BỘ CÔNG THƯƠNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM TP HCM KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM ooo000ooo ĐỀ TÀI CLOSTRIDIUM PERFRINGENS TP Hồ Chí Minh, 2021 1 MỤC LỤC 1 Tổng quan về clostridium perfringens 2 2 T.
Tổng quan về clostridium perfringens
Clostridium perfringens, trước đây được gọi là C Welchi để vinh danh William Henry Welch, người phát hiện ra vi khuẩn này vào năm 1891, là một vi khuẩn Gram dương, hình que, phát triển trong điều kiện kị khí Vi khuẩn này sinh nội bào tử và thuộc chi Clostridium, ưa môi trường có độ axit và pH lý tưởng từ 5,5-8 Chúng thực hiện trao đổi chất thông qua quá trình lên men, có khả năng lên men glucose, lactose và sucrose Clostridium perfringens thường được tìm thấy trong ruột của người và động vật, gây ra thiệt hại nghiêm trọng cho mô mà chúng xâm nhập, với khả năng gây tử vong cao và không để lại cơ hội phục hồi cho các mô bị lây nhiễm.
C perfringens có khả năng tồn tại ở nhiệt độ cao và phát triển mạnh mẽ trong quá trình làm lạnh cũng như khi thực phẩm được giữ ở nhiệt độ từ 54°F đến 140°F (12°C đến 60°C) Đặc biệt, vi khuẩn này phát triển rất nhanh trong khoảng nhiệt độ từ 109°F đến 117°F (43°C đến 47°C).
Vi khuẩn C.perfringens có khả năng di động đặc biệt mặc dù không có đuôi, nhờ vào việc toàn bộ cơ thể được bao phủ bởi các sợi tơ Các biến thể siêu di động như SM101 thường xuất hiện ở các rìa khuẩn lạc trên đĩa thạch Video kính hiển vi ghi lại sự chuyển động trượt của chúng cho thấy cấu trúc hình sợi dài, mỏng, cho phép chúng di chuyển nhanh chóng tương đương với các vi khuẩn có đuôi.
Clostridium perfringens có khả năng gây ra một số loại độc tố như:
-Enterotoxin: độc tố chính gây ra các trường hợp ngộ độc thực phẩm.
Alpha toxin thường được liên kết với bệnh hoại thư khí ở người, đồng thời cũng gây ra bệnh viêm ruột hoại tử ở một số động vật, bao gồm gà, gia súc và ngựa.
Toxin Beta được nghiên cứu cho thấy có khả năng hoạt động như một chất độc thần kinh, gây ra các cơn co thắt động mạch Loại độc tố này cũng liên quan đến một số bệnh lý đường tiêu hóa ở một số loài động vật có vú.
Toxin Epsilon là một chất độc nguy hiểm do vi khuẩn thuộc chi này sản xuất, có khả năng gây ra phù nề da Nghiên cứu cho thấy chất độc này có thể vượt qua hàng rào máu não, cho phép nó xâm nhập trực tiếp vào não và tích lũy tại đây.
Độc tố Iota là một loại độc tố gây viêm da và tổn thương hệ tiêu hóa, tương tự như độc tố enterotoxic, nó cũng có khả năng gây độc tế bào.
C perfringens là một nguyên nhân phổ biến gây ngộ độc thực phẩm ở Anh, thường xảy ra do thực phẩm bị nhiễm vi khuẩn hoặc chế biến không đúng cách Sự phát triển nhanh chóng của C perfringens trong thực phẩm dẫn đến việc sản xuất độc tố trong ruột, gây ra các triệu chứng ngộ độc.
C perfringens không chỉ gây ra ngộ độc thực phẩm mà còn là nguyên nhân của nhiều bệnh lý khác, bao gồm nhiễm trùng da và mô sâu Hiện tượng này được biết đến với tên gọi "Bệnh xơ hóa cơ do clostridial" hoặc "hoại thư sinh khí", do các độc tố của vi khuẩn này gây ra Các vết thương sâu có chứa vật lạ và bị nhiễm khuẩn tạo điều kiện thuận lợi cho sự phát triển của bệnh hoại thư nguy hiểm này.
Các loại thực phẩm thường chứa vi khuẩn Clostridium perfringens
Thịt bò, thịt gia cầm, nước thịt, thực phẩm khô hoặc các loại thực phẩm được chế biến sẵn là nguồn cơn lây nhiễm C perfringens phổ biến.
C perfringens có thể phát triển mạnh mẽ khi thực phẩm được chế biến với số lượng lớn và giữ ấm trong thời gian dài trước khi sử dụng Những nơi như bệnh viện, nhà ăn trường học, nhà tù, viện dưỡng lão, và các sự kiện có phục vụ ăn uống thường là những khu vực dễ xảy ra bùng phát dịch bệnh.
Mọi người đều có nguy cơ bị ngộ độc thực phẩm từ C perfringens.
Trẻ nhỏ và người cao tuổi là hai nhóm đối tượng có nguy cơ nhiễm C perfringens cao nhất, với khả năng gặp phải các triệu chứng nghiêm trọng kéo dài từ 1 đến 2 tuần.
-Các dấu hiệu và triệu chứng khi bị nhiễm vi khuẩn C perfringens:
Khi nạn nhân tiêu thụ thực phẩm nhiễm C perfringens với số lượng lớn, triệu chứng chính là tiêu chảy Bên cạnh đó, người bệnh có thể gặp phải các triệu chứng khác như buồn nôn, nôn mửa, đau bụng và sốt.
Các triệu chứng thường khởi phát một cách đột ngột và xảy ra trong khoảng từ 8-12 giờ; vài trường hợp có thể mất đến 24 giờ kể từ khi ăn.
24 giờ là thời gian tối đa các triệu chứng xuất hiện.
Tiêu chảy là triệu chứng khởi phát đầu tiên của nhiễm trùng này, không kèm theo viêm, và thường đi kèm với cơn đau nhói ở vùng thượng vị Trong một số ít trường hợp, người bệnh có thể gặp các triệu chứng bổ sung như sốt, buồn nôn và nôn mửa.
+Bệnh xơ hóa cơ do clostridial (hoại thư sinh khí):
Các triệu chứng khởi phát một cách đột ngột, đặc biệt cảm thấy đau dữ dội tại vết thương
Màu da trên khu vực bị nhiễm thay đổi (ví dụ: màu thay đổi từ trắng sang đồng, sau đó là tím hoặc đỏ)
Nạn nhân có cảm giác tồn tại khí dưới da
Tầm quan trọng của việc nghiên cứu đối tượng Clostridium perfringens
Tỷ lệ mắc bệnh viêm ruột hoại tử do vi khuẩn C perfringens, thường xuất hiện ở thịt cừu, gà và các loài gia cầm trên toàn cầu, đang gia tăng C perfringens được chia thành 5 loại (A-E) và gây ra nhiều loại bệnh khác nhau; một số chủng thậm chí có khả năng gây nhiễm trùng cho cả người và động vật.
