(LUẬN văn THẠC sĩ) thử nghiệm lâm sàng nhãn mở, đơn nhóm, đánh giá tính an toàn và hiệu quả của liệu pháp ứng dụng tế bào gốc trung mô tự thân từ tủy xương trong điều trị đái tháo đường típ 2​

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN _ Hoàng Thị Ái Xuân THỬ NGHIỆM LÂM SÀNG NHÃN MỞ, ĐƠN NHĨM, ĐÁNH GIÁ TÍNH AN TỒN VÀ HIỆU QUẢ CỦA LIỆU PHÁP ỨNG DỤNG TẾ BÀO GỐC TRUNG MÔ TỰ THÂN TỪ TỦY XƯƠNG TRONG ĐIỀU TRỊ ĐÁI THÁO ĐƯỜNG TÍP LUẬN VĂN THẠC SỸ KHOA HỌC download by : skknchat@gmail.com Hà Nội -2019 download by : skknchat@gmail.com ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN Hoàng Thị Ái Xuân THỬ NGHIỆM LÂM SÀNG NHÃN MỞ, ĐƠN NHÓM, ĐÁNH GIÁ TÍNH AN TỒN VÀ HIỆU QUẢ CỦA LIỆU PHÁP  ỨNG DỤNG TẾ BÀO GỐC TRUNG MÔ TỰ THÂN TỪ TỦY XƯƠNG TRONG ĐIỀU TRỊ ĐÁI THÁO ĐƯỜNG TÍP Chuyên ngành : Sinh học thực nghiệm Mã số : 8420101.14 LUẬN VĂN THẠC SỸ KHOA HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: GS.TS NGUYỄN THANH LIÊM PGS.TS HOÀNG THỊ MỸ NHUNG Hà Nội - 2019 download by : skknchat@gmail.com LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, xin bày tỏ biết ơn chân thành sâu sắc tới GS.TS.BS Nguyễn Thanh Liêm - Viện trưởng Viện nghiên cứu Tế bào gốc Công nghệ Gen Vinmec - Bệnh viện Đa khoa quốc tế Vinmec người định hướng nghiên cứu Thầy tận tình hướng dẫn, dạy bảo cho hiểu biết lĩnh vực nghiên cứu chuyên sâu thử nghiệm lâm sàng, ứng dụng tế bào gốc trị liệu tạo điều kiện thuận lợi để tơi hồn thành nghiên cứu cách tốt Tôi xin chân thành cảm ơn tới PGS.TS Hồng Thị Mỹ Nhung – Trưởng Bộ mơn Sinh học tế bào, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên – Đại học Quốc gia Hà Nội giảng viên đồng hướng dẫn Cô dạy dỗ, giúp đỡ, đưa lời khuyên góp ý quan trọng cho tơi suốt q trình học tập để tơi hồn thành luận văn Tơi xin chân thành cảm ơn đến TS Hoàng Minh Đức, người hướng dẫn ngày làm việc labo, dạy kiến thức Tế bào học phịng thí nghiệm Viện nghiên cứu Tế bào gốc Công nghệ Gen Vinmec, đồng hành tơi suốt q trình thực luận văn thạc sỹ Để hoàn thành luận văn này, xin gửi lời cảm ơn chân thành tới anh chị, bạn bè đồng nghiệp Viện nghiên cứu Tế bào gốc Công nghệ Gen Vinmec Khoa Sinh, Đại học khoa học tự nhiên giúp đỡ, dẫn, khun bảo tơi suốt q trình học tập nghiên cứu để tơi hồn thành luận văn cách thuận lợi Cuối muốn gửi lời biết ơn sâu sắc tới gia đình, anh chị, bạn bè ln sát cánh bên tôi, động viên tôi, tiếp thêm cho sức mạnh lúc tơi gặp khó khăn sống học tập để vững vàng bước đường chọn download by : skknchat@gmail.com Hà Nội, ngày 06 tháng 11 năm 2019 Người viết lời cảm ơn Hoàng Thị Ái Xuân MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ Chương 1:TỔNG QUAN 1.1 BỆNH ĐÁI THÁO ĐƯỜNG 1.1.1 Định nghĩa đái tháo đường 1.1.2 Phân loại đái tháo đường .3 1.1.3 Dịch tễ học đái tháo đường 1.1.4 Cơ chế bệnh sinh đái tháo đường típ .4 1.1.5 Biến chứng đái tháo đường típ 1.1.6 Điều trị đái tháo đường típ 1.2 TẾ BÀO GỐC 11 1.2.1 Định nghĩa tế bào gốc 11 1.2.2 Tế bào gốc trung mô 12 1.2.3 Tế bào gốc trung mô từ tủy xương 14 1.3 ỨNG DỤNG CỦA TẾ BÀO GỐC TRUNG MƠ TRONG ĐIỀU TRỊ BỆNH ĐÁI THÁO ĐƯỜNG TÍP 15 1.3.1 Cơ sở lý luận phương pháp ghép tế bào gốc bệnh nhân đái tháo đường típ 15 1.3.2 Đặc điểm tế bào gốc trung mô bệnh lý đái tháo đường típ 20 1.3.3 Ứng dụng tế bào gốc trung mô điều trị đái tháo đường típ 221 1.3.4 Phản ứng phụ, tác dụng bất lợi liệu pháp ghép tế bào gốc 25 Chương 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 27 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 27 2.1.1 Cỡ mẫu 27 2.1.2 Tiêu chuẩn lựa chọn bệnh nhân 27 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .28 2.2.1 Thiết kế nghiên cứu 28 2.2.