Nghiên cứu một số biện pháp kỹ thuật để hoàn thiện quy trình nhân nhanh trong nuôi cấy mô hoa phong lữ thảo

TRƢỜNG ĐẠI HỌC HÙNG VƢƠNG KHOA NÔNG – LÂM – NGƢ Phùng Thị Thanh Mai “NGHIÊN CỨU MỘT SỐ BIỆN PHÁP KỸ THUẬT ĐỂ HỒN THIỆN QUY TRÌNH NHÂN NHANH TRONG NI CẤY MƠ HOA PHONG LỮ THẢO” KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Nhóm ngành: Khoa học trồng Giảng viên hướng dẫn 1: ThS Trần Thành Vinh 2: ThS Nguyễn Viết Dũng Phú Thọ, 2017 LỜI CẢM ƠN Để hồn thành đề tài khóa luận này, em ln nhận nhiệt tình giúp đỡ nhiều mặt thầy giáo gia đình Em xin chân thành bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến: ThS Trần Thành Vinh tận tình hướng dẫn, giúp đỡ em suốt trình thực đề tài khóa luận TS.Lê Đức Thảo,Trưởng mơn Đột biến & Ưu lai, Th.s Nguyễn Viết Dũng, Viện Di truyền Nơng nghiệp tận tình hướng dẫn, giúp đỡ, bảo suốt q trình thực khóa luận Xin chân thành cảm ơn giúp đỡ tận tình thầy cô, cán công nhân viên môn Đột biến & Ưu lai, Viện Di truyền Nơng nghiệp Việt Nam, gia đình, người thân toàn thể bạn bè động viên, giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi cho em suốt trình thực khóa luận Qua em xin chân thành cảm ơn thầy cô giáo Trường Đại học Hùng Vương tận tình giúp đỡ, tạo điều kiện cho em thời gian học tập DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT BAP : 6-Benzylaminopurine CT : Cơng thức CV (%) : Sai số thí nghiệm ĐC : Đối chứng Kin : Kinetin (6 –furfrylaminopurine) LSD0,05 : Độ lệch tiêu chuẩn mức ý nghĩa 5% MS : Môi trường Murashige and Skoog TB : Trung bình α – NAA : Axit α – naphtyl axetic PLT : Phong lữ thảo MỞ ĐẦU Đặt vấn đề Phong lữ thảo (Pelargonium Sp) loài hoa đẹp, với to tròn, mềm mại, dịu dàng, vẻ đẹp với màu sắc hoa phong phú đa dạng đỏ, vàng, trắng, phấn hồng…Phong lữ thảo có nguồn gốc từ nước vùng Địa Trung Hải, trồng phổ biến nhiều quốc gia có khí hậu nhiệt đới cận nhiệt đới Từ hoa bắt đầu nở tàn kéo dài tuần Cụm hoa Phong lữ thảo rực rỡ thêm vươn thẳng đám xanh mướt, hoa có độ bền lâu, hài hồ với thân cành nên có giá trị thẩm mỹ cao trồng chậu hay trang trí gia đình, khn viên, vườn hoa… Ngoài tác dụng làm đẹp cảnh quan, trồng chậu trang trí; y học, Phong lữ cịn loại thuốc bổ chống suy nhược có khả khử trùng Đặc biệt, cuống hoa, hoa dùng chưng cất tinh dầu hay sản xuất loại nước hoa dành cho nam giới Mặc dù du nhập vào nước ta, song nhờ đặc điểm ưu việt mà hoa Phong lữ thảo người sản xuất người tiêu dùng ưa chuộng loại hoa trồng chậu phát triển, có giá trị kinh tế cao Tuy nhiên, suất chất lượng hoa cung cấp cho thị trường hạn chế Phong lữ thảo giống hoa nhập, chưa đáp ứng nhu cầu sử dụng người tiêu dùng Phương pháp nhân giống hoa Phong lữ thảo chủ yếu giâm cành gieo hạt áp dụng phổ biến nhiên hai phương pháp cịn có mặt hạn chế giống đem giâm nhiễm bệnh, khơng đồng đều… Chính vậy, phương pháp nhân giống ni cấy mô tế bào áp dụng cách phổ biến để khắc phục hạn chế phương pháp cổ điển Với phương pháp này, hoàn tồn tạo quần thể trồng đồng đều, giữ nguyên đặc tính tốt giống mẹ, hệ số nhân giống cao, sớm cho hiệu kinh tế, khơng tốn diện tích nhân giống Vì vậy, để đáp ứng nhu cầu sử dụng nguời tiêu dùng với chất lượng giống cao với số lượng lớn, tiến hành nghiên cứu: “Nghiên cứu số biện pháp kỹ thuật để hồn thiện quy trình nhân nhanh nuôi cấy mô hoa Phong lữ thảo” Mục tiêu đề tài Góp phần xây dựng quy trình nhân nhanh in vitro hoa Phong lữ thảo Ý nghĩa đề tài 3.1 Ý nghĩa khoa học - Kết nghiên cứu cung cấp dẫn liệu khoa học giúp hồn thiện quy trình nhân nhanh giống hoa Phong lữ thảo - Đối