FELODIPIN phương pháp định lượng felodipin trong viên nén bằng HPLC

FELODIPIN phương pháp định lượng felodipin trong viên nén bằng HPLC  Phương pháp đã được thẩm định cho độ đặc hiệu cao, độ phù hợp tốt, khoảng tuyến tính đảm bảo với yêu cầu định lượng felodipin trong chế phẩm, độ chính xác và độ đúng cao.  Phương pháp được áp dụng định tính, định lượng felodipin trong viên felodipin 5 mg giải phóng có kiểm soát bào chế được. Kết quả thu được cho thấy viên chứa felodipin với hàm lượng nằm trong khoảng 90,0 % 110,0 % so với lượng ghi trên nhãn đạt giới hạn quy định.

MỤC LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Đại cương felodipin 1.1.1 Công thức tính chất lý hóa .3 1.1.2 Dược động học .4 1.1.3 Tác dụng dược lý 1.1.4 Chỉ định 1.1.5 Chống định .5 1.1.6 Thận trọng 1.1.7 Tác dụng không mong muốn (ADR) 1.1.8 Liều lượng cách dùng 1.1.9 Quá liều xử trí 1.1.10 Tương tác thuốc 1.1.11 Một số chế phẩm felodipin thị trường 1.2 Một số nghiên cứu định lượng felodipin .9 1.3 Tổng quan HPLC 11 1.3.1 Khái niệm thông số đặc trưng cho trình sắc ký .11 1.3.2 Cấu tạo máy HPLC 14 1.3.3 Ứng dụng kỹ thuật HPLC 14 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 2.1 Đối tượng phương tiện nghiên cứu .16 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 16 2.1.2 Phương tiện nghiên cứu 16 2.2 Nội dung nghiên cứu 17 2.3 Phương pháp nghiên cứu 18 2.3.1 Khảo sát điều kiện sắc ký .18 2.3.2 Thẩm định phương pháp .18 2.3.3 Ứng dụng phương pháp phân tích định tính, định lượng felodipin viên nén felodipin giải phóng có kiểm sốt 20 2.3.4 Phương pháp xử lý kết 20 PHẦN 3: THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN .21 3.1 Xây dựng điều kiện phân tích Felodipin HPLC 21 3.1.1 Lựa chọn cột sắc ký 21 3.1.2 Lựa chọn bước sóng thích hợp .22 3.1.3 Khảo sát lựa chọn tốc độ dòng pha động 23 3.1.4 Lựa chọn thể tích tiêm mẫu 25 3.2 Chuẩn bị mẫu 26 3.2.1 Chuẩn bị dung dịch chuẩn 26 3.2.2 Chuẩn bị dung dịch thử: .27 3.2.3 Chuẩn bị mẫu trắng: .27 3.3 Thẩm định phương pháp HPLC định lượng Felodipin 27 3.3.1 Độ thích hợp hệ thống 27 3.3.2 Tính đặc hiệu 28 3.3.3 Độ tuyến tính 29 3.3.4 Độ xác 31 3.3.5 Độ đúng: .32 3.4 Ứng dụng định tính định lượng Felodipin chế phẩm .33 3.5 BÀN LUẬN 36 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 38 TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT ATC (Anatomical Therapeutic Chemical): Hệ thống phân loại thuốc HPLC (High Performance Liquid Chromatography): Sắc ký lỏng hiệu cao HIV (Human Immuno-deficiency Virus): Virus gây suy giảm miễn dịch người MS (Mass spectrometry): Khối phổ UV- VIS (Ultraviolet - Visible): Tử ngoại - khả kiến PA (Pure for analysis): Độ tinh khiết phân tích PVP: Polyvinyl pyrrolidone ACN : Acetonitril MetOH: Methanol RSD (Relative standard deviation): Độ lệch chuẩn tương đối r: Hệ số tương quan SD (Standard deviation): Độ lệch chuẩn SKD: Sinh khả dụng t1/2: Thời gian bán thải USP (The United States Pharmacopeia): Dược điển Mỹ v/v: Thể tích/thể tích v/v/v: Thể tích/thể tích/thể tích DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Các chế phẩm felodipin thị trường Bảng 3.1 Kết khảo sát lựa chọn cột .21 Bảng 3.2 Kết khảo sát tỷ lệ pha động 24 Bảng 3.3 Cách pha dung dịch chuẩn 27 Bảng 3.5 Kết khảo sát độ tuyến tính 30 Bảng 3.6 Kết xác định độ xác 31 Bảng 3.7 Kết đánh giá độ .33 Bảng 3.8 Kết định lượng Felodipin viên giải phóng có kiểm sốt.34 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Cơng thức cấu tạo felodipin Hình 1.3 Sơ đồ hệ thống HPLC 14 Hình 3.1 Sắc ký đồ Felodipin phân tích cột Zorbax SB .21 Hình 3.2 Sắc ký đồ Felodipin phân tích cột Eclipase XDB 22 Hình 3.3 Phổ hấp thụ tử ngoại dung dịch Felodipin chuẩn 23 Hình 3.4 Sắc ký đồ hệ pha động thứ 24 Hình 3.5 Sắc ký đồ hệ pha động thứ 24 Hình 3.6 Sắc ký đồ hệ pha động thứ 25 Hình 3.7 Sắc ký đồ Felodipin (khảo sát điều kiện sắc ký) 26 Hình 3.8 Sắc ký đồ mẫu trắng .29 Hình 3.9 Sắc ký đồ mẫu chuẩn nồng độ 20µg/ml 29 Hình 3.10 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc tuyến tính nồng độ 30 diện tích pic 30 Hình 3.11 Sắc ký đồ mẫu chuẩn 35 Hình 3.12 Sắc ký đồ mẫu định lượng 35 ĐẶT VẤN ĐỀ Bệnh tim mạch bệnh phổ biến, gánh nặng sức khỏe yếu, để lại nhiều tàn phế nguyên nhân gây tử vong hàng đầu tồn giới Trong đó, tăng huyết áp (hay gọi cao huyết áp) bệnh tiêu biểu thường gặp Nếu khơng chẩn đốn điều trị gây biến chứng di chứng nặng nề tai biến mạch não, suy thận… ảnh hưởng xấu đến chất lượng sống người bệnh, trở thành gánh nặng cho gia đình cho xã hội Do vậy, thuốc điều trị bệnh tim mạch tăng huyết áp ngày chiếm tỷ trọng lớn, có vai trị quan trọng cơng tác chăm sóc sức khỏe cộng đồng Cùng với phát triển mạnh mẽ công nghiệp dược phẩm nước nhiều năm gần đây, dạng bào chế viên tác dụng kéo dài đời để phù hợp với đặc thù điều trị bệnh tim mạch phải sử dụng thường xuyên, lâu dài mà giảm số lần dùng thuốc, giảm tác dụng bất lợi nhiều như: viên nén giải phóng chậm, viên nén bao film giải phóng chậm, viên nén giải phóng kéo dài, viên nén giải phóng có kiểm sốt… Dược điển Anh, Mỹ có số chun luận viên tác dụng kéo dài, Dược điển Việt Nam chưa có chuyên luận riêng dạng bào chế Nhiều dược chất dùng dạng bào chế như: diltiazem, nicardipin, nifedipin, verapamil, …Trong đó, felodipin thuốc sử dụng phổ biến Việt Nam năm gần Chế phẩm viên nén felodipin mg nghiên cứu bào chế Do đó, để đánh giá kịp thời chất lượng chế phẩm nghiên cứu yêu cầu bắt buộc Để góp phần phát triển chế phẩm thuốc tiến hành thực đề tài: “Xây dựng phương pháp định lượng felodipin viên nén giải phóng kéo dài HPLC” với mục tiêu sau:  Xây dựng quy trình định tính định lượng Felodipin viên nén HPLC  Thẩm định quy trình phân tích xây