Đề cương ôn tập môn vi sinh vật thú y part 2 full

Thạch Văn Mạnh TYD-K55 ĐỀ CƢƠNG ÔN THI HẾT HỌC PHẦN MÔN: Vi Sinh Vật Thú Y Học kỳ I năm học 2013-2014 (Dành cho sinh viên thú y hệ chính quy) 1. Đặc tính sinh học của tụ cầu khuẩn Staphylococcus aureus.? a. Hình thái và tính chất bắt màu - VK có hình cầu, đường kính 0.7- 1 μm - Không sinh nha bào và giáp mô, không có lông - Xếp thành từng đám nhỏ như chùm nho - Bắt màu Gram + b. Đặc tính nuôi cấy: - Sống hiếu khí hoặc kỵ khí tùy tiện - Nhiệt độ thích hợp : 32 – 37 0 C, pH : 7,2 – 7,6 - Dễ mọc trên các môi trường nuôi cấy thông thường. Môi trường Đặc điểm Nước thịt Sau 5-6h VK đã làm đục, sau 24h môi trường rất đục, lắng cặn nhiều, không có màng. Thạch thường Sau 24h khuẩn lạc to dạng S, mặt ướt, bờ đều nhẵn, VK sinh sắc tố nên khuẩn lạc có màu vàng thẫm loài tụ cầu gây bệnh (aureus) hoặc trắng (albus), vàng chanh(citreus) loài tụ cầu có độc lực thấp, không gây bệnh. Thạch máu Sau 24h vi khuẩn mọc rất tốt, khuẩn lạc dạng S. Tụ cầu loại gây bệnh gây hiện tượng dung huyết. MT Sapman Phân lập và kiểm tra độc lực của tụ cầu. Môi trường từ màu đỏ (pH= 8,4) sang màu vàng (pH= 6,8) thì là tụ cầu gây bệnh. Môi trường ko đổi màu là ko gây bệnh. MT Gelatin Cấy VK theo đường chích sâu, nuôi ở nhiệt độ 20 0 C, sau 2-3 ngày gelatin bị tan chảy ra trông giống dạng hình phễu. - Trên môi trường thạch máu : Tụ cầu có 4 loại độc tố có khả năng làm tan hồng cầu của một số loài ĐV gọi là dung huyết tố : α, β, δ, γ c. Đặc tính sinh hóa: - Chuyển hóa đường: Lên men các đường sau : 5 + Glucoz + Levuloz + Lactoz + Manit + Saccaroz - Phản ứng catalaza (+) d. Cấu trúc kháng nguyên: Phân tích được 2 loại kháng nguyên: - 1 KN polysaccarit ở vạch là 1 phức hợp mucopeptit- ax teichoic, nếu gặp KT tương ứng sẽ gây phản ứng nguywng kết. - 1 KN Protein hay Protein A là thành phần ở vách và ở phía ngoài. e. Các chất do tụ cầu tiết ra: - Các độc tố: 4 loại chính là các dung huyết tố: + Anpha: gây tan hồng cầu ở thỏ ở 37 0 C, hoạt tử da và gây chết. Đây là 1 ngoại độc tố, bản chất Protein, bền với nhiệt độ. Là KN hoàn toàn, gây hình thành KT kết tủa và KT Thạch Văn Mạnh TYD-K55 trung hòa dưới tác dụng của focmon và nhiệt độ nó biến thành giải độc tố có thể dùng làm vacxin. + Bêta: gây tan hồng cầu cừ ở 4 0 C, kém độc hơn dung huyết tố anpha. + Đenta: gây tan hồng cầu người, thỏ, cừu, ngựa, gây hoại tử da. + Gamma: loại này không tác động lên hồng cầu ngựa. Dung huyết tố anpha là đặc điểm xác định tụ cầu có khả năng gây bệnh. - Enzim: f. Sức đề kháng: - Kém với nhiệt độ: 70 0 C chết sau 1h, 80 0 C sau 10-30ph, 100 0 C sau vài ph. - Các chất sát trùng thông thường diệt VK nhanh chóng. - Ở nơi khô ráo có thể sống trên 200 ngày. - VK có sức đề kháng ở nhiệt độ lạnh. g. Khả năng gây bệnh: Trong tự nhiên Trong phòng TN + Tụ cầu kí sinh trên da, niêm mạc người và gia súc, có 30% người khỏa mang loại VK này. Khi sức đề kháng của cơ thể giảm hoặc khi có tổn thương trên da và niêm mạc, VK sẽ âm nhập và gây bệnh. +Khi nhiếm trừng có nhiều biểu hiện khác nhau:  Mưng mủ, áp xe, viêm cơ, viêm vú.  Nhiễm trừng huyết, bại huyết.  Hình thành độc tố gây nhiễm độc do thức ăn, viêm ruột cấp.  