Đánh giá khả năng liên kết β HCG (β subunit of human chorionic gonadotropin) và một số kháng thể thương mại đặc hiệu

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ TP HCM TRƯƠNG KỲ VĂN ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG LIÊN KẾT CỦA β HCG (β SUBUNIT OF HUMAN CHORIONIC GONADOTROPIN) VÀ MỘT SỐ KHÁNG THỂ THƯƠNG MẠI ĐẶC HIỆU LUẬN VĂN THẠC SĨ Chuyên ngành Công Nghệ Sinh Học Mã số ngành 60420201 TP HỒ CHÍ MINH, tháng 10 năm 2021 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ TP HCM TRƯƠNG KỲ VĂN ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG LIÊN KẾT CỦA β HCG (β SUBUNIT OF HUMAN CHORIONIC GONADOTROPIN) VÀ MỘT SỐ KHÁNG THỂ THƯƠNG MẠI ĐẶC HIỆU LUẬN VĂN THẠC SĨ.

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ TP HCM - TRƯƠNG KỲ VĂN ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG LIÊN KẾT CỦA β - HCG (β - SUBUNIT OF HUMAN CHORIONIC GONADOTROPIN) VÀ MỘT SỐ KHÁNG THỂ THƯƠNG MẠI ĐẶC HIỆU LUẬN VĂN THẠC SĨ Chuyên ngành : Công Nghệ Sinh Học Mã số ngành: 60420201 TP HỒ CHÍ MINH, tháng 10 năm 2021 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ TP HCM - TRƯƠNG KỲ VĂN ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG LIÊN KẾT CỦA β - HCG (β - SUBUNIT OF HUMAN CHORIONIC GONADOTROPIN) VÀ MỘT SỐ KHÁNG THỂ THƯƠNG MẠI ĐẶC HIỆU LUẬN VĂN THẠC SĨ Chuyên ngành : Công Nghệ Sinh Học Mã số ngành: 60420201 CÁN BỘ HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS ĐẶNG THỊ MỸ DUNG TP HỒ CHÍ MINH, tháng 10 năm 2021 CƠNG TRÌNH ĐƯỢC HỒN THÀNH TẠI TRƯỜNG ĐẠI HỌC CƠNG NGHỆ TP HCM Cán hướng dẫn khoa học : TS ĐẶNG THỊ MỸ DUNG Luận văn Thạc sĩ bảo vệ Trường Đại học Công nghệ TP HCM ngày … tháng … năm 2021 Thành phần Hội đồng đánh giá Luận văn Thạc sĩ gồm: (Ghi rõ họ, tên, học hàm, học vị Hội đồng chấm bảo vệ Luận văn Thạc sĩ) TT Họ tên PGS.TS Nguyễn Tiến Thắng PGS.TS Ngô Đại Nghiệp TS Nguyễn Hoài Hương TS Nguyễn Hoàng Dũng TS San Trâm Anh Chức danh Hội đồng Chủ tịch Phản biện Phản biện Ủy viên Ủy viên, Thư ký Xác nhận Chủ tịch Hội đồng đánh giá Luận sau Luận văn sửa chữa (nếu có) Chủ tịch Hội đồng đánh giá LV TRƯỜNG ĐH CÔNG NGHỆ TP HCM VIỆN ĐÀO TẠO SAU ĐẠI HỌC CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập – Tự – Hạnh phúc TP HCM, ngày … tháng… năm 20 … NHIỆM VỤ LUẬN VĂN THẠC SĨ Họ tên học viên: TRƯƠNG KỲ VĂN Giới tính: Nam Ngày, tháng, năm sinh: 19 – 04 – 1996 Nơi sinh: Tỉnh Bến Tre Chuyên ngành: Công nghệ sinh học MSHV: 1841880008 I- Tên đề tài: Đánh giá khả liên kết β - hCG (β - subunit of human Chorionic Gonadotropin) số kháng thể thương mại đặc hiệu II- Nhiệm vụ nội dung: Khảo sát đưa kết nghiên cứu khả liên kết β – hCG kháng thể thương mại Khảo sát khoảng nồng độ kháng thể khác nhằm tìm nồng độ tối ưu Khảo sát loại kháng thể khác nhằm tìm cặp kháng thể tối ưu Thử nghiệm gắn cặp kháng thể khảo sát lên cảm biến sinh học III- Ngày giao nhiệm vụ: 15 – 05 – 2021 IV- Ngày hoàn thành nhiệm vụ: 16 – 06 – 2021 V- Cán hướng dẫn: TS ĐẶNG THỊ MỸ DUNG CÁN BỘ HƯỚNG DẪN (Họ tên chữ ký) KHOA QUẢN LÝ CHUYÊN NGÀNH (Họ tên chữ ký) i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi Các số liệu, kết nêu Luận văn trung thực chưa công bố cơng trình khác Tơi xin cam đoan giúp đỡ cho việc thực Luận văn cảm ơn thông tin trích dẫn Luận văn rõ nguồn gốc Học viên thực Luận văn (Ký ghi rõ họ tên) ii LỜI CÁM ƠN Luận văn hồn thành Phịng thí nghiệm sinh học thuộc Viện Công Nghệ Nano - Đại học