Hóa phân tích nâng cao 2017

TRƯỜNG ĐẠI HỌC DUY TÂN KHOA DƯỢC BỘ MƠN HĨA PHÂN TÍCH-KIỂM NGHIỆM *********** GIÁO TRÌNH THỰC HÀNH HĨA PHÂN TÍCH NÂNG CAO Lưu hành nội ĐÀ NẴNG, NĂM 2018 BÀI SẮC KÝ GIẤY + SẮC KÝ LỚP MỎNG 2+ 2+ Tách hỗn hợp Cu Ni sắc ký giấy lên Phát berberin sắc ký lớp mỏng I Mục tiêu Nêu nguyên tắc phương pháp sắc ký phân bố giấy Nếu nguyên tắc phương pháp sắc ký lớp mỏng Làm kỹ thuật sắc ký giấy lên.Tính hệ số Rf định tính chất có hỗn hợp Làm sắc ký lớp mỏng: Xác định Berberin mẫu thử dựa vào Rf so với mẫu chuẩn II Nguyên tắc 2.1 Sắc ký giấy Là phương pháp tách chất hỗn hợp dựa khả phân bố khác chúng dung mơi khơng hịa lẫn với nhau, ln tiếp xúc với nhau: Một dung môi tĩnh dung môi động Dung môi tĩnh thấm giấy (gọi chất mang trơ mặt hoá học với chất cần tách).Sự phân bố chất A dung môi đặc trưng hệ số phân bố Kp (khi phân bố đạt tới cân bằng): Kp Nồng độ chất A dung môi tĩnh [A]t = = Nồng chất A dung Nồng độđộ chất A dung môimôi độngđộng [A]đ - sắc ký) - Cho dung môi động chạy qua (triển khai sắc ký): chất tan nhiều dung mơi động (có Kp nhỏ) di chuyển xa, chạy nhanh Chất tan dung môi động chạy chậm - Phun thuốc thử thích hợp để màu, thu sắc đồ sắc ký (sắc ký đồ) Tốc độ di chuyển chất vị trí vết sắc đồ biểu thị số Rf (gọi thừa số chậm hay thừa số tốc độ): Đường chất tan(của vết màu) Rf = = f(Kp) Đường dung môi Trong điều kiện sắc ký xác định (giấy, dung môi, nhiệt độ, kỹ thuật sắc ký ) Rf coi trị số đặc trưng cho chất Sắc ký dùng để định tính định lượng Để định tính: nguyên tắc xác định chất nhờ trị số Rf Tuy nhiên có nhiều yếu tố ảnh hưởng nên thực tế thường xác định chất sắc ký so sánh chất thử với chất chuẩn sắc đồ Khi Rf chất thử trùng với Rf chất chuẩn xác định chắn chất thử chất chuẩn Để định lượng sắc ký giấy tiến hành đo chiều dài vết , đo diện tích vết, đo cường độ màu vết cắt khoanh giấy có vết chất đem chiết dùng phương pháp thích hợp định lượng Tuy nhiên sắc ký định lượng thường mắc sai số lớn (từ vài phần trăm đến vài chục phần trăm tùy trường hợp) Khi tiến hành sắc ký: Nếu cho dung môi động chạy từ phía giấy sắc ký lên gọi sắc ký giấy lên; cho dung môi động chạy theo đường kính giấy sắc ký hình trịn gọi sắc ký giấy vòng (sắc ký vòng); cho dung mơi động chạy từ phía giấy xuống gọi sắc ký giấy xuống (sắc ký xuống) 2.2 Nguyên tắc sắc ký lớp mỏng Là phương pháp tách chất dựa khả bị hấp phụ (là chủ yếu) khác chúng bề mặt chất rắn (chất hấp phụ), tướng tĩnh chất rắn, tướng động dung môi Chất hấp phụ sắc ký lớp mỏng (như silicagel, nhôm oxyd, thạch cao, xenluloza ) dùng dạng hạt mịn rắc thành lớp mỏng kính (hay kim loại) thành mỏng khơng dính mỏng dính Các chất hấp phụ sử dụng u cầu khơng có phản ứng hóa học với dung môi chất bị hấp phụ Dung mơi động dung mơi phân cực (như nước, alcol thấp) dung mơi phân cực (như benzen, cloroform, hexan, cycloluxan, cacbontetraclorua ) hay hỗn hợp dung môi với tỷ lệ khác Chọn dung môi chất hấp phụ tùy thuộc vào chất