Đồ Án Tốt Nghiệp Đồ Án Tốt Nghiệp ii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN I DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT V DANH MỤC CÁC BẢNG iv DANH MỤC CÁC HÌNH iiv LỜI CẢM ƠN iiiv LỜI MỞ ĐẦU 1 CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 4 1 1 Giới thiệu về cây chuối già 4 1 1 1 Phân loại khoa học 4 1 1 2 Nguồn gốc và phân bố 5 1 1 3 Đặc điểm sinh học 8 1 1 4 Giá trị của cây chuối già 10 1 1 4 1 Làm thức ăn dinh dưỡng 10 1 1 4 2 Làm thuốc 11 1 2 Tình hình nghiên cứu cây chuối già 13 1 2 1 Trên thế giới 13 1 2 2 Nghiên cứu tại Việt Nam 14 1 3 T.
VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP
Thời gian, địa điểm và các nội dung nghiên cứu
- Địa điểm: Phòng Công nghệ tế bào thực vật – Viện Sinh học nhiệt đới, Thành phố Hồ Chí Minh
Thời gian: Đề tài được thực hiện từ tháng 04/05/2020 đến tháng 05/08/2020
- Thí nghiệm 1: Ảnh hưởng của ánh sáng đèn LED lên sự nhân nhanh chồi cây chuối già Cavendish sau 3 lần cấy chuyền
- Thí nghiệm 2: Ảnh hưởng của ánh sáng đèn LED lên sự phát triển cây chuối già Cavendish nuôi cấy in vitro
Nghiên cứu này tiếp tục mở rộng thí nghiệm của Đỗ Đức Thăng và cộng sự (2020) về việc ứng dụng ánh sáng từ đèn LED trong quy trình vi nhân giống cây chuối già Cavendish (Musa spp.) ở giai đoạn cấy chuyền thứ 3.
Vật liệu nghiên cứu
Mẫu dùng trong quá trình nuôi cấy là các chồi của cây chuối già Cavendish (Musa acuminate), được cung cấp bởi phòng Công Nghệ tế bào thực vật thuộc Viện Sinh học nhiệt đới.
Hình 2.1 Mẫu chuối già Cavendish dùng trong nuôi cấy in vitro
Hình 2.2 Đèn huỳnh quang sử dụng trong thí nghiệm
Hình 2.3 Đèn LED P1S5 sử dụng trong thí nghiệm
Hình 2.4 Đèn LED P1S3 dụng trong thí nghiệm
37 Đèn LED HortiPower được sử dụng trong thí nghiệm thuộc công ty HortiPower Asia, Singapore
Tủ cấy vô trùng (Ads Laminaire, Pháp)
Nồi hấp khử trùng (Hirayama, Nhật)
Máy đo pH (Thermo, Mỹ)
Cân phân tích (Sartorius, Đức)
Tủ sấy Đèn huỳnh quang Đèn LED HortiPower
Máy đo diệp lục tố Chlorophyll
- Máy đo cường độ ánh sáng – Lux kế (WALK LAB – Mỹ)
- Pipetman (2-20 àl, 20-200 àl, 200-1000 àl,1000-5000 àl)
- Kẹp, dao mổ, đèn cồn (bằng inox hạn chế sự rét rỉ), và một số thiết bị khác dùng trong phòng thí nghiệm
Các mẫu cấy in vitro được nuôi trong môi trường phù hợp và dưới các tỷ lệ ánh sáng đơn sắc, sử dụng các loại đèn LED khác nhau, tùy thuộc vào mục đích thí nghiệm.
- Môi trường nuôi cấy: môi trường MS bổ sung nước dừa 10% (v/v), 30 g/l đường sucrose, 7.5 g/l agar và 5 mg/l BA
- Thời gian chiếu sáng: 16 giờ/ngày
- Cường độ chiếu sáng: đèn huỳnh quang với cường độ chiếu sáng 24.6 μmol m -2 s -1 và bóng đèn LED P1S3 cường độ chiếu sáng 51.8 μmol m -2 s -1 , P1S5 cường độ chiếu sáng 53.6 μmol m -2 s -1
- Nhiệt độ trung bình ở không gian bên dưới hệ thống chiếu sáng: 25 ± 2°C
- Nguồn sáng: Thí nghiệm sử dụng đèn huỳnh quang, đèn LED.
Phương pháp nghiên cứu
2.3.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát ảnh hưởng của ánh sáng đèn LED lên sự nhân nhanh chồi cây chuối già Cavendish sau 3 lần cấy chuyền
Mục đích của thí nghiệm này là khảo sát ảnh hưởng của ánh sáng đèn LED đối với sự nhân nhanh của chồi chuối Cavendish Đối tượng thí nghiệm được sử dụng là mẫu chồi chuối in vitro, được cung cấp bởi phòng Công nghệ tế bào thực vật thuộc Viện Sinh học nhiệt đới.