Mức độ cảm nhiễm ở gia súc: ngực > bò > chó> lợn> cừu. Ngoài ra người cũng cảm nhiễm, loài chim không mắc bệnh. + Thỏ cảm nhiễm nhất:  Tiêm 1-2ml canh khuẩn tụ cầu 24h vào tĩnh mạch tai, sau 36-48h thỏ chết vì chứng huyết nhiễm mủ. Mổ khám thấy nhiều ổ áp xe trong phủ tạng.  Nếu tiêm dưới da gây áp xe dưới da. 2. Chẩn đoán vi khuẩn học bệnh do Staphyloccocus gây ra.? Gồm có 4 bước: - Lấy bệnh phẩm: +) Phải tuân thủ quy tắc tuyệt đối vô trùng để tránh nhiễm các VK khác. +) Dùng tăm bông lấy mủ hoặc dịch viêm ở ổ mủ hoặc vết thương hở. +) Dùng bơm tiêm hút mủ ở các ổ apxe - Kiểm tra hình thái trên kính hiển vi: +) Làm tiêu bản, đem nhuộm Gram rồi quan sát dưới kính hiển vi. +) Nếu là tụ cầu: VK hình cầu, bắt màu Gram dương, tụ lại thành từng đám như hình chùm nho. - Nuôi cấy vào các môi trường thích hợp: +) Bệnh phẩm được nuôi cấy vào môi trường nước thịt, thạch máu, thạch Sapman. - Tiêm ĐV thí nghiệm: +) Dùng thỏ để gây bệnh. +) Để xác định tụ cầu gây bệnh phải dựa vào những tính chất sau: + Lên men đường manit Thạch Văn Mạnh TYD-K55 + Sinh sắc tố + Có dung huyết tố anpha + Có men Coagulaz + Một số trường hợp phát hiện Dezoxyribonucleaz và Fibrinolyzin. 3. Đặc tính sinh học của Streptococcus suis. ? a. Hình thái: - VK hình cầu hoặc bầu dục, đường kính 0,5 - 1 μm. - VK xếp thành chuỗi ngắn có 6-8 VK, có chuỗi 12 VK. - Bắt màu Gram +. - Không sinh nha bào, không di động, đôi khi có 1 lớp giáp mô mỏng bên ngoài VK. b. Đặc tính nuôi cấy: - VK hiếu khí hay yếm khí tùy tiện( trong môi trường thiếu O 2 vẫn phát triển mạnh). - Thường kí sinh trên đường ruột gia súc. - Nhiệt độ thích hợp: 37 0 C; pH= 7,2-7,4. Môi trƣờng Đặc điểm Nước thịt Sau khi nuôi cấy 24h, môi trường trong suốt, đáy ống có cặn, không có mùi đặc biệt Thạch thường Sau khi nuôi cấy 24h, VK hình thành khuẩn lạc dạng S, khuẩn lạc nhỏ, tròn, lồi, bóng, màu hơi xám. Đường kính khuẩn lạc: 1-2 mm. VK xếp thành chuỗi ngắn. Thạch máu (thỏ,ngựa,cừu ) Sau khi nuôi cấy 24h, VK phát triển tốt, khuẩn lạc dạng S to hơn môi trường thạch thường. Những chủng gây bệnh thì có độc tố, gây dung huyết, trong môi trường thạch máu thì làm tan máu: týp β > týp α > týp γ. - Trong môi trường thạch máu quan sát được: + Týp anpha (α): Khuẩn lạc bao quanh 1 vòng hồng cầu còn nguyên hình nhưng màu xanh, xa khuẩn lạc một chút có vòng tan máu. Liên cầu dung huyết nhóm anpha, độc lực không cao. + Týp bêta (β): Bao quanh KL là 1 vòng tan máu hoàn toàn trong suốt có bờ rõ ràng. Liên cầu dung huyết nhóm bêta, độc lực cao. + Týp gamma (γ): Xung quanh KL ko có sự thay đổi nào, hồng cầu vẫn giữ màu hồng nhạt. Liên cầu không có khả năng dung huyết, thường là những VK không gây bệnh. c. Đặc tính sinh hóa: - Chuyển hóa đường: Lên men các đường sau: 5 + Glucoz + Saccaroz + Lactoz + Salixin + Trêhaloz - Không lên men các đường sau: + Mannit + Inulin - Phản ứng sinh hóa khác: + Indol: (-) + Không làm đông vón huyết tương ( Coagulaz - ) + H 2 S: (-) Thạch Văn Mạnh TYD-K55 d. Cấu trúc kháng nguyên: KN thân (O) KN giáp mô (K) KN bám dính (H) - Nằm trên lớp màng TB - Có vai trò quyết định độc lực gây bệnh của VK chia làm 22 nhóm VK từ A đến V - Là KN nằm ngoài màng - 1 số ít VK có KN giáp mô - Nằm trên pili( lông) VK - Bám chặt vào TB vật chủ. e. Các chất do liên cầu tiết ra:  Độc tố: - Liên