Quốc gia Thành phố Hồ Chí Minh Để có luận văn em xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành sâu sắc đến cô Đặng Thị Mỹ Dung hướng dẫn, giúp đỡ em với dẫn khoa học hữu ích suốt q trình triển khai, nghiên cứu tạo điều kiện để em hoàn thành tốt luận văn Em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến quý thầy cô trường Đại học Cơng nghệ Tp.HCM nói chung thầy Viện Khoa Học Ứng Dụng nói riêng truyền đạt cho em kiến thức, kỹ chuyên môn để tạo điều kiện thuận lợi cho em suốt thời gian qua Đồng thời, em xin gửi lời cảm ơn đến chị Lê Thị Vân Anh, chị Lâm Hồng Phương, chị Lê Thị Mai, em Đinh Trịnh Minh Đức cán nghiên cứu phịng thí nghiệm nhiệt tình giúp đỡ suốt ngày thực luận văn Xin chân thành cảm ơn TRƯƠNG KỲ VĂN iii TÓM TẮT Human chorionic gonadotropin (hCG) thường sử dụng để phát theo dõi thai kỳ Định lượng hCG giúp cung cấp thông tin cần thiết để đưa chẩn đoán phù hợp Một que thử LFA thị trường định tính hCG, muốn định lượng hCG cần phải tiến hành nhiều xét nghiệm sinh hóa phức tạp kit ELISA xét nghiệm miễn dịch sở y tế Một cảm biến sinh học phát triển nhằm định lượng hCG thông qua que thử LFA có chứa kháng thể Luận văn nhằm giải hai vấn đề Phần thứ khảo sát kháng thể thương mại nhằm chọn cặp kháng thể phù hợp cho LFA dựa nguyên tắc Sandwich ELISA, tỉ lệ kháng thể tối ưu cho cảm biến sinh học Phần thứ hai cố định kháng thể lên màng nitrocellulose, kiểm tra khả hoạt động que thử LFA thiết kế Kết cho thấy kháng thể đơn dịng khảo sát, cặp kháng thể β1- mAb (INN-hCG-2) β4 – mAb (INN-hCG-24 ) cho kết tối ưu Trong đó, nồng độ kháng thể bắt giữ β1- mAb 4.000 ng/ml nồng độ kháng thể phát β4 – mAb 4.000 ng/ml Sau đó, kháng thể β1 – mAb cố định lên màng nitrocelluolose vị trí vạch thử nghiệm (test line) để làm kháng thể bắt giữ Kháng thể β4 – mAb liên hợp với vật liệu nano vàng đưa lên đệm liên hợp LFA Thử nghiệm với mẫu hCG tái tổ hợp cho thấy cặp kháng thể thành công việc phát hCG thơng qua tín hiệu màu đỏ (màu vật liệu nano vàng) vạch thử nghiệm Cung cấp thơng tin hữu ích, làm sở cho nghiên cứu nhằm tối ưu khả định lượng cảm biến sinh học xây dựng quy trình chuẩn phục vụ cho việc khảo sát kháng thể khác nhiều lĩnh vực iv ABSTRACT Human chorionic gonadotropin (hCG) is commonly used for detection and monitoring of pregnancy Quantification of hCG helps to provide the necessary information to make appropriate diagnoses An ordinary LFA test strip can only identify hCG, while to quantify hCG, it is necessary to conduct a lot of complex biochemical tests using ELISA kits or immunoassays at medical facilities A biosensor was developed for the quantification of hCG via LFA test strips containing antibodies The main purpose of this thesis is to solve the two problems The first part is testing commercial antibodies to select suitable antibody pairs for LFA based on the Sandwich ELISA method, as well as the most optimal antibody ratio for biosensor The second part is attaching the antibodies to the nitrocellulose membrane, testing the performance of the designed LFA test strip The results showed that among the monoclonal antibodies investigated, the β1mAb (INN-hCG-2) and β4 - mAb (INN-hCG-24) antibody pairs gave the best results In which, the concentration of β1-mAb arresting antibody was 4.000 ng/ml and the concentration of β4-mAb detection antibody was 4.000 ng/ml The β1-mAb antibody was attached to the nitrocellulose