với nghiên cứu khoa học: Giúp sinh viên tiếp cận với công tác nghiên cứu khoa học, nâng cao trình độ chuyên mơn đồng thời tạo cho tác phong làm việc đắn, nghiêm túc, sáng tạo, đúc rút kinh nghiệm thực tế 3.2 Ý nghĩa thực tiễn Qua kết nghiên cứu đề tài góp phần hồn thiện quy trình nhân nhanh hoa Phong lữ thảo ứng dụng vào thực tiễn sản suất, nâng cao chất lượng hoa trồng CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Nguồn gốc, vị trí, phân loại hoa Phong lữ thảo Phong lữ thảo (Pelargonium sp) có nguồn gốc Nam Phi, Reunion, Madagascar, Ai Cập Maroc, sau phát triển nước Châu Âu Ý, Tây Ban Nha Pháp vào kỷ 17 Hiện hoa Phong lữ thảo phân bố rộng rãi khắp giới, đặc biệt vùng ôn đới khu vực miền núi vùng nhiệt đới Địa Trung Hải thích hợp cho loại hoa phát triển Phong lữ thảo có: Tên khoa học: Pelargonium sp Chi: Pelargonium Họ: Geraniaceae (Mỏ hạc) Bộ: Geraniales 1.1.1 Đặc điểm thực vật học hoa Phong lữ thảo - Lá : Lá Phong lữ thảo thường có hình dạng trịn, xẻ thuỳ với cưa nhỏ, bên mặt có vịng trịn thẫm, kích thước to, màu xanh sẫm - Hoa: Hoa Phong lữ thảo có dạng chùm, cánh hoa có hình bầu dục, bơng hoa cụm hoa dạng đầu, bao gồm tập hợp lại với Tập hợp nhiều hoa cành hoa - Quả hạt: Quả Phong lữ thảo có dạng nang, dài mảnh, cành hoa có nhiều bơng hoa, bơng sau tàn có có hạt màu đen bên Bình quân cành hoa cho từ 10 - 20 hạt - Thân: Cây Phong lữ thảo thuộc dạng thân bụi, chiều cao trung bình từ 20 đến 50cm, có khả phân cành mạnh nên sản xuất phải cắt tỉa cành để tập trung dinh dưỡng cho cành phát triển tạo tán cho phù hợp với yêu cầu trồng chậu - Rễ: Rễ Phong lữ thảo không ăn sâu có nhiều rễ nhỏ, phát triển theo chiều ngang tầng mặt đất, với số lượng rễ nhiều nên khả hút nước chất dinh dưỡng mạnh, nên trồng chậu cho Phong lữ thảo đường kính chậu thích hợp giúp cho rễ phát triển tốt, tránh ảnh hưởng bất thường thời tiết nắng nóng, khơ hạn 1.1.2 u cầu ngoại cảnh hoa Phong lữ thảo 1.1.2.1 Ánh sáng Ánh sáng yếu tố cần thiết cho sinh trưởng phát triển hoa Ánh sáng cung cấp lượng cho phản ứng quang hợp tạo chất hữu cho Để hoa Phong lữ thảo đạt suất, chất lượng cao ánh sáng yếu tố quan trọng ảnh hưởng tới trình hoa Tuy nhiên, để chịu ánh sáng trực tiếp liên tục nhiệt độ cao làm ảnh hưởng tới khả quang hợp lá, làm cho bị héo, làm ẩm ướt, ngồi gây đỏ cuống thân Cường độ ánh sáng nguyên nhân ảnh hưởng tới chiều cao khả hoa Phong lữ thảo (Nguyễn Xuân Linh, 2000) 1.1.2.2 Nhiệt độ Nhiệt độ tối ưu ngày phụ thuộc vào cường độ ánh sáng Phong lữ thảo có nguồn gốc ơn đới nên thích hợp nơi có khí hậu mát mẻ, có biên độ nhiệt độ ngày đêm cao sinh trưởng, phát triển tốt Độ ẩm khơng khí thích hợp 80 - 85%, nhiệt độ thích hợp 18 đến 22 0C ban ngày, ban đêm 15 đến 170C tốt 1.1.2.3 Đất dinh dưỡng Giá thể Phong lữ thảo quan trọng, giá thể trấu hun, xơ dừa, mùn cưa…giá thể giúp cho đứng vững nơi giữ, cung cấp nước, dinh dưỡng cho suốt q trình sinh trưởng, phát triển Ngồi cịn phải cung cấp dinh dưỡng qua đất cách bón loại phân trực tiếp vài đất trồng cung cấp dinh dưỡng qua cách phun loại phân bón thích hợp Đối với đất, Phong lữ thảo trồng loại đất nào, nhiên đất phải có cấu trúc tốt nước Trong suốt q trình trồng, đất phải tơi xốp bề mặt đất phải đủ ẩm Nhìn chung, Phong lữ thảo ưa đất có thành phần giới nhẹ, nhiều mùn có hàm lượng dinh dưỡng cao đất mùn núi, đất phù sa… để đạt hiệu trang trí cao việc phối hợp giá thể xơ dừa, mùn, trấu hun đất khâu quan trọng để hoa Phong lữ thảo đạt suất chất lượng cao 1.1.3 Giá trị sử dụng - Hoa đẹp màu sắc hình dáng hoa lá, trồng làm