Khảo sát ảnh hưởng của thành phần khoáng và nồng độ Ba, Kinetin, IBA, NAA, IAA đến quá trình tạo chồi và tạo rễ cây Măng Tây (Asparagus Officinalis L.) in vitro

ĐẠI HOC NGUYỄN TẤT THÀNH NGUYEN T/\T THANH THỤC HỌC - THỤC HÀNH - THỤC DANH - THỤC NGHIỆP KHOA CƠNG NGHỆ SINH HỌC KHĨA LUẬN TĨT NGHIỆP KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA THÀNH PHÀN KHOÁNG VÀ NỒNG Độ BA, KINETIN, IBA, NAA, IAA ĐẾN QUÁ TRÌNH TẠO CHỒI VÀ TẠO RẺ CÂY MĂNG TÂY (Asparagus officinalis L.) IN VITRO Sinh viên thực : Hoàng Thị Thúy MSSV : 1600002711 GVHD : ThS ĐỒ Tiến Vinh ThS Mai Thị Phương Hoa TP HCM, 2020 MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i MỤC LỤC .ii TÓM TẮT iv SUMMARY V DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH vi DANH MỤC BẢNG BIẺU vii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT viii ĐẶT • VÁN ĐÈ ix Tính cấp thiết đề tài ix Mục tiêu đề tài X Giới hạn phạm vi nghiên cứu X CHƯƠNG TÓNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Cây Măng Tây 1.1.1 Đặc điểm phân bố 1.1.2 Đặc điểm thực vật 1.1.3 Thành phần hóa học cơng dụng 1.1.4 Giá trị kinh tế 1.2 Phương pháp nhân giống công nghệ sinh học 1.2.1 Nuôi cấy mô 1.2.2 Cơ sở khoa học 1.2.3 Ưu phạm vi ứng dụng 1.3 Các chất điều hòa sinh trưởng thực vật 1.3.1 Nhóm auxin ii 1.3.2 Nhóm cytokinin 1.4 Các cơng trình nghiên cứu nước 1.4.1 Các cơng trình nghiên cứu giới 1.4.2 Các cơng trình nghiên cứu nước CHƯƠNG NỘI DƯNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cứu 10 2.1 Nơi thực 10 2.2 Nội dung nghiên cứu 10 2.3 Phương pháp nghiên cứu 10 2.3.2 Nội dung nghiên cứu 11 2.4 phương pháp thu thập xử lý số liệu 14 2.4.1 Phương pháp thu thập số liệu 14 2.4.2 Xử lý số liệu 14 CHƯƠNG KÉT QƯẢ VÀ THẢO LUẬN 15 3.1 Kết thí nghiệm 1: Vơ trùng mầu 15 3.2 Kết thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng thành phần mơi trường khống đến sinh trưởng phát triển Măng Tây 17 3.3 Kết thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng tỷ lệ BA Kinetin đến q trình ni cấy tạo chồi Măng Tây 20 3.4 Kết khảo sát ảnh hưởng IBA, NAA, IAA đến trình tạo rề Măng Tây in vitro 22 KÉT LUẬN VÀ ĐÈ NGHỊ 25 TÀI LIỆU THAM KHẢO 26 PHỤ LỤC 27 iii TÓM TẮT Măng tây (Asparagus oficinalis) loại thực vật dùng làm rau có giá trị kinh tế cao ưa chuộng thị trường Đề tài: Kháo sát ảnh hưởng thành phần khoáng nồng độ BA, kinetin, IBA, NAA, IAA đến q trình tạo chịi rễ Măng Tây (Asparagus officinalis L.) ìn vitro Được thực từ tháng 10/2019 đến 4/2020 Phịng Ni cấy mô Thực vật, khoa Công nghệ Sinh học, Trường Đại học Nguyễn Tất Thành với mục tiêu xác định thành phần khống thích hợp nồng độ chất điều hịa sinh trưởng thích họp đến q trình tạo chồi tạo rễ Măng Tây (Asparagus oficinalis L.) in vitro Đề tài có bốn nội dung: (Các thí nghiệm bổ trí theo kiểu hồn tồn ngầu nhiên) - Vơ trùng mẫu Măng Tây - Khảo sát môi trường khống ni cấy Măng Tây in vitro - Khảo sát ảnh hưởng tỷ lệ BA Kinetin đến q trình ni cấy tạo chồi Măng Tây - Khảo sát ảnh hưởng IBA, NAA, IAA đến trình tạo rễ Măng Tây in vitro Những kết đạt sau tháng nghiên cứu: - Nồng độ javel 75% 10 phút thích họp để vơ trùng mẫu hạt Măng Tây - Mơi trường LV thích họp để nhân giống Măng Tây - Mơi trường thích họp để tạo chồi Măng Tây: LV bổ sung BA mg/1 - Mơi trường thích họp để tạo rễ Măng Tây: LV bổ sung NAA mg/1 iv DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH Hình 1.1 Cây Măng Tây Hình 2.1 Sơ đồ tổng quan nội dung nghiên cứu 10 Hình 3.1 Vơ trùng mẫu Măng Tây 17 Hình 3.2 Chồi Măng Tây ni cấy mơi trường 19 Hình 3.3 Chồi Măng Tây ni cấy mơi trường có bổ sung kinetin .21 Hình 3.4 Chồi Măng Tây ni cấy mơi trường có bổ sung BA 22 Hình 3.5 Chồi Măng Tây ni cấy mơi trường có bổ sung: IBA; IAA NAA 24 VI DANH MỤC • BẢNG BIỂU Bảng 2.1 Nồng độ javel thời gian thí nghiệm vơ trùng mẫu 11 Bảng 2.2 Mơi trường khống nuôi cấy Măng Tây 12 Bảng 2.3 Nồng độ BA kinetin sử dung nuôi cấy tạo chồi Măng Tây 13 Bảng 2.4 Nồng độ IAA, IBA NAA sử dụng nuôi cấy tạo rề 14 Bảng 3.1 Kết khảo sát nồng độ javel thời gian vô trùng mầu 16 Bảng 3.2 Kết khảo sát mơi trường khống nuôi cấy Măng Tây 19 Bảng 3.3 Kết khảo sát ảnh hưởng nồng độ BA kinetin đến q trình ni cấy tạo chồi Măng Tây 21 Bảng 3.4 Kết khảo sát ảnh hưởng nồng độ IAA, IBA NAA đến trình ni cấy tạo rề Măng Tây 23 vii DANH MỤC CHỮ VIÉT TẮT BA Benzyladenine B5 Môi trường Gamborg 1968 CTV Cộng tác viên IBA Indolebutyric acid LV Môi trường Litvay 1985 MS Môi trường Murashige-Skoog 1962 Môi trường thạch Mơi trường có bổ sung agar g/L NAA a-Naphthalene acetic acid NT Nghiệm thức TN Thí nghiệm ĐHST Điều hịa sinh trưởng WPM Mơi trường Loyd & McCown 1980 V111 ĐẶT VẤN ĐỀ Tính cấp thiết đề tài Măng Tây {Asparagus officinalis L.) có nguồn gốc từ nước Châu Âu (phía bắc Tây Ban Nha, Vương quốc Anh, tây bắc Đức) Ở Việt Nam Măng Tây đà du nhập vào từ năm 1960 - 1970 Măng Tây biết đến loại rau xanh ngon bổ dường, hàm lượng dinh dưỡng cao có nhiều dược tính Mãng Tây chứa nhiều nước, chất xơ, vitamin khoáng chất nên đem lại nhiều lợi ích cho sức khỏe Măng Tây nguồn cung cấp đạm giúp người lao động trí óc giảm stress, tăng cường sinh lực sức dẻo dai làm việc, chống béo phì chống lão hóa da, ổn định kinh nguyệt, tốt cho sữa mẹ, làm giảm cholesterol, giúp ổn định huyết áp, phòng ngừa xơ vừa động mạch vành bệnh đột quỵ tim mạch hữu hiệu Không biết đến với công dụng rau xanh làm thực phẩm mà Măng Tây cịn biết đến với cơng dụng làm kiểng Măng Tây thị trường sử dụng nhiều dạng, bên cạnh sử dụng măng tươi Măng Tây cịn ngun liệu cho cơng nghệ đồ hộp, mặt hàng xuất có giá trị kinh tế cao Những năm gần đây, để đáp ứng nhu cầu ngày cao thị trường, diện tích trồng Măng Tây tăng lên đáng kể Tuy nhiên, việc đòi hởi nghiêm ngặt điều kiện trồng chăn sóc khả kháng sâu bệnh nên quy mơ trồng Măng Tây cịn hạn chế chưa đáp ứng nhu cầu lớn thị trường Để đáp ứng nhu cầu làm thực phẩm dược liệu với số lượng lón cần phải có nguồn giống Măng Tây có suất cao, nguồn giống bệnh Tuy nhiên, việc phát triển diện tích trồng mang tính tự phát, tính tạp giao tự nhiên phức tạp việc thiếu chiến lược chọn tạo giống họp lý ảnh hưởng lón đến suất chất lượng sản phẩm Măng Tây Đẻ có chiến lược phát triển lâu dài đem lại hiệu kinh tế - kĩ thuật cao, vấn đề tuyển chọn xây dựng quy trình nhân giống lồi cần thiết Hiện nay, Măng Tây chủ yểu nhân giống theo phương pháp truyền thống từ Măng Tây mẹ tách thành 2-4 phần để nhân lên con, phương pháp cho hệ số nhân thấp khó đảm bảo bệnh Nhân giống Măng Tây hạt khó thực có hoa đực hoa khác thân có hoa đực hoa dị hợp từ Nguồn giống nhập nên giá thành hạt giống cao, tỷ lệ nảy IX mầm thấp làm tăng chi phí sản xuất Ni cấy mơ thực vật phương phát quan tâm lĩnh vực ứng