ĐỐI TƯỢNG, VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
ĐỐI TƯỢNG VÀ THỜI GIAN NGHIÊN CỨU
Gà mắc hoặc nghi mắc ORT nuôi theo hình thức thả vườn tại các hộ/trang trại chăn nuôi trên địa bàn huyện Bình Giang, tỉnh Hải Dương
* Thời gian nghiên cứu: từ tháng 9/2019 đến tháng 4/2020.
NỘI DUNG NGHIÊN CỨU
Bài viết đánh giá tình hình chăn nuôi và công tác phòng chống dịch bệnh cho đàn gà nuôi thả vườn tại huyện Bình Giang, tỉnh Hải Dương Dựa trên những phân tích này, chúng tôi sẽ xác định một số địa điểm phù hợp để tiến hành các nghiên cứu tiếp theo.
- Xác định tình trạng gà thả vườn mắc bệnh ORT tại các địa điểm đã lựa chọn;
- Nghiên cứu một số triệu chứng và bệnh tích điển hình của gà bị mắc bệnh ORT;
- Nuôi cấy và phân lập vi khuẩn ORT bằng các phương pháp;
- Xác định được tính mẫn cảm của vi khuẩn ORT phân lập từ gà mắc bệnh với một số kháng sinh và thử nghiệm điều trị.
PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
Hãy hỏi trực tiếp chủ trại về tình hình chăn nuôi gà, bao gồm vệ sinh phòng bệnh và quy trình tiêm phòng cho đàn gà Cần tìm hiểu các biểu hiện bệnh lý của gà và những biện pháp phòng ngừa, điều trị mà chủ trại thường áp dụng để duy trì sức khỏe cho đàn gà.
Chúng tôi đã tiến hành theo dõi và lấy mẫu gà từ các đàn nghi mắc ORT tại các xã Bình Xuyên, Nhân Quyền, Tân Hồng thuộc huyện Bình Giang, tỉnh Hải Dương Trong quá trình này, chúng tôi ghi chép các triệu chứng lâm sàng của gà sống nghi mắc ORT, đặc biệt chú trọng đến các triệu chứng điển hình, những biểu hiện bệnh khi thời tiết thay đổi và khi có yếu tố stress Đồng thời, chúng tôi cũng đánh giá hiệu quả phòng và điều trị bệnh bằng các loại thuốc.
3.3.3 Mổ khám, kiểm tra bệnh tích
Đối với gia cầm có triệu chứng rõ ràng, chúng tôi thực hiện mổ khám để kiểm tra bệnh tích đại thể ở tất cả các cơ quan Các bước thực hiện quy trình này bao gồm việc quan sát và đánh giá tình trạng sức khỏe của từng bộ phận.
Bộ đồ mổ khám được vô trùng;
Các trang thiết bị bảo hộ cho người mổ khám (quần áo, găng tay, khẩu trang,…);
Dụng cụ lấy mẫu được vô trùng;
Hóa chất: Cồn Metanon, Cồn etanon (Ethanol) 96%, Natri xitrat, Magie Sunfat…
Gà còn sống thì phải dùng biện pháp làm chết tránh những biến đổi lớn về mực độ quán sát bệnh tích (dùng điện, cắt tiết…)
Kiểm tra bên ngoài: thể trạng cơ thể, da, các lỗ tự nhiên, các tổn thương…
Mổ khám kiểm tra bên trong:
Đặt gà nằm ngửa trên bàn mổ, sử dụng kéo để cắt da giữa vùng bụng và bẹn ở hai bên chân Sau đó, lật chân sang hai bên và kéo da để bộc lộ cơ ngực.
+ Kiểm tra cơ ngực cơ đùi, xương lưỡi hái về tình trạng khô cơ, xuất huyết, biến dạng…;
+ Dùng kéo cắt từ miệng dọc thực quản thẳng tới diều kiểm tra dịch, chất chứa và mùi bên trong;
+ Dọc khí quản kiểm tra dịch, xuất huyết, hoại tử bên trong;
+Dùng kéo cắt từ cổ dọc theo xương ức đến gần lỗ huyệt, rồi bộc lộ các nội tạng bên trong;
+ Quán sát các túi khí và phía ngoài các cơ quan nội tạng trong xoang bụng và xoang ngực;
+ Lấy gan, mật, lá lách ra kiểm tra màu sắc, kích thước, hoại tử…;
Cắt đứt phía trên dạ dày và lật toàn bộ dạ dày cùng ruột ra phía sau để kiểm tra, nhằm tránh nhiễm bẩn cho dụng cụ và các tổ chức khác.
+ Kiểm tra toàn bộ cơ quan sinh dục (buồng trứng, ống dẫn trứng, dịch hoàn, ống dẫn tinh);
+ Kiểm tra thận, ống dẫn niệu;
+ Kiểm tra túi Frabricius bên ngoài và bên trong về hình dạng, kích thước, màu sắc dịch;
+ Dùng kéo mở một bên cạnh mỏ quan sát xoang miệng, cắt ngang mỏ trên, kiểm tra xoang mũi;
+ Kiểm tra xoang bao tim, dịch bên trong, mở tim kiểm tra cơ, các xoang và van tim…;
+ Tách phổi các khỏi các xương sườn kiểm tra về màu sắc, độ xốp;
+ Rạch khớp chân gà kiểm tra dịch, bẻ xương đùi kiểm tra độ cứng, mềm;
+ Dùng kéo rạch ruột, rạch từ dạ dày tuyến xuống tận hậu môn kiểm tra các tổn thương, hoại tử, xuất huyết, ký sinh trùng…
+ Xử lý xác gà hợp lý
3.3.4 Lấy mẫu và nuôi cấy phân lập vi khuẩn
Các mẫu được lấy theo quy định của ngành
Mẫu cơ quan tổ chức cần được lấy đúng từ cơ quan phù hợp, tập trung vào vùng tổn thương điển hình Ngoài ra, cần đảm bảo đủ thành phần cấu tạo cần nghiên cứu và lượng mẫu cần thiết để đạt được kết quả chính xác.
