định lượng tolperison hydrochlorid trong viên nén bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (hplc)

LỜI CẢM ƠN Những dòng đầu tiên của bản luận văn này, em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đối với PGS. TS Thái Nguyễn Hùng Thu người đã giao đề tài, tận tình hướng dẫn em rất nhiều trong những năm học tại trường. Em xin chân thành cảm ơn thầy Đoàn Cao Sơn - Viện trưởng Viện kiểm nghiệm thuốc Trung ương, chị Lục Thị Vân phó phòng Hóa Lý II cùng toàn thể các anh chị tại phòng Hóa Lý II đã đồng hướng dẫn và tạo mọi điều kiện thuận lợi cho em trong suốt quá trình nghiên cứu tại phòng. Em xin gửi lời cảm ơn đến tất cả các thầy cô trong bộ môn hóa phân tích đã nhiệt tình giảng dạy và hướng dẫn em trong suốt thời gian học tập tại trường. Cuối cùng, em xin chân thành gửi cảm ơn tới gia đình và các bạn đã luôn đông viên giúp đỡ em hoàn thành bản luận văn này. Hà Nội, ngày 09 tháng 05 năm 2011 Sinh viên Vũ Thị Phượng MỤC LỤC      !"##$%!&'() *#$!+, (/)0() 123#456# (7)0(1) /8#9989:;-6'-9<=>?'@5='#-'=>5/ A8>>BCD %@E!F#'&!:GD 1G!?H! ?HIJ!%K!!='D /8#LG9K#M,CG!B!HN / 2OPQRPSTUV/ 2OPQUV/ WXRYZ[/ +,#$!/ >\!L;/ 1]RPSTUV^ 1G>5%>E#"%^ 1989>E#"%^ 1_ AY`R`a_ 1A`T2AbcAd_ 1e,#f9,:Ggh#G!?F#I.()0(1)0(/)0(^)0(D)0(7)_ 1e,#fLi#?+(D)j 11e,#f!H#:G5k(^)0(D)N 1l2[PSmcAd2no(D)0(_) 1Ap'?8!4:3#>B% 1Ap'?8!I'p!%@\4^ 11Ap'?8!:G-39-&>D 1/Ap'?8!:G:q_ 1^>i>&98!>Brsgh>i>&:;-6rs7 11V2[PQUtj Kuv!wp,>Cx%!y!=E:z%#+hC-6:&!I'pj7{hC-6>!=E|05' :+:&!}E%#%~gzhC-6#M,g>Evrj^{•N^{s!<'}E%#%~21 11ZRa1 /AYa11 /2€X11 RbA`1^ >\>B!1^ >\1^ DANH MỤC HÌNH Hình1.1. Giản đồ sắc ký hai chất 1 và 2 Error: Reference source not found Hình 1.2. Sơ đồ cấu tạo một hệ thống HPLC hoàn chỉnh Error: Reference source not found Hình 3.1. Sắc ký đồ với pha động đệm phosphats pH 3: acetonitril (45:55) Error: Reference source not found Hình 3.2. Sắc ký đồ với pha động có chứa natri laurylsulfat Error: Reference source not found Hình 3.3. Phổ hấp thụ UV – VIS của Tolperison Error: Reference source not found Hình 3.4. Sắc ký đồ của dung dịch mẫu tá dược Error: Reference source not found Hình 3.5. Sắc ký đồ của mẫu chuẩn Error: Reference source not found Hình 3.6. Sắc ký đồ của mẫu thử tự tạo Error: Reference source not found Hình 3.7. Đánh giá sự tương đồng giữa phổ chuẩn và thử Error: Reference source not found Hình 3.8. Đồ thị khảo sát khoảng tuyến tính Error: Reference source not found Hình 3.9. Sắc ký đồ của mẫu thử Mydocam 50mg Error: Reference source not found Hình 3.10. Sắc ký đồ mẫu thử Myderison 50mg Error: Reference source not found      !"##$%!&'() *#$!+, (/)0() 123#456# (7)0(1) 16#:Gf# 18#5•gh##\ 11‚:; 1^K!=fI>5ƒ1 1D!8#!%H#1 1_8#5•9•1 17>z%-6/ „…>-iw/ 1j%8->z%/ /8#9989:;-6'-9<=>?'@5='#-'=>5/ /989#%~:G!='C >!