cầu nhóm A sinh độc tố mà bản chất của chúng là Protein thường thì độc tố này gây ra nốt ban đỏ trên da. - Dung huyết tố: +) Streptolysin O: Đóng vai trò quan trọng, hầu hết các loại liên cầu làm tan máu đều có độc tố này. + Dễ mất độc tố bởi Oxy và kháng thể cơ thể (antistreptolysin O) + Định lượng kháng thể antistreptolyzin O có giá trị trong chẩn đoán bệnh do liên cầu gây ra. +) Streptolysin S: ko có ý nghĩa quan trọng, nhiều loại VK sản sinh độc tố này. + Không bị mất hoạt tính bởi Oxy, có tính kháng nguyên yếu do vậy nên không có ý nghĩa trong chẩn đoán bệnh.  Enzyme: - Men làm tan tơ huyết ( streptokinaz): + Do các liên cầu nhóm A, C, G sinh ra, làm tan tơ huyết + Tính kháng nguyên cao, kích thích cơ thể hình thành kháng thể ( antistreptokinaz) - Streptodornaz: + Làm lỏng mủ đặc do các liên cầu độc tạo nên + Có 4 loại A, B, C, D chúng có tác dụng khi có mặt ion Mg 2+ - Hyaluronidaz: + Thủy phân axit hyaluronic là chất cơ bản của mô liên kết, giúp VK dễ lan tràn + Kích thích cơ thể hình thành kháng thể đặc hiệu dùng chẩn đoán bệnh. - Diphotpho-Pyridin-Nucleotidaz + Các liên cầu A, C, G làm chết các bạch cầu - Proteinaz: + Phân hủy protein, tiêm liều cao gây thương tổn ở tim. f. Sức đề kháng: Liên cầu khuẩn có sức đề kháng kém với nhiệt độ và hóa chất - Nhiệt độ: 70 0 C/ 35-40ph, 100 0 C/ 1ph - Các chất sát trùng thông thường dễ tiêu diệt được liên cầu. g. Tính gây bệnh: Trong tự nhiên Trong phòng thí nghiệm - Chúng cư trú ở họng và ruột, một số có khả năng gây bệnh: - Ở người: nhiễm khuẩn Eczema, mưng mủ ở - Thỏ là ĐVTN dễ cảm thụ nhất. - Tiêm vào dưới da cho thỏ: Áp xe tại nơi viêm Thạch Văn Mạnh TYD-K55 phủ tạng, viêm họng, mẩn đỏ - Ở ĐV: chứng mưng mủ, bệnh biến chung hay cục bộ( viêm vú) + Ở ngựa: bệnh viêm hạch truyền nhiễm Adenitis Equorum + Ở bò: bệnh viêm buồng vú truyền nhiễm của bò sữa, bệnh bại liệt của bê. + Ở dê: chứng nung mủ, viêm vú, viêm phổi và ngoại tâm mạc - Tiêm vào tĩnh mạch hay phúc mạc: thỏ chết nhanh do nhiễm khuẩn huyết. - Có thể dùng chuột nhắt để gây bệnh. 4. Đặc tính sinh học của Trực khuẩn Đóng dấu lợn. ? a. Hình thái: - Trực khuẩn nhỏ, thẳng, có khi hơi cong, kích thước 1 – 1,5 X 0,2 – 0,4 µm. - VK không có lông, không di động, không hình thành nha bào và giáp mô, sinh sản bằng trực phân, sống hiếu khí. - Từ canh khuẩn già hoặc bệnh phẩm lợn mắc bệnh mạn tính thấy VK có hình sợi tơ dài, cong queo. - Trong bệnh phẩm VK đứng riêng lẻ hay từng đôi một, có khi nằm trong bạch cầu. - Bắt màu Gram + , có thể nhuộm với tất cả các thuốc nhuộm kiềm Anilin. b. Đặc tính nuôi cấy: - VK hiếu khí( có thể sinh trưởng trong môi trường yếm khí), nhiệt độ thích hợp 37 0 C, pH: 7,2 – 7,6. Môi trường nước thịt sau 24h, môi trường hơi đục rồi trong, khi lắc có vẩn như mây bay rồi trở lại trong như cũ, đáy ống có ít một ít cặn trắng nhày màu tro. Nếu cho thêm đường glucozo và 10% huyết thanh vào môi trường thì VK mọc rất tốt. Chú ý: nuôi lâu nước thịt trong ra, có giống lại làm môi trường vẩn đục và có mùi thối. Thạch thường sau 24h, VK hình thành khuẩn lạc rất nhỏ, bóng láng( dạng S) hình tròn, rìa gọn, trong như giọt sương. Thạch máu Không dung huyết, sau 24 – 48h, thấy xuất hiện những khuẩn lạc nhỏ, tròn, óng ánh như hạt