membrane on the test line as a capture antibody The β4-mAb antibody conjugated to the gold nanomaterial was placed on the conjugated pad of the LFA Testing with the recombinant hCG sample showed that the antibody pair was successful in detecting hCG through the red signal (the color of gold nanomaterials) on the test line Providing useful information as a basis for further studies to optimize the quantitative ability of biosensors, as well as develop standard methods for the investigation of different antibodies in many fields v MỤC LỤC MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Human chorionic gonadotropin (hCG) 1.1.1 Tổng quan hCG 1.1.2 Cấu trúc hCG 1.1.3 Các biến thể hCG 1.1.4 Thụ thể hCG/LH 1.2 Kháng thể hCG 10 1.2.1 Epitope hCG 10 1.2.2 Vùng kháng nguyên đồ epitope hCG hCGβ 11 1.3 Lựa chọn kháng thể khảo sát 13 1.4 Kỹ thuật Western Blot 15 1.4.1 Tổng quan phương pháp Western Blot 15 1.4.2 Nguyên tắc kỹ thuật 17 1.4.2.1 Chuẩn bị mẫu 17 1.4.2.2 Điện di gel polyacrylamide 17 1.4.2.3 Chuyển thẩm lên màng 19 1.4.2.4 Khóa màng 21 1.4.2.5 Kháng thể thứ 22 1.4.2.6 Kháng thể thứ hai 23 1.4.2.7 Phát tín hiệu 24 vi 1.5.1 Tổng quan phương pháp ELISA 25 1.5.2 Phân loại phương pháp ELISA 27 1.5.2.1 Direct ELISA 27 1.5.2.2 Indirect ELISA 28 1.5.2.3 Sandwich ELISA 29 1.6 Kỹ thuật LFA định lượng 31 1.6.1 Tổng quan phương pháp Lateral Flow Assay 31 1.6.2 Một số phương pháp LFA định lượng 32 1.7 Phần mềm ImageJ 33 1.8 Tình hình nghiên cứu LFA 34 CHƯƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 36 2.1 Phương pháp luận 36 2.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu 37 2.3 Nguyên vật liệu 37 2.3.1 Mẫu hCG kháng thể 37 2.3.3 Hóa chất dùng cho Western Blot 38 2.3.4 Hóa chất dùng cho ELISA 39 2.3.5 Hóa chất dùng cho thử nghiệm chế tạo que thử 41 2.4 Thiết bị dụng cụ sử dụng 42 2.5 Bố trí thí nghiệm 44 2.5.1 Sơ đồ thí nghiệm 44 2.5.2 Khảo sát khả bắt cặp loại kháng thể 45 Count Sum Average Variance 4 4 4 24 0.67909 0.74618 0.8661 1.06706 3.49281 5.2327 12.08394 0.169773 0.186545 0.216525 0.266765 0.873203 1.308175 0.503498 7.01E-05 1.85E-05 0.002341 0.00067 0.004271 0.012028 0.19982 hCG- 10 Count Sum Average Variance 4 0.68538 1.01238 1.07627 0.171345 0.253095 0.269068 0.000359 0.001359 0.000294 4 24 1.17812 4.44283 4.20446 12.59944 0.29453 1.110708 1.051115 0.524977 8.35E-07 0.00584 0.048716 0.170417 hCG- 100 Count Sum Average Variance 4 4 4 24 0.92949 0.62842 0.95074 1.53357 3.18248 5.58214 12.80684 0.232373 0.157105 0.237685 0.383393 0.79562 1.395535 0.533618 0.002897 2.53E-05 0.000962 8.83E-06 0.002699 0.000699 0.201682 hCG- 1000 Count Sum Average Variance 1.13578 0.283945 0.002558 0.698 0.1745 3.43E-05 0.99028 0.24757 0.00228 4 24 1.49712 3.30187 4.98661 12.60966 0.37428 0.825468 1.246653 0.525403 0.0041 0.003784 0.002858 0.157116 hCG- 10000 Count Sum Average Variance 4 0.82138 1.06476 0.205345 0.26619 0.00269 0.001755 4 4 24 1.0256 1.41621 4.21126 5.9998 14.53901 0.2564 0.354053 1.052815 1.49995 0.605792 0.00099 5.97E-05 7.24E-05 0.001976 0.254981 Total Count Sum Average Variance ANOVA Source of Variation 24 24 24 24 24 24 4.92734 5.02142 5.81213 7.70974 21.35768 30.54427 0.205306 0.209226 0.242172 0.321239 0.889903 1.272678 0.002978 0.002268 0.001289 0.003398 0.025468 0.032444 SS df MS F P-value F crit Sample Columns Interaction Within 0.31431 24.37415 0.913529 0.332563 0.062862 20.4145 4.87483 