hoa trang trí phịng khách, bàn làm việc, trang trí khơng gian sinh hoạt gia đình…hay làm quà tặng khách hàng, tặng bạn bè, người thân… - Có thể trồng hoa Phong Lữ thành luống chậu cảnh để xếp thành thảm hoa trang trí màu hay xen kẽ với nhiều màu sắc khác khách sạn, biệt thự, lối nơi cơng viên,…nhìn đẹp mắt sinh động - Ngoài tác dụng làm đẹp cảnh quan, trồng chậu trang trí; y học, Phong Lữ cịn loại thuốc bổ chống suy nhược có khả khử trùng Đặc biệt, cuống hoa, hoa dùng chưng cất tinh dầu hay sản xuất loại nước hoa dành cho nam giới 1.2 Tình hình sản xuất hoa trồng chậu, trồng thảm giới Việt Nam 1.2.1 Tình hình sản xuất hoa trồng chậu, trồng thảm giới Ngày sản xuất hoa trồng chậu, trồng thảm giới phát triển cách mạnh mẽ trở thành ngành thương mại cao Sản xuất hoa trồng chậu, trồng thảm mang lại lợi ích to lớn cho kinh tế nước trồng hoa, cảnh, có nước Châu Á Năm 2000 lượng tiêu thụ hoa chậu giới vào khoảng 20 đến 23 tỷ USD Mỹ nhập khoảng 1/3 lượng hoa chậu giới, sau Đức 20%, đến Pháp Ý Các nước xuất hoa chậu lớn giới Hà Lan, Đan Mạch Bỉ khoảng 1,75 tỷ USD năm 1995 (Lê Xuân Tảo, 2004) [2] Theo Terril A Nell (2004), hoa trồng chậu chiếm phần quan trọng sản xuất trồng hoa Mỹ (20,3% ngành trồng hoa) năm tiểu bang California, Florida, Texas, Pennsylvania, New York chiếm tới 53% sản xuất hoa trồng chậu nước Thời vụ chủ yếu vào mùa xuân mùa hè, đặc biệt tháng tư tháng sáu hoa Phong lữ thảo sản xuất bán thị trường lớn Phong lữ thảo trồng chậu xếp hạng số loại hoa trồng chậu tiêu thụ cao thị trường nước Mỹ Ở Châu Á, Nhật Bản nước sản xuất hoa trồng chậu lớn (chủ yếu phục vụ nội tiêu) năm 1994 diện tích hoa cắt cành khoảng 18.000ha, diện tích hoa trồng chậu 2000ha) Tiếp theo Isarael, Ấn độ số nước Đông Nam Á Nam Á khác Thái Lan, Maylaysia, Hàn Quốc Trung Quốc Hiện nay, Trung Quốc có xu hướng phát triển mạnh hoa trang trí, bao gồm loại hoa như: hoa Báo xuân (Primula), Trạng nguyên, Thu hải đường (Begonia) với diện tích khoảng 60.000ha, loại chủ yếu xuất sang số nước Asean, có miền Bắc Việt Nam Thành phố Cơn Minh thủ phủ tỉnh Vân Nam, Trung Quốc, với lợi thiên nhiên khí hậu tương tự Sapa, thấy Cơn Minh tràn ngập đủ loại hoa đủ màu sắc khác Trên hè phố, vng trồng lấy bóng mát trang trí chậu hoa nhỏ, màu sắc sặc sỡ Sản xuất hoa xem ngành chủ chốt Côn Minh, nơi cung cấp 70% hoa tươi cho Trung Quốc 1.2.2 Tình hình sản xuất hoa trồng chậu, trồng thảm Việt Nam Tại Việt Nam, sản xuất hoa chậu chủ yếu tập trung số tỉnh phía Nam Gị Vấp, Thủ Đức, Vĩnh Long, Tiền Giang, Thành Phố Hồ Chí Minh Đà Lạt nơi sản xuất hoa tiếng nước ta, năm 2003 diện tích trồng hoa Đà Lạt 743ha, đến năm 2005 diện tích tăng lên 1063ha hoa loại đến năm 2009 xấp xỉ 3000ha Hiện Đà Lạt có nhiều cá nhân công ty sản xuất hoa chậu Công ty TNHH Bonie Farm, công ty TNHH Lang Biang, Công ty quản lý cơng trình thị, cơng ty TNHH Ánh Minh, Công ty Dalat Hasfarm nông hộ chuyên bán hoa chậu dọc đường Nguyễn Thị Minh Khai, khu Hồ Bình, điểm du lịch Hoa chậu Đà Lạt cung cấp cho nhu cầu địa phương mà đáp ứng người tiêu dùng nhiều tỉnh, thành nước Mỗi độ xuân về, hoa chậu Đà Lạt theo chuyến xe khắp nẻo đường đất nước để đến với Hà Nội, Đà Nẵng, Nha Trang… đem niềm vui, hương sắc loại hoa ôn đới, làm tô đẹp thêm không gian nhiều nhà Sa Pa, vùng du lịch tiếng khu vực phía Bắc với điều kiện thiên nhiên thuận lợi nên có tiềm phát triển hoa lớn Ngồi loại hoa ơn đới Hồng, Lay ơn, Cẩm chướng, Địa Lan … việc sản xuất hoa trồng chậu, trồng thảm Sapa phát triển nhiên khiêm tốn Thị trường hoa cao cấp phát triển địa bàn