Môi trường nuôi cấy: môi trường MS bổ sung nước dừa 10% (v/v), 30 g/L đường sucrose, 7.5 g/l agar và 5 mg/l BA Dụng cụ nuôi cấy trong bịch chịu nhiệt có chứa
Để tiến hành cấy ghép, các chồi có kích thước từ 0.2 đến 0.5 cm của mẫu chuối già lùn ở các lần cấy chuyền thứ 4 (L4), thứ 5 (L5) và thứ 6 (L6) được tách ra thành các chồi riêng lẻ Sau đó, các chồi này được cấy vào môi trường MS có bổ sung 10% nước dừa (v/v).
Nghiên cứu sử dụng môi trường nuôi cấy gồm 30 g/l đường sucrose, 7.5 g/l agar và 5 mg/l BA, được thực hiện dưới ánh sáng LED HortiPower với ba điều kiện ánh sáng khác nhau: huỳnh quang, P1S3 và P1S5 Thí nghiệm được thiết kế theo kiểu đơn yếu tố, bao gồm 3 nghiệm thức và 3 lần lặp lại, mỗi nghiệm thức có 10 bịch và mỗi bịch chứa 10 mẫu.
Chỉ tiêu và cách thức theo dõi:
Số chồi: đếm tổng số chồi trên 1 mẫu cấy ban đầu (số chồi/mẫu)
Chiều cao chồi: đo xác định chiều cao chồi (cm) từ vị trí gốc lên tới đỉnh ngọn
Số lá: đếm số lá hình thành trên chồi (số lá/chồi)
Khối lượng tươi: cân xác định khối lượng tươi (g) của từng mẫu cấy trong bịch
Khối lượng khô: sấy khô mẫu tươi ở 50 0 C trong 48 giờ sau đó cân chính xác khối lượng khô (g)
Hàm lượng chlorophyll: hàm lượng chlorophyll được xác định bằng máy chlorophyll Meter CL-01 (Hansatech)
2.3.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng của ánh sáng đèn LED lên sự phát triển cây chuối già Cavendish nuôi cấy in vitro
Mục đích của thí nghiệm này là khảo sát ảnh hưởng của ánh sáng đèn LED đến sự phát triển của cây chuối già Cavendish được nuôi cấy in vitro Đối tượng thí nghiệm là các mẫu chồi chuối in vitro, được cung cấp bởi phòng Công nghệ tế bào thực vật thuộc Viện Sinh học nhiệt đới.
Môi trường nuôi cấy bao gồm 10% nước dừa (v/v), 30 g/L đường sucrose, 7.5 g/L agar và 0.4 g/L than hoạt tính Dụng cụ nuôi cây được sử dụng là bịch chịu nhiệt, mỗi bịch chứa 40 ml môi trường nuôi cấy.
Chồi cây chuối già lùn được cấy vào môi trường MS với 10% nước dừa, 30 g/l đường sucrose, 7.5 g/l agar và 0.4 g/l than hoạt tính trong lần cấy chuyền thứ 6 Quá trình nuôi cấy diễn ra dưới ánh sáng đèn LED HortiPower với ba điều kiện ánh sáng khác nhau: huỳnh quang, P1S3 và P1S5 Thí nghiệm được thiết kế theo kiểu đơn yếu tố, bao gồm 3 nghiệm thức với 3 lần lặp lại, mỗi nghiệm thức có 10 bịch và mỗi bịch chứa 10 mẫu.
Chỉ tiêu và cách thức theo dõi:
Chiều cao của cây: đo xác định chiều cao (cm) cây từ vị trí gốc lên tới đỉnh ngọn
Số lá: đếm số lá hình thành trên cây (số lá/cây)
Số rễ: đếm tổng số rễ trên cây (số rễ)
Chiều dài rễ: đo xác định chiều dài (cm) từ vị trí ra rễ đến chóp rễ
Khối lượng tươi: cân xác định khối lượng tươi (g) của từng mẫu cấy trong bịch
Khối lượng khô: sấy khô mẫu tươi ở 50 0 C trong 48 giờ sau đó cân chính xác khối lượng khô (g)
Hàm lượng diệp lục tố (chlorophyll): hàm lượng chlorophyll được xác định bằng máy chlorophyll Meter CL-01 (Hansatech)
Bố trí nghiệm thức ứng với từng loại đèn
Bảng 2.1 Loại bóng đèn ứng với từng nghiệm thức
STT Nghiệm Thức Loại Đèn
HQ: đèn huỳnh quang với cường độ 24.6 μmol m -2 s -1
P1S3: đèn LED với cường độ 51.8 μmol m -2 s -1
P1S5: đèn LED với cường độ 53.6 μmol m -2 s -1
Chỉ tiêu theo dõi và phương pháp lấy số liệu
Các chỉ tiêu theo dõi được ghi nhận sau 4 tuần nuôi cấy Được xử lý bằng phần mềm Microsoft Excell 2016 và Sas 9.4