1583.105 25 0.036541 11.86678 108 0.003079 Total 25.93455 143 2.69E-14 2.298431 2.8E-99 2.298431 6.77E-21 1.608173 Xử lý thống kê giá trị OD kháng thể β11 Anova: Two-Factor With Replication SUMMARY 100 500 1000 10000 20000 Total hCG- Count Sum Average Variance 4 4 4 24 0.357236 0.431286 0.498231 1.112116 2.553321 4.780076 9.732266 0.089309 0.107822 0.124558 0.278029 0.63833 1.195019 0.405511 0.000583 0.000639 0.000945 0.004987 0.002267 0.009652 0.169673 hCG- Count Sum Average Variance 4 4 4 24 0.351176 0.428146 0.627676 1.015786 2.716071 5.092126 10.23098 0.087794 0.107037 0.156919 0.253947 0.679018 1.273032 0.426291 0.00066 0.00075 0.003711 0.003411 0.043036 0.009731 0.199232 hCG- 10 Count Sum Average Variance 4 4 4 24 0.332006 0.662776 0.668176 1.122286 3.168336 3.749056 9.702636 0.083002 0.165694 0.167044 0.280572 0.792084 0.937264 0.404277 0.000452 0.005798 0.004973 0.000931 0.114475 0.024323 0.135549 hCG- 100 Count Sum Average Variance 4 4 4 24 0.623616 0.365486 0.506121 1.374376 2.587426 5.013641 10.47067 0.155904 0.091372 0.12653 0.343594 0.646857 1.25341 0.436278 0.006822 0.000179 0.00097 1.28E-05 0.022598 0.004295 0.180923 hCG- 1000 Count Sum Average Variance 4 4 4 24 0.726356 0.429776 0.478636 1.190866 2.349046 4.899046 10.07373 0.181589 0.107444 0.119659 0.297717 0.587262 1.224762 0.419739 0.010872 0.000653 0.000933 0.001237 0.015123 0.000881 0.166536 hCG- 10000 Count Sum Average Variance 4 4 4 24 0.382316 0.539466 0.690231 1.413196 3.049056 4.899916 10.97418 0.095579 0.134867 0.172558 0.353299 0.762264 1.224979 0.457258 8.03E-05 0.001575 0.004532 0.001326 0.051249 0.030777 0.187163 Total Count Sum Average Variance 24 24 24 24 24 24 2.772706 2.856936 3.469071 7.228626 16.42326 28.43386 0.115529 0.119039 0.144545 0.301193 0.684302 1.184744 0.004089 0.001877 0.00258 0.002895 0.037777 0.023796 ANOVA Source of Variation Sample Columns Interaction Within SS 0.048151 22.2676 0.474839 1.156321 Total 23.94691 df 5 25 108 143 MS F P-value F crit 0.00963 0.89946 0.484332 2.298431 4.453519 415.9571 7.98E-69 2.298431 0.018994 1.773992 0.023373 1.608173 0.010707 4.3 Khảo sát khả bắt cặp kháng thể có gắn ALP Xử lý thống kê giá trị OD kháng thể β1 Anova: Two-Factor With Replication SUMMARY 100 500 1000 2000 4000 Total Count Sum Average Variance 3 0.2837 0.298825 0.094567 0.099608 3.33E-07 1.25E-05 3 3 18 0.32325 0.424025 0.385588 0.511 2.226388 0.10775 0.141342 0.128529 0.170333 0.123688 3.31E-06 0.002542 0.000322 0.001835 0.001295 Count Sum Average Variance 3 3 3 18 0.2665 0.275475 0.312763 0.294313 0.44375 0.354075 1.946876 0.088833 0.091825 0.104254 0.098104 0.147917 0.118025 0.10816 1.05E-05 3.32E-05 0.000177 9.5E-06 5.59E-05 7.73E-05 0.000472 10 Count Sum Average Variance 3 3 3 18 0.268975 0.281975 0.330025 0.389788 0.530238 0.546113 2.347114 0.089658 0.093992 0.110008 0.129929 0.176746 0.182038 0.130395 9.81E-06 2.26E-05 0.000209 0.001432 0.004136 0.004149 0.002621 50 Count Sum Average Variance 0.27945 0.09315 9.19E-06 3 3 18 0.2787 0.344638 0.513325 1.107375 1.17235 3.695838 0.0929 0.114879 0.171108 0.369125 0.390783 0.205324 1.32E-05 0.000571 0.000421 0.002687 0.008306 0.018318 100 Count Sum Average Variance 3 3 3 18 0.279388 0.421238 0.439194 0.529981 1.445244 1.511988 4.627033 0.093129 0.140413 0.146398 0.17666 0.481748 0.503996 0.257057 2.15E-06 8E-05 0.000145 7.91E-05 0.003817 6.29E-05 0.030608 500 Count 3 3 3 18 Sum Average Variance 0.290063 0.762913 0.922394 1.939225 2.007288 2.315638 8.237521 0.096688 0.254304 0.307465 0.646408 0.669096 0.771879 0.45764 1.18E-05 0.00062 1.11E-05 0.000334 0.006108 0.011984 0.068116 1000 Count Sum Average Variance 3 3 3 18 0.27735 0.799925 1.032363 2.377888 2.908438 4.071656 11.46762 0.09245 0.266642 0.344121 0.792629 0.969479 1.357219 0.63709 4.45E-05 4.58E-05 0.003071 0.000775 0.002269 0.117938 0.221597 10000 Count Sum Average Variance 3 3 3 18 0.3443 1.0349 1.287181 3.114775 4.533894 5.00673 15.32178 0.114767 0.344967 0.42906 1.038258 1.511298 1.66891 0.85121 0.000275 0.002086 5.9E-05 0.006881 0.001707 0.002927 0.375083 Total Count Sum Average Variance 24 24 24 24 24 24 2.289726 4.153951 4.991808 9.58332 13.36182 15.48955 0.095405 0.173081 0.207992 0.399305 0.556742 0.645398 9.32E-05 0.009468 0.016044 0.125715 0.214428 0.322407 ANOVA Source of Variation Sample Columns Interaction Within SS 9.586972 5.967289 5.86383 0.37675 Total 21.79484 df 35 96 MS F 1.369567 348.9809 1.193458 304.1062 0.167538 42.69053 0.003924 143 Xử lý thống kê giá trị OD kháng thể β2 P-value F crit 2.54E-65 2.106465 3.26E-57 2.309202 1.06E-44 1.545596 Anova: Two-Factor With Replication SUMMARY 100 500 1000 2000 4000 Total Count Sum Average Variance 0.3214 0.107133 4.58E-05 3 3 18 0.3156 0.4358 0.4468 0.5492 0.5146 2.5834 0.1052 0.145267 0.148933 0.183067 0.171533 0.143522 3.99E-06 0.000392 0.000265 0.000129 0.000374 0.001055 Count Sum Average Variance 3 3 0.2987 0.3169 0.6753 0.7435 0.6751 0.099567 0.105633 0.2251 0.247833 0.225033 8.63E-07 2.33E-08 0.012527 0.009983 0.004645 18 0.4137 3.1232 0.1379 0.173511 6.49E-05 0.007117 10 Count Sum Average Variance 3 3 3 18 0.3371 0.3816 0.5881 0.4091 0.5847 1.5795 3.8801 0.112367 0.1272 0.196033 0.136367 0.1949 0.5265 0.215561 0.000113 0.000341 0.006342 2.33E-08 0.000202 0.104813 0.034723 50 Count Sum Average Variance 3 3 0.317 0.3647 1.0259 0.84 0.9453 0.105667 0.121567 0.341967 0.28 0.3151 1.26E-06 3.82E-06 0.054731 0.017054 0.011014 18 0.6255 4.1184 0.2085 0.2288 0.00068 0.018636 100 Count Sum Average Variance 3 3 3 18 0.3157 0.3767 0.4267 0.7201 0.6418 0.6627 3.1437 0.105233 0.125567 0.142233 0.240033 0.213933 0.2209 0.17465 4.44E-06 7.18E-05 1.99E-05 0.000162 0.000841 0.001075 0.003121 500 Count Sum Average Variance 3 0.3061 0.5376 0.9459 0.102033 0.1792 0.3153 7.69E-06 0.000512 0.015281 3 18 1.8063 3.1251 4.1663 10.8873 0.6021 1.0417 1.388767 0.60485 0.02648 0.006335 0.015897 0.241098 1000 Count Sum Average Variance 3 3 3 18 0.3522 0.7046 1.5417 3.3106 4.7336 4.7549 15.3976 0.1174 0.234867 0.5139 1.103533 1.577867 1.584967 0.855422 0.000143 0.001598 0.052406 0.001272 0.00203 5.02E-05 0.388316 10000 Count Sum Average Variance 3 3 3 18 0.301 4.0992 10.2583 10.9003 11.3761 11.6472 48.5821 0.100333 1.3664 3.419433 3.633433 3.792033 3.8824 2.699006 2.79E-05 0.175122 0.008065 0.000614 0.000113 0.000126 2.230403 Total Count Sum Average Variance 24 24 24 24 24 24 2.5492 7.0969 15.8977 19.1767 22.6309 24.3644 0.106217 0.295704 0.662404 0.799029 0.942954 1.015183 6.4E-05 0.188111 1.159958 1.297826 1.451098 1.535088 ANOVA Source of Variation Sample Columns Interaction Within SS 95.70522 15.88184 32.77017 1.063962 Total 145.4212 df 35 96 MS F 13.67217 1233.624 3.176367 286.5998 0.936291 84.48038 0.011083 P-value F crit 4.85E-91 2.106465 4.69E-56 2.309202 4.38E-58 1.545596 