=…I,()0(^)0(7)/ /989†%,9‡„(7)0(N)0()^ A8>>BCD %@E!F#'&!:GD 1G!?H! ?HIJ!%K!!='D 1/B?H9ˆLH_ 1…>>,-%_ 11‰4#-%7 1/B?H5%-67 1^B?H#f-f#7 1D>B%-e##G!gh?H:Š, !%@\!j 1_2G9ˆ>p>rsj 17B?HL$!:H>u"wN /8#LG9K#M,CG!B!HN /Z‹#",9,:G /ZC /1B}ECCx% //G!?F#I. /^,:G /D<!<#!'=1 / 2OPQRPSTUV/ 2OPQUV/ WXRYZ[/ +,#$!/ >\!L;/ 1]RPSTUV^ 1G>5%>E#"%^ 1€ˆ@5e#!=‹?F#I.^ 1~C:;#!=‹?F#I.:|uˆ@5e^ 11V5•9989:|uˆ@5e:‰:;-6'-9<=>?'@5='#-'=>5!=' g>Ev^ 1989>E#"%^ 1>E#"%:;4w^ 1>E#"%:;-6wD 1_ AY`R`a_ 1A`T2AbcAd_ 1e,#f9,:Ggh#G!?F#I.()0(1)0(/)0(^)0(D)0(7)_ 1e,#fLi#?+(D)j 11e,#f!H#:G5k(^)0(D)N 1l2[PSmcAd2no(D)0(_) 1Ap'?8!4:3#>B% 1Ap'?8!I'p!%@\4^ 11Ap'?8!:G-39-&>D 1/Ap'?8!:G:q_ 1^>i>&98!>Brsgh>i>&:;-6rs7 11V2[PQUtj Kuv!wp,>Cx%!y!=E:z%#+hC-6:&!I'pj7{hC-6>!=E|05' :+:&!}E%#%~gzhC-6#M,g>Evrj^{•N^{s!<'}E%#%~21 11ZRa1 /AYa11 /2€X11 RbA`1^ >\>B!1^ >\1^ ĐẶT VẤN ĐỀ Tolperison hydrochlorid là một thuốc rất quan trọng, được sử dụng đặc biệt trong điều trị bệnh liên quan đến tăng trương lực cơ với biệt dược nổi tiếng là Mydocalm. Toperison hydrochlorid có tác dụng làm bền vững màng cục bộ nên ức chế phản xạ đơn synap và đa synap đồng thời ức chế dòng Ca 2+ nhập vào synap nên ức chế chất vận chuyển. Vì vậy Toperisin hydrochlorid có tác dụng giảm trương lực cơ trong những bệnh về thần kinh thực vật, bệnh co cứng cơ, chuột rút, mất tính tự điều khiển của tủy sống… Ngoài ra, Tolperison hydrochlorid cải thiện tuần hoàn ngoại biên nên được dùng trong điều trị các bệnh nghẽn mao mạch và bệnh gây bởi rối loạn thần kinh mao mạch như: tắc do vữa xơ động mạch nghẽn, viêm mạch tạo huyết khối nghẽn, bệnh Raynaud, xơ cứng bì lan tỏa, xanh tím tái đầu chi, chứng khó đi do loạn thần kinh - mạch từng cơn. Tolperison hydrochhlorid không phải là một chất mới, đã được sử dụng nhiều thập kỷ nay. Tuy nhiên cho đến thời điểm hiện nay Toperison hydrochlorid chưa được đưa vào được điển các nước như: USP, EP, BP… và cả DĐVN. Việc nghiên cứu xây dựng phương pháp định lượng (chỉ tiêu quan trọng trong tiêu chuẩn chất lượng) để áp dụng trong kiểm tra chất lượng thuốc là rất cần thiết. Từ thực tế trên, đề tài “Định lượng Tolperison hydrochlorid trong viên nén bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC)” được thực hiện với các mục tiêu sau: 1. Xây dựng phương pháp định lượng Tolperison hydrochlorid trong viên nén bằng HPLC. 2. Triển khai áp dụng phương pháp trên một số chế phẩm viên nén để kiểm chứng khả năng đáp ứng. Đề tài này được phối hợp thực hiện tại Phòng kiểm nghiệm và bào chế - Viện Kiệm thuốc Trung ương. Chương 1 TỔNG QUAN 1.1 TỔNG QUAN VỀ TOLPERISON HYDROCHLORID 1.1.1 Công thức cấu tạo [12] O CH 3 N CH 3 H • HCl Công thức: C 16 H 23 NO.HCl Trọng lượng phân tử: M = 281,81 Tên khoa học: (2RS)-2-Methyl- 1- (4-methylphenyl)- 3- piperidin-1-yl