cần xác định, chất xác định không phân cực chọn chất hấp phụ có hoạt tính cao (hấp phụ mạnh) dung mơi khơng hay phân cực Chất phân cực ta chọn ngược lại Sau cho dung dịch chứa chất cần xác định lên chất hấp phụ (chấm sắc ký giấy), chất bị hấp phụ Khi triển khai cho dung môi động chạy, chất bị phản hấp phụ di chuyển, tùy theo khả bị hấp phụ phản hấp phụ ta thu sắc ký đồ đó, tính Rf chất xác định sắc ký giấy III Một số ví dụ 2+ 2+ 3.1 Tách hỗn hợp Cu Hg sắc ký giấy lên 3.1.1 Dụng cụ, hóa chất -Bình chạy sắc ký -Bình phun thuốc thử màu -Ống đong pha dung môi -Ống mao quản nhỏ (hoặc micropipet) -Giấy sắc ký -Butanol -HCl 3N -Dung dịch Na2S 0,2% -Dung dịch Hg(NO3)2 1% -Dung dịch Cu(NO3)2 1% -Dung dịch hỗn hợp cần tách(dung dịch tập) 3.1.2 Tiến hành Trên giấy sắc ký ( 8x20cm) kẻ đường chì mờ cách mép khoảng 1,5-2,0cm Vẽ vịng trịn đường kính 2mm cách cách mép bên khoảng 1,5cm Dùng mao quản lấy dung dịch Hg(NO3)2 ,Cu(NO3)2 dung dịch hỗn hợp cần tách chấm vào vòng tròn (lưu ý vòng trịn loại dung dịch) Làm khơ tiếp tục chấm lại khoảng 3-5 lần Pha 20ml hỗn hợp dung mơi gồm Butanol:HCl 3N = 1:1 cho vào bình chạy sắc ký.Treo giấy sắc ký (đã chấm dung dịch) vào bình sắc ký chưa cho giấy chạm vào dung mơi.Đậy bình để giấy bão hịa dung mơi khoảng 30 phút.Sau cho giấy sắc ký ngập vào dung mơi khoảng 1cm.Đậy kín, sau giờ, lấy giấy sắc ký ra, hơ nóng nhẹ cho bay hết dung mơi.Phun dung dịch Na2S lên giấy sắc ký Để khô.Đo xác định Rf chất.Cho biết chất có hỗn hợp cần tách.Yêu cầu sắc ký đồ gọn, rõ ràng 2+ 2+ 2+ 3+ 3.2 Tách hỗn hợp Cu ,Ni ,Co ,Fe sắc ký vòng 3.2.1.Dụng cụ, hóa chất -Nắp petri có đường kính nhau: -Bình phun thuốc : -Ống đong 1ml -Pipet chia độ -Mao quản(hoặc micropipet) -Dung dich Ni(NO3)2 1% -Dung dịch Co(NO3)2 1% -Dung dịch Cu(NO3)2 1% -Dung dịch FeCl3 1% -Dung dịch acid rubenic 0,1% cồn 60 -Amoniac đặc -Dung dịch HCl 20% -Dung dịch Kaliferoxyanua 5% -Dung dịch hỗn hợp cần tách (dung dịch tập) 3.2.2.Cách tiến hành: Pha hỗn hợp dung môi Aceton : HCl 20% =8,8 : 1,2 Lắc đổ vào nắp petri, đậy kín nắp petri khác có đường kính Cắt giấy sắc ký thành hình trịn rộng nắp petri chút Từ tâm vẽ đường trịn đường kính 1,0-1,5cm Trên đường tròn chấm điểm cách nhau,từ điểm chấm dung dịch Ni(NO 3)2, Co(NO3)2, Cu(NO3)2, FeCl3, hỗn hợp cần tách (mỗi điểm dung dịch riêng)sao cho vết dung dịch loang không 2mm.Khoét lỗ thủng tâm giấy cuộn mẫu nhỏ giấy sắc ký khác thành bấc trịn dài khoảng 1,5cm cắm vừa khít lỗ thủng vừa khoét giấy sắc ký.Đặt giấy sắc ký có bấc giấy lên nắp petri khơng cho bấc chạm vào dung môi.