25 2.3375 X 35 2.4025 X -Contrast Difference +/- Limits -25 - 35 -0.065 0.654884 -* denotes a statistically significant difference Multiple Range Tests for CFU by x3 -Method: 95.0 percent LSD x3 Count LS Mean Homogeneous Groups -7 2.1 X 2.64 X -Contrast Difference +/- Limits -5 - *0.54 0.376963 -* denotes a statistically significant difference [...]...1.2 Mục đích và mục tiêu của đề tài: 1.2.1 Mục đích: + Tối ưu hóa môi trường nuôi cấy Trichoderma harzianum + Khảo sát khả năng phòng nấm gây bệnh của chế phẩm Trichoderma Harzianum trên rau cải bẹ xanh 1.2.2 Mục tiêu: + Xác định thành phần môi trường tối ưu nuôi cấy chủng Trichoderma Harzianum + Xác định khả năng phòng bệnh của chế phẩm Trichoderma Harzianum trên cây rau cải... loài Trichoderma Do đó trong môi trường nuôi trồng không được có mặt của muối này Nồng độ CO2 trong môi trường nuôi trồng cũng ảnh hưởng đến sự sinh trưởng của nấm đối kháng trong đất Tuy nhiên ảnh hưởng của CO2 đến khả năng sinh trưởng và sản xuất của Trichoderma phụ thuộc vào nồng độ pH của môi trường đất Khi tăng nồng độ CO2 từ 2 - 10% thì tốc độ mọc của Trichoderma giảm trong môi trường acid và tăng... chế phẩm Trichoderma cho cây sầu riêng”, Trichoderma cho cây rau xanh”, và “BIO – TRI” với bản quyền thuộc trường Đại học Nông Lâm TP Hồ Chí Minh, góp phần tạo sản phẩm nông nghiệp an toàn trong sử dụng Cùng với chức năng nghiên cứu, chuyển giao công nghệ và sản xuất các chế phẩm sinh học phục vụ nông nghiệp, năm 2007, Trung tâm Công nghệ sinh học TP.HCM đã nghiên cứu và sản xuất thành công chế phẩm. .. dàng Sử dụng chế phẩm kết hợp với phân hữu cơ có tác dụng cải tạo làm cho đất xốp hơn và làm tăng hàm lượng chất mùn và mật độ côn trùng có ích, giữ được độ phì của đất Tóm lại tiềm năng sử dụng chế phẩm sinh học trong canh tác cây trồng rất lớn, là một hướng đi đúng đắn, hướng tới một nền nông nghiệp hữu cơ sinh thái bền vững và thân thiện với môi trường Tuy nhiên, trên thực tế việc sử dụng chế phẩm. .. còn rất hạn chế, đặc biệt là nhóm chế phẩm sinh học phòng trừ sâu bệnh hại cây trồng Vì vậy nhà nước và ngành nông nghiệp phải có chính sách khuyến khích hỗ trợ các doanh nghiệp đầu tư vào sản xuất, kinh doanh trong lĩnh vực này Ngoài ra, cần có sự đầu tư chuyển giao kỹ thuật, tuyên truyền, hướng dẫn để người nông dân ủng hộ và ứng dụng rộng rãi các chế phẩm sinh học trong sản xuất nông nghiệp Như vậy... Nai) đã được nông dân các vùng trồng cây ăn trái, cây tiêu, cây điều và cây rau ứng dụng hiệu quả 2.2.2 Ứng dụng chế phẩm sinh học trong cải tạo đất và xử lý phế thải: [6] Trong các chế phẩm cải tạo đất, nhóm vi sinh vật cũng được ứng dụng cải tạo đất bị ô nhiễm do kim loại nặng và các thuốc hóa học bảo vệ thực vật hữu cơ Các vi sinh vật này sống ở vùng rễ cây có sinh sản ra acid hữu cơ và tạo phức... nấm hiện diện trong các loại đất rừng và 1.5% số lượng nấm trong đất đồng cỏ Tuner và cộng sự (1997) chỉ ra rằng T Longibachiatum và T citrinoviride có nhiều sự trùng nhau về khu vực phân bố địa lý Sự phân bố rộng khắp này có lẽ là do sự phát tán hiệu quả (nhờ gió và côn trùng) hoặc biểu hiện một quá trình tiến hóa sớm 2.2 Ứng dụng của chế phẩm sinh học Trichoderma 2.2.1 .Ứng dụng chế phẩm sinh học... nghiệp Như vậy mới giúp cho nông dân có 10 thể nâng cao chất lượng, giảm giá thành sản phẩm, tăng thu nhập cho nông dân trong nền kinh tế hội nhập và cải thiện chất lượng môi trường 2.2.5 Ứng dụng trong lương thực và ngành dệt: [7], [23] Trichoderma là những nhà máy sản xuất nhiều enzyme ngoại bào rất có hiệu quả Chúng được thương mại hóa trong việc sản xuất các cellulase và các enzyme khác phân hủy... trường acid và tăng trong môi trường kiềm, và khi độ pH đạt đến 10% thì nồng độ CO2 không ảnh hưởng đến tốc độ sinh trưởng của Trichoderma Như vậy CO2 có ảnh hưởng đến sự sinh trưởng của Trichoderma tại độ pH có giá trị cao Tuy nhiên ở nồng độ cao, CO2 sẽ ức chế mạnh sự phát triển của Trichoderma trong môi trường kiềm Điều này có thể giải thích vì sao Trichoderma chỉ phát triển trong môi trường đất phèn,... bậc của nấm Trichoderma là bào tử có màu xanh đặc trưng, một số ít có màu trắng (như T Virens), màu vàng hay xanh xám Trên môi trường PGA, khuẩn lạc ban đầu có màu trắng, khi sinh bào tử thì chuyển sang xanh đậm, xanh vàng hoặc lục trắng Và một số loài còn có khả năng tiết ra một số chất làm môi trường hóa vàng Hình 2.1 Khuẩn ty và cơ quan sinh bào tử của Trichoderma Hình 2.2 Trichoderma Hazianum T-22 ... thế, nhằm nghiên cứu khả ứng dụng chế phẩm Trichoderma nơng nghiệp nên chúng tơi thực đề tài Tối ưu hóa mơi trường ni cấy Trichoderma Harzianum ứng dụng chế phẩm nơng nghiệp 1.2 Mục đích mục... tạo mơi trường tối ưu ni cấy Trichoderma Hazianum làm rõ khả phòng nấm bệnh rau Trichoderma Hazianum Hai phương pháp để thực đề tài là: - Tối ưu hóa mơi trường bán rắn ni cấy Trichoderma Hazianum. .. 2.1.4 Đặc điểm sinh thái, sinh hóa 2.2 Ứng dụng chế phẩm sinh học Trichoderma 2.2.1 .Ứng dụng chế phẩm sinh học phục vụ trồng 2.2.2 Ứng dụng chế phẩm sinh học cải tạo đất xử