tỉnh Lào Cai, chưa có thị trường thương hiệu vùng tiêu thụ lớn Hà Nội, Hải Phòng, Quang Ninh… Một số giống hoa trồng chậu thị trường nước ưa chuộng như: hoa Mào gà (Celosia argentea), Cúc nho (Cineraria), Mai Địa thảo (Impatiens walleriana), Dạ yến thảo (Petunia), Phong lữ thảo (Pelargonium sp.), Thu hải đường (Begonia)….Trong loại hoa Dạ yến thảo, Phong lữ thảo, Thu hải đường trồng quanh năm nơi có khí hậu mát mẻ Đà Lạt, Sapa, Mộc Châu Ngoài ra, loại hoa trồng trang trí thành phố lớn Hà Nội, TP Hồ Chí Minh, Hải Phịng… dịp lễ tết như: 30/4, 1/5, 20/10, tết Dương lịch, Âm lịch… Phong lữ thảo loài hoa đẹp, hoa dày lộ mặt tán, rực rỡ chậu cộng với chiều cao vừa phải, thích hợp cho trang trí phịng khách, cửa sổ…, nhiên u cầu nhiệt độ lồi hoa khơng q khắt khe, Phong lữ thảo yêu cầu nhiệt độ sinh trưởng phát triển tốt khoảng 18 – 22 0C ban ngày khoảng 15 – 17 0C vào ban đêm Hà Nội nơi tiêu thụ, trang trí hoa trồng chậu nhiều qua ngày lễ lớn đất nước Hoa trang trí khắp nơi địa bàn Hà Nội như: Hồ Gươm, Công viên, đường phố lớn Các giống hoa trồng chậu dùng để trang trí chủ yếu Phong lữ thảo, Thu hải đường, Trạng nguyên…được lấy từ nước Đà Lạt, Sapa số từ hoa Cơn Minh Trung Quốc Rõ ràng, hoa trồng chậu, trồng thảm xu hướng phát triển người trồng hoa mà nhu cầu chơi hoa, trang trí khn viên, khách sạn ngày tăng Hoa Phong lữ thảo 38 lượng chồi trước đưa vườn ươm tiến hành thí nghiệm nghiên cứu ảnh hưởng tổ hợp nồng độ α – NAA + Kinetin đến khả rễ Phong lữ thảo Từ nghiên cứu ảnh hưởng riêng rẽ α – NAA đến khả rễ Phong lữ thảo cho thấy nồng độ 0,2 mg/l α – NAA cho số rễ cao nên từ tiến hành thử nghiệm mơi trường MS + 0,2 mg/l α – NAA bổ sung Kinetin nồng độ khác Thí nghiệm bố trí ni cấy mơi trường MS + 0,2 mg/l α NAA có bổ sung - mg/l Kin Tiêu chuẩn chồi chọn để chuyển sang môi trường tạo rễ: chồi cao - cm, có - lá, chồi cứng cáp, sinh trưởng phát triển tốt Kết sau tuần nuôi cấy thể bảng 4.6: Bảng 3.6 Ảnh hưởng tổ hợp nồng độ α-NAA Kinetin tới khả tạo rễ in vitro Phong lữ thảo sau tuần nuôi cấy Công thức α –NAA Kinetin Tỷ lệ tạo Số Chiều dài rễ mg/l mg/l cụm rễ rễ/ mẫu (cm) (%) (rễ) CT1 (Đ/C) 0 0 CT2 0,3 73,33 2,9* 1,42* CT3 83,33 3,7* 2,02* CT4 73,33 3,2* 2,24* CV% 2,0 0,4 LSD0,05 0,09 0,01 Từ bảng 4.6 ta thấy: Công thức MS + 0,3 mg/l α – NAA + 2mg/l Kinetin cho kết tạo cụm rễ tốt với tỷ lệ tạo cụm rễ 83,33%, số rễ trung bình đạt 3,7 rễ/mẫu chiều dài rễ đạt 2,02 cm Ở công thức bổ sung MS + 0,3 mg/l α – NAA + mg/l Kinetin tỷ lệ cụm rễ hình thành đạt 73,33%, số rễ trung bình 3,2 rễ/mẫu, nhiên chiều dài rễ trung bình lại đạt cao 2,24 cm Khi phân tích thống kê mức sai khác nhỏ có ý nghĩa LSD % cho thấy cơng 39 thức có sai khác với đối chứng Tuy nhiên, số rễ trung bình đạt cao công thức bổ sung chiều dài rễ trung bình đạt cao cơng thức bổ sung 0,3 mg/l α – NAA + mg/l Kinetin, nhiên chiều dài rễ trung bình lại đạt cao công thức sung 0,3 mg/l α – NAA + mg/l Kinetin với chiều dài rễ trung bình 2,24 cm Kinetin có tác dụng việc giúp khỏe, xanh tốt tạo điều kiện để rễ phát triển tốt Kết luận: Với nghiên cứu khả rễ Phong lữ thảo cho thấy cơng thức tối ưu hai công thức MS + 30 g/l đường + 6,5 mg/l agar + 0,3 mg/l α – NAA + mg/l Kin cho số rễ trung bình cao đạt 3,7 rễ công thức MS + 30 g/l đường + 6,5 mg/l agar + 0,3 mg/l α – NAA + mg/l Kin cho chiều dài rễ trung bình cao 2,24 cm Từ cho thấy hai cơng thức có khả giúp cho rễ hút nước tốt đưa vườn ươm, nhiên để xác định công thức tốt cho rễ Phong lữ thảo cần phải đưa vườn ươm thử nghiệm để tìm công thức tốt 40 