35 II VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2 3 Địa điểm nghiên cứu Nghiên cứu được tiến hành tại phòng thí nghiệm của Viện Công Nghệ Sinh học – Thực phẩm, nhà F lầu 4, 5,6,7 trường Đại Học Công Nghiệp Thành phố Hồ Chí Minh 2 4 Đối tƣợng nghiên cứu 2 4 1 Mục tiêu nghiên cứu Xây dựng quy trình chế biến cao từ Nấm Vân chi Xác định một số chỉ tiêu có trong Nấm Vân chi Khảo sát công đoạn trích ly Khảo sát công đoạn cô đặc Khảo sát cong thức phối chế cao vân chi 2 4 2 Đối tƣợng nghiên cứu 2 4.
II VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.3 Địa điểm nghiên cứu Nghiên cứu tiến hành phòng thí nghiệm Viện Cơng Nghệ Sinh học – Thực phẩm, nhà F lầu 4, 5,6,7 trường Đại Học Công Nghiệp Thành phố Hồ Chí Minh 2.4 Đối tƣợng nghiên cứu 2.4.1 Mục tiêu nghiên cứu Xây dựng quy trình chế biến cao từ Nấm Vân chi Xác định số tiêu có Nấm Vân chi Khảo sát cơng đoạn trích ly Khảo sát công đoạn cô đặc Khảo sát cong thức phối chế cao vân chi 2.4.2 Đối tƣợng nghiên cứu 2.4.2.1 Đối tƣợng nghiên cứu: Nấm Vân chi (Trametes versicolor) Hình 16 Nguyên liệu Nấm Vân chi 35 2.4.2.2 Phạm vi nghiên cứu: Xác định yếu tố ảnh hưởng, trích ly xây dựng quy trình sản xuất cao từ Nấm Vân chi điều kiện phịng thí nghiệm 2.5 Nội dụng nghiên cứu 2.5.1 Sơ đồ nội dụng nghiên cứu Xác định số tiêu Nấm Vân chi - Độ ẩm - Hàm lượng polyphenol tổng - Hàm lượng flavonoid tổng Vân chi Trích ly Cơ đặc - Syrup - Pepti Phối trộn Khảo sát yếu tố ảnh hưởng đến hàm lượng polysaccharides công đoạn trích ly - Nhiệt độ - Thời gian - Tỉ lệ dung mơi Khảo sát tìm thơng số - Nhiệt độ - Áp suất Tỉ lệ phối cố định Sản phẩm cao Hình 17 Quy trình nội dung nghiên cứu 36 2.5.2 Quy trình sản xuất Cao từ Nấm Vân chi Nấm Vân chi Trích ly Nhiệt độ: 90⁰ C Thời gian: 45p Thể tích nước: 45ml Cô đặc chân không Thời gian: 20p Áp suất: 22,5 inchHg Phối chế 100ml dịch cô đặc 30ml syrup 100 Brix 1% phụ gia Sản phẩm cao Vân chi Hình 18 Quy trình sản xuất cao Vân chi 2.5.3 Thuyết minh quy trình: 2.5.3.1 Nguyên liệu Tiêu chuẩn Nấm Vân chi có màu nâu, khơng bị lẫn tạp chất cát, nilong… 2.5.3.2 Trích ly Cân 1g nấm vào erlen, sau cho 45ml nước trích ly nhiệt độ 90⁰C thời gian 45 phút 37 Lưu ý: Bao kín dung dịch tránh ánh sáng trực tiếp khơng làm bay dung dịch để q trình trích ly hiệu Mục đích: Nhằm tách chiết polysaccharides tan nước bào tử Nấm Vân chi vào nước 2.5.3.3 Cô đặc Cô đặc thiết bị quay chân khơng phịng thí nghiệm Áp suất 22,5inchHg thời gian 20 phút Mục đích: Đuổi nước, thu dịch cao có hàm lượng polysaccharides cao 2.5.3.4 Phối trộn Mục đích nhằm tăng giá trị cảm quan cho sản phẩm, giúp người tiêu dùng dễ sử dụng, giảm giá thành sản phẩm 2.5.3.5 Sản phẩm Yêu cầu dạng lỏng sệt, màu vàng óng Hồn thiện, bao gói, dán nhãn bảo quản sản