Tiếp tục khảo sát với các điều kiện sắc trên nhưng thay đổi tốc độ dòng 0,8ml/phút, 1ml/phút và 1,5ml/phút. Kết quả cho thấy nếu sử dụng tốc độ dòng ở 0,8ml/phút thì thời gian rửa giải dài, khoảng 13 phút. Nếu để tốc độ dòng 1,5ml/phút thì áp suất cột tăng cao hơn 200 do đó không tốt cho cột và làm giảm tuổi thọ của cột.
Khảo sát tại tốc độ dòng 1ml/phút cho pic gọn cân đối, thời gian lưu khoảng 10,5 phút, áp suất 160 bar. Vì vậy tôi tiến hành chạy sắc ký với tốc độ dòng là 1ml/phút.
Từ kết quả khảo sát ở trên, điều kiện sắc ký được lựa chọn là: - Cột sắc ký: Luna C18 (4,6mm x 250mm, 5ηm).
- Pha động: Natri laurylsulfat 0,04M trong hỗn hợp đệm phosphat pH3 và acetonitril (45:55).
Trong đó đệm phosphat pH 3 được pha như sau: hòa tan 3,4g Kali dihydrophosphat vào 1000ml nước khấy đều, điều chỉnh về pH = 3 bằng H3PO4 đậm đặc.
- Thể tích tiêm: 20μL. - Tốc độ dòng: 1ml/phút.
- Nhiệt độ phân tích: nhiệt độ phòng thí nghiệm.
3.1.4 Chuẩn bị dung dịch chuẩn và dung dịch thử:
- Dung dịch chuẩn:
Pha dung dịch chuẩn từ Tolperison hydrochlorid chuẩn trong pha động
có nồng độ chính xác khoảng 0,1mg/ml. Lọc qua màng lọc 0,45µm.
- Dung dịch thử:
Cân 20 viên (loại bỏ lớp bao phim, nếu cần), tính khối lượng trung bình viên và nghiền thành bột mịn.
Cân một lượng bột tương ứng với 50 mg Tolperison hydrochlorid vào bình định mức 50ml, thêm khoảng 35ml pha động, lắc siêu âm trong 10 phút
để hòa tan, thêm pha động vừa đủ. Lọc qua màng lọc 0,45µm, pha loãng 5,0
ml dịch lọc thành 50,0ml dung dịch với pha động.