- Vật liệu nghiên cứu: hạt giống hoa Phong lữ thảo F1 do Bộ môn Đột biến và ưu thế lai, Viện di truyền Nông nghiệp Việt Nam cung cấp.
2.2. Phạm vi nghiên cứu
- Nghiên cứu được thực hiện tại phịng thí nghiệm Bộ mơn Đột biến và ưu thế lai, Viện di truyền nông nghiệp Việt Nam
- Thời gian : Từ tháng 12/2016 đến tháng 5/2017
2.3. Nội dung nghiên cứu
2.3.1. Nội dung 1: Nghiên cứu thời gian khử trùng đến tỷ lệ nảy mầm của hạt Phong lữ thảo: hạt Phong lữ thảo:
+ Thí nghiệm 1: Nghiên cứu ảnh hƣởng thời gian xử lý cồn 70º đến tỷ lệ nảy mầm của hạt Phong lữ thảo
Môi trường nền (MTN): MS + 30g/l đường + 6,5 g/l agar
STT Công thức Thời gian xử lý (phút)
1 CT1 2
2 CT2 3
3 CT3 4
Chỉ tiêu theo dõi: Tỉ lệ mẫu nhiễm (%); tỉ lệ mẫu sạch (%); tỉ lệ mẫu chết (%) - Tỉ lệ mẫu nhiễm(%) = Số mẫu nhiễm/ Tổng số mẫu cấy x 100% - Tỉ lệ mẫu sạch(%) = Số mẫu sạch/ Tổng số mẫu cấy x 100% - Tỉ lệ mẫu chết(%) = Số mẫu chết/ Tổng số mẫu cấy x 100%
2.3.2. Nội dung 2: Nghiên cứu nhân nhanh in vitro chồi hoa Phong lữ thảo
+ Thí nghiệm 2: Nghiên cứu ảnh hƣởng của nồng độ BAP đến hệ số nhân chồi
CT 1: (Đ/C) MS + 100ml/l nước dừa + 30g/l đường + 6,5g/l agar(Nền) CT 2: Nền + 0,5 mg/l BAP
23 CT 3: Nền + 1 mg/l BAP CT 3: Nền + 1 mg/l BAP
CT 4: Nền + 1,5 mg/l BAP
Chỉ tiêu theo dõi: Tỷ lệ mẫu hình thành cụm chồi (%); chiều cao chồi (cm); số lá (cái) số đốt (cái)
- Tỷ lệ tạo cụm chồi (%) = (Tổng số mẫu tạo cụm chồi/Tổng số mẫu cấy) x 100%.
- Số chồi trung bình = Tổng số chồi/Tổng số mẫu cấy.
- Chiều cao chồi trung bình (cm) = Tổng chiều cao chồi/Tổng số chồi. - Số lá trung bình = Tổng số lá/Tổng số mẫu cấy.
- Số đốt trung bình = Tổng đốt chồi/Tổng số mẫu cấy.
+ Thí nghiệm 3: Nghiên cứu ảnh hƣởng của nồng độ kinetin đến hệ số nhân chồi
CT 1: (Đ/C) MS + 30g/l đường + 6,5g/l agar (Nền) CT 2: Nền + 1 mg/l kinetin
CT 3: Nền + 2 mg/l kinetin CT 4: Nền + 3 mg/l kinetin
Chỉ tiêu theo dõi: Tỷ lệ mẫu hình thành cụm chồi (%); chiều cao chồi (cm); số lá (cái); số đốt (cái)
- Tỷ lệ tạo cụm chồi (%) = (Tổng số mẫu tạo cụm chồi/Tổng số mẫu cấy) x 100%.
- Số chồi trung bình = Tổng số chồi/Tổng số mẫu cấy.
- Chiều cao chồi trung bình (cm) = Tổng chiều cao chồi/Tổng số chồi. - Số lá trung bình = Tổng số lá/Tổng số mẫu cấy.
- Số đốt trung bình = Tổng đốt chồi/Tổng số mẫu cấy.
+ Thí nghiệm 4: Nghiên cứu ảnh hƣởng của tổ hợp nồng độ BAP, kinetin đến hệ số nhân chồi
CT 1: (Đ/C) MS + 30g/l đường + 6,5g/l agar (Nền) CT 2: Nền + [ BAP*] + 1 mg/l kinetin
CT 3: Nền + [BAP*] + 2 mg/l kinetin CT 4: Nền + [BAP*] + 3 mg/l kinetin
24
[BAP*]: công thức nồng độ BAP tốt nhất từ thí nghiệm 2
Chỉ tiêu theo dõi: Tỷ lệ mẫu hình thành cụm chồi (%), số chồi (chồi), chiều cao chồi (cm); số lá (cái) số đốt (cái)
- Tỷ lệ tạo cụm chồi (%) = (Tổng số mẫu tạo cụm chồi/Tổng số mẫu cấy) x 100%.
- Số chồi trung bình = Tổng số chồi/Tổng số mẫu cấy.
- Chiều cao chồi trung bình (cm) = Tổng chiều cao chồi/Tổng số chồi. - Số lá trung bình = Tổng số lá/Tổng số mẫu cấy.
- Số đốt trung bình = Tổng đốt chồi/Tổng số mẫu cấy.
2.3.3. Nội dung 3: Nghiên cứu tạo cây Phong lữ thảo in vitro hoàn chỉnh
+ Thí nghiệm 5: Nghiên cứu ảnh hƣởng của nồng độ α -NAA đến khả năng ra rễ
CT 1: (Đ/C) MS + + 30 g/l đường + 6,5g/l agar (Nền) CT 2: Nền + 0,1 mg/l α -NAA
CT 3: Nền + 0,2 mg/l α -NAA CT 4: Nền + 0,3 mg/l α -NAA
Chỉ tiêu theo dõi: Tỉ lệ mẫu tạo rễ (%); số rễ/cây (cái); chiều dài rễ (cm) - Tỷ lệ ra rễ (%) = (Tổng số mẫu ra rễ/Tổng số mẫu cấy) x 100%. - Số rễ trung bình (rễ) = Tổng số rễ/Tổng số mẫu cấy.
- Chiều dài rễ trung bình (cm)= Tổng chiều dài rễ/Tổng số rễ.
+ Thí nghiệm 6: Nghiên cứu ảnh hƣởng của tổ hợp nồng độ α –NAA và kinetin đến khả năng ra rễ
CT 1: (Đ/C) MS + 30 g/l đường + 6,5g/l agar (Nền) CT 2: Nền + [α -NAA*] + 1 mg/l kinetin
CT 3: Nền + [α -NAA*] + 2 mg/l kinetin CT 4: Nền + [α -NAA*] + 3 mg/l kinetin
[α – NAA*]: công thức nồng độ α – NAA tốt nhất từ thí nghiệm 5 Chỉ tiêu theo dõi: Tỉ lệ mẫu tạo rễ (%); số rễ/cây (cái); chiều dài rễ (cm) - Tỷ lệ ra rễ (%) = (Tổng số mẫu ra rễ/Tổng số mẫu cấy) x 100%. - Số rễ trung bình (rễ) = Tổng số rễ/Tổng số mẫu cấy.
25
- Chiểu dài rễ trung bình (cm)= Tổng chiều dài rễ/Tổng số rễ
2.4. Phƣơng pháp nghiên cứu