phẩm nơi thống mát 2.5.3.6 Cảm quan sản phẩm Sản phẩm có vị dịu syrup, hương thơm Nấm Vân chi trích ly, màu vàng óng, dạng lỏng sệt 2.5.4 Cách sử dụng sản phẩm cao Vân chi Sản phẩm dùng trực tiếp mở nắp Sử dụng trước ăn 30 phút Liều lượng: muỗng cà phê/2lần/ngày 2.6 Hóa chất 38 Bảng Bảng hóa chất sử dụng xác định thành phần polyphenols STT Hóa chất Folin- Ciocalteus phenol reagent Nơi sản xuất CTPT C₁ ₀ H₅ ¬NaO ₅S Độ tinh khiết Đức Sodium carbonate anhydrous Na₂ CO₃ ≥ 99,8% Trung Quốc Bảng Bảng hóa chất sử dụng xác định thành phần polysaccharides STT Hóa chất CTPT Nơi sản xuất Độ tinh khiết Phenol C₆ H₆ O Trung Quốc ≥ 99% Acid sulfuric H₂ SO₄ Trung Quốc 95-98% Bảng Bảng hóa chất sử dụng xác định thành phần flavonoids Hóa chất CTPT Nơi sản xuất Sodium Nitrit NaNO₃ Trung Quốc 99 % Alunimium chloride AlCl₃ Trung Quốc 99 % Sodium hydroxide NaOH Trung Quốc 96 % STT Độ tinh khiết 2.7 Dụng cụ 39 Bảng Bảng dụng cụ sử dụng xác định thành phần polyphenols, polysaccharid, flavonoids STT Tên dụng cụ Số lƣợng Erlen 250ml 30 Bình định mức 100ml Berker 100ml, 250ml, 20 500 ml 10 Pipet ml, ml, 10 ml Micro pipet 1000 l Bóp cao su Bình tia Phễu lọc 10 11 12 13 14 15 Đầu típ 1000 l Nhiệt kế, cồn kế Ống nghiệm Giá đỡ ống nghiệm Đũa thủy tinh Nồi 35 30 2 2.8 Thiết bị 40 Bảng Bảng thiết bị sử dụng xác định thành phần polyphenols, polysaccharid, flavonoids STT TÊN THIẾT BỊ NHÃN HIỆU Máy siêu âm Elmasonic S 60 H Tủ sấy Contherm Tủ mát ALASKA Tủ hút TECH LAP Cân phân tích số lẻ Sartorius ag germany Cân kỹ thuật Sartorius ag germany MA150C 23V1 Máy sấy ẩm hồng ngoại Sartorius ag germany MA150C 23V1 Bộ thiết bị cô quay chân DOA-P504-BN không Bếp hồng ngoại Gali 10 Máy quang phổ GENESYS 20 Visible 11 Thiết bị đo quang INNOTEC 2.9 Nội dung nghiên cứu 2.9.1 Xác định thành phần độ ẩm nguyên liệu thành phần có nguyên liệu 2.9.1.1 Xác định độ ẩm nguyên liệu: Cân 1g mẫu vân chi Myanmar đem xác định ẩm thiết bị sấy ẩm hồng ngoại Thực lần để lấy kết trung bình cho loại 2.9.1.2 Xác đinh hàm lƣợng flavonoids: Nguyên tắc: Flavonoids Nấm Vân chi tạo phức màu vàng với dung dịch nhôm clorua Phản ứng dùng để xác định hàm lượng flavonoids tổng có Nấm Vân chi, cường độ màu tỷ lệ thuận với hàm lượng flavonoids xác định bước sóng 510nm 41 Bảng Bảng xây dựng đƣờng chuẩn flavonoids phƣơng pháp UV-VIS với thuốc thử nhôm clorua Số ống M1 M2 M3 Acid Quercetin 0,05 0,2 0,4 0,6 0,8 0 1 6,4 6,4 6,4 (100ppm) Dịch mẫu(ml) NaNO2 5% (ml) 0,3 Lắc để yên phút AlCl3 10% (ml) 0,3 Lắc để yên phút NaOH 1M (ml) Nước cất (ml) 7,4 7,35 7,2 7,0 6,8 6,6 6,4 Nồng độ (Cx) 20 40 60 80 100 Lắc đo quang bước sóng = 510 nm Cách tiến hành: Xây dựng đường chuẩn acid quercetin cách bổ sung dung dịch quercetin 100 ppm chuẩn với thể tích khác vào ống