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ Kết luận Từ kết nghiên cứu thí nghiệm tiến hành, rút kết luận sau: - Thời gian thích hợp để khử trùng Phong lữ thảo phút với cồn 700 cho tỷ lệ mẫu 90%, tỷ lệ nhiễm 3,33% tỷ lệ chết 6,67% - Môi trường thích hợp để nhân nhanh chồi Phong lữ thảo MS + 1,5 mg/l BAP + mg/l Kinetin, cho tỷ lệ tạo cụm chồi 90%, số chồi đạt 3,5 chồi chiều cao chồi trung bình 2,21 cm sau tuần ni cấy - Mơi trường thích hợp để rễ Phong lữ thảo MS + 30 g/l đường + 6,5 mg/l agar + 0,3 mg/l α – NAA + mg/l Kin cho số rễ trung bình đạt 3,7 rễ MS + 30 g/l đường + 6,5 mg/l agar + 0,3 mg/l α – NAA + mg/l Kin cho chiều dài rễ trung bình cao 2,24 cm sau tuần ni cấy Đề nghị - Có thể áp dụng kết khử trùng, nhân nhanh chồi nhân giống in vitro Phong lữ thảo - Thử nghiệm cơng thức rễ ngồi vườn ươm để tìm cơng thức tốt rễ Phong lữ thảo môi trường in vitro - Cần tiến hành thử nghiệm nhân tố thí nghiệm khác (nhiệt độ ni cấy, cường độ ánh sáng, hàm lượng muối khoáng…) chất điều tiết sinh trưởng với nồng độ cao chất điều tiết sinh trưởng khác (IAA, 2,4D, TDZ…) nhằm tìm mơi trường thích hợp ni cấy Phong lữ thảo 41 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu nƣớc Hoài Anh (2007), tổng hợp biên dịch, kỹ thuật trồng chăm sóc hoa cảnh dịp tết, Nxb Văn hóa - thơng tin, tr.117 - 118 Lê Xuân Tảo (2004), “Nghiên cứu giải pháp kỹ thuật xây dựng quy trình cơng nghệ sản xuất hoa chậu vùng Hà Nội”, đề tài nghiên cứu khoa học công nghệ, Viện di truyền Nông nghiệp, tr.2-3 Nguyễn Xuân Linh, Nguyễn Thị Kim Lý (2005), ứng dụng công nghệ sản xuất hoa, NXB Lao động, Tr 1- 30 Nguyễn Xuân Linh, năm 2000 Hoa kỹ thuật trồng hoa, nhà xuất Nông nghiệp trang 5- 47 Trần Hợp (1993), Cây cảnh – hoa Việt Nam– NXB Hà Nội Trần Hoài Hương (2008), Nghiên cứu số biện pháp kỹ thuật nhằm phát triển giống hoa trồng thảm cho Hà Nội, Luận văn thạc sĩ nông nghiệp Tài liệu nƣớc Batra A (2001) Micropropagation In: Fundamentals of plant biotechnology, Capital Publishing Company, New Delhi, Calcutta pp 1823 Binns AN, Thomashow MF (1988) Cell biology of Agrobacterium infection and transformation of plants Ann Rev Microbiol 42:575-606 Brian AK, Brian EW, Ingram M, Brenda C (2010) Geranium Leaf Tissue Nutrient Sufficiency Ranges by Chronological Age J Plant Nutr 33(3):339-350 10 Brown JT, Charlwood BV (1986) The accumulation of essential oils by tissue cultures of Pelargonium fragrans (Wild) Fed Eur Biochem Soc 204:117-120 11 Farooqi AA, Sreeram BS (2001) Geranium In: Cultivationsof medicinal and aromatic crop pp 356-362 12 Irfan KA (2001) Role of Biotechnology in Medicinal and Aromatric 42 Plants Razdan, MK Introduction to Plant Tissue culture p 16 13 Jeon JH, Kim HW, Kim MG, Lee HS (2008) Mite control activities of active constituents isolated from Pelargonium graveolens against house dust mite J Microbiol Biotechnol 18(10):1666-1671 14 Karato M, Yamaguchi K, Takei S, Kino T, Yazawa K (2006).Inhibitory effects of pasuchaca (Geranium dielsianum) extract on alphaglucosidase in mouse Biosci Biotech Biochem 9(6):1482-1484 15 Kumar De K (1992) Callus culture, Cytodifferentiation, Organogenesis In: Plant tissue cultures pp 35-78 16 Narayana MR, Prakash R, Rajeswara RBR, Sastry KP (1986) Geranium cultivation in India: Potentials and prospects PAFAI 4:25-29 17 Ooshiro A, Hiradate S, Kawano S, Takushi T, Fujii Y, Natsume M, Abe H (2009) Identification and activity of ethyl gallate as an antimicrobial compound produced by Geranium carolinianum Weed Biol Manage 9(2):169-172 18 Rajeswara