Loại Bệnh Đối tượng gây bệnh
- Viêm ruột nhiễm độc máu
- Viêm dạ dày xuất huyết
- Viêm ruột độc máu - Cừu non
- Viêm ruột độc máu - Người
D - Viêm ruột nhiễm độc máu - Cừu, dê, trâu bò
- Viêm ruột nhiễm độc máu - Thỏ
- Bê con và cừu con
Tỷ lệ nhiễm độc tố ruột ở gia súc nhai lại nhỏ ở các nước khác nhau trên thế giới
Việc nhận diện chính xác các biến thể của C perfringens là vấn đề then chốt trong các cuộc điều tra dịch tễ học Đặc biệt, các loài nhai lại, nhất là các giống bản địa, có vai trò quan trọng trong đời sống kinh tế - xã hội của một bộ phận lớn dân cư vùng nhiệt đới.
Số vụ bùng phát Clostridium perfringens từ 1998 đến 2010 tại Hoa Kỳ từ 1998 đến 2010
Trung bình, Clostridium perfringens chiếm 5% tổng số đợt bùng phát bệnh do thực phẩm hàng năm, đứng thứ hai sau Salmonella với tỷ lệ bộc phát lên đến 70% Điều này nhấn mạnh tầm quan trọng của việc cải thiện quản lý và di truyền trong sản xuất thực phẩm Trong những năm gần đây, ngành chăn nuôi đà điểu đã có những bước phát triển vượt bậc, góp phần vào sự ổn định kinh tế toàn cầu Clostridium perfringens đóng vai trò quan trọng trong khả năng gây bệnh ở cừu và gà thịt, với các loại độc tố liên quan đến bệnh dạ dày và đường ruột ở động vật.
Sau khi nhận thức được khả năng gây bệnh của C perfringens trong thực phẩm chế biến, các nhà nghiên cứu đã phát triển các biện pháp kiểm soát vệ sinh thực phẩm Những biện pháp này bao gồm hạn chế ô nhiễm, làm sạch kỹ lưỡng, đóng hộp đúng cách và duy trì thực phẩm ở nhiệt độ an toàn, ngoài phạm vi phát triển của C perfringens Đặc biệt, thực phẩm chế biến sẵn, nhất là sản phẩm thịt, cần được giữ ở nhiệt độ rất nóng hoặc rất lạnh để ngăn chặn sự phát triển của vi khuẩn này Thực phẩm nên được tiêu thụ trong vòng 3 giờ sau khi nấu chín Nếu thực phẩm được giữ ấm để phục vụ sau, cần duy trì nhiệt độ trên 55°C; nếu nhiệt độ giảm xuống dưới 55°C, thực phẩm phải được hâm nóng lại trước khi sử dụng.
60 0 C Thực phẩm được phục vụ lạnh sau khi nấu phải được làm lạnh nhanh đến 20 0 C và giữ ở hoặc dưới 7 0 C cho đến khi được phục vụ
Theo cuốn Avian Pathology, bệnh hoại tử ruột do C perfringens và nhiễm trùng cận lâm sàng ở gà gia tăng sau khi EU cấm sử dụng các chất kích thích kháng sinh, dẫn đến giảm trọng lượng và khủng hoảng kinh tế cho ngành chăn nuôi gia cầm Tỷ lệ nhiễm C perfringens cao trong gia cầm và nguy cơ lây truyền sang chuỗi thực phẩm đang gây ra những lo ngại về sức khỏe cộng đồng.
Mặc dù Clostridium perfringens là nguyên nhân chính gây ngộ độc thực phẩm tại châu Âu hàng năm, nhưng việc kiểm soát nó trong ngành công nghiệp thịt lại dễ dàng hơn so với B cereus trong ngành công nghiệp sữa Một thách thức lớn với C perfringens là các chủng hoang dã được phân lập từ môi trường thường không mang độc tố ruột, mặc dù một số chủng có thể sở hữu gen này nhưng không biểu hiện độc tố.
Chủng C perfringens âm tính với độc tố ruột có thể chuyển đổi thành dương tính thông qua quá trình bào tử lặp lại và sốc nhiệt ở 75°C trong 20 phút (Uemura và Skjelkvble, 1976) Ngộ độc thực phẩm do C perfringens luôn là trách nhiệm của nhà sản xuất Nếu quy trình làm sạch và khử trùng tại nhà máy thực phẩm được thực hiện đúng cách, chuỗi xử lý nhiệt và bào tử sẽ bị phá vỡ, ngăn chặn sự hình thành các chủng enterotoxin dương tính Tuy nhiên, việc khử trùng thực phẩm nhiễm bào tử cần được thực hiện cẩn thận, chỉ có Hypoclorit điều chỉnh đến pH dưới 8 mới có khả năng tiêu diệt bào tử sau khi đã làm sạch thích hợp (Granum và Magnussen, 1987).
Các giải pháp thay thế hiệu quả về chi phí cần được nghiên cứu khẩn trương, bắt đầu với việc phát triển một mô hình thực nghiệm tái tạo bệnh để thử nghiệm các sản phẩm kiểm soát dịch bệnh Nghiên cứu nên tập trung vào việc tạo ra các biện pháp bảo vệ mới, trong đó việc cân đối thành phần nguyên liệu thức ăn chăn nuôi có thể là phương pháp phòng chống hiệu quả nhất Tiêm phòng cho gia cầm chống lại C perfringens đang được chú trọng, bên cạnh việc sử dụng prebiotics và probiotics, đã chứng minh hiệu quả trong việc chống lại các mầm bệnh khác ở gia cầm, cần được thúc đẩy hơn nữa.
Đại học Mannheim ở Đức đã tiến hành nghiên cứu về việc điều trị ung thư tuyến tụy bằng cách sử dụng độc tố ruột của Clostridium perfringens Độc tố này được xem là một mục tiêu điều trị mới cho bệnh ung thư tuyến tụy, với đề xuất về phương pháp điều trị mới thông qua hợp chất CPE (Clostridium perfringens enterotoxin) có sẵn trong tự nhiên.