Đậy nắp để giấy bão hịa dung mơi khoảng 15 phút.Sau cho bấc nhúng vào dung môi,dung môi hút lên chảy lan giấy sắc ký thành hình trịn Khi dung mơi chạy đến cách mép giấy khoảng 0,5-1cm lấy ra, để khô phun thuốc acidrubenic 0,1%, sau làm khơ để bão hịa amoniac Sấy khô, phun thuốc Kaliferocyanua Nhận xét vị trí vết màu sắc đồ.Kết luận có mặt ion hỗn hợp cần tách.Yêu cầu sắc đồ phải rõ ràng, định tính 3.3 Phát berberin sắc ký lớp mỏng 3.3.1 Dụng cụ, hóa chất - Bình chạy sắc ký - Mao quản - Bình phun thuốc thử - Bản mỏng tráng sẵn Silicagel F254 - Ống đong dung môi - Bình nón - n-buthanol - Acid acetic - Nước - Thuốc thử Dragendorff 3.3.2 Tiến hành Bản mỏng Silicagel F254 Dung môi khai triển: n-butanol : acid acetic : nước (7:1:2) Chuẩn bị mẫu: - Dung dịch mẫu thử: cân khoảng 0,1 g bột thuốc cho vào bình nón, thêm 10 ml cồn 90% (TT),lắc đều, sau lọc qua thu dung dịch thử - Dung dịch đối chiếu: berberin clorid/ethanol 90% Chấm riêng biệt mỏng khoảng 10 µl dung dịch Sau triển khai sắc ký, lấy mỏng ra, để khô khơng khí Phun lên mỏng thuốc thử Dragendorff Trên sắc ký đồ dung dịch thử có vết màu đỏ cam giá trị Rf với vết berberin thu sắc ký đồ dung dịch đối chiếu IV Nội dung thực hành: 2+ 2+ 4.1 Tách Ni Cu kỹ thuật sắc ký giấy lên Trên giấy sắc ký GF254 ( 8x20cm) kẻ đường chì mờ cách mép khoảng 1,5-2,0cm Chấm điểm cách đường kẻ ngang Dùng mao quản lấy dung dịch Ni(NO3)2 ,Cu(NO3)2 dung dịch hỗn hợp cần tách chấm vào điểm Làm khô tiếp tục chấm lại khoảng lần Pha 20ml hỗn hợp dung môi gồm Aceton : HCl 20% = 8,8 : 1,2 cho vào bình chạy sắc ký Treo giấy sắc ký (đã chấm dung dịch) vào bình sắc ký chưa cho giấy chạm vào dung môi.Đậy bình để giấy bão hịa dung mơi khoảng 30 phút Sau cho giấy sắc ký ngập vào dung mơi khoảng 1cm Đậy kín, dung mơi chạy đến cách mép giấy khoảng 0,5-1cm lấy ra, để khơ phun thuốc acid rubenic 0,1%, sau làm khơ để bão hịa amoniac Sấy khơ, phun thuốc Kali ferocyanua.lấy giấy sắc ký ra, hơ nóng nhẹ cho bay hết dung môi Để khô, đo xác định Rf chất Cho biết chất có hỗn hợp cần tách Yêu cầu sắc ký đồ gọn, rõ ràng 4.2 Phát berberin sắc ký lớp mỏng Trên mỏng tráng sẵn Silicagel F254 kẻ đường chì mờ cách bờ 1-1,5 cm Chấm điểm cách cách mép bên 0,8-1 cm đường kẻ ngang Dùng mao quản chấm dung dịch mẫu thử, mẫu đối chiếu vào điểm Chờ cho vết khô chấm vết tiếp theo, vết chấm phải gọn đồng tâm Pha 10 ml hỗn hợp dung môi pha động cho vào bình sắc ký (lót sẵn miếng giấy lọc bình) Đậy kín nắp bình lại, bão hịa dung môi khoảng 30 phút, dùng vaselin thoa nắp để đảm bảo độ kín cho bình Dùng kẹp đưa mỏng tựa vào thành bình từ từ, vạch ngang phải nằm mặt dung mơi Đậy kín nắp bình lại, dung môi chạy cách mép khoảng 0,5-1cm lấy Để khơ, phun thuốc thử màu Đo xác định Rf berberin sắc ký đồ V Câu hỏi lượng giá 5.1.Trình bày nguyên tắc phương pháp sắc ký phân bố giấy, sắc ký lớp mỏng 5.2 So sánh hai phương pháp sắc ký giấy sắc ký lớp mỏng ? 