nghiệm, sau cho 0,3 ml dung dịch NaNO₂ vào lắc để yên phút Sau đó, cho thêm tiếp 0,3 ml dung dịch AlCl₃ vào lắc để yên phút, sau bổ sung thêm ml dung dịch NaOH 1M lắc thêm nước cất cho đủ 10 ml đem đo quang bước sóng λ = 510nm Tổng hàm lượng flavonoids biểu thị gam quercetin tương đương (QE) Từ đồ thị đường chuẩn, xác định hàm lượng flavonoids tổng có mẫu nghiên cứu Hàm lượng flavonoids tổng tính theo cơng thức: Hàm lượng flavonoids ( )= x x xK Trong đó: 42 Cx: Hàm lượng flavonoids tổng có dịch trích ly tính tốn từ đường chuẩn (ppm) Vđm: Thể tích định mức mẫu a: Lượng mẫu kiểm tra (g) w: Độ ẩm (%) K: Hệ số pha loãng 2.9.1.3 Xác định hàm lƣợng polyphenols: Nguyên tắc: Phương pháp dựa khả phản ứng với hợp chất phenolic thuốc thử Folin - Ciocalteu Đây hỗn hợp muối phức molybdate/tungstate nhạy chất khử, nên có mặt hợp chất phenolic mơi trường kiềm nhẹ bị khử thành hợp chất có màu xanh có độ hấp thu mạnh bước sóng 765nm Cường độ màu hỗn hợp phản ứng tỷ lệ thuận với nồng độ hợp chất phenolic có dịch trích đo máy quang phổ so màu Dùng acid gallic đồ thị chuẩn để tính hàm lượng phenolic tổng có mẫu phân tích với đơn vị tính gam GAE/g chất khô Nấm Vân chi ta sử dụng để thu nhận dịch trích 43 Bảng Bảng xây dựng đƣờng chuẩn polyphenols phƣơng pháp Folin –Ciocalteu Số ống 10 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 M1 M2 M3 nghiệm Acid gallic (100ppm) 0 1 0 Dịch mẫu (ml) Folin 10% (ml) Lắc để yên phút Na2CO3 7.5% (ml) Nước cất 0,9 0,8 0,7 0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0 10 (ml) Nồng độ (Cx) Lắc ủ nhiệt độ tối ưu đem đo quang bước sóng λ = 765nm Cách tiến hành: Xây dựng đường chuẩn acid gallic cách bổ sung dung dịch acid gallic 100ppm chuẩn với thể tích khác vào ống nghiệm, sau cho ml dung dịch Folin - Ciocalteu vào lắc để yên phút cho Folin - Ciocalteu phản ứng hết với polyphenols Sau đó, cho thêm tiếp 4ml dung dịch Na₂ CO₃ 7,5% vào để tạo pH kiềm, cuối bổ sung thêm nước cất cho đủ 10 ml Đậy kín, lắc ủ điều kiện tối đem đo quang bước sóng λ = 765nm Từ đồ thị đường chuẩn, xác định hàm lượng polyphenols tổng có mẫu nghiên cứu 44 3.3.5 Các thông số cô đặc ảnh hƣởng đến hiệu suất cô đặc polysccharides nấm Vân chi Bảng 13 Kết chạy thực nghiệm STT Mã code Xₐ Xb Y 00 20 22,5 32,67 10 20 28,75 +0 30 22,5 39,25 -0 10 22,5 29,74 +- 30 20 34,37 -+ 10 25 29,29 ++ 30 25 35,16 0- 20 20 31,16 00 20 22,5 32,14 10 0+ 20 25 33,32 3.3.6 Các thơng số trích ly có dung mơi nƣớc ảnh hƣởng đến hiệu ứng trích ly polysaccharides Nấm Vân chi Mianmar Kết chạy tối ưu polysaccharides từ Nấm Vân chi Hình 21 Biểu đồ biểu diễn tƣơng quan biến giá trị polysaccharides 58 Xu hướng lựa chọn điều kiện trích ly tối ưu polysaccharides: Hình 22 Biểu đồ biểu diễn xu hƣớng lựa chọn điều kiện trích