Phân tích các phản ứng miễn dịch chống lại độc tố C perfringens loại A và C cho thấy chất bổ trợ từ dầu khoáng làm tăng sản xuất kháng thể Ở gà tiêm vắc xin kết hợp bất hoạt với bổ trợ dầu sativa, hiệu giá kháng thể chống lại độc tố C perfringens loại A và C cao hơn Kết quả cho thấy N sativa hiệu quả hơn trong việc tăng cường sản xuất kháng thể so với chất bổ trợ dầu khoáng Tuy nhiên, sự khác biệt về tác động của N sativa đối với mức độ kháng thể theo loại tác nhân tạo miễn dịch vẫn chưa được lý giải rõ ràng, với hiệu giá kháng thể thấp hơn trong trường hợp kháng nguyên Salmonella và cao hơn với độc tố C perfringens.
C perfringens là một chỉ số quan trọng trong kiểm tra chất lượng nước, nhờ vào khả năng hình thành bào tử và chịu đựng tốt các yếu tố khắc nghiệt như nhiệt độ cao và khử trùng bằng clo So với các tế bào sinh dưỡng như coliform (E coli, enterococci) có sức đề kháng yếu hơn, C perfringens có khả năng tồn tại lâu hơn, làm cho nó trở thành một chỉ số đáng tin cậy trong việc đánh giá ô nhiễm nước.
Sự nhiễm bẩn trong phân thường được phát hiện qua coliform, nhưng có thể biến mất sau quá trình xử lý Ngược lại, C perfringens vẫn tồn tại và không gây nguy hiểm trong nước, nhưng lại trở thành mối đe dọa khi nước tiếp xúc với thực phẩm.
Dùng các kỹ thuật khác nhau để phân tích đối tượng C perfringens
Việc phát hiện và xác định C perfringens là bước quan trọng trong kiểm soát mầm bệnh này, với các enzym đặc trưng như hemolysin, lecithinase, protease ngoại bào, lipase, collagenase, hyaluronidase, enzym đường hóa và enzym khử sulphite thành sunfua Những enzym này không chỉ giúp phân biệt C perfringens mà còn chứng minh tính chất không di động của vi khuẩn này, làm cho nó trở thành vi khuẩn quan trọng nhất trong nhóm clostridia khử sulphite Đặc biệt, C perfringens có khả năng phát triển ở nhiệt độ 44 °C, trong khi nhiều clostridia khác bị ức chế ở mức nhiệt này, điều này được ứng dụng trong các phương pháp ISOO để tạo ra môi trường có độ chọn lọc cao hơn.
C perfringens nổi tiếng vì sở hữu một lượng độc tố cực kỳ phong phú, với hơn
C perfringens là một loại vi khuẩn có khả năng sản sinh ra 15 loại độc tố khác nhau, gây ra nhiều bệnh lý về đường ruột ở cả người và động vật Vi khuẩn này được phân loại thành năm loại chính (A đến E) dựa trên bốn độc tố chính: alpha (α), beta (β), epsilon (ε) và iota (ι) Chủng loại A, với độc tố alpha, là loại phổ biến nhất, gây ra hoại thư do khí, tiêu chảy và các bệnh truyền qua thực phẩm ở người Các chủng B và D gây ra bệnh nhiễm độc ruột nguy hiểm ở động vật và đôi khi ở người Chủng loại C gây viêm ruột hoại tử nghiêm trọng, trong khi chủng E có khả năng gây bệnh chưa rõ ràng và hiếm khi được phát hiện ở người Để giảm thiểu nguy cơ lây nhiễm, cần phát triển các chiến lược chẩn đoán và
Chẩn đoán C perfringens thường dựa vào các dấu hiệu lâm sàng và bệnh lý, nhưng để xác nhận chính xác, cần sử dụng các phương pháp phân lập và đặc điểm vi sinh Các kỹ thuật này bao gồm nuôi cấy vi khuẩn, phân tích sinh hóa và xét nghiệm hấp thụ miễn dịch liên kết với enzym.
Xét nghiệm trung hòa huyết thanh trên chuột hoặc chuột lang được sử dụng trong một số phòng thí nghiệm để xác định và chẩn đoán độc tố vi khuẩn Tuy nhiên, phương pháp này không chỉ tốn thời gian và chi phí mà còn gây thiệt hại cho động vật thí nghiệm, điều này làm cho việc áp dụng nó trở nên không phù hợp và phi đạo đức.
Theo nghiên cứu của Timoney và cộng sự, phương pháp ELISA đã được chứng minh là một cách đo độc tố trong huyết thanh cừu hiệu quả, nhanh chóng và tiết kiệm, có thể thay thế cho xét nghiệm trung hòa huyết thanh ELISA sử dụng kháng thể đa dòng để xác định độc tố C perfringens, tuy nhiên, nhược điểm của phương pháp này là sự tương tác giữa các kháng thể có thể gây khó khăn trong việc xác định chính xác các loại độc tố Ngoài ra, ELISA không thể phát hiện độc tố β 2 và cần có các phương pháp nuôi cấy đặc biệt để xác định độc tố từ vi khuẩn hình thành bào tử.
Xét nghiệm sinh hóa không thể phân biệt các loại C perfringens khác nhau Trong khi đó, công nghệ PCR hiện đại là phương pháp chẩn đoán hiệu quả nhất cho các bệnh truyền nhiễm, cho kết quả nhanh chóng chỉ trong vài giờ và độ tin cậy cao hơn so với các kỹ thuật cổ điển PCR giúp xác định vi khuẩn nhanh chóng từ các mẫu lâm sàng.
Phương pháp ELISA
Công nghệ Elisa là một phương pháp sinh hóa quan trọng trong miễn dịch học, giúp phát hiện kháng thể hoặc kháng nguyên trong mẫu Phương pháp này được áp dụng rộng rãi trong chẩn đoán y tế, chẩn đoán bệnh thực vật, và kiểm soát chất lượng trong nhiều lĩnh vực khác nhau.
Phương pháp ELISA có 3 loại là: trực tiếp, gián tiếp và “sandwich”
Phương pháp phát hiện 5 loại độc tố quan trọng của Clostridium perfringens, bao gồm α, β, ε, iota và enterotoxin, dựa trên việc sử dụng các kháng thể đặc hiệu Phương pháp này mang lại kết quả nhanh chóng và có độ nhạy cao Tuy nhiên, để đạt được độ chính xác, mẫu cần có độ tinh khiết cao, tránh bị ảnh hưởng bởi protein thực phẩm Nếu không, mẫu cần phải còn nguyên vẹn và không bị biến tính để giảm thiểu nguy cơ kết quả âm tính giả.
Hiện nay, phương pháp ELISA được áp dụng phổ biến trong nhiều lĩnh vực nghiên cứu, bao gồm y học, nông nghiệp, và đặc biệt là trong quy trình kiểm tra chất lượng sản phẩm sinh học.