sương. Thạch huyết thanh 10% khuẩn lạc nhỏ li ti, giống hạt sương, màu xanh lơ nhạt, nhìn qua ánh sáng thấy các khuẩn lạc to có màu xanh lơ rõ, khuẩn lạc nhỏ có màu lơ rất nhạt. Môi trường packer hình thành những khuẩn lạc rất nhỏ mịn, dạng S hoặc những khuẩn lạc dạng R, to hơn, bề mặt không đều và đục. Thạch lỏng VK phát triển tốt, ko di động Gelatin Cấy sâu nuôi ở 28 0 C sau 5 ngày ở đường cấy chích sâu thấy VK mọc ngang ra những lông nhỏ màu xanh tro giống hình bàn chải rửa ống nghiệm. Gelatin ko tan chảy, để lâu, mặt gelatin ở xung quanh vết cấy vẫn khô. c. Đặc tính sinh hóa: - Chuyển hóa đường: Phản ứng thử trong MT đường có 10% huyết thanh và chỉ thị màu andrat ho ặc xanh bromotymon. + Lên men đường: glucoz, galactoz, levuloz, mannoz Thạch Văn Mạnh TYD-K55 + Không lên men đường: saccaroz, mantoz, arabinoz, xyloz, dechtrin, mantion, socbiton, dunxiton, glyxeron, inositon, trihaloz, inulin, xalixin. - Phản ứng sinh hóa: + Phản ứng VP: - + Phản ứng MR: - + Indol: - + Sinh H 2 S: + + Không sinh ure, không gây dung huyết + Catalase: - d. Sức đề kháng: - Vk có thể sống được 17-35 năm trong môi trường dịch thể khi nút kín miệng ống nghiệm. - Trong phủ tạng lợn chết: 4 tháng; lợn chết chôn dưới đất: 9 tháng. - Sấy khô Vk chết trong 3 tuần - Chỗ ẩm, tối ở 37 0 C: sống 1 tháng. - Có ánh sáng mặt trời sống 12 ngày. - Nhiệt độ cao dễ dàng giết VK: trong canh khuẩn đun 70 0 C/ 5 phút; 100 0 C chết ngay. Thịt có VK cắt dày 15 cm phải nấu sôi 100 0 C/ 2h30ph vẫn chưa diệt được VK. - Những chất hóa học sát trùng thông thường đều diệt được Vk: clorua vôi 1%, NaOH 5%, axit pheic 1%. e. Tính gây bệnh: Trong tự nhiên Trong phòng thí nghiệm + Lợn đặc biệt lợn con, lợn 3-4 tháng tuổi cho đến 1 năm tuổi rất mẫn cảm. + Loài chim cũng cảm thụ ở mức độ nặng nhẹ theo thứ tự: Bồ câu, gà, vịt, ngan, ngỗng, vẹt, sáo, chim sẻ. + Triệu chứng ở chim: mào tái, suy nhược, ỉa chảy. Bệnh tích: xuất huyết niêm mạc và bắp thịt, gan lách tụ máu, sưng to. + Trâu, bò, dê, chó cũng mắc. + Người cũng mắc: sốt cao, nổi nốt đỏ trên da, đầu các khớp xương và hạch sưng. + Chuột bạch: cảm thụ nhất. Tiêm S.C chuột canh khuẩn 24h với liều 0,3-0,4 ml sau từ 2-6 ngày tuổi chuột bị bại huyết và chết, trước khi chết chuột sợ ánh sáng, viêm sưng giác mạc. Bệnh tích: phổi sưng, tụ máu, lách sưng, gan màu tro, nát. + Bồ câu: mẫn cảm. Tiêm S.C hoặc I.M canh khuẩn 24h liều 1ml. Sau 3-4 ngày chết. Trước khi chết: 2 chân bại, thở khó. Bệnh tích: chỗ tiêm sưng tụ máu, tim sưng, viêm ngoại tâm mạc có tích nước, gan thận viêm tụ máu. Có thể tăng độc lực của VK qua tiêm truyền nhiều lần qua bồ câu. + Thỏ: cảm thụ kém. Tiêm vi khuẩn vào I.V, thỏ chết sau 3-6 ngày, kết quả ko chắc chắn. 5. Chẩn đoán vi khuẩn học bệnh Đóng dấu lợn. ? a. Lấy bệnh phẩm: - Thể cấp và mạn tính lấy máu tim và lách - Bại huyết lấy gan, thận - Mắc bệnh cấp tính hoặc bại huyết mà không chết, chuyển sang thể mạn tính thì lấy tủy sương ( tốt nhất là đốt sống 3-5) b. Kiểm tra bằng KHV: - Lấy bệnh phẩm làm tiêu bản rồi nhuộm gram hoặc Vrait thấy VK ngắn, nhỏ, tập trung nhiều trong bạch cầu. - Ở lợn mắc bệnh mạn tính VK có hình sợi dài. c. Nuôi cấy vào môi trường thích hợp: Thạch Văn Mạnh TYD-K55 - Dùng bệnh phẩm cấy vào môi trường Packer