ly tối ƣu Hình 23 Biểu đồ biểu diễn xu hƣớngpolysaccharides lựa chọn điều kiện trích ly tối ƣu polysaccharides Nhìn vào xu hướng ta thấy rằng: Ở vùng khảo sát nhiệt độ từ 75 – 95⁰ C theo hình 2.3, ta lựa chọn điều kiện tối ưu 90⁰ C Ta thấy rằng, nhiệt độ 90⁰ C điều kiện trích ly thích hợp hàm lượng polysaccharides cao Trong vùng khảo sát thời gian trích ly từ 30 – 60 phút, yếu tố trích ly tối ưu thời gian trích ly gần 45 phút 60 phút hàm lượng polysaccharides cao Tuy nhiên xu hướng lựa chọn tối ưu 45 phút tiết kiệm thời gian trích ly mà hàm lượng polysaccharides cao Nồng độ dung mơi có vùng khảo sát từ 30 – 60 (dung mơi sử dụng nước) xu hướng lựa chọn nồng độ dung mơi 45% cho hàm lượng polysaccharides cao nhất, đồng thời tiết kiệm dung mơi Cuối cùng, yếu tố lựa chọn thích hợp cho việc trích ly hàm lượng polysaccharides cao nhiệt độ 90⁰ C trích ly 45 phút nồng độ dung môi 45% Theo Lundstedt (1998) cho biết giá trị R2 ≥ 0,8 kết có độ tin cậy cao mơ hình lựa chọn thích hợp Kết mà mơ hình Box - Behken phần mềm xử lý số liệu JMP tối ưu hóa q trình trích ly polysaccharides, giá trị R2 = 0,98 > 0,8 nên mơ hình tuơng thích để tối ưu hóa q trình trích ly polyphenols, kết chấp nhận Ngồi ra, giá trị pvalue = 0,0015< 0,05 nên kết q trình tối ưu có ý nghĩa mặt thống kê 59 Theo hình phụ lục ta kết luận yếu tố ảnh hưởng đến hàm lượng polysaccharides nhiệt độ , thời gian, tỉ lệ Ta có phương trình hồi quy sau: Y₂ = 0.638375X₁ + 0.091X₂ + 0.04225X₃ + 0.013875X₁ X₃ + 0.027375X₁ X₃ + 0.017X₂ X₃ + 0,3568125X₁ ² – 0.012167X₂ ²+ 0.0743333X₃ ² Kết chạy chạy thực nghiệm đặc polysaccharides Hình 24 Biểu đồ biểu diễn tƣơng quan biến giá trị polysaccharides Hình 25 Biểu đồ biểu diễn xu hƣớng lựa chọn điều kiện trích ly tối ƣu polysaccharides 60 Nhìn vào xu hướng ta thấy rằng: Ở vùng khảo sát thời gian cô đặc từ 10-30 phút lựa chọn tối ưu 20 phút thời gian điều kiện đặc thích hợp để trích ly hàm lượng polysaccharides cao Trong vùng khảo sát áp suất cô đặc từ 20-25inchHg, yếu tố trích ly tối ưu áp suất 22,5inchHg cho hàm lượng polysaccharides cao Cuối cùng, yếu tố lựa chọn thích hợp cho việc đặc mẫu để hàm lượng polysaccharides cao thời gian 20 phút cô đặc áp suất 22,5inchHg Theo Lundstedt (1998) cho biết giá trị R2 ≥ 0,8 kết có độ tin cậy cao mơ hình lựa chọn thích hợp (Aida, Shuhaimi et al.) Kết mà mơ hình Box - Behnken phần mềm xử lý số liệu JMP (theo phụ lục F.4 trang F2) tối ưu hóa q trình đặc cao flavonoids giá trị R2 = 0,9 > 0,8 nên mơ hình tuơng thích để tối ưu hóa q trình đặc cao flavonoids, kết chấp nhận Ngoài ra, giá trị pvalue = 0,039 < 0,05 nên kết trình tối ưu có ý nghĩa mặt thống kê Theo hình 18 ta có yếu tố ảnh hưởng đến hiệu suất đặc từ ta có phương trình hồi quy: Y₂ = 3.5X₁ + 0.5816667X₂ + 0.0625X₁ X₂ + 0.6971429X₁ ² – 1.557857X₂ ² 3.3.7 Kết phép thử cảm quan Sau thực đánh giá khảo sát 20 người hội đồng cảm quan cho kết xử lí excel cho ta biểu đồ sau: A B C Hình 26 Đồ thị biểu diễn mức độ yêu thích sản phẩm cao Vân chi 61 Dựa vào biểu đồ ta thấy mẫu cao phối 1g pectin (4.8 điểm) có độ yêu thích cao hai mẫu A (4.25 điểm) C (4.45 điểm) Xét độ lệch chuẩn mức độ đánh giá 20 thành viên hội đồng cảm quan ta thấy mẫu cao A có độ lệch chuẩn cao cho thấy có chênh lệch lớn việc đánh giá mức độ yêu thích cho thấy cảm nhận thành viên hội đồng khác biệt mẫu cao Về mẫu cao B C có độ lệch chuẩn tương đồng với thấp A cho thấy độ tin cậy cao mức độ đánh giá Dựa vào yếu tố cho ta thu nhận kết mẫu cao Vân chi phối 1g pectin sử dụng làm công thức phối chế Ta thu công thức phối chế sau: Dịch cao bào tử Nấm Vân chi 76% Syrup 23% Pectin 1% Sản phẩm cao Vân chi dựa vào kết đánh giá cảm quan cho thấy chấp nhận sản phẩm thị trường 3.4 Kết luận Qua trình nghiên cứu thực đề tài, chúng tơi tìm hàm lượng chất có nguyên liệu Nấm Vân chi Trametes versicolor trích ly hai dung mơi ethanol nước Qua khảo sát ta thấy rằng, trích ly dung mơi ethanol có hiệu methanol hàm lượng polyphenols flavonoids, đồng thời có ý nghĩa với sản xuất thực phẩm Ta có kết sau: Với hàm lượng polysaccharides đạt 11,6 dung môi nước) flavonoids 2,965 0,200và polyphenols 0,91 0,10 (trích ly 0,125 ( tính theo phần trăm) Sau tiến hành khảo sát q trình trích ly hàm lượng polýaccharide mơ hình Box – Behnken với ba yếu tố ảnh hưởng nhiệt độ siêu âm (75-95⁰ C), thời gian trích ly (30-60 phút) nồng độ dung môi nước (30-60) Kết thu là: Đối với hàm lượng polysaccharides vân chi mianma Thời gian trích ly 90 phút, nhiệt độ siêu âm 45⁰ C với nồng độ dung môi 45% (cho hàm lượng 2,13%) Kết thu là: Đối với hàm lượng polysaccharides vân chi Việt Nam Thời gian trích ly 90 phút, nhiệt độ siêu âm 45⁰ C với nồng độ dung môi 45% (cho hàm lượng 1,19%) 62 Sau tìm thơng số tối ưu trích ly hàm lượng polysccharide ta tiến hành chạy mơ hình JMP nhằm tìm thơng số tối ưu cho q trình cô đặc sản phẩm nâm vân chi với hai yếu tố áp suất với thời gian cô đặc 3.5 Kiến nghị Đề tài nghiên cứu tiến hành thực phịng thí nghiệm có quy mơ nhỏ nên đưa kiến nghị sau: Các kết chưa nằm khoảng tối ưu khoảng sát khoảng chưa đủ để đạt kết tối ưu Vì sản phẩm tạo thành chưa phải sản phẩm có chất lượng, hiệu cao Kiến nghị cần có thêm thời gian để khảo sát khoảng yếu tố ảnh hưởng để có kết tối ưu sát đưa sản phẩm có hiệu cao Phịng thí nghiệm với quy mơ nhỏ dụng cụ thiết bị chưa có độ xác cao nên kết có sai xót nhỏ Đồng thời nhóm thực gặp vài trục trặc với việc sử dụng thiết bị đo màu UV-Vis làm chậm trễ trình nghiên cứu Hy vọng thiết bị cải tiến tốt thời gian tới 63 DANH MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO "TCVN 4327:2007 (ISO 5984:2002), Xác định tro thô." Aida, F M N A., M Shuhaimi, M Yazid and A G Maaruf (2009) "Mushroom as a potential source of prebiotics: a review." Trends in Food Science & Technology 20(11): 567575 Aksu, Z., N K Klỗ, S Erturul and G Dönmez (2007) "Inhibitory effects of chromium (VI) and Remazol Black B on chromium (VI) and dyestuff removals by Trametes versicolor." Enzyme and Microbial Technology 40(5): 1167-1174 Bonten, M J., S M Huijts, M Bolkenbaas, C Webber, S Patterson, S Gault, C H van Werkhoven, A M van Deursen, E A Sanders and T J Verheij (2015) "Polysaccharides conjugate vaccine against pneumococcal pneumonia in adults." New England Journal of Medicine 372(12): 1114-1125 Collins, P J., M Kotterman, J A Field and A Dobson (1996) "Oxidation of Anthracene and Benzo [a] pyrene by Laccases from Trametes versicolor." Applied and environmental microbiology 62(12): 4563-4567 Rosario Freixo, M., A Karmali, C Frazão and J M Arteiro (2008) "Production of laccase and xylanase from Coriolus versicolor grown on tomato pomace and their chromatographic behaviour on immobilized metal chelates." Process Biochemistry 43(11): 1265-1274 Ho, C.-Y., C.-F Kim, K.-N Leung, K.-P Fung, T.-F Tse, H Chan and C B.-S Lau (2006) "Coriolus versicolor (Yunzhi) extract attenuates growth of human leukemia xenografts and induces apoptosis through the mitochondrial pathway." Oncology reports 16(3): 609-616 Hsu, W.-k., T.-h Hsu, F.-y Lin, Y.-k Cheng and J P.-w Yang (2013) "Separation, purification, and α-glucosidase inhibition of polysaccharides from Coriolus versicolor LH1 mycelia." Carbohydrate polymers 92(1): 297-306 Hui, K P.-Y., W.-H Sit and J M.-F Wan (2005) "Induction of S phase cell arrest and caspase activation by polysaccharides peptide isolated from Coriolus versicolor enhanced the cell cycle dependent activity and apoptotic cell death of doxorubicin and etoposide, but not cytarabine in HL-60 cells." Oncology reports 14(1): 145-155 64 10 Liu, W., T Ng, S Sze and K Tsui (1993) "Activation of peritoneal macrophages by polysaccharopeptide from the mushroom, Coriolus versicolor." Immunopharmacology 26(2): 139-146 11 Nguyen, L N., F I Hai, S Yang, J Kang, F D Leusch, F Roddick, W E Price and L D Nghiem (2014) "Removal of pharmaceuticals, steroid hormones, phytoestrogens, UV-filters, industrial chemicals and pesticides by Trametes versicolor: role of biosorption and biodegradation." International Biodeterioration & Biodegradation 88: 169-175 12 Wang, H., T.-B Ng, W Liu, V E Ooi and S.