propan-1-one monohydrochlorid 1.1.2 Tính chất hóa lý [4], [12] Tolperison hydroclrorid tồn tại dạng bột kết tinh màu trắng, nhẹ, với mùi đặc trưng, là chất hút ẩm. Rất dễ hòa tan trong acid acetic (100), dễ tan trong nước và trong ethanol (95), ít tan trong aceton và thực tế không hòa tan trong benzen hoặc ether. pH dung dịch Tolperison.HCl (1/20) là 4,5 – 5,5 1.2.3 Đặc tính dược lý [8], [13] 1.1.3.1 Dược động học Khi uống Tolperison được hấp thu tốt qua ruột non. Nồng độ đỉnh trong huyết tương trong vòng 0,5 - 1 giờ sau khi dùng thuốc. Do có chuyển hóa mạnh nên sinh khả dụng của chế phẩm này khoảng 20%. Tolperison được 1 [...]... nhiên, phương pháp này độ chính xác không cao do ảnh hưởng của tạp chất liên quan và các thành phần tá dược Vì vậy, phương pháp này ít được áp dụng cho định lượng chế phẩm mà chủ yếu chỉ sử dụng để định lượng các hoạt chất trong phép thử độ hòa tan của viên nén và viên nang Dựa trên những ưu điểm của phương pháp HPLC và những phân tích ở trên nên tôi tiến hành xây dựng phương pháp định lượng Tolperison hydrochlorid. .. uống 600mg Trong những nghiên cứu độc tính cấp tiền lâm sàng, thì liều cao Tolperison có thể gây thất điều, co giật cứng run, khó thở, liệt hô hấp Tolperison hydrochlorid không có thuốc giải độc đặc hiệu Nếu gặp quá liều nên hỗ trợ và điều trị triệu trứng 1.1.4 Các phương pháp định lượng Tolperison hydrochlorid 1.1.4.1 Phương pháp chuẩn độ trong môi trường khan [1], [5], [8] Trong phân tử Tolperison. .. phổ và tính hệ số Match 16 2.3.2.2 Nghiên cứu định lượng: Dựa vào kết quả định tính để đánh giá sự có mặt của Tolperison hydrochlorid và dựa vào tín hiệu từ pic chuẩn và thử (diện tích hoặc chiều cao pic) trong một điều kiện sắc ký đã xác định là cơ sở của phép định lượng Từ đó dựa vào nồng độ dung dịch chuẩn để xác định nồng độ Tolperison hydrochlorid trong mẫu thử Một số công thức toán thống kê được... khối lượng trung bình viên xác định được là 0,1081g Cân 6 mẫu, mỗi mẫu có khối lượng Tolperison ứng với khối lượng trung bình của 1 viên Pha 6 mẫu đó thành các dung dịch thử Tiến hành chạy sắc ký 6 mẫu thử trong cùng điều kiện với mẫu chuẩn ở trên Hàm lượng hoạt chất trong viên nén Myderison 50mg được tính theo công thức: Trong đó: St, Sc: là diện tích pic ở mẫu thử và mẫu chuẩn HLc: làm lượng Tolperison. .. pháp - Độ đúng - Độ tuyến tính - Giới hạn phát hiện và giới hạn định lượng 2.3.1.3 Ứng dụng phương pháp đã xây dựng để định lượng Tolperison Hydrochlorid trong viên nén 2.3.2 Phương pháp nghiên cứu Tiến hành thực nghiệm trên hệ thống HPLC để tìm ra điều kiện sắc ký thích hợp, sau đó xử lý thống kê các kết quả thu được 2.3.2.1 Nghiên cứu định tính: - Dựa vào thời gian lưu: So sánh thời gian lưu của pic... THẨM ĐỊNH