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu 28 download by : skknchat@gmail.com 2.2.3 Quy trình nghiên cứu 28 2.2.4 Chỉ số nghiên cứu 32 2.2.5 Thiết bị, hóa chất, vật tư tiêu hao .34 2.2.6 Đạo đức nghiên cứu 36 2.2.7 Phân tích liệu 36 Chương 3: KẾT QUẢ - BÀN LUẬN .37 3.1 ĐẶC ĐIỂM CHUNG CỦA BÊNH NHÂN THAM GIA NGHIÊN CỨU .37 3.2 ĐẶC ĐIỂM TẾ BÀO GỐC TRUNG MÔ TỪ TỦY XƯƠNG CỦA BỆNH NHÂN ĐÁI THÁO ĐƯỜNG TÍP 40 3.2.1 Kết phân lập nuôi cấy tăng sinh tế bào gốc trung mô từ tủy xương bệnh nhân đái tháo đường típ 40 3.2.2 Đánh giá chất lượng tế bào gốc trung mô từ tủy xương bệnh nhân đái tháo đường típ 41 3.3 KẾT QUẢ GHÉP TẾ BÀO GỐC 50 3.3.1 Đánh giá tính an tồn việc áp dụng quy trình ghép tế bào gốc tủy xương tự thân điều trị đái tháo đường típ .50 3.3.2 Đánh giá hiệu sau ghép tế bào gốc 52 KẾT LUẬN 65 KHUYẾN NGHỊ 66 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC download by : skknchat@gmail.com VIẾT TẮT Từ viết tắt Tiếng Anh 18F-FDG Fluorine 18-Fluorodeoxyglucose AD-MSC Adipose-Derived Mesenchymal Stem Cells Body Mass Index Bone marrow –Derived BMI BM-MSC Mesenchymal Stem Cells Diabetic Ketoacidosis DKA ĐTĐ ĐTĐ T1 ĐTĐ T2 EPC FPG HbA1C HBO HHS Endothelial Progenitor Cell Fasting Plasma Glucose Hemoglobin A1C Hyperbaric Oxygen Hyperosmolar Hyperglycemic Tiếng Việt Tế bào gốc trung mô từ mô mỡ Chỉ số khối thể Tế bào gốc trung mô từ tủy xương Hôn mê nhiễm toan ceton Bệnh Đái tháo đường Bệnh Đái tháo đường tuýp Bệnh Đái tháo đường tuýp Tế bào tiền thân nội mơ Đường huyết tĩnh mạch lúc đói Hơn mê tăng áp lực thẩm thấu Syndrome Human immunodeficiency virus Virut gây suy giảm miễn dịch infection / acquired người/ Hội chứng suy giảm HOT IDF immunodeficiency syndrome Hyperbaric Oxygen therapy International Diabetes miễn dịch mắc phải người Liệu pháp oxy liều cao Liên đoàn đái tháo đường giới IGF-1 Federation (Insulin-like Growth Factor -1), Yếu tố tăng trưởng giống IPTR  International Pancreas insulin Cơ quan đăng ký cấy ghép tụy ISCN Transplant Registry (IPTR) International System for Human quốc tế Hệ thống di truyền tế bào học ISCT Cytogenetic Nomenclature người International Society for Cellular Hiệp hội quốc tế liệu pháp tế miRNA, mRNA MSC P PET Pha M Therapy Micro RNA Messenger RNA Mesenchymal stem cells Passage Positron Emission Tomography Mitotic phase HIV/AIDS bào ARN thông tin Tế bào gốc trung mô Lần cấy chuyển Ghi hình cắt lớp Positron Pha phân chia download by : skknchat@gmail.com STEPwise Điều tra quốc gia yếu tố nguy VEGF vascular endothelial growth bệnh không lây nhiễm Yếu tố tăng trưởng nội mạc β-FGF factor β-Fibroblast Growth Factor mạch máu Yếu tố tăng trưởng nguyên bào sợi download by : skknchat@gmail.com DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Cơ chế phân tử kháng insulin .5 Bảng 1.2 Một số thử nghiệm lâm sàng ứng dụng tế bào gốc trung mô điều trị đái tháo đường típ 23 Bảng 2.1 Hóa chất sử dụng nghiên cứu 34 Bảng 2.2 Thiết bị