-T Chang (1996) "Polysaccharides—peptide complexes from the cultured mycelia of the mushroom coriolus versicolor and their culture medium activate mouse lymphocytes and macrophages." The international journal of biochemistry & cell biology 28(5): 601-607 13 Hoachatcongnghiep.org.vn 14 Agarwood.org.vn 15 Harholt, J., Suttangkakul, A., & Scheller, H V (2010) Biosynthesis of pectin Plant physiology, 153(2), 384-395 16 Cui, J., et al., Characterisation and bioactivity of protein-bound polysaccharides from submerged-culture fermentation of Coriolus versicolor Wr-74 and ATCC-20545 strains Journal of industrial microbiology & biotechnology, 2007 34(5): p 393-402 17 Jönsson, L., et al., Detoxification of wood hydrolysates with laccase and peroxidase from the white-rot fungus Trametes versicolor Applied microbiology and biotechnology, 1998 49(6): p 691-697 18 Collins, P.J., et al., Oxidation of Anthracene and Benzo pyrene by Laccases from Trametes versicolor Applied and environmental microbiology, 1996 62(12): p 4563-4567 19 Nguyen, L.N., et al., Removal of pharmaceuticals, steroid hormones, phytoestrogens, UVfilters, industrial chemicals and pesticides by Trametes versicolor: role of biosorption and biodegradation International Biodeterioration & Biodegradation, 2014 88: p 169-175 20 Kha, T.T., Nghiên cứu số đặc điểm sinh vật học, sinh thái học nấm làm dược liệu mọc gỗ vườn Quốc Gia Ba Vì Hà Nội 2014 21 Hen, Yi, Xie, Mingyong, Zhang, Hui, Wang, Yuanxing, Nie, Shaoping, & Li, Chang (2012) Quantification of total polysaccharides and triterpenoids in Ganoderma lucidum and 65 Ganoderma atrum by near infrared spectroscopy and chemometrics Food Chemistry, 135(1), 268-275 22 Pawar, Harshal A, & D’Mello, Priscilla M (2011) Spectrophotometric estimation of total polysaccharides in Cassia tora gum 23 V K Gupta, S.C Taneja and B.D.Gupta (2010) Comprehensive Bioactive Natural Products: Studium Press LLC 24 Sarker, Satyajit D, & Nahar, Lutfun (2012) An introduction to natural products isolation Natural products isolation, 1-25 25 Raynie, Douglas E (2006) Modern extraction techniques Analytical chemistry, 78(12), 3997-4004 26 DONG, Yan-hong, LI, Shu-jing, ZHENG, Hui-hua, LI, Xue, CHEN, Gui-tang, ZHAO, Liyan, HU, Qiu-hui (2009) Optimization of Ultrasonic-assisted Extraction Technology of Ganoderma lucidum Polysaccharides by Response Surface Methodology [J] Food Science, 16, 018 27 Rodríguez Seoane, Paula, Flórez-Fernández, Noelia, Conde Piđeiro, Enma, & Domínguez González, Herminia (2017) Chapter - Microwave-Assisted Water Extraction Water Extraction of Bioactive Compounds (pp 163-198): Elsevier 28 Vinatoru, M., Mason, T J., & Calinescu, I (2017) Ultrasonically assisted extraction (UAE) and microwave assisted extraction (MAE) of functional compounds from plant materials TrAC Trends in Analytical Chemistry, 97, 159-178 29 Routray, Winny, & Orsat, Valérie (2012) Microwave-assisted extraction of flavonoids: a review Food and Bioprocess Technology, 5(2), 409-424 30 Bastos, Erick L., & Gonỗalves, Letícia C P (2017) Chapter - Microwave-Assisted Extraction of Betalains A2 - González, Herminia Dominguez In M J G Muñoz (Ed.), Water Extraction of Bioactive Compounds (pp 245-268): Elsevier 31 Chemat, Farid, Rombaut, Natacha, Sicaire, Anne-Gaëlle, Meullemiestre, Alice, FabianoTixier, Anne-Sylvie, & Abert-Vian, Maryline (2017) Ultrasound assisted extraction of food and natural products Mechanisms, techniques, combinations, protocols and applications A review Ultrasonics Sonochemistry, 34, 540-560 66 32 Hielscher, T (2005) Ultrasonic production of nano-size dispersions and emulsions, paper presented at 1st Workshop on Nano Technology Transfer ENS Paris.–14–16 December.– Paris France Phụ lục Bảng 14 xử lý số liệu thành phần chất khô nguyên liệu Dung môi Ethanol Độ ẩm Thành phần tổng 14,56 Polyphenol Hàm lƣợng chất khô Flavonoid 13,73 Polysaccharid Nƣớc cất 13,86 Bảng 2: kết xử lý trích ly polysaccharide Phần trăm 7,91 1,25 0,79 0,125 38,74 9,63 2,00 0,10 3,87 0,96 0,200 0,010 Bảng 15 Kết xử lý trích ly polysaccharide Nghiệm thức Mã code Nhiệt độ Thời gian Tỉ lệ Mianmar −−0 75 30 45 1,807 −+0 75 60 45 1,946 000 85 45 45 1,92 +0− 95 45 30 2,44 0−− 85 30 30 1,911 0+− 85 60 30 2,065 0++ 85 60 60 2,154 000 85 45 45 1,98 67 000 85 45 45 1,96 10 0−+ 85 30 60 1,932 11 +0+ 95 45 60 2,554 12 −0− 75 45 30 1,855 13 −0+ 75 45 60 1,896 14 ++0 95 60 45 2,411 15 +−0 95 30 45 2,235 Bảng 3: kết tối ưu cô đặc polysacchide STT 10 Mã code 00 -+0 -0 +-+ ++ 000 0+ Xa 20 10 30 10 30 10 30 20 20 20 Xb 22,5 20 22,5 22,5 20 25 25 20 22,5 25 Y 32,67 28,75 39,25 29,74 34,37 29,29 35,16 31,16 32,14 33,32 Hình 27 Kết xử lý trích ly polysaccharide 68 69 Hình 28 Kết tối ƣu cô đặc polysaccharide 70 71 PHẦN III: PHỤC LỤC ĐÍNH KÈM Hợp đồng thực đề tài nghiên cứu khoa học Thuyết minh đề tài phê duyệt Quyết định nghiệm thu Hồ sơ nghiệm thu (biên họp, phiếu đánh giá, bảng tổng hợp điểm, giải trình, phiếu phản biện) Sản phẩm nghiên cứu (bài báo, vẽ, mô hình, ) 72 ... Phối chế 100ml dịch cô đặc 30 ml syrup 100 Brix 1% phụ gia Sản phẩm cao Vân chi Hình 18 Quy trình sản xuất cao Vân chi 2.5 .3 Thuyết minh quy trình: 2.5 .3. 1 Nguyên liệu Tiêu chuẩn Nấm Vân chi có... Nhiệt độ - Áp suất Tỉ lệ phối cố định Sản phẩm cao Hình 17 Quy trình nội dung nghiên cứu 36 2.5.2 Quy trình sản xuất Cao từ Nấm Vân chi Nấm Vân chi Trích ly Nhiệt độ: 90⁰ C Thời gian: 45p Thể... polysaccacharide 3. 3.2 Độ ẩm Vân chi Myanmar STT Lần Lần Lần Độ ẩm (% ) 14,56 13, 73 13, 86 14,05 % Trung bình 3. 3 .3 Thành phần chất Nấm Vân chi Myanmar sử dụng dung mơi trích ly: 15 14.8 14.6 14.4 14.2 14 13. 8