là tốt nhất. - Nếu bệnh phẩm đã thối đem nghiền với nước sinh lý tiêm S.C bồ câu ( không I.M) sau đó phân lập VK lấy từ máu tim hoặc gan của bồ câu chết. Nuôi cấy vào các môi trường và quan sát tính chất mọc, thử các phản ứng sinh hóa: VP, MR, Indol, H 2 S. d. Tiêm ĐVTN: - Tiêm canh khuẩn hay bệnh phẩm S.C cho chuột bạch, S.C hay I.M cho bồ câu, theo dõi triệu chứng, thời gian chết và mổ khám xem bệnh tích. 6. Chẩn đoán huyết thanh học bệnh đóng dấu lợn. ? - Thường dùng huyết thanh nghi -> chỉ áp dụng để chẩn đoán bệnh ở thể thứ cấp hoặc mạn tính ( vì lúc đó huyết thanh lợn bệnh mới có kháng thể đặc hiệu) - Các phương pháp: + Phản ứng ngưng kết ( thường dùng) + Phản ứng miễn dịch huỳnh quang. a. Phản ứng ngƣng kết nhanh trên phiến kính với máu lợn nghi: đơn giản, dễ ứng dụng. b. Nguyên lý: - Đối với các KN hữu hình( xác VK) gặp KT đặc hiệu các VK sẽ kết lại với nhau thành đám lớn nhờ cầu nối KT đặc hiệu mà mắt thường có thể quan sát được -> hiện tượng ngưng kết trực tiếp. c. Phƣơng pháp tiến hành: -Chuẩn bị: +KN: VK đóng dấu lợn tiêu chuẩn pha với nước sinh lý: đậm độ 15 tỷ VK/ml. Được giết chết bằng formol và nhuộm màu bằng tím Gientian. +KT: là máu của lợn nghi bệnh. Lấy máu ở tĩnh mạch tai, chống đông bằng natricitrat 5% hoặc lấy huyết thanh. -Tiến hành: + Dùng phiến kính trong sạch: chia 2 phần  1 đầu nhỏ 1 giọt KN ( 0,05ml), 1 giọt máu nghi bệnh  1 đầu nhỏ 1 giọt KN, 1 giọt nước sinh lý ( để đối chứng) + Trộn đều, để 1-2 ph rồi đọc kết quả. + Phản ứng dương tính (+): VK tập trung thành đám màu tím nước xung quanh, trong. + Phản ứng âm tính (-): hỗn dịch có màu tím như giọt đối chứng. 7. Đặc tính sinh học của Pasteurella multocida. ? a. Hình thái: - Là loại cầu trực khuẩn nhỏ, hình trứng hoặc bầu dục, 2 đầu tròn. - Kích thước: 0,25-0,4 x 0,4-1,5 μm. Gram (-) - KHÔNG: lông, di động, nha bào. - Trong cơ thể vật bệnh hình thành lớp giáp mô mỏng nhưng nhuộm xem khó thấy. - Tiêu bản từ bệnh phẩm: VK bắt màu sẫm 2 đầu do nguyên sinh chất dung giải dồn về 2 đầu, tốc độ sinh sản lớn-> VK lưỡng cực. Thạch Văn Mạnh TYD-K55 - Tiêu bản từ canh trùng: VK đứng riêng lẻ hoặc thành chuỗi ngắn. Canh khuẩn già: VK suy yếu, biến dạng, thay đổi hình thái( gậy đài, dùi cui, quả đấm) kích thước lớn hơn bt ( dài 2-3μm). b. Đặc tính nuôi cấy: - VK hiếu khí hoặc hiếu khí tùy tiện. Thích hợp: 37 0 C, pH: 7,2-7,4. - Môi trường thông thường: mọc yếu, có thêm huyết thanh hoặc máu sẽ mọc tốt Môi trƣờng Đặc điểm Nước thịt 24h, canh khuẩn đục vừa, lắc có vẩn như sương mù-> mất, đáy ống có cặn nhày, có khi sinh màng mỏng trên mặt. Có mùi tanh như nước dãi khô. Mọc tốt khi thêm huyết thanh. Thạch thường khuẩn lạc S, nhỏ, trong suốt, mặt vồng. Nuôi lâu có màu trắng ngà dính vào môi trường. Thạch máu không làm dung huyết, kích thước khuẩn lạc to, là môi trường thường dùng để giữ giống VK. Thạch huyết thanh và huyết cầu tố dùng để giám định, phân lập và xác định độc lực.  VK phát triển thành khuẩn lạc đặc biệt: có hiện tượng phát huỳnh quang ( độ 20x, góc đèn 45 0 ). Màu sắc huỳnh quang phụ thuộc độc lực của khuẩn lạc.  Độc lực cao: màu xanh lá mạ chiếm 2/3 diện tích khuẩn lạc về phía đèn, 1/3 còn lại màu vàng cam( dạng Fg)  Độc lực vừa: 1/3 diện tích màu xanh lá mạ, 2/3 màu vàng cam ( dạng Fo)  Độc lực yếu: không phát quang ( dạng Fn)  Xem rõ sau nuôi cấy 24h, mất sau 72h.  