sử dụng nghiên cứu 35 Bảng 2.3 Vật tư tiêu hao sử dụng nghiên cứu 35 Bảng 3.1 Đặc điểm chung bệnh nhân tham gia nghiên cứu 37 Bảng 3.2 Kết tế bào thu trình thu thập, phân lập nuôi cấy tăng sinh tế bào gốc trung mô từ tủy xương bệnh nhân đái tháo đường típ 40 Bảng 3.3 Kết theo dõi bệnh nhân 72 sau ghép hai nhóm bệnh nhân truyền động mạch tĩnh mạch .50 Bảng 3.4 Đánh giá số cận lâm sàng sau tháng 51 Bảng 3.5 Đánh giá số lượng bệnh nhân có đáp ứng điều trị theo mức giảm HbA1C theo hai đường truyền tĩnh mạch động mạch sau tháng57 Bảng 3.6 Các số theo dõi sau ghép bệnh nhân nam, 33 tuổi sau tháng ghép tế bào gốc trung mô tự thân từ tủy xương .58 Bảng 3.7 Các số theo dõi sau ghép bệnh nhân nam, 67 tuổi sau tháng ghép tế bào gốc trung mô tự thân từ tủy xương .60 Bảng 3.8 Các số theo dõi sau ghép bệnh nhân nam, 37 tuổi sau tháng ghép tế bào gốc trung mô tự thân từ tủy xương .61 Bảng 3.9 Các số theo dõi sau ghép bệnh nhân nam, 33 tuổi sau tháng ghép tế bào gốc trung mô tự thân từ tủy xương .62 download by : skknchat@gmail.com DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Mơ hình tiếp nhân tín hiệu insulin giảm nồng độ glucose máu Hình 1.2 Hoạt động tế bào đảo tụy trì nồng độ glucose huyết Hình 1.3 Sơ đồ lựa chọn thuốc phương pháp điều trị đái tháo đường típ 10 Hình 1.4 Nguồn tế bào gốc trung mô trưởng thành loại tế bào mà chúng biệt hóa 12 Hình 1.5 Tiềm biệt hóa tế bào gốc trung mô 13 Hình 1.6 Cơ sở lý luận phương pháp ghép tế bào gốc bệnh nhân đái tháo đường típ 16 Hình 2.1 Sơ đồ nghiên cứu 28 Hình 3.1 Đặc điểm hình thái học tế bào gốc trung mô từ tủy xương bệnh nhân đái tháo đường típ nuôi cấy môi trường không chứa huyết (Serum-free) không chứa chất từ động vật (xeno-free) 42 Hình 3.2 Thời gian nhân đôi tế bào gốc trung mô từ tủy xương bệnh nhân đái tháo đường típ 43 Hình 3.3 Đánh giá biểu dấu ấn bề mặt tế bào gốc trung mô từ tủy xương bệnh nhân mắc đái tháo đường típ thời điểm cấy chuyển số số phương pháp đếm tế bào theo dòng chảy 46 Hình 3.4 Khả biệt hóa đa dịng tế bào gốc trung mơ từ tủy xương bệnh nhân đái tháo đường típ - nam, 37 tuổi giai đoạn cấy chuyển số thành tế bào mỡ, xương sụn 48 Hình 3.5 Hình ảnh nhiễm sắc thể người 46, XY giai đoạn cấy chuyển số tế bào gốc trung mô từ tủy xương bệnh nhân đái tháo đường típ - nam, 33 tuổi phương pháp nhuộm D-Band nhiễm sắc thể 48 Hình 3.6 Kết theo dõi nồng độ FPG bệnh nhân sau tháng .53 Hình 3.7 Độ giảm FPG thời điểm theo dõi sau ghép tế bào gốc hai nhóm tĩnh mạch động mạch sau ghép tháng 53 Hình 3.8 Kết theo dõi nồng độ HbA1C bệnh nhân sau ghép tháng 55 Hình 3.9 Độ giảm HbA1C thời điểm theo dõi sau ghép tế bào gốc theo hai đường truyền tĩnh mạch động mạch 56 download by : skknchat@gmail.com ... TỰ NHIÊN Hoàng Thị Ái Xuân THỬ NGHIỆM LÂM SÀNG NHÃN MỞ, ĐƠN NHĨM, ĐÁNH GIÁ TÍNH AN TỒN VÀ HIỆU QUẢ CỦA LIỆU PHÁP  ỨNG DỤNG TẾ BÀO GỐC TRUNG MÔ TỰ THÂN TỪ TỦY XƯƠNG TRONG ĐIỀU TRỊ ĐÁI... xương điều trị bệnh đái tháo đường típ 2” với mục tiêu sau: Đánh giá số đặc điểm tế bào gốc trung mô tự thân từ tủy xương tự thân bệnh nhân mắc đái tháo đường típ 2 Đánh giá tính an toàn liệu pháp. .. pháp ghép tế bào gốc bệnh nhân đái tháo đường típ 15 1.3.2 Đặc điểm tế bào gốc trung mô bệnh lý đái tháo đường típ 20 1.3.3 Ứng dụng tế bào gốc trung mô điều trị đái tháo đường típ