2+ 2+ 5.3.Trong sắc ký đồ chạy sắc ký giấy lên (tách Cu Ni ) ion có Rf lớn hơn? Vì sao? 5.4 Hãy cho biết vài đặc điểm giấy dùng làm giấy sắc ký đặc điểm pha tĩnh sắc ký mỏng? 5.5 Thế sắc ký pha thuận, pha đảo Cách chọn dung môi sắc ký giấy, sắc ký lớp mỏng BÀI PHƯƠNG PHÁP ĐO QUANG 3+ 2+ Định lượng Fe ,Cu phương pháp đo quang phổ hấp thụ UV - VIS I Mục tiêu 1.Trình bày nguyên tắc phương pháp đo quang phổ hấp thụ vùng tử ngoại (UV) khả kiến(VIS).Làm quen vận hành máy đo 2.Thực hành chọn bước sóng để đo mật độ quang dung dịch 3.Thực phép định lượng chất phương pháp đo quang theo phương pháp so sánh phương pháp đường chuẩn II Nguyên tắc phương pháp đo quang phổ hấp thụ tử ngoại khả kiến Dựa hấp thụ ánh sáng (bức xạ điện từ) dung dịch chất nghiên cứu vùng tử ngoại (UV) khả kiến (VIS) Định luật hấp thụ ánh sáng dung dịch định luật Lambert-Beer: A = K.C.l A mật độ quang dung dịch, K hệ số hấp thụ, l bề dày lớp dung dịch(cm), C nồng độ dung dịch Khi nồng độ C tính theo mol/lit mol/lit, l =1cm, ta có A=K.C l =K= ε gọi hệ số hấp thụ phân tử , đặc trưng cho chất tan dung dịch phụ thuộc vào bước sóng ánh sáng đơn sắc Khi nồng độ C tính theo phần trăm (KL/TT) 1%, l=1cm, ta có A = K.C.l = K= 1% E 1cm gọi hệ số hấp thụ riêng (ký hiệu E(1,1)) Định luật Lambert-beer dùng xạ đơn sắc, đo máy đo quang phổ hấp thụ UV-VIS cần phải dùng lăng kính cách tử để tạo xạ đơn sắc Đường biểu diễn phụ thuộc mật độ quang hay hệ số hấp thụ vào bước sóng ánh sáng gọi quang phổ hấp thụ chất nghiên cứu có dạng: BÀI PHƯƠNG PHÁP ĐO PHỔ UV-VIS (tt) Định lượng Novocain phương pháp chiết đo quang I.Mục tiêu: 1.Trình bày nguyên tắc phương pháp chiết cặp ion 2.Thực động tác chiết nước với dung môi hữu không trộn lẫn với nước 3.Định lượng chất phương pháp chiết đo quang II Nguyên tắc phương pháp chiết cặp ion: Khi cho ion tác dụng với ion trái dấu hình thành cặp ion giống phân tử trung hịa điện chiết dung mơi gây phân ly: - + - + A + B = A B (cặp ion) Điều kiện để chiết cặp ion hai ion tạo cặp phải có khối lượng lớn kỵ nước.Mặt khác chiết phải cố gắng trì pH tướng nước cho ngăn cản ion tạo cặp chuyển sang dạng phân tử(bởi hai ion chuyển sang dạng phân tử (bởi hai ion chuyển sang dạng phân tử khơng cịn tạo cặp ion nữa).Đơi làm tăng hiệu suất chiết cặp ion cách thêm chất điện ly (chất thay muối kết) vào dung dịch nước.Sẽ làm giảm khả hịa tan nước,giảm số điện mơi pha nước ,làm cho tạo cặp ion dễ dàng Trong phân tích ,ứng dụng việc chiết cặp ion để định lượng nhiều chất cách cho ion cần định lương tạo cặp với ion trái dấu có màu ,rồi chiết vào dung môi hữu đem so màu đo quang Để đạt kết tốt cần chọn chất màu không tan vào dung môi chiết,dùng thừa chất màu chọn pH thích hợp III.Định lượng Novocain phương pháp chiết đo quang: Novocain: procain hydroclorid O H2N O CH2 CH2 N ( C2 H5 ) H (C13H20O2N2.HCl = 278,80) Tên khoa học: Benzoic acid,4-amino-2 (diethylamino)ethyl ester,monohydrocloride 3.1.Nguyên tắc: Novocain bazơ tổng hợp, có khả tạo cặp ion màu với số chất acid(thí dụ màu azoin heliantin, tropeolin OO ).Trong môi trường dung dịch đệm acetat có pH + - 4-5 Novocain dạng cation (B ) acid màu heliantin dạng anion (A ) + - tạo thành cặp ion B A có màu chiết vào cloroform: - + - A +B =A B + + B : dạng cation alcaloid,base tổng hợp - A : dạng anion màu acid - + A B : có màu,chiết vào cloroform Để định lượng, lấy lớp cloroform đem đo mật độ quang bước sóng 420nm 3.2.Dụng cụ, hóa chất: -Buret -Pipet xác loại -Bình gạn 50ml -Bình định mức 10ml -Các cốc thủy tinh -Phễu lọc -Giấy lọc -Ống nghiệm to -Dung dịch Novocain chuẩn 1mg/ml(0,1%) -Dung dịch tiêm Novocain để định lượng(khi dùng phải tính tốn pha lỗng để có nồng độ chuẩn) -Dung dịch đệm acetat(pH=4-5) -Dung dịch heliantin 0,1% -Cloroform -Máy đo quang phổ UV-VIS 3.3.Tiến hành: Cho vào bình gạn chất theo bảng sau: Bình gạn So S1 S2 X1 X2 Dungacetat dịch cho Đệm (ml)vào 3 3 Heliantin0,1% 2 2 Novocain chuẩn 1mg/ml(ml) 0,5 0,5 0 Dung dịch Novocain định lượng 0 0,5 0,5 4,5 4,5 4,5 4,5 pha loãng (ml) Nước cất Chiết bình với CHCl3 cách lắc nhẹ 10 phút (làm lần, lần ml CHCl 3) Gộp dịch chiết CHCl3 (3 lần) bình gạn vào bình định mức 25ml tương ứng,thêm CHCl3 vào bình vạch, lắc đều.Lọc qua giấy lọc khô vào ống nghiệm to tương ứng (sạch khô) Đo mật độ quang A dịch lọc (trong ống nghiệm) bước sóng 420nm với dung dịch so sánh dich chiết từ bình S0 Tính kết theo phương pháp so sánh: CX  Cch AX AS Cx : nồng độ dung dịch novocain phải định lượng Cch: nồng độ dung dịch novocain phải chuẩn Ax: mật độ trung bình X1 X2 As: mật độ trung bình S1 S2 Yêu cầu kết định lượng cao không 7% IV Câu hỏi lượng giá: 4.1.Trình bày nguyên tắc phương pháp chiết cặp ion 4.2.Nguyên tắc phương pháp định novocain chiết đo quang 4.3.Khi chiết cặp ion novocain heliantin,ion ion có khối lượng lớn kỵ nước 4.4.Có thể chiết cặp ion novocain heliantin mơi trường có pH5 khơng?tại sao? 4.5.Thiết lập cơng thức tính kết phép định lượng ( có chứng minh giải thích) BÀI PHƯƠNG PHÁP ĐO PHỔ UV-VIS (tt) Định lượng Berberin phương pháp đo quang theo phương pháp thêm I Mục tiêu: 1.Nêu nguyên tắc phương pháp thêm định lượng đo quang 2.Làm phép định lượng chất hỗn hợp phức tạp đo quang theo phương pháp thêm II Xác định nồng độ dung dịch phương pháp đo quang theo phương pháp thêm: Là phương pháp có nguyên tắc với phương pháp so sánh, đòi hỏi dung dịch đo phải tuân theo đinh luật Lambert-Beer hai dung dịch đo có nồng độ không nên khác nhiều Phương pháp tiến hành cách: Đo Dx dung dịch có nồng độ Cx cần xác định,sau tiến hành đo D ' x dung dịch có nồng độ Cx xác định có thêm lượng chất chuẩn ứng với nồng độ Cch thêm vào.Khi ta có: ' Dx = ε.l.Cx ( Dx = ε.l.(C x + C ch) chất, bước sóng đo, l đo loại cuvet).Do đó: DX D DX CX  ' C  X X  CX  Cch ' D D C ch X X Phương pháp thường áp dụng dung dịch chất cần xác định có thành phần phức tạp ,lúc loại trừ số yếu tố ảnh hưởng mà nhiều chưa biết III.Định lượng Berberin viên nén Berberin: O O - Cl 2H2O + N O H3C O CH3 - Berberin hydroclorid [C20H18NO4 Cl ].2H2O = 388,92 3.1.Nguyên tắc: Dung dịch Berberin nước có cực đại hấp thụ ánh sáng bước sóng 263nm 345 nm,vì áp dụng phương pháp đo quang để định lượng berberin.nhưng viên nén, thành phần phức tạp, ngồi berberin cịn có tá dược,do dùng phương pháp thêm để khắc phục số yếu tố ảnh hưởng 3.2.Dụng cụ,hóa chất: - Máy quang phổ UV-VIS - Cân phân tích - Cối chày sứ - Các bình định mức - Các cốc thủy tinh - Giấy lọc băng xanh - Phễu lọc - Các pipet xác - Berberin.HCl dùng làm chuẩn - Mẫu viên nén Berberin 3.3.Tiến hành: 3.3.1 Pha dung dịch Berberin 1% (dùng làm chuẩn):Cân xác cân phân tích lượng cần thiết để pha (qua tính tốn),hịa tan nước nóng 3.3.2.