• Phát hiện và định lượng vi sinh vật trong thực phẩm trong vòng vài giờ sau khi tăng sinh
• Phát hiện độc tố trong tảo
• Phát hiện E coli, Salmonella, Staphylococcus aureus, sán lá gan trong thực phẩm
• Phát hiện chloramphenicol trong tôm, cá và các sản phẩm thủy sản
• Kiểm tra lượng dư của kháng sinh, thuốc diệt cỏ, thuốc trừ sâu,… còn trong thực phẩm.
• Là một trong những kỹ thuật xét nghiệm HIV để phát hiện kháng nguyên p24
• Chẩn đoán và điều trị các bệnh như viêm gan B, viêm gan C và ung thư
• Ứng dụng phát hiện bệnh aspergillosis (bệnh viêm màng não) Quảng Châu
• Xác định tỷ lệ nhiễm KSTSR ở miền Trung-Tây Nguyên
• Chẩn đoán bệnh Tristeza (tác nhân gây bệnh héo Fusarium) trên cây có múi
• Đánh giá sự có mặt của BBTV
• Phát hiện kháng thể Mycoplasma hyopneumoniae (ML) ở lợn
• Đánh giá bệnh lùn xoắn lá trên lúa bằng phương phápDAS ELISA cải tiến.
Phương pháp PCR
Phân tích PCR, hay còn gọi là phân tích sinh học phân tử, là một phương pháp dựa trên chu trình nhiệt nhằm tạo ra số lượng lớn bản sao DNA mục tiêu trong ống nghiệm Kỹ thuật này được phát minh bởi nhà khoa học Cary Mullis vào năm 1985.
Xét nghiệm PCR là một công cụ quan trọng trong công nghệ sinh học nhờ vào độ nhạy cao và khả năng cho kết quả cụ thể Mặc dù các xét nghiệm PCR thường cho kết quả chính xác, nhưng độ chính xác này còn phụ thuộc vào kỹ năng của kỹ thuật viên, chất lượng máy móc và quy trình kiểm tra Do đó, cùng một phép thử có thể cho kết quả khác nhau giữa các cơ sở, với một số nơi cho kết quả nhạy và chính xác hơn so với những nơi khác.
Việc phát hiện Clostridium perfringens trong thực phẩm chủ yếu tập trung vào việc xác định các gen độc tố ruột, vì đây là nguyên nhân chính gây ra ngộ độc thực phẩm.
Vào năm 1997, Patrick Fach và Michel R Popoff đã áp dụng công nghệ PCR để phát hiện Clostridium perfringens sản sinh độc tố ruột trong thực phẩm Họ sử dụng hai cặp mồi (PL3, PL7) và (P145, P146) để xác định sự hiện diện của gen α đỉnh của phospholipase C và gen cpe enterotoxin, cả hai gen này đều nằm trên nhiễm sắc thể của Clostridium perfringens Phương pháp PCR đã chứng tỏ hiệu quả trong phân tích vi sinh vật.
Trong vi sinh vật học, PCR là một công cụ hữu ích để phát hiện mầm bệnh vi sinh vật
PCR cũng được sử dụng để xác định độc tố vi sinh vật
PCR cũng được sử dụng để nghiên cứu khả năng kháng kháng sinh của vi khuẩn
Trong lĩnh vực ký sinh trùng, người ta dùng PCR để chẩn đoánLeishmania, Echinococcus,
Phương pháp nuôi cấy
Nuôi cấy vi khuẩn là quá trình đưa mẫu bệnh phẩm nghi ngờ có chứa vi khuẩn vào môi trường thích hợp để kích thích sự phát triển của chúng Các môi trường nuôi cấy được thiết kế với các chất dinh dưỡng và yếu tố đặc biệt như muối, muối mật, hay chất tạo màu nhằm nhận diện các đặc tính sinh hóa của vi khuẩn Quá trình này giúp xác định sơ bộ các nhóm vi khuẩn và phát hiện những vi khuẩn có nguy cơ gây bệnh Có nhiều kỹ thuật nuôi cấy vi khuẩn khác nhau, có thể phân loại theo nhiều tiêu chí khác nhau.
Cấy định danh là phương pháp sử dụng các môi trường đặc biệt để phát hiện tính chất sinh vật hóa học của vi khuẩn Mỗi loại vi khuẩn sở hữu một bộ tính chất sinh vật hóa học riêng biệt Sau 24 giờ cấy định danh, các tính chất này được phân tích để xác định tên của vi khuẩn.
Cấy tăng sinh là phương pháp hiệu quả để tăng số lượng vi khuẩn trong mẫu bệnh phẩm, đặc biệt là đối với những mẫu có ít vi khuẩn như máu, dịch não tủy và dịch màng phổi.
Cấy định lượng là phương pháp xác định chính xác mật độ vi khuẩn trong mẫu bệnh phẩm, điển hình là cấy nước tiểu.
Cấy bán định lượng là một phương pháp được sử dụng để xác định mật độ vi khuẩn trong mẫu bệnh phẩm ban đầu, tuy nhiên, phương pháp này vẫn chưa hoàn hảo Một ví dụ điển hình cho phương pháp cấy định lượng là cấy đờm.
Cấy lưu chủng là phương pháp sử dụng vi khuẩn đã được xác định tên và đặc tính, đưa vào môi trường phù hợp nhằm bảo tồn và lưu giữ các chủng vi khuẩn cho nghiên cứu hoặc các mục đích khác.
Các phương pháp nuôi cấy truyền thống để xét nghiệm C perfringens được phát triển dựa trên các đặc điểm vi sinh và sinh hóa của vi khuẩn Quy trình này bao gồm một số bước cụ thể nhằm đảm bảo tính chính xác trong việc xác định sự hiện diện của vi khuẩn.
Phương pháp nuôi cấy truyền thống để xét nghiệm Clostridium Perfringens được xây dựng dựa trên các đặc điểm vi sinh và sinh hóa của vi khuẩn Quy trình này bao gồm nhiều bước cụ thể nhằm xác định sự hiện diện của vi khuẩn trong mẫu thử.
- Phân lập và nuôi cấy:
Để phân lập Clostridium Perfringens, ta lấy mẫu thực phẩm và pha loãng đến nồng độ thích hợp, sau đó cấy 0,1 ml dịch pha loãng vào môi trường thạch sâu Iron Sulfite Agar (ISA) Tiếp theo, đổ thêm một lớp ISA lên bề mặt và ủ ở điều kiện kỵ khí tại 37°C trong 24 giờ Khuẩn lạc của Clostridium Perfringens sẽ có hình tròn và màu đen rõ rệt trong môi trường ISA Tuy nhiên, cần lưu ý rằng một số chủng Clostridium khác cũng có thể tạo khuẩn lạc tương tự, do đó cần thực hiện các bước khẳng định sinh hóa để phân biệt.