143 Xử lý thống kê giá trị OD kháng thể β4 Anova: Two-Factor With Replication SUMMARY 100 500 1000 2000 3 3 4000 Total Count 18 Sum Average Variance 0.3039 0.3073 0.3302 0.4254 0.453 0.8855 2.7053 0.1013 0.102433 0.110067 0.1418 0.151 0.295167 0.150294 2.68E-06 1.66E-06 7.69E-06 0.000434 0.000251 0.010553 0.006154 Count Sum Average Variance 3 3 3 18 0.3001 0.3169 0.3795 0.3805 0.4666 0.5006 2.3442 0.100033 0.105633 0.1265 0.126833 0.155533 0.166867 0.130233 1.56E-05 6.58E-06 0.000118 1.64E-05 0.001126 1.26E-06 0.000773 10 Count Sum Average Variance 0.2837 0.094567 5.83E-07 3 0.2877 0.3133 0.0959 0.104433 8.89E-06 3.73E-07 3 18 0.3576 0.4113 0.4859 2.1395 0.1192 0.1371 0.161967 0.118861 3.36E-05 0.000179 4.33E-08 0.000647 50 Count Sum Average Variance 3 3 0.2786 0.3079 0.4408 0.5059 0.092867 0.102633 0.146933 0.168633 9.33E-08 2.33E-08 0.000137 0.000268 0.5496 0.1832 3.48E-05 18 0.72 2.8028 0.24 0.155711 1.81E-05 0.002678 3 3 0.2726 0.3127 0.3995 0.6337 0.090867 0.104233 0.133167 0.211233 6.09E-06 1.92E-06 1.77E-06 0.000503 3 18 0.7101 0.8948 3.2234 0.2367 0.298267 0.179078 2.38E-05 5.83E-07 0.006072 100 Count Sum Average Variance 500 Count Sum Average Variance 3 3 3 18 0.2963 0.4817 0.9978 1.6058 2.6108 3.4742 9.4666 0.098767 0.160567 0.3326 0.535267 0.870267 1.158067 0.525922 2.28E-05 0.000478 0.000643 0.003238 0.022469 0.005934 0.157666 1000 Count Sum Average Variance 3 3 3 18 0.2851 0.6421 1.4951 2.572 4.6533 5.7427 15.3903 0.095033 0.214033 0.498367 0.857333 1.5511 1.914233 0.855017 1.73E-07 6.58E-05 0.000892 0.00505 0.000195 5.82E-06 0.481103 10000 Count Sum Average Variance 3 3 3 18 0.2775 3.8718 10.3402 11.0409 11.4698 11.6544 48.6546 0.0925 1.2906 3.446733 3.6803 3.823267 3.8848 2.703033 2.1E-07 0.002234 0.002483 0.001172 0.004188 0.000856 2.290019 Total Count Sum Average Variance 24 24 24 24 24 24 2.2978 6.5281 14.6964 17.5218 21.3245 24.3581 0.095742 0.272004 0.61235 0.730075 0.888521 1.014921 1.76E-05 0.156451 1.215702 1.360782 1.518162 1.585553 ANOVA Source of Variation Sample Columns Interaction Within SS 99.39974 15.22326 34.7163 0.127358 Total 149.4666 df 35 96 MS F 14.19996 10703.7 3.044652 2295.008 0.991894 747.6734 0.001327 P-value F crit 7.2E-136 2.106465 3.29E-98 2.309202 9.5E-103 1.545596 143 4.4 Kiểm tra tính khả thi cặp kháng thể Xử lý thống kê cặp kháng thể β4-β1 Anova: Two-Factor With Replication SUMMARY 500 1000 2000 4000 5000 Total Count Sum Average Variance 3 3 3 18 0.284939 0.285587 0.490295 0.498936 0.483407 2.02629 4.069454 0.09498 0.095196 0.163432 0.166312 0.161136 0.67543 0.226081 2.05E-07 1.63E-05 0.003141 5.35E-05 0.001427 0.189279 0.066569 100 Count Sum Average Variance 3 3 3 18 0.29413 0.716528 0.644969 0.763433 1.314688 1.568553 5.302301 0.098043 0.238843 0.21499 0.254478 0.438229 0.522851 0.294572 2.56E-07 5E-07 1.14E-05 2.05E-07 0.000282 0.01271 0.023133 250 Count Sum Average Variance 3 3 3 18 0.340386 0.385694 0.395135 0.796295 2.219791 1.551089 5.68839 0.113462 0.128565 0.131712 0.265432 0.73993 0.51703 0.316022 3.64E-07 4.49E-06 6.36E-06 0.00133 0.014051 0.021531 0.063074 500 Count Sum Average Variance 3 3 3 18 0.378042 0.502956 0.498704 0.860048 1.459151 1.491514 5.190415 0.126014 0.167652 0.166235 0.286683 0.486384 0.497171 0.288356 2E-06 2.7E-05 2.32E-08 9.88E-05 5.39E-06 0.001146 0.02462 1000 Count Sum Average Variance 3 3 3 18 0.498327 0.761075 0.722196 1.04065 1.710441 