dựng nhằm định tính định lượng Felodipin viên nén Felodipin mg giải phóng kéo dài phương pháp HPLC CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Đại cương felodipin 1.1.1 Cơng thức tính chất lý hóa Cơng thức cấu tạo: Hình 1.1 Cơng thức cấu tạo Felodipin Công thức phân tử: C18H19Cl2NO4 Khối lượng phân tử: 384,3 Tên khoa học: Ethyl methyl 4-(2,3-dichlorophenyl)-1,4-dihydro-2,6dimethylpyridine-3,5-dicarboxylat [10], [17] Mã ATC: C08C A02 [2] Phân loại: Felodipin thuốc chẹn kênh calci có tính chọn lọc cao mạch, dùng điều trị tăng huyết áp đau thắt ngực ổn định [2] Tính chất lý hóa: Bột tinh thể trắng đến vàng nhạt Không tan nước (19,17 mg/L 25C), dễ tan aceton, tan methanol, ethanol, dicloromethan tan nhẹ heptan Nhiệt độ nóng chảy dạng khan: 145oC [10], [15] Độ ổn định bảo quản: Các chế phẩm nên bảo quản kín, tránh ánh sáng, nhiệt độ 30oC [2], [17] 1.1.2 Dược động học Hấp thu: Felodipin hấp thu gần hồn tồn qua đường tiêu hố sau uống chuyển hoá lần đầu gan có sinh khả dụng tuyệt đối (SKD) khoảng 15% Nồng độ đỉnh huyết tương đạt sau 3-5 Thức ăn ảnh hưởng đến tốc độ hấp thu, không ảnh hưởng đến mức độ hấp thu Phân bố: Liên kết với protein huyết tương xấp xỉ 99%, chủ yếu albumin Thể tích phân bố trạng thái ổn định 10 L/kg Chuyển hóa: Felodipin chuyển hố mạnh qua gan Các chất chuyển hóa xác định khơng có hoạt tính gây giãn mạch Thải trừ: Bài xuất chủ yếu (khoảng 70% liều dùng) qua nước tiểu dạng chất chuyển hố khơng hoạt tính, phần cịn lại chưa chuyển hố đào thải qua phân, 0,5% liều dùng tiết dạng không đổi nước tiểu Thời gian bán thải (t1/2) felodipin 11-16 Felodipin có độ thải cao, trung bình 1200 mL/phút Độ thải giảm người cao tuổi bệnh nhân suy giảm chức gan Khơng có nguy tích lũy thuốc điều trị kéo dài [2], [16] 1.1.3 Tác dụng dược lý Tác dụng hạ áp động mạch: Felodipin thuốc chẹn kênh calci chậm có tính chất chọn lọc thuộc nhóm dihydropyridin Felodipin làm giảm trương lực động mạch (nhất tiểu động mạch), dẫn đến tác dụng giãn mạch gây hạ huyết áp Do tính chất chọn lọc cao trơn thành tiểu động mạch nên felodipin liều điều trị không gây tác dụng trực tiếp đến tim, đặc biệt đến tính co bóp tim tính dẫn truyền Felodipin khơng gây hạ huyết áp đứng thuốc khơng ảnh hưởng đến trơn tĩnh mạch chế kiểm soát hệ giao cảm Felodipin có tác dụng thải natri lợi tiểu nhẹ giảm tái hấp thu natri nước qua ống thận, khơng gây ứ dịch muối bệnh nhân điều trị lâu dài Tác dụng chống đau thắt ngực: Felodipin cải thiện cân cung cầu oxygen tim Lưu lượng động mạch vành lượng cung cấp oxygen cho tim tăng lên nhờ giãn mạch vành Felodipin giảm huyết áp toàn thân nên làm giảm hậu gánh thất trái, giảm nhu cầu oxygen 25 Cho vào bình định mức 50 ml thể tích dung dịch felodipin nồng độ mg/ml xác bảng 3.3, pha loãng pha động đến vạch, lắc Bảng 3.3 Cách pha dung dịch chuẩn Bình định STT