Định lượng Berberin viên nén: - Cân xác 20 viên nén Berberin cần định lượng.Tính khối lượng trung bình viên Nghiền cối sứ thành bột mịn - Cân xác m gam lượng bột viên (tương ứng với khoảng 0,1g Berberin) cho vào cốc có mỏ loại 100ml.Thêm 20ml nước sôi khuấy kỹ.Để lắng nguội 15 phút,gạn chuyển dung dịch vào bình đinh mức 100ml.Phần cịn lại them 30ml nước sôi khuấy kỹ.Để lắng nguội 15 phút,gạn chuyển dung dịch vào tiếp bình định mức trên.Phần cặn lại thêm tiếp nước sơi, khuấy kỹ sau tập trung hết vào bình định mức 100ml ,them nước đến vạch,lắc kỹ.Lọc qua giấy khô, bỏ 20ml dịch lọc đầu.Lấy xác 10ml dịch lọc cho vào bình định mức 100ml khác ,them nước đến vạch ,lắc kỹ.Đem đo mật độ quang bước sóng 263nm(hoặc 345nm) với dung dịch so sánh nước Dx -Song song tiến hành thí nghiệm sau cân xác mg bột viên có them lượng xác dung dịch Berberin 1% làm chuẩn (tương ứng 0,02g Berberin)vào trước hòa tan,các giai đoạn sau tiến hành tương tự.Kết đo mật độ x ’ quang D ’ Từ Dx, Dx lượng berberin biết thêm vào ,tính hàm lượng berberin viên IV.Câu hỏi lượng giá: 4.1.Cách xác định nồng độ dung dịch theo phương pháp theemtrong phương pháp đo quang 4.2.Thiết lập cơng thức tính kết số gam Berberin viên Berbrin 4.3.Nếu dung dịch chất cần xác định khơng tn theo định luật Lambert –Beer, áp dụng định lượng theo phương pháp thêm khơng? BÀI PHƯƠNG PHÁP ĐIỆN HĨA :ĐO pH VÀ CHUẨN ĐỘ ĐO THẾ I Mục tiêu: 1.Trình bày chất phép đo pH đo phương pháp chuẩn độ đo 2.Thực hành động tác đo pH Đo đạt sai không ± 0,2 đơn vị pH 3.Làm phép chuẩn độ đo II Bản chất phương pháp: Thực chất phương pháp đo đo suất điện động pin tạo điện cực thay đổi phụ thuộc vào nồng độ ion chất cần xác định (gọi điện cực thị )và điện cực khơng thay đổi (gọi điện cực so sánh), điện cực nhúng vào dung dịch nghiên cứu : E = Echỉ thị -Eso sánh Máy đo Cực thị Cực so sánh Dung dịch đo Vì tìm điện cực thị cho ion (chất) đó, xác định nồng độ phương pháp đo tùy theo kỹ thuật thực sau: *Tiến hành đo dung dịch chuẩn dung dịch cần xác định từ suy nồng độ ion cần xác định theo phương pháp so sánh, đường chuẩn (như phương pháp đo quang phổ hay sắc ký): Điển hình cho kỹ thuật phân tích đo pH, đo pM (M ion đó) *Tiến hành đo dung dịch q trình chuẩn độ ,từ suy điểm tương đương để tính tốn nồng độ dung dịch, gọi phương pháp chuẩn độ đo III Xác định pH dung dịch phương pháp đo thế: Dùng điện cực thị thủy tinh hay Pt Điện cực so sánh calomen hay Ag/AgCl Để cho gọn dùng điện cực tổ hợp điện cực kép gồm điện cực thị điện cực so sánh (thường hay dùng thủy tinh+calomen; thủy tinh Ag/AgCl; kim loại quí+calomen) Khi nhúng cực vào dung dịch đo có pH khoảng 0