1.713144 6.445833 0.166109 0.253692 0.240732 0.346883 0.570147 0.571048 0.358102 1.73E-06 2.02E-05 0.001197 0.000677 0.005498 0.00047 0.027744 2500 Count Sum Average Variance 3 3 3 18 0.406262 0.98101 2.446481 3.593662 3.922268 3.123059 14.47274 0.135421 0.327003 0.815494 1.197887 1.307423 1.04102 0.804041 8.86E-06 0.0064 0.000135 0.014963 0.000101 1.79E-05 0.203618 5000 Count Sum Average Variance 3 3 3 18 0.412239 0.887571 2.464075 4.917916 5.345326 6.117297 20.14442 0.137413 0.295857 0.821358 1.639305 1.781775 2.039099 1.119135 0.000175 3.66E-05 7.19E-05 0.022158 0.020349 0.000108 0.584971 10000 Count Sum Average 3 0.456805 2.524279 0.152268 0.841426 3 3 18 3.90531 7.50953 5.672428 5.846012 25.91436 1.30177 2.503177 1.890809 1.948671 1.439687 Variance 3.91E-05 6.42E-08 0.058671 0.388391 0.003707 0.010651 0.694519 Total Count Sum Average Variance 24 24 24 24 24 24 3.07113 7.0447 11.56717 19.98047 22.1275 23.43696 0.127964 0.293529 0.481965 0.83252 0.921979 0.97654 0.000592 0.051212 0.181821 0.716601 0.39343 0.409222 ANOVA Source of Variation Sample Columns Interaction Within SS 26.73585 15.11987 12.02241 1.557943 Total 55.43608 df 35 96 MS F 3.819407 235.3507 3.023975 186.3364 0.343497 21.16621 0.016229 P-value F crit 1.66E-57 2.106465 8.56E-48 2.309202 9.8E-32 1.545596 143 Xử lý thống kê cặp kháng thể β1-β2 Anova: Two-Factor With Replication SUMMARY 500 1000 2000 4000 5000 Total Count Sum Average Variance 3 3 3 18 0.26845 0.299799 0.323751 0.437904 0.380651 0.499208 2.209763 0.089483 0.099933 0.107917 0.145968 0.126884 0.166403 0.122765 2.55E-05 1.43E-06 3.77E-07 0.00029 3.66E-05 0.000209 0.000827 100 Count Sum Average Variance 3 3 3 18 0.26739 0.277061 0.31642 0.293464 0.741692 0.5035 2.399527 0.08913 0.092354 0.105473 0.097821 0.247231 0.167833 0.133307 1.19E-06 3.78E-06 2.01E-05 1.08E-06 6.37E-06 0.000442 0.003556 250 Count 3 3 3 18 Sum Average Variance 0.268113 0.280668 0.334003 0.400204 1.622472 0.459696 3.365156 0.089371 0.093556 0.111334 0.133401 0.540824 0.153232 0.186953 1.12E-06 2.57E-06 2.38E-05 0.000163 0.007228 0.001029 0.028028 500 Count Sum Average Variance 3 3 3 18 0.280284 0.279701 0.351215 0.409378 1.000492 0.739729 3.060799 0.093428 0.093234 0.117072 0.136459 0.333497 0.246576 0.170044 1.05E-06 1.51E-06 6.5E-05 0.00014 7.43E-06 0.002155 0.008799 1000 Count Sum Average Variance 3 3 0.310702 0.423699 0.442461 0.503987 1.318853 0.103567 0.141233 0.147487 0.167996 0.439618 1.82E-05 9.11E-06 1.65E-05 2.19E-07 1.14E-05 18 1.00854 4.008242 0.33618 0.22268 4.41E-05 0.01579 2500 Count Sum Average Variance 3 3 3 18 0.309391 1.191165 1.895819 3.561877 3.239197 2.664028 12.86148 0.10313 0.397055 0.63194 1.187292 1.079732 0.888009 0.714527 1.71E-06 0.001992 0.000144 0.000413 0.015203 0.001772 0.155543 5000 Count Sum Average Variance 3 3 3 18 0.252248 0.836875 0.950707 2.245867 3.669718 3.884406 11.83982 0.084083 0.278958 0.316902 0.748622 1.223239 1.294802 0.657768 1.07E-06 4.31E-05 0.000718 0.002749 3.19E-05 0.010141 0.235014 10000 Count Sum Average Variance 3 3 3 18 0.339739 2.548091 3.276069 4.465624 4.983042 5.1467 20.75927 0.113246 0.849364 1.092023 1.488541 1.661014 1.715567 1.153293 3.13E-05 0.000181 0.000732 0.037628 0.103886 0.11063 0.358742 Total Count Sum Average Variance 24 24 24 24 24 24 2.296317 6.137059 7.890445 12.31831 16.95612 14.90581 0.09568 0.255711 0.328769 0.513263 0.706505 0.621075 9.67E-05 0.064067 0.117307 0.287146 0.28518 0.346931 ANOVA Source of Variation Sample Columns Interaction Within SS 18.13073 6.521082 6.589488 0.596508 Total df 35 96 31.8378 MS F 2.590104 416.8429 1.304216 209.8964 0.188271 30.29974 0.006214 P-value F crit 6.87E-69 2.106465 4.75E-50 2.309202 3.11E-38 1.545596 143 Xử lý thống kê cặp kháng thể β1-β4 Anova: Two-Factor With Replication SUMMARY 500 1000 2000 4000 5000 Total Count Sum Average Variance 0.295378 0.098459 2.61E-07 3 3 18 0.30198 0.324802 0.434314 0.430849 0.767369 2.554692 0.10066 0.108267 0.144771 0.143616 0.25579 0.141927 4.87E-06 3.05E-06 0.000366 0.000198 0.002892 0.003531 0.019138 0.014057 0.05378 0.059425 100 Count Sum Average Variance 3 3 3 18 0.285694 0.29417 0.338192 0.340243 0.477302 0.42875 2.164351 0.095231 0.098057 0.112731 0.113414 0.159101 0.142917 0.120242 1.74E-07 1.41E-05 0.000102 7.96E-06 0.000202 2.32E-05 0.000614 250 Count Sum Average Variance 3 3 3 18 0.277022 0.287075 0.321032 0.367126 0.474602 0.511372 2.238229 0.092341 0.095692 0.107011 0.122375 0.158201 0.170457 0.124346 3.41E-06 1.11E-05 5.09E-05 0.000443 0.000814 0.001065 0.001238 500 Count Sum 0.279021 3 3 18 0.29314 0.383403 0.518582 0.828473 0.936655 3.239274 Average Variance 0.093007 0.097713 0.127801 0.172861 0.276158 0.312218 0.17996 2.07E-06 3.23E-06 0.000248 2.79E-05 0.000599 0.002268 0.008107 1000 Count Sum Average Variance 3 3 3 18 0.299235 0.365411 0.417596 0.595567 1.069991 1.203307 3.951107 0.099745 0.121804 0.139199 0.198522 0.356664 0.401102 0.219506 7.34E-05 2.48E-05 4.25E-05 6.07E-06 0.001082 1.44E-05 0.014717 2500 Count Sum Average Variance 3 3 3 18 0.324508 0.638185 0.976626 1.81039 2.41116 2.853597 9.014466 0.108169 0.212728 0.325542 0.603463 0.80372 0.951199 0.500804 1.92E-06 0.00038 9.11E-05 0.000731 0.007467 0.000999 0.102259 5000 Count Sum Average Variance 3 3 3 18 0.334116 0.725676 1.248623 2.522589 4.035443 4.254252 13.1207 0.111372 0.241892 0.416208 0.840863 1.345148 1.418084 0.728928 0.000208 8.45E-07 0.000355 0.001316 0.006859 0.000904 0.280587 10000 Count Sum Average Variance 3 3 3 18 0.493461 2.48719 2.781082 4.093681 4.963248 5.013362 19.83202 0.164487 0.829063 0.927027 1.36456 1.654416 1.671121 1.101779 0.000748 0.001438 0.000378 0.00099 6.8E-07 0.004355 0.297761 Total Count Sum Average Variance 24 24 24 24 24 24 2.588435 5.392827 6.791356 10.68249 14.69107 15.96866 0.107851 0.224701 0.282973 0.445104 0.612128 0.665361 0.000611 0.057616 0.074404 0.191607 0.323582 0.332395 ANOVA Source of Variation Sample Columns SS 16.41321 5.918077 df MS F 2.344744 2976.058 1.183615 1502.3 P-value F crit 2.9E-109 2.106465 1.8E-89 2.309202 Interaction Within 6.056131 0.075635 Total 28.46305 35 0.173032 219.6207 96 0.000788 143 1.86E-77 1.545596 ... epitope β2 β4 (β2 /4), 13 kháng thể nhận biết epitope β3 β5 (β3 /5) cịn lại kháng thể nhận biết epitope β6 Epitope β2 ? ?β5 có mặt hCG, hCGn, hCG? ? hCG? ?n hCG? ?cf Epitope β6 có hCG? ?, hCG? ?n hCG? ?cf Một số vùng... tài: Đánh giá khả liên kết β - hCG (β - subunit of human Chorionic Gonadotropin) số kháng thể thương mại đặc hiệu II- Nhiệm vụ nội dung: Khảo sát đưa kết nghiên cứu khả liên kết β – hCG kháng thể. .. nghĩa kháng thể đơn dịng có khả nhận biết epitope β1 ? ?β5 có khả bắt biến thể bao gồm: hCG,  hCGn, hCG? ?, hCG? ?n, hCG? ?cf Epitopes β8 β9 nằm hCG? ?CTP xác định có tính đặc hiệu cho hCG tiểu đơn vị β [5]