CHƯƠNG TRÌNH SẮC KÝ Đà SỬ DỤNG [6], [7] 3.2.1 Khảo sát tính đặc hiệu Tính đặc hiệu là khả năng xác định được dược chất phân tính khi có mặt các thành phần khác như tạp chất, sản phẩm phân hủy, tá dược… Trong phép 22 thử định lượng phải đưa ra kết quả chính xác về hàm lượng hay hoạt lực của chất cần phân tích trong mẫu Dựa trên công thức bào chế chung của viên nén và một số biệt dược chứa Tolperison. .. hyrochlorid trong mẫu chuẩn Dc, Dt: hệ số pha loãng của mẫu chuẩn và mẫu thử (đều bằng 50) mt: lượng cân chất thử (g) mc: lượng cân chất chuẩn (g) 27 Kết quả định lượng được tiến hành tính toán theo công thức trên bằng so sánh diện tích pic của dung dịch chuẩn và dung dịch thử trong cùng điều kiện sắc ký Kết quả thu được như trong bảng 3.3 Bảng 3.3 Kết quả khảo sát độ lặp lại của phương pháp Khối lượng Diện... pháp định lượng Tolperison hydrochlorid bằng phương pháp HPLC 6 1.2 TỔNG QUAN VỀ SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) [5], [6] 1.2.1 Khái niệm HPLC (High performent liquid chromatography) là kỹ thuật phân tích dựa trên cơ sở của sự phân tách các chất trên một pha tĩnh chứa trong cột nhờ dòng di chuyển của pha động dưới áp suất cao 1.2.2 Nguyên tắc hoạt động Pha cố định hay còn gọi là pha tĩnh có thể là... Pha đảo: pha tĩnh ít phân cực, pha động phân cực Trong kiểm nghiệm pha sắc ký phân bố pha đảo được sử dụng nhiều nhất vì khả năng tách cao, thực hiện dễ dàng, nhanh hơn và tính lặp lại cao hơn sắc 13 ký phân bố pha thuận 1.2.4.6 Detector Là bộ phận phát hiện các chất khi chúng ra khỏi cột và cho các tín hiệu ghi trên săc ký đồ để có thể định tính và định lượng Tùy theo tính chất của các chất cần phân... 245 - Các dụng cụ: pipet, bình định mức, bình nón, phễu lọc… đạt yêu cầu dùng cho kiểm nghiệm thuốc 2.3 NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.3.1 Nội dung nghiên cứu 2.3.1.1 Xây dựng chương trình sắc ký - Chọn cột sắc ký - Lưa chọn pha động - Lựa chọn bước sóng thích hợp 2.3.1.2 Thẩm định chương trình sắc ký đã xây dựng - Tính đặc hiệu - Độ lặp lại của hệ thống và phương pháp - Độ đúng - Độ tuyến tính . hydrochlorid trong viên nén bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) được thực hiện với các mục tiêu sau: 1. Xây dựng phương pháp định lượng Tolperison hydrochlorid trong viên nén bằng HPLC ở trên nên tôi tiến hành xây dựng phương pháp định lượng Tolperison hydrochlorid bằng phương pháp HPLC. 5 1.2 TỔNG QUAN VỀ SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) [5], [6] 1.2.1 Khái niệm HPLC (High performent. dựng phương pháp định lượng (chỉ tiêu quan trọng trong tiêu chuẩn chất lượng) để áp dụng trong kiểm tra chất lượng thuốc là rất cần thiết. Từ thực tế trên, đề tài Định lượng Tolperison hydrochlorid trong