mức (ml) 50 50 50 50 50 Lọc qua màng 0,45 µm để chạy sắc ký Thể tích dung dịch chuẩn gốc (µl) 500 600 800 1000 1200 Nồng độ dự kiến sau pha lỗng (µg/ml) 10 12 16 20 24 3.2.2 Chuẩn bị dung dịch thử: Cân xác khối lượng 20 viên chế phẩm, tính khối lượng trung bìnhviên, nghiền thành bột mịn Cân xác lượng bột viên tương ứng khoảng 5,0 mg felodipin (viên có khối lượng trung bình 354,60 mg) cho vào bình định mức dung tích 50,0 ml, thêm khoảng 30 ml pha động, siêu âm 15 phút thêm pha động vừa đủ tới vạch, lắc Ly tâm với tốc độ 5000 vòng/phút phút Lấy 10,0 ml dịch sau ly tâm vào bình định mức 50,0 ml, thêm pha động tới vạch, lắc Lọc qua màng lọc 0,45 µm, dung dịch thử 3.2.3 Chuẩn bị mẫu trắng: Là mẫu tá dược tự tạo cách trộn theo nguyên tắc đồng lượng dựa vào công thức viên, không chứa dược chất cân xử lý mẫu giống mẫu thử 3.3 Thẩm định phương pháp HPLC định lượng felodipin 26 3.3.1 Độ thích hợp hệ thống Tiến hành: chuẩn bị mẫu felodipin chuẩn nồng độ 20 µg/ml mục 3.2.1 Sắc ký lặp lại lần dung dịch theo điều kiện chọn Kết trình bày bảng 3.4 Bảng 3.4 Kết khảo sát độ thích hợp hệ thống sắc ký Stt TB RSD% Nhận xét: Thời gian lưu (phút) 7,273 7,154 7,051 7,280 7,281 7,175 7,203 1,29 Diện tích pic(mAU.s) 398,6 396,2 397,9 396,6 396,8 399,0 397,5 0,29 Hệ số đối xứng 0,959 0,994 0,996 0,988 0,990 0,997 Số đĩa lý thuyết 8411 8293 8102 8664 8602 8463 8422,5 Kết bảng cho thấy RSD thời gian lưu diện tích pic Felodipin phép thử 2%,các giá trị đối xứng nằm khoảng cho phép 0,8 ≤ F≤ 1,5 số đĩa lý thuyết trung bình cao Điều chứng tỏ hệ thống sử dụng phù hợp đảm bảo ổn định cho phép phân tích định lượng felodipin 3.3.2 Tính đặc hiệu  Chuẩn bị dung dịch chuẩn Felodipin nồng độ 20 µg/ml mục 3.2.1, mẫu trắng mục 3.2.3  Tiến hành sắc ký với điều kiện chọn với mẫu chuẩn bị Kết thu sắc ký đồ hình 3.8, 3.9 27 Hình 3.8 Sắc ký đồ mẫu trắng Hình 3.9 Sắc ký đồ mẫu chuẩn nồng độ 20µg/ml Nhận xét: hình 3.9 cho thấy pic felodipin có t R= 7,303 phút, pic cân đối sắc nét Trên sắc ký đồ mẫu trắng không xuất pic khoảng thời gian phân tích từ 7- phút Chứng tỏ phương pháp có tính đặc hiệu cao 3.3.3 Độ tuyến tính Tiến hành: chuẩn bị dãy chuẩn felodipin có nồng độ 10-12-16-20-24 µg/ml mục 3.2.1, sắc ký theo điều kiện chọn Ghi giá trị diện tích pic đo ứng với nồng độ dung dịch thiết lập phương trình hồi quy hệ số tương quan r Kết khảo sát độ tuyến tính trình bày bảng 3.5 hình 3.10 28 Bảng 3.5 Kết khảo sát độ tuyến tính Nồng độ C (µg/ml) Diện tích pic (mAU.s) Kết 10,01 12,01 16,02 20,02 24,02 174,4 211,2 292,4 376,7 455,8 Phương trình hồi quy tuyến tính: y=20,237x - 30,125 Hệ số tương quan tuyến tính: R=0,9999 500 450 400 350 300 50 00 150 100 10 15 20 25 30 Hình 3.10 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc tuyến tính nồng độ diện tích pic Nhận xét: Kết bảng 3.5 cho thấy khoảng nồng độ khảo sát, diện tích pic thu đáp ứng sắc ký đồ tỷ lệ thuận với nồng độ chúng,sự phụ thuộc thể qua đường thẳng hồi quy tuyến tính (hình 3.10) hệ số tương quan R= 0,9999 Như phương pháp có tương quan tuyến tính chặt chẽ khoảng nồng độ khảo sát 10 - 24 µg/ml 3.3.4 Độ xác a Độ lặp lại 29  Chuẩn bị dung dịch thử mục 3.2.2 làm mẫu.Tiến hành sắc ký, ghi lại sắc ký đồ tính nồng độ felodipin dung dịch thử theo đường chuẩn xây dựng từ dãy chuẩn  Kết xác định độ lặp lại kết định lượng trình bày bảng 3.6 b Độ xác trung gian Phân tích định lượng felodipin viên ngày Tiến hành tương tự độ lặp lại ngày: phân tích mẫu thử độc lập Tính tốn nồng độ chất thử theo đường chuẩn xây dựng ngày phân tích Kết xác định hàm lượng felodipin viên trình bày bảng 3.6 Bảng 3.6 Kết xác định độ xác STT Độ lặp lại Độ xác trung gian 10 11 12 Khối lượng cân (mg) Diện tích pic (mAU.s) 354,88 384,5 357,00 384,2 367,20 393,7 356,37 391,8 357,10 382,0 366,09 395,6 355,70 390,5 351,40 390,2 355,30 391,9 361,50 396,2 353,10 383,2 356,30 395,9 Gộp kết ngày (n=12) Nhận xét: kết bảng cho thấy: Hàm lượng so với lượng ghi nhãn (%) 102,36 101,68 101,12 103,72 101,11 101,88 105,81 107,02 106,31 105,62 104,61 107,09 Các giá trị thống kê (%) TB=101,98 RSD%=0,96 TB=106,08 RSD%=0,88 RSD%=2,24 30 Với điều kiện chọn, độ lặp lại kết định lượng ngày phân tích cho RSD đạt 0,96% 0,88% nhỏ 2% Đánh giá gộp kết ngày cho RSD 2,24 % nhỏ 3% Kết luận: phương pháp có độ lặp lại ngày độ xác trung gian đáp ứng yêu cầu thẩm định với chế phẩm thuốc 3.3.5 Độ đúng: Tiến hành: - Pha dãy chuẩn: chuẩn bị mục 3.2.1 - Mẫu tự tạo: Cân lượng mẫu tá dược tương đương khối lượng bột chứa mg felodipin vào bình định mức 50,0 ml Thêm xác khoảng mg, mg mg chất chuẩn felodipin vào bình, thêm 35 ml pha động Siêu âm 15 phút, bổ sung pha động tới vạch, lắc Ly tâm với tốc độ 5000 vòng/phút phút Lấy 10,0ml dịch sau ly tâm vào bình định mức 50,0 ml, thêm pha động tới vạch, lắc Lọc qua màng lọc 0,45 µm Sắc ký theo điều kiện chọn trên, tìm độ thu hồi chất chuẩn Kết khảo sát độ phương pháp trình bày bảng 3.7 Bảng 3.7 Kết đánh giá độ Mức STT Khối lượng Nồng độ Felodipin Diện tích pic Lượng felodipi %tìm 31 nồng độ Mức 80% chuẩn thêm vào(mg) (µg/ml) (mAU.s) n tìm lại (mg) 4,04 3,97 4,07 4,96 4,93 4,95 5,99 5,96 5,99 lại 4,01 16,06 297,1 100,66 3,97 15,87 291,3 100,07 4,04 16,16 299,4 100,76 Mức 5,02 20,08 371,3 98,79 100% 4,96 19,84 369,1 99,43 5,05 20,20 370,5 98,01 Mức 6,02 24,096 454,4 99,36 120% 5,95 23,81 452,5 100,17 6,06 24,24 454,7 98,83 Trung bình 99,56 RSD% 0,93 Nhận xét: Kết cho thấy độ phương pháp cho lượng chuẩn tìm lại sau thêm lượng chuẩn biết nằm khoảng 98,0-102,0% Độ lệch chuẩn tương đối 0,93%  2% Như phương pháp có độ cao Nhận xét chung: Phương pháp thẩm định có tính đặc hiệu cao, độ đúng, độ xác cao khoảng nồng độ tuyến tính có hệ số