dụng đạt nhiều thành công bật công nghệ sinh học thực vật Nhân giống kĩ thuật nuôi cấy mơ sản xuất số lượng lớn giống thời gian ngắn, chất lượng đồng giữ đặc tính ưu việt mẹ, giá thành thấp, kiểm soát mầm bệnh Vì phương pháp nhân giống ni cấy mô in vitro giải pháp khả thi cần nghiên cứu áp dụng Ổ Việt Nam việc nghiên cứu nhân giống Măng Tây chưa nghiên cứu nhiều Việc nghiên cứu xác định quy trình xử lý mẫu in vitro, thành phần khoáng, nồng độ hoạt chất điều hịa sinh trưởng thực vật thích họp cho việc tạo chồi rề Măng Tây in vitro Do đó, tơi thực đề tài “Khảo sát ảnh hưởng thành phần khoáng nồng độ BA, kinetin, IBA, NAA, IAA đến trình tạo chồi rễ Măng Tây (Asparagus officinalis L.) ìn vitro” Mục tiêu đề tài Xác định thành phần khống thích họp nồng độ chất điều hịa sinh trưởng thích họp đến trình tạo chồi tạo rễ Mãng Tây (Asparagus oficinalis L.) in vitro Giói hạn phạm vi nghiên cúu Đề tài thực quy mơ phịng thí nghiệm Thời gian thực hiện: Từ tháng 10/2019 đến tháng 04/2020 X Chương Tổng quan tài liệu CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Cây Măng Tây Măng Tây tên khoa học: Asparagus officinalis L Giới: Plantae Bộ: Asparagales Họ: Asparagaceae Chi: Asparagus Hình 1.1 Cây Măng Tây Loài: A officinalisc 1.1.1 Đặc điểm phân bố Măng Tây hoang dại có nguồn gốc từ Châu Âu, Bắc Phi Tây Á, sau trồng trọt canh tác loại rau xanh nhiều nước giới Pháp, Đức Các nước Tây Âu nơi có nhu cầu tiêu dùng Măng Tây nhiều khí hậu lạnh, mồi năm trồng vụ vào mùa xuân suất không cao Riêng Việt Nam, đặc biệt Lâm Đồng, Đà Lạt, nơi có khí hậu ơn đới quanh năm thích họp cho việc trồng thu hái Măng Tây quanh năm đem lại giá trị kinh tế cao cho người trồng Từ năm 1960 - 1970, nhiều vùng nước ta trồng Măng Tây để chế biến xuất Đông Anh (Hà Nội), Kiến Anh (Hải Phòng) Long Xuyên (An Giang) Thị trường nhập Măng Tây chủ yếu nước Tây Âu, tổng lượng Măng Tây mà nước Tây Âu nhập lên tới hàng trăm ngàn tấn/năm Các nhà hàng nước có nhu cầu tiêu thụ sản phẩm 1.1.2 Đặc điểm thực vật Măng Tây thuộc trồng lâu năm, dạng bụi, thân thảo, có hoa đơn tính khác gốc Có khoảng nửa số mang hoa đục, nửa mang hoa Hoa có màu đỏ Mồi ngăn có - hạt đen, vỏ hạt cứng Hạt Măng Tây nảy mầm nhiệt độ 20°C thích họp 25°c nhiệt độ trung bình cần thiết cho phát tiển Ngay sau hạt nảy mầm rề ngắn bị chết thay vào rề trụ thẳng đứng tạo thành rề khác mọc ngang từ rề trụ Sau khoảng cách gần mặt đất, đốt rề trụ hình thành thân mầm - gọi măng Măng PHỤ LỤC Phụ lục 1: Môi trường LV: NH4NO3 : 1,65 g/1 KNO3 : 1,9 g/1 MgSO4.7H2O : KH2PO4 : 0,34 g/1 CaCl2.2H2O : 0,22 g/1 MyO Inositol : lg/1 NH4NO3 : 1,65 g/1 KNO3 : 1,9 g/1 MgSO4.7H2O : 3,7 g/1 KH2PO4 : CaCl2 : 3,32 g/1 1,85 g/1 Môi trường MS: 1,7 g/1 Môi trường WPM NH4NO3 : 0,4 g/1 K2SO4 : 0,99 g/1 Ca(NO3)24H2O : 0,556 g/1 MgSO4.7H2O : 0,37 g/1 CaCl2 : 0,0725 g/1 KH2PO4 : 0,17 g/1 Môi trường B5 KNO3 : 2,5 g/1 CaCl2.2H2O : 0,15 g/1 MgSO4.7H2O : 0,25 g/1 (NH4)2SO4 : 0,134 g/1 NaH2PO4 : 0,15 g/1 Vi lượng: 5ml vitamin, 5ml vi lượng, 5ml Fe - EDTA, 30g đường 27 Phụ lục xủ LÝ SỐ LIỆU TNl TY LE VO TRUNG The ANOVA Procedure Class Level Information Levels Class T Values VI V2 V3 V4 V5 V6 Number of Observations Read 18 Number of Observations Used 18 The ANOVA Procedure Sum of Source DF Squares Mean Square F Value 28749.93143 5749.98629 2982.19 Pr> F Model F Model F Model