Hiện tượng chỉ áp dụng với P.multocida gây bệnh cho trâu bò. Loại gây bệnh cho gà, chủng độc lực cao phát dạng Fo. 8. Chẩn đoán vi khuẩn học bệnh tụ huyết trùng gà. ? 1. Lấy bệnh phẩm: có thể lấy máu tim, gan, lách, tủy xương, phổi, dịch thủy thũng. 2. Tiến hành làm tiêu bản:  Nhuộm Gram hoặc Giemsa ( nếu là máu) rồi tìm VK.  Nếu có P.multocida: VK nhỏ hình trứng, bắt màu thẫm 2 đầu, gram -, không nha bào, không lông, giáp mô khó thấy.  Nếu bệnh mạn tính hoặc thối: khó phát hiện VK trong kính hiển vi. 3. Nuôi cấy vào môi trường thích hợp:  Cấy bệnh phẩm vào các môi trường nuôi cấy thích hợp.  Quan sát tính chất mọc và xác định các phản ứng sinh hóa cần thiết. 4. Tiêm động vật thí nghiệm:  Dùng bệnh phẩm hoặc canh trùng 24h tiêm dưới da hoặc phúc mạc cho thỏ.  Nếu bệnh phẩm có VK tụ huyết trùng gà sẽ phát bệnh, giết chết thỏ với bệnh tích tụ huyết, xuất huyết.  Mổ quan sát bệnh tích. Thạch Văn Mạnh TYD-K55 9. Đặc tính sinh học của vi khuẩn Brucella. ? a. Hình thái và tính chất bắt màu: - Trực khuẩn nhỏ, 2 đầu tròn kích thước 0,6 – 1,5 x 0,5 – 0,7 µm. - Không di động, không sinh nha bào, có giáp mô. - Bắt màu gram – b. Đặc tính nuôi cấy: - Vi khuẩn hiếu khí, nhiệt độ thích hợp 37 0 C, pH: 6,8 – 7,4. - VK mọc tốt trên môi trường cho thêm huyết thanh, máu, gan. Mọc chậm trên môi trường nuôi cấy thông thường. Môi trường nước thịt Đục đều, có váng nhỏ trên mặt, sau lắng cặn lầy nhầy ở đáy. Môi trường thạch nước gan Khuẩn lạc như hạt sương, tròn, lồi, hơi ướt, không có màu sắc Môi trường thạch huyết thanh đứng Cấy theo đường trích sâu, sau 3-6 ngày cách mặt thạch 0,5 cm trở xuống VK mọc theo đường cấy 1-2 cm, khuẩn lạc màu trắng, trắng xám. Môi trường khoai tây Sau 40h, VK mọc thành những khuẩn lạc màu nâu. Môi trường gelatin Không làm tan chảy gelatin. c. Đặc tính sinh hóa: - Không lên men đường. - Có thể phân giải ure nhờ men ureaza. - Sinh H 2 S ( nhờ tính chất ức chế phát triển của VK qua Thionin và Fucsin -> phân loại Brucella) d. Cấu trúc KN: - Mỗi loại Brucella đều có 2 phức hợp KN A và KN M. Giữa các typ có hiện tượng ngưng kết chéo. e. Miễn dịch: - Brucellocis có khả năng MD ( đã mắc rồi khỏi sẽ không mắc lại). - Miễn dịch chống là MD qua trung gian bào, lympho T, đại thực bào f. Sức đề kháng: - Điều kiện lạnh: đề kháng cao 0 0 C trong 8 tháng. - Nhiệt độ: chết 60 0 C sau 30ph, 75 0 C sau 5-10ph, 100 0 C chết ngay. - Trong nước: 6 ngày- 5 tháng, trong sữa sống 6-8 ngày. - Ở lông: 1,5-4 tháng, trong phân sống 45 ngày. - Các chất sát trùng thông thường diệt VK dễ dàng. g. Tính gây bệnh: Trong tự nhiên Trong phòng TN + Ổ chứa là các loài: dê, cừu, bò, trâu, lợn, chó, thú rừng, chim, chuột. + Người cũng mắc bệnh, lây từ động vật ốm. Không lây trực tiếp sang người. + Cảm thụ nhất: chuột lang. Thỏ, khỉ, chuột nhắt cũng nhạy cảm. + Gây bệnh bằng tiêm bệnh phẩm hoặc canh khuẩn dưới da hoặc phúc mạc. + Gây nhiễm khuẩn huyết, xuất hiện sớm. + Sau 10-15 ngày: xuất hiện bệnh tích hạch bẹn sưng, nung mủ, có thương tổn ở khớp, dần xuất hiện mụn lao, nang lao Thạch Văn Mạnh TYD-K55 giả ở lách, hạch, phổi. 10. Chẩn đoán bệnh sảy thai truyền nhiễm Brucellosis bằng phản ứng ngƣng kết. ?  