- Kiểm tra khẳng định sơ bộ:
Cấy vi khuẩn Clostridium Perfringens từ môi trường ISA sang môi trường Thioglycolate Broth và ủ ở nhiệt độ 37°C trong 24 giờ Sau đó, tiến hành nhuộm gram và quan sát hình ảnh tế bào dưới kính hiển vi.
Chúng tôi tiến hành lấy 1ml dịch nuôi cấy từ môi trường Thioglycolate Broth và chuyển sang môi trường iron-milk ở nhiệt độ 46°C Sau 2 giờ cấy, chúng tôi kiểm tra sự lên men trong môi trường đã được chuyển mỗi giờ một lần.
- Kiểm tra khẳng định ( độ chính xác):
Chúng tôi đã tiến hành phản ứng sinh hóa trên hai môi trường Motility-Nitrate và Lactose-Gelatin để xác định Clostridium perfringens Đây là trực khuẩn Gram dương, tạo khuẩn lạc màu đen trên môi trường ISA, không di động, khử nitrate thành nitrite, và cho kết quả Catalase âm tính C perfringens lên men Lactose tạo ra axit và khí, đồng thời làm tan hoàn toàn Gelatin Để xác định chính xác hơn, chúng tôi sử dụng cơ chất MUP (Methylumbelliferylphosphate) thêm vào môi trường ISA trong quá trình phân lập nuôi cấy MUP là chất chỉ thị đặc trưng cho C perfringens, khi Phosphatase phân hủy MUP sẽ tạo ra 4 MUP và phát sáng huỳnh quang dưới đèn UV.
Kỹ thuật định lượng trong môi trường thạch tryptose sulfide cycloserin (tsc) 14 8 Phương pháp truyền thống- phương pháp đếm khuẩn lạc
Vi khuẩn C perfringens phát triển thành các khuẩn lạc màu đen trong môi trường thạch Tryptose Sulfide Cycloserin (TSC) dưới điều kiện kỵ khí Việc chọn các khuẩn lạc điển hình và xác định tính chất sinh vật hoá học theo phương pháp thường quy là cần thiết để đánh giá đặc điểm của vi khuẩn này.
Phát hiện ô nhiễm Clostridium perfringens trong nước, thực phẩm và thức ăn chế biến sẵn.
-Dụng cụ, môi trường, thuốc thử
Bình nuôi cấy kỵ khí.
Thạch Tryptose Sulfide Cycloserin (TSC agar).
Canh thang gan cục hoặc canh thang thịt.
Canh thang nuôi cấy nha bào.
Dung dịch đệm glycerin - salt.
-Chuẩn bị môi trường, thuốc thử
Môi trường nuôi cấy, canh thang và nước pha loãng được chuẩn bị theo công thức cụ thể và được đóng vào các dụng cụ như bình cầu, bình nón, ống nghiệm Sau đó, chúng được hấp tiệt trùng ở nhiệt độ 110 o C trong 30 phút hoặc 121 o C trong 15 phút để đảm bảo an toàn cho quá trình nuôi cấy.
+ Chuẩn bị mẫu và dung dịch mẫu thử
Mẫu thực phẩm được cắt nhỏ hoặc xay nhuyễn bằng máy trong điều kiện vô trùng cho tới khi được thể đồng nhất.
Để đảm bảo chất lượng mẫu thực phẩm khi xét nghiệm sau 8 giờ, cần bảo quản trong dung dịch muối đệm glycerin (Buffer Glycerin Salt Solution - BGS) Cách thực hiện là ngâm thực phẩm trong dung dịch BGS với tỷ lệ 1:1 và bảo quản ở nhiệt độ lạnh -20 oC.
Trước khi xét nghiệm, phải làm tan băng.
Chuẩn bị dung dịch mẫu thử 10 -1
Cân chính xác 25 g thực phẩm đã được chuẩn bị (hoặc hút 25ml thực phẩm lỏng), cho vào bình nón chứa sẵn 225 ml nước muối đệm pepton (BPW) 9‰.
Lắc đều 2 - 3 phút Thu được dung dịch mẫu thử 10 -1
Chuẩn bị dung dịch mẫu thử 10 - 2 ,10 - 3 ,10 - 4
Hút chính xác 1ml dung dịch mẫu thử 10 -1 cho sang ống nghiệm chứa sẵn 9ml nước muối đệm pepton 9‰ Lắc đều trong 2-3phút Thu được dung dịch 10 -2
Tiếp tục làm tương tự như vậy, ta thu được các dung dịch mẫu thử tương ứng 10 -3 , 10 -4 , 10 -5 (theo sơ đồ ).
A Cấy đếm vi khuẩn trên đĩa thạch
- Rót 6 - 7 ml thạch TSC vào mỗi đĩa petri đã được đánh dấu nồng độ pha loãng Lắc cho thạch láng đều mặt đĩa.
Khi thạch đông chặt, sử dụng pipet để hút chính xác 1 ml dung dịch mẫu thử ở mỗi nồng độ pha loãng và nhỏ lên bề mặt thạch Mỗi nồng độ cần được cấy vào hai đĩa petri tương ứng.
- Rót tiếp 15 ml thạch TSC vào mỗi đĩa petri đã được láng mẫu thử Lắc trộn đều sao cho thạch phủ đều khắp bề mặt đĩa petri.
Khi thạch đông đã chặt, hãy lật ngược đĩa và đặt vào bình kỵ khí, có thể sử dụng các túi hóa chất tạo kỵ khí hoặc tủ ấm nuôi vi khuẩn kỵ khí Sau đó, đặt bình kỵ khí vào tủ ấm ở nhiệt độ 35 độ C trong khoảng 20-24 giờ.
Bước 2: Đọc kết quả sơ bộ sau 24 giờ
- Đếm toàn bộ các khuẩn lạc có các đặc tính: tròn, lồi, bờ đều, nhẵn, có màu đen
Để tính số lượng vi khuẩn C perfringens trong 1 gram thực phẩm, bạn cần lấy trung bình cộng số lượng vi khuẩn từ các đĩa nuôi cấy có cùng nồng độ pha loãng, sau đó nhân với hệ số pha loãng tương ứng.
- Chỉ đếm các đĩa thạch có khoảng 20 - 200 khuẩn lạc để tính kết quả.
- Nếu các khuẩn lạc phân bố trên đĩa nuôi cấy không rõ ràng thì phải làm lại.
Bước 3: Xác định hình thể và tính chất bắt mầu a) Chuẩn bị canh trùng thuần nhất
Chọn khuẩn lạc điển hình với đặc điểm tròn, lồi, bờ đều, nhẵn và có màu đen trên đĩa thạch TSC, sau đó cấy vào ống môi trường canh thang thioglycolat, canh thang gan cục và canh thang nha bào Ủ ấm ở 35°C trong khoảng 18 - 24 giờ để thu được canh trùng thuần nhất Hình thể và tính chất bắt màu của khuẩn lạc sẽ được quan sát và ghi nhận.
- Từ canh trùng thuần nhất, nhuộm Gram để xem hình thể và tính chất bắt mầu C perfringens là trực khuẩn ngắn, bắt mầu thuốc nhuộm Gram, Gr ( +).
Phát hiện khả năng sinh nha bào có thể thực hiện bằng phương pháp nhuộm Gram Qua quan sát canh thang nha bào, ta thấy sự xuất hiện của trực khuẩn ngắn, có hình dạng tròn đầu, với đặc điểm nổi bật là phần giữa có khoảng trắng sáng không bắt màu thuốc nhuộm.
Bước 4: Thử tính chất sinh vật hoá học a) Thử nghiệm Iron - Milk
- Lấy 1ml canh trùng thuần nhất cho vào ống nghiệm môi trường Iron - Milk
- C.perfringen làm đông sữa nhanh ở đáy ống nghiệm và tạo ra lớp nhũ tương ở trên. b) Thử tính chất lên men đường và hoá lỏng gelatin
- Từ canh trùng thuần nhất cấy vào môi trường lactoza gelatin Sau 24 giờ ở
35 0 C , nhận định khả năng lên men đường Lactoza, và khả năng sinh hơi Đặt ống nghiệm vào 5 0 C/1 giờ - Đọc kết quả sơ bộ khả năng hóa lỏng gelatin
- Nếu môi trường vẫn ở dạng đặc, ủ thêm 24 giờ/ 35 0 C. c) Khả năng chuyển hoá nitrat thành nitrit:
- Từ canh trùng thuần nhất cấy vi khuẩn vào ống nitrat, ủ 35 o C/24 giờ Nhỏ 0,25ml thuốc thử A và B.
- Quan sát mầu môi trường chuyển sang mầu cam hoặc tím (+)/10 phút.
Tiêu chuẩn để xác định C perfringen
Có nha bào Khuẩn lạc mầu đen trên TSC
B Phương pháp nuôi cấy trong ống thạch
- Thạch Wilson Blair hay thạch Perfringens selective được đổ vào mỗi ống nghiệm ( mỗi ống nghiệm khoảng 30ml thạch)
- Dung dịch ferrous amon sunfat 5% (dung dịch phèn sắt 5%).
- Chuẩn bị mẫu và dung dịch mẫu thử như trên, tùy theo mức độ sạch, bẩn của mẫu mà pha loãng đến đậm độ dùng nuôi cấy.
Melt Wilson Blair agar or selective Perfringens agar and cool it to approximately 50°C Add 10ml of the sample solution into the agar, ensuring to use two tubes for each concentration To each tube, add 2ml of a 20% Na2SO3 solution and 5 drops of 5% iron alum Mix thoroughly.
- Đun cách thủy 75 0 C/15phút Làm đông nhanh thạch.
B.3 Đọc kết quả: Khuẩn lạc vi khuẩn C perfringens tròn, đen, có đường kính ³
Để tính số lượng vi khuẩn C perfringens có trong 1g mẫu, bạn cần lấy trung bình cộng số khuẩn lạc nghi ngờ từ hai đĩa thạch hoặc ống nghiệm nuôi cấy cùng nồng độ, sau đó nhân với hệ số pha loãng tương ứng và chia cho 10.
Ví dụ: Độ pha loãng 10 -2 :
Đĩa thạch hoặc ống nghiệm 1 có: 10 khuẩn lạc
Đĩa thạch hoặc ống nghiệm 2 có: 14 khuẩn lạc
Số khuẩn lạc có trong 1g thực phẩm được tính
X×1000 Như vậy: Trong 1 gam thực phẩm có 1,2 ´ 10 2 vi khuẩn C.perfringens
Thạch Tryptose – Sunfit – Cycloserin (TSC)
Bình kỵ khí để trong điều kiện 35 0 C/20-24 giờ
Nhận định kết quả sơ bộ: Chọn đĩa có 20-200 khuẩn lạc đen để đếm
Xác định hình thể, tính chất bắt mầu và khả năng sinh nha bào
Xác định tính chất sinh vật hoá học
Trực khuẩn ngắn Có nha bào Mầu đen trên môi trường TSC Lactoza: (+) Hơi: (+) Iron – milk: (+) Làm lỏng gelatin
8.Phương pháp truyền thống- phương pháp đếm khuẩn lạc
MỘT SỐ MÔI TRƯỜNG THUỐC THỬ DÙNG ĐỂ ĐỊNH LƯỢNG C. PERFRINGENS TRONG THỰC PHẨM
Thạch Tryptose - Sulfide - Cycloserine (TSC agar)
Nước cất 900ml Đun tan môi trường TSC. pH = 7,6 ± 0,2 Hấp ướt tới 121 0 C/15 phút Trước khi dùng, để môi trường ở
Dung dịch D-cycloserine : Pha 1gam D-cycloserin (tinh thể trắng) vào 200ml nước cất Khử trùng bằng cách lọc và bảo quản 4 0 C trước khi dùng.
Khi dùng : cho 20 ml dung dịch D-cycloserin vào 250 ml thạch nêu trên Trộn đều đổ đĩa.
Để chuẩn bị thạch TSC với lòng đỏ trứng gà, sau khi thêm D-cycloserin, bạn cần cho thêm 20 ml dung dịch lòng đỏ trứng gà Hãy trộn đều và đổ vào đĩa trước khi sử dụng.
Natri thioglycolat hoặc axit thioglycolat
Resazurin natri solution(1:1000) mới 1ml pha
Pha L-cystin, NaCl, dextroza, men thủy phân và tryptose vào 1 lít nước, sau đó đun cách thủy cho tan hoàn toàn Tiếp theo, thêm natri thioglycolat hoặc axit thioglycolic để đạt pH = 7,1 ± 0,2 Sau khi trộn đều, cho dung dịch Natri resazurin vào, rồi hấp ướt ở 121°C trong 20 phút Có thể chia dung dịch ra các ống nghiệm trước khi tiến hành sấy ướt.
Môi trường Iron - Milk cải tiến
Sữa tươi toàn phần 1 lít
Hòa tan 50 ml nước cất với sắt sunfat, sau đó từ từ thêm 1 lít sữa trong khi khuấy đều bằng máy khuấy từ hoặc đũa thủy tinh Tiếp theo, hút 11 ml dung dịch vào ống nghiệm 16 x 150 mm và hấp ướt ở 118 độ C trong 15 phút Môi trường pha chế này nên được sử dụng ngay lập tức.
Để chuẩn bị dung dịch, hãy đun 1 lít nước cất cho tan Tryptose, men thủy phân và lactoza trong 400ml nước Tiếp theo, hòa tan gelatin trong 600ml nước nóng ở nhiệt độ 50 - 60 độ C Sau khi hoàn thành, trộn hai hỗn dịch lại với nhau và điều chỉnh pH đến 7,5 ± 0,2 Cuối cùng, thêm chỉ thị màu đỏ phenol và phân chia dung dịch vào các ống nghiệm có kích thước 16 x 150mm.
Hấp ướt ở 121 0 C/10phút Trong vòng 8 giờ nếu chưa dùng cần để nóng 50 - 70 0 C/ 2 -
3 giờ trước khi tiến hành xét nghiệm.
Môi trường canh thang bào tử (Sporulation broth)
Chỉnh pH 7,8 ± 0,1 San ra các ống nghiệm Hấp ướt 121 0 C/15 phút.
Môi trường di động nitrat
Hòa các chất trừ thạch, điều chỉnh pH đến 7,3 ± 0,1, sau đó thêm thạch và đun cho đến khi tan hoàn toàn Chia hỗn hợp vào các ống 11 ml và hấp ướt ở 121°C trong 15 phút Nếu không sử dụng trong vòng 4 giờ, cần đun sôi cách thủy trong 10 phút và làm lạnh ngay bằng nước trước khi tiến hành xét nghiệm.
Dung dịch đệm glycerin muối
Phương pháp phân lập và xác định type độc tổ (toxinotype) của vi khuẩn
Clostridium perfringens là vi khuẩn yếm khí gram dương, gây ra nhiều bệnh lý ở người và động vật Đặc điểm gây bệnh của vi khuẩn này liên quan đến bốn loại độc tố chính: Alpha, Beta, Epsilon và Iota, cùng với độc tố ngoại bào enterotoxin gây ngộ độc thực phẩm ở người Beta 2 toxin có thể gây viêm ruột hoại tử ở gia súc, đặc biệt là lợn con, ngựa và chó Hiện nay, C perfringens được phân loại thành năm type dựa trên khả năng sản sinh các loại độc tố.
Theo nghiên cứu của Theo Dwight và cộng sự (2004), tất cả 5 loại Clostridium perfringens đều sản sinh Alpha toxin, trong đó loại A chỉ sản sinh Alpha toxin là phospholipase C có khả năng tác động lên sphingomyeline Cả hai loại protein này có khả năng tương tác với màng tế bào của vật chủ Beta toxin, được sản sinh bởi Cl perfringens type B và C, nằm trên plasmid của vi khuẩn và gây tổn thương cho tế bào biểu mô ruột cũng như tế bào màng trong ruột Hơn nữa, beta toxin còn ảnh hưởng đến mô thần kinh, làm rối loạn chức năng trao đổi calcium của màng Gần đây, nhiều tác giả đã đề cập đến beta toxin 2 (Cpb2), với gene mã hóa nằm trên plasmid Theo nghiên cứu của Dawn và cộng sự (2003) từ Trường đại học Arizona, tỷ lệ lưu hành của gene Cpb2 trong các chủng Cl perfringens phân lập từ bò bị tiêu chảy, viêm ruột nhiễm độc máu và chết đột tử là 21,4%.
A là 11,8 % , type C là 40 % và type E là 97,3 %
Độc tố Epsilon do C perfringens loại B và D sản sinh, với gene mã hóa nằm trên plasmid, nhắm vào nhóm lipid như cholesterol và sphingolipid có trong màng tế bào động vật Eukaryotic, dẫn đến sự tập trung của độc tố này ở não và thận Độc tố Ex được tiết ra dưới dạng tiền độc tố và được kích hoạt bởi men proteolytic Trong khi đó, độc tố Iota do C perfringens loại E sản sinh có hai vị trí quan trọng: vị trí gắn độc tố với tế bào biểu mô (Ib) và vị trí kích hoạt enzyme (Ia) Sau khi gắn vào thụ thể đặc hiệu trên bề mặt tế bào, độc tố này xâm nhập vào tế bào chất và gây chết tế bào.
Trong các ổ dịch viêm ruột tiêu chảy , các chủng C perfringens gây bệnh được thải ra và tồn tại một thời gian dài trong đất
Vi khuẩn C perfringens có nhiều loại gây bệnh viêm ruột tiêu chảy ở gia súc, với type A phổ biến toàn cầu, type B ảnh hưởng đến cừu ở Châu Âu và Nam Phi, type C gây bệnh cho gia súc và có thể gây ngộ độc máu ở người, trong khi type D chỉ gây bệnh cho cừu và type E được phát hiện tại Anh, Mỹ và Úc Để đánh giá sự lưu hành các loại độc tố của C perfringens từ gia súc mắc bệnh tiêu chảy ở một số tỉnh duyên hải miền Trung, chúng tôi đã áp dụng kỹ thuật multiplex PCR để định type, từ đó đề xuất các nghiên cứu và giải pháp nhằm giảm thiểu thiệt hại trong chăn nuôi động vật nhai lại và ngăn ngừa bệnh ngộ độc thực phẩm ở người do C perfringens gây ra.
Nguyên liệu và phương pháp:
Bệnh phẩm là phân , chất chứa đường ruột , và phủ tạng của bò bê , dê cừu bị tiêu chảy
The environment includes thioglycolate, egg yolk, TSC, SPS, litmus milk, and blood agar from Merck For PCR reactions, primers consist of four pairs targeting CPA (alpha toxin), CPB (beta toxin), CPE (epsilon toxin), and CPI (iota toxin) sourced from Sigma-Genosys (The Woodlands, TX, USA) Additionally, Itaq DNA polymerase at 5 units/μl in a 50 μl volume from Biorad is utilized, along with anaerobic culture vessels and a thermal cycler.
Phân lập và xác định các đặc tính sinh vật hoá học của vi khuẩn C perfringens theo phương pháp của Quinn và cộng sự 1998
Phương pháp multiplex PCR được sử dụng để xác định loại độc tố của vi khuẩn C perfringens, bao gồm các độc tố alpha, beta, epsilon và iota, theo nghiên cứu của Han Sang Yoo và cộng sự năm 1997.
Phản ứng multiplex PCR được thực hiện trên máy luân nhiệt với hỗn hợp PCR bao gồm 541 PCR buffer 10x, 4µl của 25 mM MgCl2, 1µl d NTPs 10mM, 100 pmol các primers, 1µl Taq polymerase và nước cất đủ 50ml Chương trình nhiệt độ được thiết lập là 5 phút ở 94 °C, sau đó là 30 chu kỳ gồm 1 phút ở 55 °C, 1 phút ở 72 °C và 1 phút ở 94 °C.
Kết quả phân lập vi khuẩn cho thấy vi khuẩn C perfringens đã được phân lập từ 223 mẫu phân trực tràng của bò con bị tiêu chảy Chi tiết về kết quả nuôi cấy được trình bày trong bảng 1.
Tỉnh Số mẫu phân lập Số mẫu dương tính Tỷ lệ % Đắc Lắc 132 49 37.12
Bảng 1: Kết quả phân lập C perfringens từ bò bê
Tỷ lệ phân lập vi khuẩn C perfringens từ 223 mẫu phân của bò và bê bị tiêu chảy đạt 41,27%, trong đó Đắk Lắk ghi nhận 37,12% và Khánh Hoà là 47,25% Ngoài ra, từ 67 mẫu phân và 20 mẫu máu phủ tạng của dê, cừu có triệu chứng tiêu chảy ở Khánh Hoà và Ninh Thuận, kết quả phân lập cũng được trình bày trong bảng 2.
Bảng 2: Kết quả phân lập C perfringens từ dê cừu
Bảng 2 cho thấy , tỷ lệ phân lập C perfringens từ 67 mẫu phân thu thập ở dê cừu tiêu chảy là 37,31 % , trong đó tại Ninh Thuận là 43,18 % và Khánh Hoà là 26,08
% Tỷ lệ phân lập C perfringens từ mẫu phủ tạng của dê cừu chết do bị viêm ruột tiêu chảy là 100 %
Kết quả xác định đặc tính sinh vật hoá học
Trong nghiên cứu, 137 chủng vi khuẩn C perfringens được phân lập từ bò, bê, dê và cừu mắc bệnh tiêu chảy đã được xác định đặc tính sinh vật hoá học theo phương pháp của Quinn và cộng sự năm 1994 Kết quả chi tiết được trình bày trong bảng 3.
Bảng 3: Kết quả xác định đặc tính sinh hóa
Các nghiên cứu về 137 chủng vi khuẩn C perfringens được phân lập từ bò, bê, dê và cừu mắc bệnh tiêu chảy cho thấy chúng có các đặc tính sinh vật hoá học tương đồng với những gì đã được công bố trong tài liệu về vi khuẩn này.
Kết quả xác định type độc tố ( toxinotype )
Dùng phản ứng Multiplex PCR để xác định các gen mã hoá cho các độc tố alpha, beta, epsilon và iota của 137 chủng vi khuẩn C perfringens
Kết quả tình bày ở bảng 4
Bảng 4: Type độc tố của C perfringens phân lập từ bò, dê, bê, cừu
Kết quả nghiên cứu cho thấy, tất cả 92 chủng C perfringens phân lập từ bò và bê đều thuộc type A với 100% mang gen Cpa, quy định sinh tổng hợp độc tố Alpha Ngoài ra, 25 chủng C perfringens phân lập từ phân của dê và cừu bị tiêu chảy cũng thuộc type A, trong khi 20 chủng phân lập từ phủ tạng dê và cừu mắc bệnh viêm ruột tiêu chảy lại thuộc các type khác.
D mang 2 gen Cpa và Cpe quy định sinh tổng hợp độc tố Alpha , Epsilon , tỷ lệ 100
% Như vậy các chủng Cl perfringens phân lập từ dê cừu thuộc 2 type A và D.
Các chủng C Perfringens được phân lập đều thể hiện các đặc tính sinh vật hoá học đặc trưng Các chủng này, đặc biệt là từ bò và bê bị tiêu chảy, thuộc type A và mang gen Cpa Tương tự, các chủng từ phân dê và cừu cũng thuộc type A; tuy nhiên, những chủng phân lập từ phủ tạng lại thuộc type A và mang cả gen Cpa và Cpe.
Kết quả phân lập vi khuẩn C perfringens từ 233 mẫu phân bò và phân bê bị tiêu chảy cho thấy tỷ lệ dương tính ở Đắk Lắk đạt 37,12% (49/132 mẫu), trong khi tỉnh Khánh Hoà có tỷ lệ cao hơn, đạt 47,25% (43/91 mẫu).
Kết quả phân lập C Perfringens từ 67 mẫu phân và 20 mẫu phủ tạng của dê, cừu bị tiêu chảy cho thấy, tỷ lệ dương tính ở mẫu phân dê, cừu tại tỉnh Ninh Thuận là 43% (19/44 mẫu) và tại Khánh Hoà là 26,08% (6/23 mẫu) Đặc biệt, các mẫu phủ tạng từ cả hai tỉnh đều cho kết quả dương tính 100%.
Nghiên cứu về clostridium perfringens
Để nghiên cứu vi khuẩn Clostridium Perfringens, chúng tôi đã thu thập tổng cộng 124 mẫu phân, chia thành hai nhóm: nhóm 1 gồm lợn từ 1-28 ngày tuổi và nhóm 2 từ 29-90 ngày tuổi Mẫu được lấy từ những con lợn có triệu chứng nặng như mệt mỏi, tiêu chảy, kén ăn, phân lỏng, có máu và mùi hôi thối Việc lấy mẫu phải thực hiện trực tiếp từ trực tràng và bảo quản trong hộp chuyên dụng có nắp xoắn trong vòng 8 giờ Sau đó, mẫu được nuôi cấy trong môi trường nước thạch máu ở 37°C trong 24 giờ, cho thấy sự xuất hiện của khuẩn lạc trơn bóng, tròn với vùng dung huyết đặc trưng.
“Tỉ lệ nhiêm Clostridium Perfringens trong hội chứng tiêu chảy ở lợn nuôi tại Hà Nội và các vùng phụ cận.”
Kết quả nghiên cứu cho thấy 100% mẫu phân lợn bị tiêu chảy đã được phân lập vi khuẩn Clostridium Perfringens Tỷ lệ trung bình phân lập vi khuẩn này trong phân lợn nghi ngờ mắc bệnh viêm ruột hoại tử, gan, lách là rất cao.
“Chẩn đoán nhiễm trùng đường ruột do Clostridium perfringens ở cừu và dê”
Kết quả nghiên cứu : phát hiện độc tố C perfringens trong thành phần ruột và nuôi cấy định lượng sau đó là đánh máy gen
“Clostridium perfringens và nhiễm trùng do thực phẩm”
Nghiên cứu cho thấy rằng C perfringens là nguyên nhân chính gây ra các bệnh lây truyền qua thực phẩm, đặc biệt là ngộ độc thực phẩm tiêu chảy do các chủng enterotoxin dương tính loại A Ngoài ra, viêm ruột hoại tử loại C và các độc tố liên quan cũng cần được chú ý trong việc phòng ngừa và kiểm soát các bệnh này.