tương quan r 0,9999 đáp ứng yêu cầu thẩm định phương pháp phân tích Phương pháp ứng dụng định lượng felodipin chế phẩm thuốc 3.4 Ứng dụng định tính định lượng Felodipin chế phẩm Trên sở điều kiện sắc ký xây dựng tiến hành định tính, định lượng viên felodipin mg giải phóng có kiểm sốt - sản phẩm nghiên cứu Bộ môn Bào chế trường Đại học Dược Hà Nội Tiến hành:  Chuẩn bị dung dịch thử mục 3.2.2,  Chuẩn bị dung dịch chuẩn: Cân xác khoảng 25,0 mg Felodipin chuẩn vào bình định mức dung tích 25,0 ml, thêm khoảng 15 ml pha động, lắc cho tan, sau pha lỗng pha động đến vạch, lắc dung dịch 32 nồng độ mg/ml Lấy 1,00 ml dung dịch nồng độ mg/ml vào bình định mức 50,0 ml, thêm pha động tới vạch dung dịch chuẩn nồng độ 20 µg/ml  Chạy sắc ký mẫu theo điều kiện chọn, ghi pic đáp ứng Mỗi mẫu thử tiến hành lần, lấy kết trung bình  Hàm lượng felodipin so với lượng ghi nhãn tính theo cơng thức: % hàm lượng = mC× H × (1-a) ×××100 Trong đó: St, Sc (mAu.s): diện tích tương ứng dung dịch thử dung dịch chuẩn Ft, Fc: hệ số pha loãng tương ứng dung dịch thử chuẩn Vt, Vc: thể tích dung dịch thử chuẩn trước pha loãng (ml) a (%): phần trăm hàm ẩm felodipin chuẩn H: hàm lượng felodipin chuẩn (%) mtb: khối lượng trung bình viên (mg) mt, mC: khối lượng bột tương ứng chế phẩm thử chuẩn (mg) b: hàm lượng ghi nhãn viên (mg) Kết quả: cân lượng chuẩn mC = 24,80 mg cho Spic = 364,05 Kết định tính định lượng trình bày bảng 3.8 hình 3.11, 3.12 Bảng 3.8 Kết định lượng Felodipin viên giải phóng có kiểm sốt STT Lượng ghi Khối lượng nhãn cân chế phẩm (mg) thử (mg) 355,3 355,7 356,3 TB ± SD Diện tích pic (mAU.s) 391,9 390,5 395,9 Hàm lượng (%) 106,87 106,37 107,66 106,97±0,65 33 Hình 3.11 Sắc ký đồ mẫu chuẩn Hình 3.12 Sắc ký đồ mẫu định lượng Nhận xét: từ hình 3.11 3.12 thấy thời gian lưu mẫu thử tương ứng với thời gian lưu mẫu chuẩn chứng tỏ pic sắc ký đồ mẫu định lượng felodipin Kết bảng cho thấy chế phẩm viên nén felodipin giải phóng có kiểm sốt đạt quy định hàm lượng theo qui định hàm lượng Dược điển Việt Nam IV chế phẩm viên nén có hàm lượng hoạt chất mg 90,0 – 110,0 % so với lượng ghi nhãn 34 3.5 BÀN LUẬN HPLC phương pháp đại áp dụng rộng rãi phịng thí nghiệm nhiều nước giới phòng thí nghiệm Việt Nam ưu điểm trội độ ổn định, độ xác cao, định lượng nhiều chất không cần phân tách trước nhiều bước sóng khác Phương pháp chúng tơi đưa sử dụng phương pháp HPLC góp phần bước đầu tiêu chuẩn hóa cho chế phẩm viên nén felodipin mg giải phóng có kiểm sốt mà Dược điển Việt Nam chưa có chuyên luận riêng Quy trình phân tích chúng tơi xây dựng để định lượng Felodipin cho kết tốt, tính khả thi cao Phương pháp thẩm định đầy đủ tính đặc hiệu, độ phù hợp, khoảng tuyến tính, độ đúng, độ lặp lại độ xác trung gian Kết thẩm định cho thấy phương pháp có tính đặc hiệu cao (thời gian lưu khoảng 7,3 phút), độ lặp lại tốt (RSD = 0,96%), độ xác trung gian cao (RSD = 0,88%), khoảng tuyến tính từ 10 µg/ml đến 24 µg/ml, độ cao (độ tìm lại nằm khoảng 98,00% đến 100,76%, RSD=0,93%) So sánh với phương pháp HPLC định lượng felodipin viên nén P Santhosh Kumar phương pháp xây dựng dùng cột C18 phổ biến, loại cột ngắn, dung môi sử dụng làm pha động kinh tế hơn, thời gian phân tích ngắn Cịn so với phương pháp Fusun Gedil phương pháp sử dụng dung môi đắt tiền loại cột ngắn hơn, khơng sử dụng chất chuẩn nội, thời gian phân tích ngắn mà đảm bảo tiêu chí thẩm định nên kinh tế nhiều So với phương pháp hóa học phương pháp quang phổ UV- VIS phương pháp xây dựng sử dụng thiết bị HPLC phức tạp hệ thống sử dụng phổ biến niều nơi mà độ nhạy, độ ổn định độ xác cao mặt định tính định lượng 35 Như vậy, phương pháp đơn giản, sử dụng dung môi acetonitril, methanol dung môi phổ biến, hay dùng cho HPLC, chương trình chạy sắc ký đẳng dịng thích hợp cho đơn vị máy HPLC khơng có khả chạy gradient dung mơi Phương pháp áp dụng định tính felodipin dựa vào thời gian lưu, định lượng felodipin viên dựa vào diện tích pic thu được, thử độ đồng hàm lượng viên chứa felodipin đồng thời dựa vào khoảng tuyến tính ta dùng phương pháp thử độ hòa tan với chế phẩm viên nén felodipin giải phóng kéo dài phổ biến thị trường Tóm lại, phương pháp phân tích xây dựng có độ đặc hiệu độ lặp lại cao, khoảng tuyến tính phù hợp, độ đảm bảo lại dễ dàng ứng dụng phịng thí nghiệm, sở sản xuất…sử dụng máy HPLC với thời gian phân tích khoảng phút KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT Kết luận Từ kết thực nghiệm thu được, đạt mục tiêu đề xây dựng phương pháp định lượng felodipin viên nén HPLC 36 Phương pháp đơn giản, thực nhanh, dung môi không phức tạp với chương trình sắc ký sau:  Cột sắc ký: Eclipse XDB C18 4,6ì150 mm, àm Detector: UV bước sóng 362 nm  Pha động: Acetonitril: dung dịch đệm KH 2PO4 25mM pH 3,0: Methanol với tỷ lệ 30:30:40 (v/v/v)  Thể tích tiêm: 20 µl  Tốc độ dịng: 1,2 ml/phút  Thời gian phân tích mẫu phút  Phương pháp thẩm định cho độ đặc hiệu cao, độ phù hợp tốt, khoảng tuyến tính đảm bảo với yêu cầu định lượng felodipin chế phẩm, độ xác độ cao  Phương pháp áp dụng định tính, định lượng felodipin viên felodipin mg giải phóng có kiểm soát bào chế Kết thu cho thấy viên chứa felodipin với hàm lượng nằm khoảng 90,0 % - 110,0 % so với lượng ghi nhãn đạt giới hạn quy định Đề xuất Với kết đạt từ khóa luận, chúng tơi đề xuất sau:  Tiếp tục nghiên cứu áp dụng quy trình vào thực tế phịng thí nghiệm, sở sản xuất có máy HPLC, đồng thời đề xuất với hội đồng Dược điển Việt Nam đưa qui trình phân tích vào Dược điển Việt Nam lần xuất tới 37 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt Bộ Y tế (2009), Dược điển Việt Nam IV, Bộ Y tế, Hà Nội Bộ Y tế (2009), Dược thư quốc gia Việt Nam, NXB Y học, tr 523-525 Bộ Y tế (2007), Dược lý học II, NXB Y học, Hà Nội, tr 69-70 Bộ Y tế (2007), Hóa Phân Tích II, NXB Y học, Hà Nội, tr.168-186 Bộ Y tế (2007), Kiểm nghiệm dược phẩm, NXB Y học, Hà Nội Bộ Y tế (2009), Hướng dẫn Asean thẩm định quy trình phân tích Phụ lục 7- Thơng tư 22/2009/TT-BYT Quy định đăng ký thuốc Thái Nguyễn Quỳnh Như (2007), Kiểm nghiệm thuốc sắc ký lỏng hiệu cao, Bộ Y tế-Viện kiểm nghiệm thuốc Trung ương-Tài liệu đào tạo: Đảm bảo chất lượng thuốc số phương pháp kiểm nghiệm thuốc, tr.230250 Vidal Việt Nam (2010), CMPMedical Asia Pte LTd Tài liệu Tiếng Anh Martin Ahnoff (1984), “Determination of felodipine in plasma by capillary gas chromatography with electron capture detection”, Journal of Pharmaceutical & Biomedical Analysis, Volume 2, Nos 314, pp 519-526 10 European Pharmacopoeia 6.0 (2007), Volume 2, pp.1867-1869 11 Margareth Gabrielsson, Kurt Jurgen Hoffmann, Carl Gunnar Regardh (1992), “Determination of four carboxylic acid metabolites of felodipine in plasma by high-performance liquid Chromatography, 573, pp 265-214 12 Fusun Gedil, Osman Ustun, chromatography”, Okan Atay (2004), Journal of “Quantitative determination of Felodipine in pharmaceuticals by high pressure liquid chromatography and UV spectroscopy”, Turkish journal of Pharmaceutical sciences, 1(2), pp 65-76 13 P Santhosh Kumar, V Srinivasa Rao, K Abdul, U.V Prasad, Y Nanda kumar, P.V.G.K Sarma(2012),” Validation, quantitative and qualitative analysis of felodipine drug using HPLC”, Journal of Pharmacy Research, 5(4), pp.1838-1840 14 Luis H Miglioranca, Rafael E Barrientos-Astigarraga, B S Schug, H H Blume, Alberto S Pereira, Gilberto De Nucci (2005), “Felodipine quantification in human plasma by high-performance liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry”, Journal of Chromatography B, Volume 814, Issue 2, pp 217-223 15 Maryadele J.O’Neli, Patricia E.Heckelman, Cherie B.Koch, Kristin J.Roman, Catherine M.Kenny, Maryann R.D’Arecca(2006), The Merck Index fourteenth edition, Merck CO., Inc.,USA, Volume 2, Page 675 16 Sean C Sweetman, BPharm, FRPharmS (2009), Martindale, The complete drug reference 36th edition, Pharmaceutical press, pp 888-889 17 The United States Pharmacopeia 32 (2009), Volume 2, pp.2346-2350 ... đề tài: “Xây dựng phương pháp định lượng felodipin viên nén giải phóng kéo dài HPLC? ?? với mục tiêu sau:  Xây dựng quy trình định tính định lượng Felodipin viên nén HPLC  Thẩm định quy trình phân... 2.3 Phương pháp nghiên cứu 18 2.3.1 Khảo sát điều kiện sắc ký .18 2.3.2 Thẩm định phương pháp .18 2.3.3 Ứng dụng phương pháp phân tích định tính, định lượng felodipin viên nén. .. ứng  Định lượng felodipin chế phẩm thử phương pháp định lượng xây dựng theo phương pháp chuẩn hóa diện tích điểm u cầu: hàm lượng felodipin nằm khoảng 90,0% - 110,0% [1] 2.3.4 Phương pháp xử