RBR, Bhattacharya AK, Kaul PN (1999) Rose Scented Geranium (Pelargonium graveolens) cultivation and technology for Andhra Pradesh Indian Perfumer 43(1):2-8 19 Rajeswara RBR, Bhattacharya AK, Kaul PN, Ramesh S (1992) The essential oil profiles of Rose Scented Geranium (Pelargonium Sp.) biomass dried prior to distillation Indian Perfumer.36(4):238-240 20 Sreedhar D (1999) Tissue culture of Pelargonium graveolens (Geranium) In: Role of Biotechnology in Medicinal and Aromatic Plants Vol.2 Eds:Irfan A.Khan, Atiya Khanum Ukaaz Publications pp 177-184 43 PHỤ LỤC  Phụ lục 1: Các hình ảnh trình thực thí nghiệm Rễ PLT mơi trƣờng MS Rễ PLT môi trƣờng MS + α – NAA + Kin Rễ PLT môi trƣờng MS + α - NAA Ra rễ PLT 44  Phụ lục 2: Môi trƣờng MS (Murashige & Skoog) gồm thành phần sau: * Nguyên tố đa lượng - NH4NO3 g/l - KNO3 36 g/l - MgSO4.7H2O 7,2 g/l - KH2PO4 5,4 g/l - Ca(N03)2 24 g/l * Nguyên tố vi lượng - H3BO4 - ZnSO4.7H2O g/l g/l - MnSO4.4H2O 3,6 g/l - Na2MoO4.2H2O 0,05 g/l - CuSO4.5H2O 0,004 g/l * Vitamine - Thiamine (B1) 0,08 g/l * Fe EDTA - FeSO4.7H2O 5,56 g/l - Na2EDTA.2H2O 7,64 g/l 45  Phụ mục 3: Kết xử lý số liệu Ảnh hƣởng nồng độ BAP đến hệ số nhân chồi Phong lữ thảo sau tuần nuôi cấy BALANCED ANOVA FOR VARIATE CHIEUCAO FILE SSS 2/ 4/17 23:51 :PAGE VARIATE V003 CHIEUCAO LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= CT$ 3.80442 * RESIDUAL 400199E-03 500249E-04 1.26814 ****** 0.000 * TOTAL (CORRECTED) 11 3.80482 345893 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SO CHOI FILE SSS 2/ 4/17 23:51 :PAGE VARIATE V004 SO CHOI LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= CT$ 7.39000 * RESIDUAL 666675E-02 833344E-03 2.46333 ****** 0.000 * TOTAL (CORRECTED) 11 7.39667 672424 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SO LA FILE SSS 2/ 4/17 23:51 :PAGE VARIATE V005 SO LA LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= CT$ 9.20917 * RESIDUAL 133342E-01 166678E-02 3.06972 ****** 0.000 * TOTAL (CORRECTED) 11 9.22250 838409 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SO DOT FILE SSS 2/ 4/17 23:51 :PAGE VARIATE V006 SO DOT LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= CT$ 2.10000 700000 * RESIDUAL 666668E-02 833335E-03 840.00 0.000 * TOTAL (CORRECTED) 11 2.10667 191515 - 46 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE SSS 2/ 4/17 23:51 :PAGE MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS CHIEUCAO SO CHOI SO LA SO DOT CT1 0.200000 0.900000 1.43333 0.900000 CT2 0.726667 2.10000 2.26667 1.46667 CT3 1.66667 3.06667 3.70000 2.00000 CT4 0.396667 2.40000 1.70000 1.10000 SE(N= 3) 0.408350E-02 0.166668E-01 0.235710E-01 0.166667E-01 5%LSD 8DF 0.133159E-01 0.543487E-01 0.768627E-01 0.543484E-01 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE SSS 2/ 4/17 23:51 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE CHIEUCAO GRAND MEAN STANDARD (N= SD/MEAN | 12) DEVIATION NO BASED ON BASED ON OBS TOTAL SS RESID SS C OF V |CT$ % | | | | | | 12 0.74750 0.58813 0.70728E-02 0.9 0.0000 SO CHOI 12 2.1167 0.82001 0.28868E-01 1.4 0.0000 SO LA 12 2.2750 0.91565 0.40826E-01 1.8 0.0000 SO DOT 12 1.3667 0.43762 0.28868E-01 2.1 0.0000 Ảnh hƣởng nồng độ Kinetin đến hệ số nhân chồi Phong lữ thảo sau tuần nuôi cấy BALANCED ANOVA FOR VARIATE CHIEUCAO FILE PP3 2/ 4/17 23:44 :PAGE VARIATE V003 CHIEUCAO LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= CT$ 4.75500 * RESIDUAL 266394E-03 332992E-04 1.58500 ****** 0.000 * TOTAL (CORRECTED) 11 4.75527 432297 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SO