Mẫu có thể là dịch ngoáy mũi, dịch hầu họng và dịch khí quản và dịch phế quản của gà mắc bệnh ở mọi lứa tuổi
1) Đối với dịch ngoáy mũi và dịch ngoáy hầu họng dùng tăm bông vô trùng ngoái sâu vào lỗ mũi/hầu họng của gà bệnh đã được lau sạch bằng cồn 70º để một thời gian cho dịch mũi thấm vào tăm bông → Để tăm bông vào ống nghiệm chứa môi trường vận chuyển (Stuart Transport Medium), môi trường nước thịt vô trùng hoặc dung dịch PBS, đậy nút và ghi nhãn rồi đưa về phòng thí nghiệm sau 2 - 8h Nếu ở xa phòng thí nghiệm thì môi trường vận chuyển phải để ở tủ lạnh Sau vận chuyển bệnh phẩm phải được cấy vào môi trường phân lập thích hợp
2) Đối với dịch khí quản hay dịch phế quản: dùng kéo vô trùng cắt dọc khí quản hay phế quản, sau đó dùng tăm bông vô trùng đưa dọc theo dường ống để lấy dịch Đặt tăm bông vào trong môi trường như trên, đậy nút ghi nhãn và vận chuyển về phòng thí nghiệm
3) Với mẫu là tổ chức phổi: sau khi mổ khám gà, dùng kéo vô trùng cắt lấy tổ chức phổi ở vùng định xét nghiệm
4) Với mẫu là tổ chức bệnh khác như ruột, hạch phổi… làm tương tự
Mẫu bệnh phẩm được nuôi cấy trên môi trường thạch máu Columbia Blood agar Base (CBA) có bổ sung 10μg/ml Gentamicin, được ủ ở 37°C với 5% CO2 trong điều kiện hiếu khí trong khoảng thời gian 24 - 48 giờ.
Chọn lọc khuẩn lạc nghi ngờ và cấy chuyển chúng sang môi trường tương tự hoặc môi trường Brain Heart Broth (BHB) để kiểm tra các đặc tính sinh hóa như Catalase, Oxidase, Kovac’s/Indol Đồng thời, thực hiện các phản ứng lên men đường như sucrose, lactose, glucose và phản ứng phân giải urê.
3.3.5 Phương pháp kiểm tra khả năng mẫn cảm kháng sinh của chủng vi khuẩn
Khả năng mẫn cảm với kháng sinh của chủng vi khuẩn ORT được xác định thông qua phương pháp khuếch tán trên thạch Đầu tiên, chủng vi khuẩn cần kiểm tra được tăng sinh trong môi trường BHB, nuôi ở 37ºC với 5% CO2 trong khoảng 24 - 48 giờ Sau đó, pha loãng canh khuẩn đến nồng độ màu phù hợp so với ống đục chuẩn, và hủy 100µl dung dịch canh khuẩn lên bề mặt thạch màu đã chuẩn bị sẵn Cuối cùng, để cho bề mặt đĩa thạch khô tự nhiên ở nhiệt độ phòng.
5 phút, rồi tiến hành đặt giấy tẩm kháng sinh lên bề mặt thạch Tiến hành đọc kết quả sau khi nuôi cấy khoảng 24 - 48 giờ
Sử dụng thước đo đường kính vòng vô khuẩn và đánh giá kết quả theo tiêu chuẩn lâm sàng của Hội đồng Quốc gia Mỹ là một phương pháp quan trọng trong phòng thí nghiệm Việc tuân thủ các tiêu chuẩn này đảm bảo độ chính xác và tin cậy trong các kết quả xét nghiệm, góp phần nâng cao chất lượng chăm sóc sức khỏe.
State National Committe for Clinical Laboratory Standards Guidelines-NCCLS,
1997) theo 3 mức: mẫn cảm mạnh, mẫn cảm trung bình, hoặc kháng thuốc
3.3.6 Điều trị bệnh do vi khuẩn ORT gây ra ở gà
Dựa vào khả năng mẫn cảm của vi khuẩn ORT với các loại kháng sinh, chúng tôi lựa chọn kháng sinh có tỷ lệ mẫn cảm cao để điều trị các bệnh do vi khuẩn này gây ra ở gà tại một số trại và hộ chăn nuôi ở huyện Bình Giang, tỉnh Hải Dương Hiệu quả điều trị được đánh giá thông qua tỷ lệ khỏi bệnh và thời gian điều trị trung bình.
Các loại kháng sinh được lựa chọn điều trị: Amoxicilline/Clavulanic acid, Ampicillin và Tetracycline hoặc Erythromycin Thử nghiệm điều trị theo phác đồ sau:
Phác đồ Tên thuốc Thành phần Liều lượng Cách dùng Liệu trình
1 Eryvet powder Erythromycin thiocyanate 1g/2 lít nước Pha nước uống
2 Amoxi Amoxicillin 1ml/5-8kg thể trọng
Tiêm bắp sâu, 1 lần/ngày
Pha nước uống hoặc trộn thức ăn
Dùng liên tục 3-5 ngày 3.3.7 Phương pháp xử lý số liệu
Tất cả các số liệu đều được theo dõi, ghi chép và xử lý bằng phần mềm Excel trên máy vi tính
Một số công thức tính toán khác:
Tổng số gà theo dõi
Tổng số gà mắc bệnh
Tổng số gà được điều trị