Nguyên lý: Đối với các KN hữu hình( xác VK) gặp KT đặc hiệu các VK sẽ kết lại với nhau thành đám lớn nhờ cầu nối KT đặc hiệu mà mắt thường có thể quan sát được -> hiện tượng ngưng kết trực tiếp. 1. Phản ứng ngƣng kết nhanh trên phiến kính: phản ứng Huddleson - Phản ứng có tính chất định tính. - Chuẩn bị: + KN Huddleson: KN chuẩn Lấy VK Brucella tiêu chuẩn cấy vào môi trường thạch glyxerin có glucoza 48h/37 0 C, rửa bằng nước muối 12% rồi nhuộm bằng tím Gientian, giết VK bằng ax phenic. + KT: dùng huyết thanh gia súc nghi mắc, tươi, trong, không tan máu rồi pha loãng. + Tiến hành:  Dùng tấm kính sạch, chia 4 phần -> làm được với 4 mẫu.  Nhỏ KN lên phiến kính, nhỏ huyết thanh sát cạnh giọt KN đã pha loãng theo hiệu giá khác nhau.  Dùng đũa thủy tinh trộn đều. Hơ qua tấm kính 1-2ph.  Đọc kết quả sau vài ph ( <8ph): Ngưng kết ++++: hỗn dịch mất màu hoàn toàn, cụm ngưng kết lớn màu xanh, tím. Ngưng kết +++: mất màu, nhiều cụm ngưng kết nhỏ xanh, tím. Ngưng kết ++: nhạt màu đi, nhiều cụm ngưng kết nhỏ xanh, tím. Ngưng kết +: mất màu không rõ. Nếu có hiện tượng ngưng kết ở độ pha loãng 1/100-1/200, độ ngưng kết ++ -> dương tính, vật mắc bệnh. 2. Phản ứng ngƣng kết chậm trong ống nghiệm: phản ứng Vrait - Có tính chất định lượng. - Chuẩn bị: + KN Vrait: VK Brucella trong nước sinh lý pha focmon nồng độ đặc 10 tỷ VK. Khi chẩn đoán pha loãng 1/10-> 1 tỷ VK/1ml. + KT: từ gia súc nghi bệnh lấy huyết thanh tươi, trong, không lẫn máu. - Tiến hành: + 10 ống nghiệm, 1 ống đối chứng huyết thanh, 1 ống đối chứng KN, các ống còn lại được pha loãng với nhau để có các hiệu giá khác nhau. + Lắc mạnh ống, 37 0 C/24h rồi để nhiệt độ phòng 1h, đọc kết quả:  Ngưng kết ++++: nước bên trên trong hoàn toàn, lắng cặn nhiều_ dù lộn ngược.  Ngưng kết +++: nước bên trên gần trong hoàn toàn, lắng cặn nhiều.  Ngưng kết ++: nước nổi không trong, trong nước nhiều hạt vẩn, lắng cặn đáy ống.  Ngưng kết +: nước nổi không trong, trong nước nhiều hạt nhỏ lơ lửng, không lắng cặn ở đáy. [...]... 27 Đặc tính sinh học của virus Lở mồm long móng ? a Hình thái phân loại: - Virus LMLM là loại virus nhỏ nhất, thuộc họ Picornavirideae, là virus chứa ARN, kích thước từ 10 -20 nm, - Virus LMLM có 7 typ: typ O, A, C, Asia, SAT1, SAT2, SAT3 Các typ virus LMLM g y những triệu chứng lâm sàng giống nhau, nhưng không g y miễn dịch chéo cho nhau, ví dụ vacxin LMLM typ A không bảo vệ chống lại virus LMLM typ... được - Virus LMLM thường giữ đặc tính của nó khi nhân lên, nhưng không hoàn toàn cố định, mà nó có thể thay đổi từ typ n y sang typ khác như từ typ A; C biến thành typ O hoặc typ O thành typ C, và cũng có khi trong quá trình nhân lên cao độ trong ổ dịch, một sub typ có thể biến dị làm n y sinh một sub typ mới b Đặc tính nuôi c y: - Virus LMLM là một virus hướng thượng bì, do đó thường nuôi c y virus... 