CHOI FILE PP3 2/ 4/17 23:44 :PAGE VARIATE V004 SO CHOI LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= CT$ 7.24250 2.41417 965.67 0.000 47 * RESIDUAL 199999E-01 249998E-02 * TOTAL (CORRECTED) 11 7.26250 660227 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SO LA FILE PP3 2/ 4/17 23:44 :PAGE VARIATE V005 SO LA LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB SQUARES SQUARES ER LN ============================================================================= CT$ 9.47667 * RESIDUAL 133332E-01 166665E-02 3.15889 ****** 0.000 * TOTAL (CORRECTED) 11 9.49000 862727 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SO DOT FILE PP3 2/ 4/17 23:44 :PAGE VARIATE V006 SO DOT LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB SQUARES SQUARES ER LN ============================================================================= CT$ 2.96917 989722 * RESIDUAL 133330E-01 166662E-02 593.85 0.000 * TOTAL (CORRECTED) 11 2.98250 271136 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE PP3 2/ 4/17 23:44 :PAGE MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS CHIEUCAO SO CHOI SO LA SO DOT CT1 0.306667 0.466667 0.800000 0.400000 CT2 0.923333 1.60000 1.46667 1.06667 CT3 2.05667 2.56667 3.13333 1.73333 CT4 1.20667 2.06667 1.20000 0.700000 SE(N= 3) 0.333163E-02 0.288674E-01 0.235701E-01 0.235699E-01 5%LSD 8DF 0.108641E-01 0.941337E-01 0.768598E-01 0.768591E-01 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE PP3 2/ 4/17 23:44 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD (N= SD/MEAN | 12) DEVIATION NO BASED ON BASED ON OBS TOTAL SS RESID SS C OF V |CT$ % | | | | | | CHIEUCAO 12 1.1233 0.65749 0.57705E-02 0.5 0.0000 SO CHOI 12 1.6750 0.81254 0.50000E-01 3.0 0.0000 48 SO LA SO DOT 12 1.6500 0.92883 0.40825E-01 2.5 0.0000 12 0.97500 0.52071 0.40824E-01 4.2 0.0000 Ảnh hƣởng tổ hợp nồng độ BAP Kinetin đến hệ số nhân chồi Phong lữ thảo sau tuần nuôi cấy BALANCED ANOVA FOR VARIATE CHIEUCAO FILE 7/ 5/17 9:43 :PAGE VARIATE V003 CHIEUCAO LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= CT$ 6.35940 * RESIDUAL 266711E-03 333389E-04 2.11980 ****** 0.000 * TOTAL (CORRECTED) 11 6.35967 578152 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SO CHOI FILE 7/ 5/17 9:43 :PAGE VARIATE V004 SO CHOI LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= CT$ 13.7700 * RESIDUAL 266669E-01 333336E-02 4.59000 ****** 0.000 * TOTAL (CORRECTED) 11 13.7967 1.25424 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SO LA FILE 7/ 5/17 9:43 :PAGE VARIATE V005 SO LA LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= CT$ 15.0825 5.02750 ****** 0.000 * RESIDUAL 266680E-01 333350E-02 * TOTAL (CORRECTED) 11 15.1092 1.37356 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SO DOT FILE 7/ 5/17 9:43 :PAGE VARIATE V006 SO DOT LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= CT$ 5.56333 * RESIDUAL 266670E-01 333337E-02 1.85444 556.33 0.000 * TOTAL (CORRECTED) 11 5.59000 508182 49 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 7/ 5/17 9:43 :PAGE MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS CHIEUCAO SO CHOI SO LA SO DOT CT1 0.406667 0.666667 1.16667 0.766667 CT2 2.07667 3.06667 3.53333 2.13333 CT3 2.20667 3.46667 4.16667 2.46667 1.93667 2.33333 2.76667 1.23333 CT4 SE(N= 3) 5%LSD 0.333361E-02 0.333335E-01 0.333342E-01 0.333335E-01 8DF 0.108706E-01 0.108697 0.108699 0.108697 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 7/ 5/17 9:43 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD (N= SD/MEAN | 12) DEVIATION NO BASED ON BASED ON OBS TOTAL SS RESID SS C OF V |CT$ % | | | | | | CHIEUCAO 12 1.6567 0.76036 0.57740E-02 0.3 0.0000 SO CHOI 12 2.3833 1.1199 0.57735E-01 2.4 0.0000 SO LA 12 2.9083 1.1720 0.57736E-01 2.0 0.0000 SO DOT 12 1.6500 0.71287 0.57735E-01 3.5 0.0000 Ảnh hƣởng nồng độ α – NAA đến khả rễ Phong lữ thảo sau tuần nuôi cấy BALANCED ANOVA FOR VARIATE SO RE FILE RE1 5/ 5/17 23:14 :PAGE VARIATE V003 SO RE LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= CT$ 22.6600 7.55333 ****** 0.000 * RESIDUAL 199992E-01 249990E-02 * TOTAL (CORRECTED) 11 22.6800 2.06182 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CHIEU DA FILE RE1 5/ 5/17 23:14 :PAGE VARIATE V004 CHIEU DA LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= CT$ 9.33029 3.11010 * RESIDUAL 200333E-03 250416E-04 ****** 0.000 - 50 * TOTAL (CORRECTED) 11 9.33049 848226 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE RE1 5/ 5/17 23:14 :PAGE MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS SO RE CHIEU DA CT1 0.000000 0.000000 CT2 2.56667 1.32667 CT3 3.56667 1.97333 CT4 3.06667 2.30333 SE(N= 3) 0.288669E-01 0.288915E-02 5%LSD 8DF 0.941322E-01 0.942124E-02 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE RE1 5/ 5/17 23:14 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD (N= SD/MEAN | 12) DEVIATION NO BASED ON BASED ON OBS TOTAL SS RESID SS C OF V |CT$ % | | | | | | SO RE 12 2.3000 1.4359 0.49999E-01 2.2 0.0000 CHIEU DA 12 1.4008 0.92099 0.50042E-02 0.4 0.0000 Ảnh hƣởng tổ hợp nồng độ α - NAA Kinetin đến khả rễ Phong lữ thảo sau tuần nuôi cấy BALANCED ANOVA FOR VARIATE SO RE FILE RE2 6/ 5/17 1:44 :PAGE VARIATE V003 SO RE LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB SQUARES SQUARES ER LN ============================================================================= CT$ 25.3092 * RESIDUAL 200003E-01 250003E-02 8.43639 ****** 0.000 * TOTAL (CORRECTED) 11 25.3292 2.30265 BALANCED ANOVA FOR VARIATE C.DAI RE FILE RE2 6/ 5/17 1:44 :PAGE VARIATE V004 C.DAI RE LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= 51 CT$ 9.15089 3.05030 ****** 0.000 * RESIDUAL 200076E-03 250095E-04 * TOTAL (CORRECTED) 11 9.15109 831917 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE RE2 6/ 5/17 1:44 :PAGE MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS SO RE C.DAI RE CT1 CT2 2.86667 0.000000 1.41667 0.000000 CT3 3.73333 2.01667 CT4 3.23333 2.24333 SE(N= 3) 0.288677E-01 0.288730E-02 5%LSD 8DF 0.941347E-01 0.941520E-02 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE RE2 6/ 5/17 1:44 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD (N= SD/MEAN | 12) DEVIATION NO BASED ON BASED ON OBS TOTAL SS RESID SS C OF V |CT$ % | | | | | | SO RE 12 2.4583 1.5174 0.50000E-01 2.0 0.0000 C.DAI RE 12 1.4192 0.91210 0.50010E-02 0.4 0.0000 52 Ngày 14 tháng 05 năm 2017 Giáo viên hƣớng dẫn Sinh viên thực ThS Trần Thành Vinh Phùng Thị Thanh Mai ... với số lượng lớn, tiến hành nghiên cứu: ? ?Nghiên cứu số biện pháp kỹ thuật để hoàn thiện quy trình nhân nhanh ni cấy mơ hoa Phong lữ thảo? ?? Mục tiêu đề tài Góp phần xây dựng quy trình nhân nhanh. .. vitro hoa Phong lữ thảo Ý nghĩa đề tài 3.1 Ý nghĩa khoa học - Kết nghiên cứu cung cấp dẫn liệu khoa học giúp hoàn thiện quy trình nhân nhanh giống hoa Phong lữ thảo - Đối với nghiên cứu khoa học:... DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tƣợng, vật liệu nghiên cứu - Đối tượng nghiên cứu: Cây Phong lữ thảo (Pelargonium sp) - Vật liệu nghiên cứu: hạt giống hoa Phong lữ thảo F1 Bộ môn Đột biến