6-8nm tập trung trên bề mặt của lớp vỏ hạt virus, bộ gen của virus là một chuỗi đơn ARN, có độ dài 12 KD, virus có 2 glycoprotein E155 và E246KD ở trên bề mặt và 1 nucleocapsit protein 36KD  Cấu trúc kháng nguyên và cấu trúc ARN của virus dịch tả lợn rất giống với virus g y bệnh tiêu ch y ở bò và virus g y bệnh Border ở cừu, do v y cần lưu ý phân biệt trong chẩn đoán huyết thanh học  Về độc lực của virus... Sữa: đông sau 24 – 72h ở 370C + Gelatin, huyết thanh đông, lòng trắng trứng đông: không tan ch y + H2S: + VP: + MR: + + Indon: + + Khử nitrat thành nitrit + Có men decacboxylaz với lyzin, denitin, acginin và glutamic e Cấu trúc kháng nguyên: Thạch Văn Mạnh TYD-K55 - Kháng nguyên O: I, II, III, IV, … có gần 150 typ + Tính chất giống như kháng nguyên O của các vi khuẩn đường ruột khác + Kháng nguyên K... là g y bệnh, 1 /20 0 là nghi ngờ + Ngựa: hiệu giá từ 1/800 trở lên chủng coi là g y bệnh, 1/400 là nghi ngờ - Nếu nghi ngờ sau 7-10 ng y l y máu lần 2 để làm phản ứng 24 Đặc tính sinh học của virus dịch tả lợn ? a.Hình thái cấu trúc:  Là thành vi n của họ Togavirideae, thuộc giống Pestisvirus,nhưng th y bộ gen tương ứng với virus thuộc họ Flavirideae hơn, do đó gần đ y có đề xuất phân loại Pestisvirus... kháng thể n y cũng bị trôi đi khi rửa nước, nên khi quan sát dưới kính hiển vi huỳnh quang không th y phát sáng, đó là phản ứng âm tính, bệnh phẩm không chứa virus dại 30 Đặc tính sinh học của virus Newcastle ? a Hình thái và phân loại: - Virus Newcastle là một ARN virus thuộc họ Paramyxoviridae - Trong họ n y có 9 nhóm virus ký hiệu từ APMV-1 đến APMV-9 (Avian paramyxo virus – APMV) - Virus Newcastle... trường n y thường được sử dụng để nuôi c y virus Khi nuôi c y, virus nhân lên ở nguyên sinh chất, không g y bệnh tích tế bào, sau khi g y nhiễm được 5-6 giờ thế hệ đầu tiên được giải phóng khỏi tế bào, virus lan rộng từ tế bào n y sang tế bào bên cạnh nhờ các cầu nối tế bào chất và virus có thể tồn tại lâu bên trong môi trường tế bào c.Độc lực của virus:  Vius dịch tả lợn là một loại virus duy nhất,... virus sẽ làm h y hoại tế bào nuôi c Sức đề kháng: - Virus LMLM có sức đề kháng cao với ngoại cảnh, với ánh sánh mặt trời chiếu trên đồng cỏ virus sống ít nhất 2 tháng về mùa đông, 2 ng y về mùa hè, trên lông gia súc virus còn hoạt lực sau 4 tuần lễ, trong đất ẩm virus sống hàng năm - Với sức nóng virus dễ bị tiêu diệt, từ 30-370C virus sống 4-9 ng y, 500C virus nhanh chóng bị bất hoạt, 700C virus chết... kháng nguyên không tan 2 Nuôi c y : - Hiếu khí, dễ nuôi c y, nhiệt độ thích hợp : 370C, ( 12 – 420 C), pH : 7 ,2 – 7,4; (6 – 9) Môi trƣờng Đặc điểm 18 – 24 h có những sợi bông lơ lửng dọc ống nghiệm, lắng xuống đ y thành MT nƣớc thịt cặn, có mùi thơm của bánh bích quy bơ khuẩn lạc dạng R, to, nhám, xù xì, đường kính 2 – 3 mm MT thạch thƣờng Thạch Văn Mạnh TYD-K55 MT thạch máu VK không g y dung huyết, mọc... 1/10, 1 /20 , 1/40, 1/160, 1/ 320 , 1/640, 1/ 128 0  Bƣớc 2: - Cho vào tất cả 16 ống nghiệm của 2 d y thí nghiệm, mỗi ống 0 .25 ml nước trứng có chứa virus ở hiệu giá là 4 đơn vị ngưng kết hồng cầu - Lắc đều cả 2 d y để cho huyết thanh và virus trộn lẫn vào nhau, để y n 5-10 phút  Bƣớc 3: - Cho vào tất cả các ống của 2 d y thí nghiệm, mỗi ống 0.5ml hồng cầu gà 1% - ở ống đối chứng dương cho vào 0 .25 ml nước . Mạnh TYD-K55 ĐỀ CƢƠNG ÔN THI HẾT HỌC PHẦN MÔN: Vi Sinh Vật Thú Y Học kỳ I năm học 20 13 -20 14 (Dành cho sinh vi n thú y hệ chính quy) 1. Đặc tính sinh. Phản ứng sinh hóa: + Phản ứng VP: - + Phản ứng MR: - + Indol: - + Sinh H 2 S: + + Không sinh ure, không g y dung huyết + Catalase: - d. Sức đề kháng: