BỌ GIAO DỤC VA ĐAO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC VINH
TRƯƠNG THỊ BÌNH GIANG
DINH LUONG MOT SO HOP CHAT CO HOAT TINH SINH HOC TRONG CAC MAU NAM LON O VUNG BAC TRUNG BO BANG
PHU ONG PHAP SAC KY LONG HIEU NANG CAO
Chuyên ngành : HỐ PHÂN TÍCH Mã số: 60.44.29
LUẬN VĂN THẠC SĨ HĨA HỌC
Người hướng dẫn khoa học:
PGS TS NGUYÊN KHÁC NGHĨA
NGHE AN - 2013
Trang 2Luận văn tốt nghiệp thạc sỹ được thực hiện tại phịng thí nghiệm Trung tâm Kiểm định An tồn Thực phẩm và Mơi trường - Trường Đại học [ĩnh
Voi long kinh trong và biết ơn sâu sắc, tơi xin chân thành cảm ơn đến PGS.TS Nguyễn Khắc Nghĩa và PGS TS Trần Đình Thắng - Khoa Hĩa học -
Truong Dai hoc Vinh da giao dé tai, tan tinh hướng dẫn, tao moi diéu kién
thuận lợi trong suốt quá trình nghiên cứu và hồn thành đề tài
Tơi xin chân thành cảm ơn ThŠ Chu Thị Thanh Lâm — Trung tâm kiểm
định An tồn thực phẩm và Mơi trường — T.T Thực hành thí nghiệm - Trường Dai hoc Vinh dé tạo điêu kiện thuận lợi và giúp đỡ tơi trong quá trình làm thí nghiệm, hướng dẫn cách sử dụng máy HPLC đo mẫu
Tơi cũng xin gửi lời cảm ơn đến các thầy cơ, các cán bộ trong khoa Hố đã giúp đỡ tơi trong quá trình thực hiện đề tài này
Là lịng biết ơn sâu sắc tới gia đình, bạn bè đã động viên, giúp đỡ tơi hồn thành đề tài
Nghệ An, tháng 10 năm 2013 Tác giả
Trang 3HPLC: LOD: LOQ: MeOH: ACN : HPLC-MS: SKPB : SKPT : SKPD : EP: DAD: ELSD: TLC: NMR: ACD: Sắc ký lỏng hiệu nang cao (High Performance Liquid Chromatography)
Giới hạn phat hién (Limit of detection) Giới hạn định luong (Limit of quantitation) Methanol Acetonitril Sắc ký lỏng hiệu năng cao ghép nĩi đầu dị khối phố Sắc ký phân bố Sắc ký pha thường Sắc ký pha đảo Ergosterol peroxide
Dau do diode array (Diode Array Detector)
Đầu dị tán xa anh sang (Evaporative light scattering detector)
Sac ky lop méng (Thin Layer Chromatography) Cộng hưởng tt hat nhan (Nuclear Magnetic Resonance)
Thu vién dién tu Chromatography Applications Database Là các số liệu ứng dụng của các phương
pháp sắc ký như GC, CE, HPLC
CAMAG: Thư viện điện tử: là một thư viện tham khảo tồn diện
về sắc ký lớp mỏng
PCA HCA PLS, UVE-PLS: Phân tích dữ liệu bằng các phương
Trang 4lý \0Nn: tL Chuong 1 TONG QUAN
1.1.Giới thiệu chung về nấm 2 222222222222222222221.722111 1 đ 1.1.2 Sự đa dạng - ¿22-2222 22 22 12221 121122111212171.211 1 0.11011121112111 011 11011 re 5 1.1.4 Đặc điểm sinh học 222222225222E22E812E821011.EEmeersrrrrsreree Ð 1.1.5 Thành phần hĩa học 2222 22222221.22212E1.1211 re 5 1.1.6 Phân loại -. -222222222222:+++2+2+2+EEEEEEE2121271712112171111211E.2.E.cr.trrrrrrrrrrrrrrrrrirer 7 1.2.1 Giới thiệu chung 25252- tt tt 22 2 ExEEEkrtrrrrtrrrrirrirrrrrrrrrrsrrersrreree 1.2.2 Vị trí - Phân loạ -+:2.2.212.212111112.1.2 71 re 10 In 7a Lh
1.2.4 Phân bồ - Sinh thái 2222222222222222221222.121 021.12e.xee ll 1.2.5 Thành phần hĩa học của nắm Linh chi -52 2222222.tsz:ccereccx 12
Trang 51.6 Ergosterol peroxide -::¿2222c22vvcvccerttrtrtrrtrrrrrrererrrrrrrrrrrrrrrrrree.v 28
1.6.1 Giới thiệu -2222 522222222222222EEEE52232212E21111E.1271.11 te 2
1.6.2 Ứng dụng 5s.-2 22221.7 erreeoe 24 1.7 Giới thiệu về phương pháp sắc ký đngerprint và những ứng dụng của sắc ký fđngerprint trong đánh giá chất liệu được phẩm .-.s 24 1.7.1 Giới thiệu về phương pháp đngerprint 2 z22:.2t.eceeoex 24 1.7.2 Cách thức xây dựng và thực hiện phương pháp sắc ký đngerprint 26 1.8 Hệ thống phân tích HPLC 2-22-2222222.22222222222222222.22.-e 35 1.8.1 Nguyên lý -. 2-2222t2tttrttnrtrrrtrrrrrrrrrrrrrerrrrrrrrrrrrrrrreoovu 39)
1.8.2 Phân LLOạI - +2 S122 E22158 555215 152151122112111111171121.112111211.1E 11.1 Tre yeg 36
1.8.3 Pha tĩnh trong sắc ký pha đảo 222222222222222222221212221 1 212122 37 1.8.4 Pha động trong sắc ký pha đảo -2 2222221221222 Ecee 40
1.8.5 Các bộ phận của hệ thống HPLC 22.2222221272271212722722.2 43
1.8.6 Các phương pháp định lượng .- 22-522 5252222222252 xsseszse2 43
1.8.7 Phương pháp tiến hành sắc ký — se 45
Chương 2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU VÀ THỰC NGHIỆM 47 2.1 Thiết bị, dụng cụ và hĩa cht 2st 1221 1rerereeee 47
rên n 47
QA.2 DUNG CU
2.2 Phương pháp lấy mẫu -222222212222222212117121 1 1.1217121 1 11 e 47
2.3 Phương pháp phân tích - 2:22 2+2 2 S22EE1222122512233213 2212221222122 xe 49
2.4 Kỹ thuật thực nghiệm 2222225555552222ttttrrrtrrrrrrrrrrrrrrrrrroe 49)
2.4.1 Phân tích ergosterol
2.4.2 Phân tích ergosterol peroxide 2.5 Khảo sát đánh giá phương pháp
2.5.1 Khảo sát giới hạn phát hiện (LOD) và giới hạn định lượng (LOQ) của
Trang 6
Chương 3 KÉT QUẢ VÀ THẢO LUẬN . -:22222212221120.1.5112 57
3.1 Xác định và định lượng ergosferoÏ ¿©2255 222222S222x2xxsrxrerrrrrsee 57
3.1.1 Xác định khoảng tuyến tính và đường chuẩn của ergosterol 57 3.1.2 Phương pháp xử lý tìm kết quả nồng độ ergosterol trong mẫu 59 3.1.3 Đánh giá phương pháp xác định ergosterol . s55 55555552 60 3.1.4 Sắc đỒ ergosterol -2222222222221.21.22212122121 1.1.12 2.2 1e 64
3.2 Xác định và dinh luong ergosterol peroxIde -:cc2c:ccsscvsccsx 71
3.2.1 Xác định khoảng tuyến tính và đường chuẩn của ergosterol peroxide 71 3.2.2 Phương pháp xử lý tìm kết quả nồng độ ergosterol peroxide trong mẫu 73 3.2.3 Đánh giá phương pháp xác định ergosterol peroxide - 73 3.2.4 Sắc đồ ergosterol peroxide -::22222222E222122212121217121.21 2121220 78
0n) 86
Trang 7Bang 1.1: Bang 1.2: Bang 1.3: Bang 1.4: Bang 1.5: Bang 3.1: Bang 3.2: Bang 3.3: Bang 3.4: Bang 3.5: Bang 3.6: Bang 3.7: Bang 3.8:
Thanh phan hoa duoc ctta nam Linh Chi cscssssssscsscsssssscsecssesssssessveeeee 12 Các hoạt chất sinh học và dẫn xuất trong nấm Linh chi 13 Hàm lượng các nguyên tố trong nấm 222252 2222212222222 14
Lục bảo Linh chi theo thời Lý Trần (1590) -ss+ 15 Tính chất của một số pha động trong sắc ký lỏng 4I Diện tích peak của ergosterol trong nắm tương ứng với từng nồng
độ chuẩn -.22222222222225222212111222222221217111111E tt 20.12122211 ecree 57
Giá trị LOD và LOQ của ergosferol -:-22- 52 5+225zz5z+22szszx 58 Kết quả phân tích hàm lượng ergosterol trong nấm 59
Kết quả trung bình, độ lệch chuẩn, hệ số biến thiên của các mẫu
Kết quả phân tích hàm lượng ergosterol peroxide trong nắm
Trang 8Hình 1.1: Hình ảnh Nắm Linh chi 2222222222222222222222222222222220-2 9 Hình 1.2: Cấu trúc sterol -:+:222222222222222222242222212121 21121 2121e 20
Hình 1.3: Cấu trúc một số sterol 22222222224221212121515122121212131121212121212222ee 21
Hình 1.4: Cấu trúc ergosterol -:-::+22+222225221222121 2111171.1 E re 22 Hình 1.5: Cấu trúc ergosterol peroxide -::::22222222E2221.222222121222 24 Hình 1.6 : Sơ đồ lựa chọn hệ dung mơi trong quá trình chiết mẫu 28 Hình 1.7: Tĩm tắt phương pháp sắc ký fingerprint -ccc2zzz2 34 Hình 1.8: Bề mặt silica đã thủy phân -222222222222222212221221.2222121120.2 38
Hình 1.9: Tạo nhánh trên bề mặt silica 2222222222 2222222222121222222525255232225222 x2 38 Hình 1.10: Cấu trúc của cột ODS -222222222222212152222221121212121221511151E cc2 38 Hình 1.11: Cấu trúc cột LC-DB 22222222E2E121515152312.1212121221111EExe.cree 39 Hình 1.12: Cấu trúc cột cĩ gốc isopropyl -:-:-cc22222E2E.1 tteesxkrtkrtrre 39
Hình 1.13: Độ nhớt của hỗn hợp nước và dung mơi hữu cơ ở 25°C 42
Hình 1.14: Sơ đồ hệ thống HPLC 222222E222222251154217221221 21112112 e 43
Hình 2.1: Mẫu nắm 1001(ererniporid naFfi1S) 5-52 52222 + + ‡z+£zzzss2
Hình 2.2: Mẫu nắm 1002 (Ƒomifopsis doehimiis) -2222222222ccccssr2 48
Hinh 2.3: Mau nam 1003 (Phellinus igniarius) Hinh 2.4: Mau nam 1004 (Ganoderma rotumdatum)
Hình 2.5: Mẫu nấm 1005 (ƑOmifopsis carneus)
Hinh 2.6: Mau nam 1006 (Ganoderma lobatum)
Hinh 2.7: Mau nam 1007 (Ganoderma philippii)
Hinh 2.8: Mau nam 1008 (Ganoderma nultiplicatum) Hinh 2.9: Mau nam 1009 (Ganoderma lucidum)
Trang 9Hình 3.4: Sắc đồ chuẩn ergosterol 1000 ppm 16.295 min 65 Hình 3.5: Sắc đồ mẫu nắm 1001 (Perenniporia marfi3) - 66
Hình 3.6: Sắc đồ mẫu nắm 1002 (Fomifopsis doehimiiis) -25-5 66
Hình 3.7: Sắc đồ mẫu nấm 1003 (PJellinus igniariis) 25555css 67 Hình 3.8: Sắc đồ mẫu nắm 1004 (Ganoderma rofiumdiafiim) 67
Hình 3.9: Sắc đồ mẫu nấm 1005 (Fomitopsis carmieius) 22-22225552s2 68
Hình 3.10: Sắc đồ mẫu nấm 1006 (Ganoderma lobafim), - 68 Hình 3.11: Sắc đồ mẫu nấm 1007 (Garnoderma philippii) 69 Hình 3.12: Sắc đồ mẫu nấm 1008 (Ganoderma multiplicatfuim) 69 Hinh 3.13: Sac dé mau nam 1009 (Ganoderma Ïiteidiumì) 555: 70
Hinh 3.14: Sac dé mau nam 1010 (Trametes gibbosa) -s2 70 Hinh 3.15: Duong chuẩn biểu thị mối quan hệ giữa diện tích peak thu được
và nồng độ các chuẩn ergosterol peroxide -:::22222222E22212222222222222-.2 72 Hình 3.16: Sắc đồ chuẩn nồng độ 2.5ppm -22222222222122122112122222 78 Hình 3.17: Sắc đồ chuẩn nồng độ 5ppm -2-2222222222c22E12122Ert2 79 Hình 3.18: Sắc đồ chuẩn nồng độ 10ppm 2222222EE22222222222222222222 80 Hình 3.19: Sắc đồ mẫu nấm 1001(erenniporia maFfiM3) -e¿ 80 Hình 3.20: Sắc đồ mẫu nấm 1002 (FƑomifopsis doehmius) - 81
Hình 3.21: Sắc đồ mẫu nấm 1003 (Phellimus ignniariiis) 255555-2 81
Hình 3.22: Sắc đồ mẫu nam 1004 (Ganoderma rotumdatum) 0.00000-4- 81 Hinh 3.23: Sac dé mau nam 1005 (Fomitopsis €aruei3) :::::22 82 Hình 3.24: Sắc đồ mẫu nấm 1006 (Gaboderma lobatiim) s5 552 82 Hình 3.25: Sắc đồ mẫu nấm 1007 (Ganoderma philippii) - 83
Hình 3.26: Sắc đồ mẫu nam 1008 (Ganoderma multiplicatum) 83
Trang 10Thảo dược cĩ mặt ở nhiều nơi trên thế giới, đặc biệt là các khu vực
nhiệt đới Thảo dược đĩng vai trị quan trọng trong các liệu pháp chữa bệnh bằng y học cơ truyền tại các nước phương Đơng Nguồn tài nguyên thiên nhiên này khơng những mang nguồn lợi về kinh tế cho cộng đồng dân cư sinh sống tại những nơi cĩ thảo dược mà cịn đĩng gĩp vào các liệu pháp chữa bệnh cho cộng đồng ở những khu vực khác Từ xa xưa con người đã biết sử
dụng những thảo dược thiên nhiên nhằm mục đích bơi bổ sức khỏe, dưỡng
tâm-can-tỳ-phế, làm chậm lại quá trình lão hĩa, kéo dài tuổi thọ.[4]
Ngày nay xu hướng sử dụng các thảo dược thiên nhiên để trị bệnh đã
trở nên phơ biến, việc tìm kiếm những khả năng chữa trị từ các loại thảo dược
đã được tiến hành ở nhiều nơi trên thé giới: Nhật Bản, Trung Quốc, Đài Loan,
Malaysia, Thái Lan Hơn thế nữa, trong y học hiện đại người ta cịn sử dụng thảo dược trong những liệu pháp trị bệnh trực tiếp theo các liệu pháp trị bệnh của y học cổ truyền Thảo dược và các sản phâm từ thảo dược cịn được sử
dụng làm nguyên liệu cơ sở cho các quá trình tổng hợp hoặc bán tổng hợp các
loại dược phẩm phức tạp Ngồi ra, các hợp chất phân lập được từ thảo dược
cịn được sử dụng làm chất khơi mào trong tổng hợp các hợp chất mới cĩ ý nghĩa cao trong y dược Trong nhiều năm gần đây, thảo dược đã thu hút nhiều sự quan tâm của các nhà dược học và y học phương Tây Bởi vì các tác dụng dược lý cao dễ chuyển hĩa trong cơ thể, khả năng gây độc thấp và rất ít các biến chứng phụ so với tây dược Trong đĩ, nấm Linh chi là đối tượng nghiên cứu của nhiều quốc gia Đặc biệt là các nước vùng Châu Á trong đĩ cĩ Việt
Nam, vì nĩ cĩ nhiều tiềm năng về nguồn được liệu
Các nghiên cứu dược học hiện đại đã chứng minh Linh chỉ chứa tới 120
chất, bao gồm các hợp chất hữu cơ, các nguyên tố vi lượng và các vitamin
Linh chi cĩ tác dụng đặc biệt đối với các triệu chứng suy giảm miễn dịch, căng
Trang 11đã mắc phải bệnh này.[ 1 I]
Các nhà khoa học đã xác định được nhiều steroid cĩ tác dụng phịng và chữa trị các bệnh hiểm nghèo như thấp khớp, suy tim, ung thư Sterol thực vật được cơng nhận là cĩ tác dụng tích cực cho sức khỏe, bởi vì chúng đã được
chứng minh là làm giảm nồng độ cholesterol trong huyết thanh và cũng cĩ thể
cĩ lợi trong việc ngăn ngừa ung thư ruột kết Mà một số steroid này lại tổn tại
trong giới nấm Do đĩ việc xác định và định lượng các hợp chất này trong nam dé tìm ra phương pháp chữa bệnh mới là rất cần thiết.[17]
Ngày nay với sự phát triển khơng ngừng của khoa học kỹ thuật, cĩ rất nhiều phương pháp và cơng cụ để nghiên cứu các thành phần hĩa học cĩ mặt trong thảo dược, để đánh giá và quản lý chất lượng thảo dược Ví dụ như phương pháp phân lập hợp chất theo định hướng hoạt tính sinh học và xác định cấu trúc hĩa học, phương pháp này cĩ thể phát hiện và phân lập một số hợp chất cĩ hoạt tính trong thảo dược Tuy nhiên trong thảo được tổn tại rất
nhiều hợp chất, nhiều hợp chất chi ton tai voi ham luong rat thap, đơi khi
khơng bên, dạng đồng phân, dạng dễ bị phân hủy ngay khi bị phân lập Do đĩ việc sử dụng phương pháp phân lập thơng thường gặp rất nhiều khĩ khăn trong việc đánh giá và kiểm sốt thành phần của thảo dược Trong điều kiện đĩ một phương pháp đang được phát triển và ứng dụng đĩ là phương pháp sắc ký ngerprint, phương pháp này kết hợp với các phương pháp phân lập, xác
định cấu trúc và hoạt tính đang được ứng dụng nhiều trong việc đánh giá,
kiểm sốt chất lượng dược liệu [4]
Xuất phát từ thực tế trên chúng tơi chọn đề tài “Định lượng một số hợp chất cĩ hoạt tính sinh học trong các mẫu nắm lớn ở vùng Bắc Trung Bộ bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao” làm luận văn tốt nghiệp thạc sỹ
Để thực hiện đề tài này chúng tơi thực hiện các nhiệm vụ sau:
Trang 12trong các mẫu nấm thu được trong quá trình lấy mẫu thực tế
- Nghiên cứu quy trình định lượng Ergosterol và Ergosterol peroxide
Trang 13TỎNG QUAN 1.1.Giới thiệu chung về nắm
1.1.1 Gidi nam
Giới nấm (tên khoa học: gi) bao gồm những sinh vật nhân chuẩn tự
dưỡng cĩ thành té bao bang kitin (chitin) Phần lớn nắm phát triển dưới dang
các sợi đa bào được gọi là sợi nấm (hyphae) tạo nên hệ sợi (mycelium), một
số nắm khác lại phát triển đưới dạng đơn bào Quá trình sinh sản (hữu tính hoặc vơ tính) của nắm thường qua bào tử, được tạo ra trên những cấu trúc đặc
biệt hay thể quả Một số lồi lại mất khả năng tạo nên những cấu trúc sinh sản
đặc biệt và nhân lên qua hình thức sinh sản sinh dưỡng
Những đại diện tiêu biểu của nấm là nấm mốc, nấm men và nấm lớn
(nấm quả thể)
Giới nấm là nhĩm sinh vật đơn ngành (monophyletic) mà cĩ nguồn gốc
hồn tồn khác biệt với những sinh vật cĩ hình thái tương tự như nắm nhay
(myxomycetes) hay mốc nước (oomycetes) Nấm cĩ mối quan hệ gần với
động vật hơn thực vật, dù vậy mơn học về nắm, hay nắm học, lại thường được xếp vào thành một nhánh của thực vật học
Nam duoc ứng dụng rất rộng rãi trong đời sống lẫn sản xuất, nhiều lồi được sử dụng trong cơng nghệ thực phẩm, sử dụng làm thức ăn hoặc trong quá trình lên men Nấm cịn được dùng để sản xuất chất kháng sinh, hoĩc mơn trong y học và nhiều loại enzym Tuy vậy nhiều loại nấm lại cĩ chứa các chất
hoạt động sinh học được gọi là mycotoxin, như ancaloit và polyketit, là những chất độc đối với động vật lẫn con người Một số loại nắm được sử dụng đề kích
thích hoặc trong các nghi lễ truyền thống với vai trị tác động lên trí tuệ và hành vi của con người Vài loại nắm cĩ thể gây ra các chứng bệnh cho con người và động vật, cũng như bệnh dịch cho cây trồng, mùa màng và cĩ thể gây tác động
Trang 14sống khác nhau, kế cả sa mạc Đa phần nấm sống ở trên cạn, nhưng một số lồi lại chỉ tìm thấy ở mơi trường nước Nấm và vi khuẩn là những sinh vật phân huỷ chính cĩ vai trị quan trọng đối với các hệ sinh thái trên cạn trên
tồn thể giới
Dựa theo tỉ lệ giữa số lồi nắm với số lồi thực vật ở trong cùng một mơi
trường, người ta ước tính giới Nấm cĩ khoảng 1,5 triệu lồi Khoảng 70.000
lồi nấm đã được các nhà phân loại học phát hiện và miêu tả tuy nhiên kích cỡ thực sự của tính đa dạng của giới nấm vẫn cịn là điều bí ấn
1.13 Hình thái
Nắm hay nấm lớn, nấm quả thể là loại cây khơng cĩ hoa, cĩ cuống hoa, khơng cĩ lá và khơng cĩ chất diệp lục, sống nhờ vào các ký sinh trùng hoặc
thực vật hoại sinh (các vi sinh vật sống trên các chất hữu cơ thối rữa) Cấu tạo của nấm cĩ nhiều sợi xơ màu đen, xanh lá cây, vàng hoặc xanh dương, những
sợi xơ này cĩ hai phần Phần thứ nhất là phần xơ trải dài giống như rễ cây,
sống dựa vào chất ở bên đưới mà chúng mọc lên từ đĩ Phần thứ hai giống như cái mũ trịn, cĩ chứa bào tử Nấm bắt đầu sinh sơi nảy nở ở những nơi nĩng và âm thấp
1.1.4 Đặc điểm sinh học
Nắm được phân loại riêng so với thực vật và động vật được gọi là giới
Nấm Đặc điểm phân loại quan trọng phân chia nĩ thành giới riêng cĩ rất
nhiều nguyên nhân Nắm chứa cấu trúc mơ, nấm cĩ thể là đơn bào hoặc đa
bào, khơng cĩ chất diép luc, chất dự trữ trong nấm khơng phải 1a tinh bột và glycogen như thực vật, động vật Nấm sinh sản bằng bào tử hoặc sinh sản sinh dưỡng (sợi nắm hay tơ nắm) Nắm là sinh vật hoại sinh chúng hấp thụ dinh
dưỡng từ các thực vật hoặc động vật chết, một số ký sinh
1.15 Thành phần hĩa học
Trang 15như:
Nắm mèo từ 4 - 8% Nắm rơm lên đến 43% Nắm mỡ hay nắm bún là 23.9 - 34.8% Nắm đơng cơ là 13,4 - 17,5%
Nam bao ngu 1a 10,5 -30,4% (bao ngu mong pleurotussajor-caju 1a 9,9 -
26,6%)
Nam kim châm là 17,6% Nam ham thủ từ 23,8 -31,7%
Nắm cĩ đầy đủ các acid amin thiết yếu nhu: isoleucine, leucine, lysine, methionine, phenylalanine, threonine, valine, tryptophan, histidine Dac biét
nấm giàu lysine va leucine, it tryptophan va methionine - Chất béo :
Chất béo cĩ trong các loại nắm chiếm từ I - 10% trọng lượng khơ của nấm, bao gồm các acid béo tự do, monofycerid, diglycerid va triglyceride, serol, sterol ester, phos - phor lipid và cĩ từ 72 - 85% acid béo thiết yếu chiếm từ 54 -769% tổng lượng chất béo
Nắm mỡ và nắm rơm là 69 -70% Nấm mèo là 40,39%
Bào ngư mỏng là 62,94% Nấm kim châm là 27,98%
- Chất xơ :
Tổng lượng Carbohydrat và sợi: chiếm từ 51 - 88% trong nấm tươi và khoảng 4 - 20% trên trọng lượng nấm khơ, bao gồm các đường penfose,
methyl pentos, hexose, disaccharide, đường amin, đường rượu, đường acid
Thành phần chính của sợi nấm 4n 1a chitin, mét polymer cia n—
acetyl glucosamin, cấu tạo nên vách của tế bào nấm Sợi chiếm từ 3,7% ở nắm kim châm cho đến 11,9 - 19.8% ở các loại:
Nấm mèo: Từ 7,5 - 17.5% Nắm bào ngư: 8 -14% Nắm mỡ: 7.3 - 8%
- Vitamin và khống chất:
Trang 16thể nguồn này lấy từ cơ chất trồng nấm thành phần chủ yếu là kali, kế đến là phosphor, natri, calci và magnesium, các nguyên tố khống này chiếm từ 56 - 70% lượng tro Phosphor và calcium trong nắm luơn luơn cao hơn một số loại trái cây và rau cải Ngồi ra cịn cĩ các khống khác như sắt, đồng kẽm, mangan, cobalt
1.16 Phân loại
Các ngành chính của nấm được phân loại chủ yếu dựa trên cấu trúc cơ
quan sinh sản hữu tính của chúng Hiện tại nắm được chia làm 7 ngành: - Ngành Chytridiomycota hay Chytrid (nấm roi - nấm trứng): chúng tồn tại rải rác khắp nơi trên thế giới Chytrid sẽ sản sinh ra những bào tử động mà cĩ khả năng di chuyên linh động trong mơi trường nước với một tiên mao duy
nhất Vì thế một số nhà phân loại học đã phân loại chúng là những động vật
nguyên sinh
-_ Ngành Blastocladiomycota trước đây từng được cho là một nhánh phân loại của Chytridiomycota Những đữ liệu phân tử và đặc điểm siêu cấu trúc gần đây đã đưa Blastocladiomycota vào một nhánh riêng giống như với các ngành Zygomycota, Glomeromycota và Dikarya
~ Ngành Neocallimastigomycofa đầu tiên cũng đặt vào ngành Chytridiomycota Những thành viên của ngành nhỏ này là những sinh vật ky khí, sống trong hệ thống tiêu hĩa của những động vật ăn cỏ lớn và cũng cĩ thể sống ở mơi trường nước và mặt đất Chúng khơng cĩ ty thể nhưng lại chứa những hydrogenosome là nguồn gốc của ty thể Giống như chytrid, øeocallimastigomyceles cĩ thé tao ra những bào tử động mà cĩ một hay nhiều tiên mao ở phía sau
- Nganh Zygomycota (nam tiép hợp) cĩ hai lớp: Zugorwcetes và Trichonn/celes Chúng sinh sản hữu tính với những bào tử giảm phân được gọi là bào tử tiếp hợp và vơ tính với túi bào tử
Trang 17khi cả hai ngành đều cĩ nhân kép chúng cĩ thể đạng sợi hoặc đơn bào, nhưng khơng bao giờ cĩ lơng roi Dikarya được gọi là "Nấm bậc cao", cho đù cĩ
nhiều lồi sinh sản vơ tính được phân loại vào nấm mốc trong các tài liệu
trước đây
-_ Ngành Ascomycota (nấm túi hay nắm nang), là nhĩm phân loại đơng nhất trong Eumycota (Nắm thật) Chúng tạo ra những bào tử giảm phân gọi là
bào tử nang, mà được chứa trong một cấu trúc đặc biệt cĩ dạng giống tui goi
là nang (ascus) Ngành này bao gồm nắm nhăn (moscela), vài loại nấm lớn và nam cuc, nhiing nam men don bao (nhu cac chi Saccharomyces, Kluyveromyces,
Peakhia va Candida) va nhiều nắm sợi sống hoại sinh, kí sinh và cộng sinh
- Ngành Basidiomycota (Nấm đảm), sản xuất ra những bào tử đảm chứa trong những thân hình dùi gọi là đảm Đa phần những lồi nấm lớn đều thuộc ngành này
1.1.7 Vai tro
Nam là sinh vật khơng thê thiếu trong đời sống, khơng cĩ nắm chu trình tuần hồn vật chất sẽ bị mất một mắt xích quan trọng trong việc phân hủy chất bã hữu cơ Nấm cịn đem lại nguồn thực phẩm giàu đạm đầy đủ các acid amin thiết yếu, hàm lượng chất béo ít và là những acid béo chưa bão hịa Do đĩ tốt cho sức khỏe, giá trị năng lượng cao, giàu khống chất và các vitamin Ngồi ra, trong nấm cịn chứa nhiều hoạt chất cĩ tính sinh học, gĩp phần ngăn ngừa và điều trị bệnh cho con người
Hiện nay các nhà khoa học đang nghiên cứu và phát hiện ra trong thành
phần của nấm cĩ những hoạt chất cĩ dược tính rất mạnh với các căn bệnh nan
y hiện nay như viêm gan, ung thư, HIV v.v Việc đưa vào sử dụng rộng rãi các chế phẩm được tách chiết từ nấm sẽ giúp con người khỏe mạnh và phịng chống được nhiều căn bệnh tiềm ân nguy hiểm như cao huyết áp Các giống
nấm được biết đến nhiều cĩ thể nhắc đến như Linh chi, nấm Lim, nấm
Trang 18cách rộng rãi và lâu dài: nắm men được sử dụng cho quá trình lên men để tạo ra rượu, bia và bánh mì, một số lồi nắm khác được sử dung dé san xuất xì dầu
Những lồi nấm quả thể được biết đến với hai dạng: nấm ăn được và nấm độc Nắm ăn được sử dụng rộng rãi làm thực phẩm, chúng cĩ thể sử dụng trong rất nhiều mĩn ăn, ở nhiều nền ẩm thực khác nhau Nấm là thực phâm cĩ giá trị dinh dưỡng cao, cĩ độ đạm cao và ít chất béo, chứa nhiều
vitamin nhĩm B và C Dù nấm khơng phải là nguốn vitamin D đáng kể, nhưng hàm lượng vitamin D cĩ thể tăng lên khi được phơi với ánh sáng (nhất là tia cực tím) dù điều này làm thẫm lớp vỏ của chúng Nấm cũng chứa nhiều
nguyên tố vi lượng, như sắt, selen, natri, kali, magié va photpho
Nhiều loại nấm ăn đã được sử dụng trong y học truyền thống hàng ngàn năm nay Những loại nấm như nấm múa, nam hương (đơng cơ), nắm chaga, nấm Linh chi đã được tập trung nghiên cứu bởi khả năng chống ung thư, chống virus và tăng cường hệ miễn dịch của chúng Lồi nắm Đơng trùng hạ
thao (Cordyceps sinensis) dugc coi la mét dược liệu quý hiếm và đã được sử dụng ở Trung Quốc từ lâu Lồi nấm cơ Linh chỉ (Ganoderma applanatum) cũng từng được coi là một "thần dược" ở Việt Nam, mặc dù khơng cĩ bằng chứng cụ thể nào về khả năng trị bệnh của nĩ
1.2 Nam Linh chi
1.21 Giới thiệu chung
Nam Linh chi (tiéng Anh: Lingzhi mushroom) cĩ tên khoa học là
Ganoderma Lucidum, thuédc ho Nam Lim (Ganodermataceae) Nấm Linh chi
cịn cĩ những tên khác như tiên thảo, nắm trường tho, vạn niên nhung
Trang 19
Nam Linh chi là một dược liệu mà con người từ xa xưa đã biết dùng
làm thuốc Trong "Thần nơng bản thảo" xếp Linh chi vào loại siêu thượng phẩm hơn cả nhân sâm: trong "Bản thảo cương mục" coi Linh chỉ là loại thuốc
quý, cĩ tác dụng bảo can (bảo vệ gan), giải độc, cường tâm, kiện não (bổ ĩc), tiêu đờm, lợi niệu, ích vị (bổ da day); gan day cac nha khoa hoc Trung
Quốc và Nhật phát hiện nam Linh chỉ cịn cĩ tác dụng phịng và chống ung thư,
chống lão hĩa làm tăng tuổi thọ.[11]
Cĩ nhiều cơng trình nghiên cứu trên thế giới đã định danh được các
hoạt chất và xác định tác dụng dược lý của nấm Linh chỉ như: Germanium, acid ganoderic, acid ganodermic, acid oleic, ganodosteron, ganoderans, adenosin, beta-D-glucan, (dac biét trong nấm Linh chi, cĩ hàm lượng
germanium cao hơn trong nhân sâm đến 5 - 8 lần) Các nhà khoa học Việt Nam tìm thấy trong nấm Linh chỉ cĩ chứa 21 nguyên tố vi lượng cần thiết cho
sự vận hành và chuyên hĩa của cơ thể như: đồng, sit, kali, magie, natri,
canxi.[11]
Ngày nay người ta biét trong ndm Linh chi cé germanium gitp té bao hấp thụ oxy tốt hơn: polysaccharit làm tăng sự miễn dich trong co thé, làm mạnh gan, diệt tế bào ung thư: acid ganodermic chống dị ứng, chống viêm
1.22 Vị trí - Phân loại
Nắm Linh chỉ cĩ vi tri phân loại được thừa nhận rộng rãi hiện nay:
Giới (regnum): Fungi
Ngành (phylum): Basidiomycota Lớp (class): Agaricomycetes
B6 (ordo): Polyporales
Ho (familia): Ganodermataceae
Chi (genus): Ganoderma
Trang 201.23 Đặc điểm hình thái
Linh chi thuộc nhĩm nấm lớn và rất đa dạng về chủng loại Từ khi xác
lập thành một chi riêng là Ganoderma Karst (1881), đến nay tính ra cĩ hơn 200 loai duge ghi nhan, riéng Ganoderma lucidum đã cĩ 45 lồi
Nấm Linh chi là một trong những loại nấm phá gỗ Nấm xuất hiện nhiều vào mùa mưa, trên thân cây hoặc gốc cây Ở Việt Nam nam Linh chi
được gọi là nấm Lim và được phát hiện ở miền Bắc bởi Patouillard N.T
(1890 đến 1928)
Nam Linh chi (qua thể) cây nấm gồm 2 phần cuống nấm và mũ nấm (phần phiến đối diện với cuống nắm) Cuống nắm dài hoặc ngắn, đính bên cĩ
hình trụ đường kính 0,5-3cm Cuống nắm ít phân nhánh, đơi khi cĩ uốn khúc
cong Lớp vỏ cuống màu đỏ, nâu đỏ, nâu đen, bĩng khơng cĩ lơng, phủ suốt
lên mặt tán nắm Mũ nấm khi non cĩ hình trứng, lớn dần cĩ hình quạt Trên
mặt mũ cĩ vân gạch đồng tâm màu sắc từ vàng chanh- vàng nghệ- vàng nâu - vàng cam - đỏ nâu - nâu tím nhẫn bĩng như láng vecni Mũ nấm cĩ đường kính
2-15cm, dày 0,8-1,2cm, phần đính cuống thường gỗ lên hoặc hơi lõm Khi
nấm đến tuơi trưởng thành thì phát tán bào tử từ phiến cĩ màu nâu sam
1.24 Phân bố - Sinh thái
Nắm Linh chi thuộc nhĩm nấm lớn, thường hoại sinh trên gỗ mục, thuộc đại diện của các ho Caesalpiniaceae (lim, lim xet, muỗng đen, me )
Trang 21Nam Linh chi sinh sản chủ yếu bằng bào tử nằm ở mặt dưới của thê quả Phần cĩ chức năng sinh dưỡng chính là hệ sợi của nắm mọc ẩn trong gỗ
mục hoặc đất Hiện nay ở Trung Quốc, Nhật Bản và Việt Nam, người ta chủ
động nghiên cứu trồng được nấm Linh chi trên giá thể nhân tạo dé ding lam thuốc
1.25 Thành phần hĩa học của nắm Linh chỉ
1.2.5.1 Thành phân hĩa được trong nắm
Các phân tích của G-Bing Lin đã chứng minh các thành phần hĩa dược tổng quát của nắm Linh chỉ như sau:
Bảng 1.1: Thành phần hĩa dược của nấm Linh chỉ Thành phần Hàm lượng (%) Nước 12-13 Celulose 54-56 Lignin 13-14 Hợp chất nitơ 1,6-2,1 Chat béo 1,9-2
Hop chat phenol 0,08-0, 1
Hop chat sterol toan phan 0,11-0,16
Saponin toan phan 0,3-1,23
Alkaloid va glusosid 1,82-3,06
1.2.5.2 Thành phân các chất hoại tính ở nắm
Từ những năm 1980 đến nay, bằng các phương pháp hiện đại: phố kế UV (tử ngoại), IR (hồng ngoại), phố kế khối lượng - sắc ký khí (GC —
MS), phơ cộng hưởng từ hạt nhân và đặc biệt là kỹ thuật sắc ký lỏng hiệu
năng cao (HPLC) cùng phố kế plasma (ICP), đã xác định chính xác gần 100
Trang 22Bảng 1.2: Các hoạt chất sinh học và dẫn xuất trong nấm Linh chỉ Nhĩm chất Hoạt chất Hoạt tính
Alacloid Tro tim
B-D-glucan Chéng ung thu, ting tinh
Polysaccharide mién dich
Ganoderma A, B, C Hạ đường huyết
D-6 Tăng tổng hợp protein, tăng
chuyên hĩa acid nucleic
Steroid Ganodosteron Giải độc gan
Acid lanosporeric A Ức chế sinh tổng hợp
lanosterol cholesterol
Acid ganoderic M, F,T, O Uc ché sinh téng hop cholesterol
Acid ganoderic R, S Uc ché giai phong histamine
Triterpenoid Acid ganoderic B, D, F, H, | Ha huyét ap, tre ché ACE K, S, Y Ganodermadiol
Ganosporelacton A, B Chống khối u
Lucidon A, lucidol Bao vé gan
Nucleotid Adenosin dẫn xuất Ức chế kết dính tiểu cầu, thư
giãn cơ, giảm đau
Protein Lingzhi-8 Chống dị ứng phố rộng, điều
hịa miễn dịch
Acid béo Dẫn xuất của acid oleic Ức chế giải phĩng histamine
1.2.5.3 Hàm lượng các nguyên tơ trong nấm
Trang 23Bảng 1.3: Hàm lượng các nguyên té trong nam T.T Nguyên tố Hàm lượng (ppm) 1 Nhơm AI 145,93 2 Vàng Au 0.01 3 Bari Ba 0.55 4 Brom Br 1,65 5 Canxi Ca 238,28 6 Clo Cl 755,81 7 Coban Co 0,10 8 Crom Cr 0,03 9 Cesi Cs 16,60 10 | Đồng Cu 2.14 II |Sắt Fe 18,98 12 Kali K 9044,58 13 Magie Mg 267,47 14 Natri Na 292,14 15 Rubidi Rb 75,81 16 Antimonium Sb 0,01 17 Mangan Mn 18,92 18 Strongtium St 2,92 19 Vanadium Vụ 1,67 20 Kém Zn 45,49 21 Germanium Ge 2,88
1.26 Tác dụng trị liệu của nắm Linh chỉ
Chỉ cĩ 6 loại nấm Linh chỉ được nghiên cứu tường tận về khả năng trị
Trang 24Trong 6 loại nay, nấm Linh chi den va đỏ được coi là cĩ tác dụng trị liệu tốt
nhất, và được dùng nhiều nhất trên thế giới hiện nay
Tuy nhiên, nấm Linh chi đỏ được chứng minh là tốt nhất cho sức khỏe vì nĩ thúc đây sự làm việc của hệ thống miễn dịch, làm tăng sự hoạt động của cơ thể và chống lão hĩa Bảng 1.4: Lục bảo Linh chỉ theo thời Lý Trần (1590)
Tên gọi Màu sắc Đặc tính
Thanh chi VỊ chua, tính bình, khơng độc, chủ trị Xanh Lg ` (Long chi) sáng mặt, bố sung khí, an thân tăng trí nhớ Hồng chi "_ - VỊ đăng, tính bình, khơng độc, tăng trí nhớ, (Xích chi, Đỏ - - - dưỡng tim, chữa trị tức ngực Don chi) Hoang chi VỊ ngọt, tính bình, khơng độc, an thần, ích tì - - Vàng
(Kim chi) khi
Bach chi , Vi cay, tính bình, khơng độc, ích phơi, Trăng ` (Ngoc chi) thơng mũi, cường ý chí, an thân, chữa ho , Vi man, tính bình, khơng độc, trị chứng bí Hac chi Den a tiêu, ích than VỊ ngọt, tính ơn khơng độc, trị đau nhức Tử chi Tím „ khớp xương, gân cốt Phần lớn các sản phẩm được giới
thiệu là “từ thiên nhiên” được làm bang nam
Linh chi đen Mặc dù được coi như là một được thảo bổ dưỡng, nấm Linh chi đen
khơng cĩ giá trị bằng nấm Linh chi đỏ vì nĩ
Trang 25
1.26.L Giá trị dược liệu của Linh chỉ
Các nhà nghiên cứu xác nhận rằng các polysaccharicdes dễ tan trong nước cĩ rất nhiều trong nấm Linh chi cĩ tác dụng chống ung thư, rối loạn miễn dịch và làm chống cao huyết áp Thành phần quan trọng khác là triterpenes, cịn được gọi là ganoderic acids giúp giảm nhẹ các dị ứng bằng cách ức chế sự phĩng thích histamine của cơ thể, đây mạnh sự hấp thụ oxy và làm tăng sự hoạt động của gan
Theo Thời Lý Trần trong “Bản Thảo Cương Mục” thì Linh chỉ cĩ tác dụng bổ tâm khí, chữa các chứng nhĩi ngực Hiện nay, Linh chỉ được dùng đề giảm áp huyết, kích thích sự làm việc của gan, tây máu và giúp cơ thê chống
lại các chứng lao lực quá độ Trong một mức độ nào đĩ, Linh chi cĩ tác dụng
giải độc cho cơ thé
Ngồi ra, Linh chi cịn được dùng đề chữa bệnh mất ngủ, lở dạ dày, tê
thấp, sưng cơ họng Nhiều y gia Nhật Bản đã dùng loại nắm này trong các loại
thuốc trị rụng tĩc Vì tác dụng bồ khí và làm tăng hệ thống miễn dịch của cơ
thể, mà người ta đã dùng Linh chi phụ với các loại thuốc trị ung thư Gần đây người ta cịn thấy Linh chỉ cĩ tác dụng với ung thư tử cung, ung thư khoang miệng ung thư dạ dày, ung thư gan Đặc biệt nếu kết hợp với hố trị liệu sẽ cĩ kết quả nhanh hơn
1.2.6.2 Tac dung duoc lý của nắm Linh chỉ
- Tac dụng của Linh chi trên hệ thần kinh
- Tac dụng giảm đau - Tác dụng chống ung thư
- Tác dụng lên hệ tuần hồn
- Thúc đây quá trình tiết insulin
- Tac dụng của Linh chi lên hệ tim mạch
“+ Tac dụng cường tim
Trang 26- Tac dụng của Linh chi lên hệ tiêu hĩa
- Cac tac dung khác của Linh chi
“+ Tac dung chống nhiễm xạ của Linh chi s* Linh chị chữa bệnh rụng tĩc
1.3 Steroid 1.31 Khái niệm
Các chất steroid là một nhĩm lớn các hợp chất cĩ cấu tạo với khung cơ bản là cyclopentan perhydrophenantren, cịn gọi là gonan Steroid là một loại hợp chất hữu cơ cĩ chứa một sự sắp xếp đặc trưng của bốn vịng cycloalkane được nối với nhau Lõi của steroid bao gồm 20 nguyên tử cacbon liên kết với nhau mang hình thức của bốn vịng hợp nhất: ba vịng cyclohexane (được xem như là vịng A, B, và C trong hình bên trái) và một vịng cyclopenfane (vịng D) Các steroid khác nhau đối với từng nhĩm chức năng gắn liền với cốt lõi bốn vịng và oxI hĩa của các vịng.[2]
D.Barton, nhà hĩa học đặt nền mĩng cho cấu hình khơng gian của các phần tử hĩa hữu cơ nhận giải nobel về chuyên ngành này đã xác định cấu hình khơng gian của các chất steroid như sau:
Trước hết là cấu hình của hai vịng: trans decalin và cis đecalin Và sau đĩ là cầu hình bốn vịng trong phân tử các chất steroid
1.32 Cơng dụng
Các steroid bao gồm nhiều loại thuốc và thực phẩm chức năng quan trọng được dùng để phịng và điều trị các bệnh hiểm nghèo như thấp khớp,
chống, dị ứng, suy tim, các chất steroid cịn dùng để điều trị các bệnh các tuyến sinh dục, điều trị vơ sinh, ung thư và đặc biệt là các thuốc chống thụ
Trang 271.33 Phân loại
Các chất steroid được phân loại theo cấu tạo hĩa học và một phần theo hoạt tính sinh học, bao gồm các nhĩm sau:
1.3.3.1 Các sferol
Gồm các steroid động vật như cholesterol và các steroid thực vật như
sitosterol, stigmasterol và campesterol Trong cơ thể người, cholesterol được
chuyên hĩa để sinh tơng hợp các acid mật, các hormon sinh dục, các hormon
vỏ tuyến thượng thận Các sterol thực vật (phytosterol) cĩ nhiều trong các loại vỏ cây và nấm men như sitosterol cĩ trong lúa mỳ, gạo, gỗ: tigmasterol cĩ trong hạt đậu tương: ergosterol cĩ trong nắm của lúa mạch, men bia.Y học sử dụng hỗn hợp các sterol thực vật làm thuốc uống đề phịng và điều trị xơ
vữa động mạch, điều trị bệnh như chu viêm, chống oxy hĩa, chống lão hĩa và điều trị các rối loạn hệ sinh dục nữ
1.3.3.2 Các acid mát
Túi mật chứa dịch mật là tác nhân giúp cho cơ thể hấp thụ các chất đinh
dưỡng Dịch mật cĩ chứa nhiều acid mật cĩ cấu tạo steroid như acid cholic trong mật gia cầm, acid ursodeoxycholic trong mật gấu, mật chuột và cả mật
người
Y học hiện đại dung acid cholic để làm thuốc thơng mật, lợi mật dùng
cho những người viêm gan, rối loạn chuyển hĩa acid mật, dùng acid chenodeoxycholic cĩ trong mật gia cầm làm thuốc tan sỏi mật
1.3.3.3 Các saponin steroid
Các saponin steroid cĩ nhiều trong các cây một lá mầm như các cây họ
củ nâu — Dioscoreaceae, thủy tiên — Amryllidaceae, hanh — Liliaceae, Rau
hùm — Tacacea Trong thực vật các saponin này ở dạng glycosid, chứa các aglycon steroid gắn với các phần đường (glucose, galactose ) Khi thủy phân bằng acid lỗng hay bằng enzym thì sẽ nhận được các aglycon steroid được gọi là các sapogenin steroid Các saponin steroid thì tan trong nước và cĩ kha
Trang 28saponm steroid trong dược liệu Trong thực vật các saponin steroid cũng được sinh tổng hợp từ cholesterol
1.3.3.4 Cac hormon sretoid sinh duc
Các hormon này cĩ 2 nhom: cac estrogen va cac progestogen
Cac estrogen 1a cac chat steroid cĩ chứa 18 nguyên tử cacbon và cĩ 4 vịng A, B, C, D trong đĩ vịng A là nhân thơm Estrogen chính là estradiol, ngồi ra cịn cĩ esfron, estriol Các estrogen là những chất quyết định trong
việc hình thành và phát triển các cơ quan sinh dục nữ, chu kỳ kinh nguyệt, sự
phát triển của buồng trứng tử cung, tuyến vú và các biểu hiện thứ cấp, các tổ chức, mơ sinh dục nữ giới và tạo dáng vẻ hấp dẫn 3 vịng cho phái đẹp làm
cho da dẻ mịn màng, mềm mại, giọng nĩi cao và nhẹ nhàng
1.3.3.5 Các adrenocorticossteroid
Tuyến thượng thận nằm trên 2 quả thận được chia làm 2 phần : phần lõi
tiết các chất catecholamin, cịn phần vỏ tiết các steroid, được gọi là các
adrenocorticosteroid
Các adrenocorticosterroid lại chia làm hai nhĩm phụ thuộc vào tác
dụng dược học và chuyên hĩa sinh học của chúng là : các glucocorticoi (hydrocortison), các mineralocorticoid ( aldosteron)
Cơ thể thiếu các hormon này sẽ bị bệnh Addison, thể hiện sự mệt mỏi, thiếu máu, nơn mửa, huyết áp hạ, da xanh hiện các vết cĩ màu, suy giảm hoạt
động trí não
1.3.3.6 Cac steroid cường tim
Các steroid cường tim chủ yếu cĩ trong các loại Dương đại hồng Digitalis purputea L, Digitalis laanata Ehrh Cac cay Strophanthus và các cây cĩ ở Việt nam như đay, trúc đào, Thơng thiên, sừng dê, sừng trâu
Trang 29+ Phần đường cịn gọi là các oligosaccharid gồm cĩ đường glucose và nhiều đường đeoxy (cịn gọi là đường hiếm)
+ Các aglycon của các glycosid cường tim cĩ nhân cấu tạo steroid, cĩ 4
vịng Các vịng A-B và C-D cĩ liên kết cis, cịn B-C cĩ liên kết trans
1.4 Sterol 1.41 Khái niệm
Sterol, cũng được biết đến như là rượu steroid, là một phân nhĩm của
các steroid (với một nhĩm hydroxyl ở vị trí-3 của vịng -A ) và một lớp quan trọng của các phân tử hữu cơ Nhĩm hydroxyl trên vịng A là phân cực, phần
cịn lại khơng phân cực Chúng xuất hiện tự nhiên trong thực vật, động vật, nấm, với các loại quen thuộc nhất của sterol động vật là cholesterol
Cholesterol là quan trọng đối với chức năng tế bào, và là tiền thân của vitamin tan trong chat béo va cac hormone steroid [23]
HO
Hình 1.2: Cấu trúc sterol
1.42 Phân loại sterol
Sterol thực vật được goi la phytosterol va sterol dong vat duoc goi la
zoosterols Zoosterols quan trọng là cholesterol, phytosterol đáng chú ý bao gồm campesterol, sitosterol, stigmasterol Ergosterol là một sterol hiện diện trong màng tế bào của nấm, nĩ phục vụ một vai trị tương tự như cholesterol trong các tế bào động vật
- Phytosterol, thường được gọi là sterol thực vật, đã được chứng minh
trong các thử nghiệm lâm sàng đề ngăn chặn sự hấp thụ cholesterol trong ruột của con người, do đĩ giúp làm giảm cholesterol ở người
Hơn 200 sterol và các hợp chất liên quan đã được xác định Phytosterol
tự do được chiết xuất từ các loại dầu khơng tan trong nước, tương đối khơng
Trang 301.4.3 Vai tro cia sterol
Sterol và các hợp chất liên quan đĩng vai trị thiết yếu trong sinh lý của
sinh vật nhân chuẩn Ví dụ, cholesterol là một phần của màng tế bào ở động
vật, nĩ ảnh hưởng đến tính lưu động của màng tế bào và cĩ chức năng truyền tải tín hiệu phát triển Ở người và các động vật khác, corticosteroid, chẳng hạn như cortisol hoạt động như hợp chất truyền tín hiệu và chuyên hĩa nĩi chung Sterol là những thành phần phố biến của các loại dầu da người `" Z TT ral Elgdsterol (ergos:a-5, 7,22-trieti.35-ol) Gsitestérbl(stignastécs.2n-38-00 Stigraastercl (stiggnssta:5,22-diew-3p-0)) os | ` | Hữ HO Carnpesteral Fucostero! Hình 1.3: Cấu trúc một số sterol
Sterol nấm và thực vật cĩ sinh tổng hợp trong các phản ứng tương tự nhau, nhưng trình tự các phản ứng và hĩa học lập thể của các sản phẩm chủ yếu khác nhau Hầu hết các sterol nấm, ví dụ ergosterol, chứa 28 nguyên tử
cacbon (Parks & Weete, 1991) Các sterol nhỏ khác, hiện diện trong các loại nấm, đã được xác định, bao gồm cả fungisterol, ergosta-5,7-dienol, 24-methyl
cholesterol va cholesterol methylene (Lyznik & Wojciechowski, 1981; Weete & Gandhi, nim 1997) Cac sterol ndm cung cấp các chức năng đặc trưng, đĩ
là cần thiết cho sự tăng trưởng thực vật
Sterol thực vật được cơng nhận là cĩ tác dụng tích cực cho sức khỏe,
Trang 31bài viết của Piironen, Lindsay, Miettinen, Toivo, va Lampi (2000) Sterol nam cĩ thể cĩ chức năng tương tự với các sterol thực vật khác, tuy nhiên cĩ vài dữ liệu về tác dụng dinh dưỡng của chúng
1.5 Ergosterol 1.51 Giới thiệu
Ergosterol (ergosta-5,7,22-trien-3-ol) là một sterol được tìm thấy
trong nấm, và đặt tên là ergot , một tên gọi chung cho các thành viên của các
lồi nắm C/awiceps, từ đĩ ergosterol lần đầu tiên được phân lập Ergosterol
khơng cĩ trong tế bào thực vật hoặc động vật Nĩ là một thành phần của nắm
men và nấm màng tế bào, cĩ cùng chức năng như cholesterol trong tế
bào động vật
Ergosterol là một sterol chủ yếu trong hầu hết các loại nắm thuộc nắm thực (Eumycotic) Ergosterol đĩng vai trị quan trọng trong màng tế bào và
các thành phần tế bào khác, cĩ liên kết chặt chẽ với tế bào chất nắm Tuy
nhiên, ergosterol khơng được tạo ra bởi tất cả các loại nấm và hàm lượng của ergosterol là khác nhau giữa các lồi tương ứng tùy thuộc vào chức năng
trang thái sinh lý của nấm [6]
AKT
Hinh 1.4: C4u tric ergosterol Danh phap IUPAC : Ergosta-5 ,7,22-trien-3B-ol
Cơng thức phân tử : C2sHy4O
Khối lượng mol : 396,65 g/mol Điểm nĩng chảy : 160,0°C
Trang 321.5.2 Ung dung
Ergosterol, con gọi là tiền vitamin Da, là một chất béo khơng xà phịng
hố được tìm thấy trong ergot, nấm men, và các loại nắm khác, là một hợp
chất tinh thé màu trắng khơng tan trong nước và hịa tan trong các dung mơi hữu cơ Nĩ được chuyên đối thành ergocalciferol (vitamin D;) khi chiếu xạ bằng ánh sáng tia cực tím hoặc bắn phá điện tử Ergosterol qua quá trình quang phân khi tiếp xúc với ánh sáng tia cực tím bước sĩng 280-320 nm tạo ra một loạt các sản phẩm photoirradiation, những sản phẩm chủ yếu là previtamin D;, tachysterol và lumisterol Tiền vitamin D; qua quá trình tự
phát nhiệt sắp xếp lại tạo thành vitamin D; (Jones, Seamark, Trafford, va Makim, 1985; Parrish, 1979: Singh, 1985) Vì lý do này, khi nắm men (như men bia) và nam (như nấm), được tiếp xúc với ánh sáng cực tím, một
lượng đáng kế vitamin D; được sản xuất.[23]
Như vậy vitamin D; cĩ vai trị như là nguồn chế độ ăn uống cĩ sẵn vitamin D đối với những người khơng ăn sản phẩm động vật, mặc dù người đĩ cĩ thể hấp thụ nguồn vitamin D phong phú thơng qua tiếp xúc với ánh sang mặt trời [17]
Ergosterol cũng được sử dụng như một chỉ báo sinh khối nấm trong đất Mặc dù nĩ khơng làm suy giảm theo thời gian, nếu giữ dưới đơng trong
một mơi trường tối suy thối này cĩ thể được làm chậm lại hoặc thậm chí
ngừng hồn tồn 1.53 Độc tính
Ergosterol bột là một chất kích thích cho da, mắt và đường hơ hấp Nuốt một lượng lớn cĩ thể gây ra chứng tăng calci huyết, (nếu kéo dài) cĩ thể dẫn
đến việc tích lay muối canxi trong các mơ mềm, và đặc biệt là thận 1.6 Ergosterol Peroxide
1.61 Giới thiệu
Ergosterol peroxide (5, 8-Epidioxyergosta 6,22 -dien-3-ol) là một steroid
Trang 33biển Nĩ cũng là một thành phần chính của màng tế bào của một loại tảo halotolerant Tuy nhiên, khơng thấy xuất hiện của ergosterol peroxide trong
nấm gây bệnh
Ergosterol peroxide cĩ: Tĩnh thê hình kim, màu trắng, tan trong Clorofom
Cơng thức phân tử là: CạạH„„O; — Khối lượng phân tử bing: 428,647 g/mol Nhiệt độ sơi: 499,7°C Cơng thức cấu tạo: ^^ ot ee AsQe zs Hình 1.5: Cấu tric ergosterol peroxide 1.6.2 Ung dung
Egosterol peroxide sở hữu một loạt các đặc tính sinh học như ức chế
miễn dịch, chống vius, chống viêm và chống khối u hoạt động Ergosterol
peroxide (EP) là một dẫn xuất steroid thường được phân lập từ nấm dược
liệu Một số nghiên cứu báo cáo hoạt động chống ung thư của EP trong các loại khác nhau của các tế bào ung thư Ví dụ, Russo và các đồng nghiệp báo cáo rằng EP suy yếu sự phát triển tế bào và apoptosis cảm ứng ở người ung thư tiền liệt tuyến Kobori và các đồng nghiệp báo cáo rằng EP ức chế phản ứng viêm trong RAW264.7 đại thực bào và tăng trưởng của HT29 các tế bào ung thư tuyến ruột kết
1.7 Giới thiệu về phương pháp sắc ký fingerprint và những ứng
dụng của sic ky fingerprint trong danh gia chat liệu dược phẩm [4]
1.71 Giới thiệu về phương pháp fingerprint
Trang 34những vịng uốn cong hoặc xoắn Ốc, sắp xếp theo các lớp xuất hiện trên bàn tay, chân của mỗi người Cho đến năm 1858 khi người Anh cai trị các nước thuộc địa, người ta bắt đầu chú ý đến đngerprint trong việc nhận dạng và xác thực cá nhân vì những nét riêng biệt mang tính duy nhất của đngerprint Những ứng dụng mạnh mẽ nhất của đngerprint trong khoa học thực sự bắt
đầu từ những năm cuối thế kỷ XIX đầu thế kỷ XX, một bác sỹ người Xcotlen
đã tiến hành các nghiên cứu, quan sát kỹ lưỡng các mẫu fngerprint và nhận thấy rằng các mẫu đngerprint trên các ngĩn tay của mỗi cá nhân cĩ những
điểm khác biệt, khơng trùng lặp, những điểm khác biệt này cĩ thể được sử
dụng để nhận dạng mỗi cá nhân Chính những phát hiện này đã dẫn đến những phát kiến để so sánh nhận dạng và ứng dụng Íngerprint Kỹ thuật fingerprint dugc ứng dụng rộng rãi trong các ngành an ninh, cơng nghệ thơng tin, ngân hàng, vật liệu Cuối cùng kỹ thuật đngerprint cịn được áp dụng
vào việc đánh giá chất lượng dược liệu và nhận dạng độc tố trong y học thơng
qua phuong phap sac ky fingerprint
Theo định nghĩa, một sắc ký đngerprint của một mẫu thảo được là một
sắc ký đồ (hoặc một điện tâm đỏ) cĩ dược tính và tính chất hĩa học điển hình
của một dịch chiết mẫu thảo dược đĩ Mẫu sắc ký đồ này phải đảm bảo các
yêu cầu về sự xuất hiện “rõ ràng” hay “mờ nhạt”, sự “giống” hay “khác nhau”
của các yếu tố hĩa học cĩ mặt trong dược liệu Dựa vào những đặc tính nêu
trên, phương pháp sắc ký đngerprint được sử dụng trong việc đánh giá và
kiểm sốt chất lượng thảo dược Khĩ khăn của việc kiểm sốt chất lượng
dược liệu từ thiên nhiên chủ yếu là do sự phức tạp của các thành phần hĩa
học, trong đĩ cĩ rất nhiều sự tương tác qua lại dẫn đến khĩ cĩ thể xác định
chính xác được thành phần nào cĩ hoạt tính Chính vì vậy, nếu đánh giá chất
lượng dược liệu mà chỉ dựa vào một số lượng hạn chế các hợp chất cĩ hoạt tính hoặc độc tố thì rất khĩ xác định được chất lượng tự nhiên của sản phẩm
một cách trọn vẹn Sự ra đời của phương pháp sắc ký ngerprint đã phần nào khắc phục được những hạn chế nêu trên qua đĩ sẽ giúp cho việc xác định định
Trang 35đáng tin cậy Kê từ vài năm trở lại đây, kỹ thuật phân tích sắc ký đngerprint
đã được sử dụng nhiều để xác định và đánh giá chất lượng dược liệu của Trung Quốc, Hàn Quốc và Nhật Bản Năm 2000, Cục Quản lý dược của
Trung Quốc đã quyết định phát triển kỹ thuật sắc ký đngerprint của được liệu cơ truyền (TMC) như một tiêu chuẩn để đánh giá và quản lý chất lượng của dược phẩm Trong tương lai khơng xa, kỹ thuật phân tích sắc ký đngerprint
sẽ trở thành một kỹ thuật mang tính tiêu chuẩn cho việc đánh giá chất lượng được liệu và các sản phẩm thiên nhiên khác cĩ nguồn gốc từ dược liệu, trong
đĩ bao gồm việc đánh giá những nguyên liệu tinh và nguyên liệu thơ dùng làm nguyên liệu đầu vào cho cơng nghiệp hĩa được
1.72 Cách thức xây dựng và thực hiện phương pháp sắc ký fïngerprinf Xéy dung fingerprint: Mau fingerprint duoc tao ra tùy thuộc vào đối tượng nghiên cứu Mỗi ngành khoa học cĩ tiêu chuẩn đặc trưng riêng cho mẫu đngerprint Trong đề tài của tơi đề cập đến các tiêu chí đề tạo mẫu sắc ký Đđngerprint phục vụ cho việc đánh giá được liệu trong y học cơ truyền
So sánh với tây dược việc đánh giá và quản lý chất lượng khơng phải là vấn đề đáng quan tâm nhiều vì chất lượng của nguyên liệu đầu vào đã được
chuẩn hĩa Đối với thảo dược và các sản phẩm từ thảo dược thì ngược lại, nguyên liệu đầu vào cĩ thể từ một lồi thực vật hoặc nhiều lồi thực vật, các
lồi này cĩ thành phần thay đối theo mơi trường sống, mùa thu hoạch, hình thức bảo quản hình thức xử lý mẫu Một số được thu thập khơng chính xác với nguyên nhân là cĩ sự nhầm lẫn do cĩ sự giống nhau về hình thái học của cây trong vùng nơi thu mẫu, một số phát sinh từ sự nhận dạng sai hoặc những
sai sĩt từ các mẫu thực vật nhập khẩu Một số khĩ khăn cịn nảy sinh từ việc
gọi tên các lồi thực vật theo các ngơn ngữ địa phương ngay trong cùng một
quốc gia hoặc rộng hơn trong một khu vực, các quốc gia Do đĩ, bước đầu
tiên đĩng vai trị quan trọng trong quy trình tạo mẫu sắc ký đngerprint đĩ là
việc chuẩn hĩa quá trình thu thập mẫu và xác định tên phân loại dược liệu
Trang 36nghiên cứu, thử nghiệm y học cồ truyển” của Tổ chức Y tế thế giới WHO, người ta chia thảo dược thành các nhĩm như sau:
Thảo mộc: Thảo mộc bao gồm những chất liệu thơ của thực vật ví dụ như các lá, hoa, quả, gốc, thân, rễ, cành, vỏ
Chất liệu của thảo mộc: Chất liệu từ thảo mộc bao gồm các thành phần hĩa học của thảo mộc, các lồi nước ép tươi, chất gom, tinh dau, nhua va
những thành phần xuất phát từ thảo mộc
Thảo mộc đã xứ lý: Đây là nguyên liệu đầu vào cho các sản phẩm thảo
dược cĩ thể bao gồm các mảnh hoặc bột từ chất liệu của thảo mộc, cao chiết
thơ Các nguyên liệu này tạo ra bằng các phương pháp chiết, phân đoạn, ly
tâm hoặc bằng các quá trình vật lý và sinh học khác
Các sản phẩm từ thảo mộc: Các sản phẩm từ thảo mộc bao gồm một hoặc nhiều phần của thảo mộc đã xử lý từ nhiều nguồn khác nhau Các sản phẩm này cĩ thể chứa các tá dược nhằm hỗ trợ thêm cho các thành phần cĩ tác dụng.Tuy nhiên, nếu sản phẩm mà cĩ các thành phần thêm vào cĩ nguồn gốc từ tổng hợp nhân tạo hoặc là các hợp chất được phân lập từ thảo mộc thì sản phâm
đĩ khơng được cơng nhận là sản phẩm từ thảo mộc Một vài thảo được độc tính
rất cao do đĩ khi thu thập cũng như khi sử dụng cần phải cĩ hướng sử dụng với liều lượng thích hợp Việc ghi nhãn trên các sản phẩm từ thảo dược khơng chính xác cũng gây ra nhiều khĩ khăn trong việc đánh giá và quản lý chất lượng dược liệu Quá trình thu thập mẫu cần tiến hành theo tiêu chuẩn thu thập
mẫu của các nhà thực vật học, ví dụ như: Ghi nhãn tên thảo dược, tiêu bản, chụp ảnh thảo dược, nơi thu thập mẫu và thời gian thu thập mẫu
Quá trình xác định tên khoa học của mẫu thu thập được: Việc định lồi và xác định tên khoa học chính xác của dược liệu đĩng vai trị vơ cùng quan trọng, việc này sẽ tránh được sự nhằm lẫn về nguồn gốc thực vật Bước đầu tiên trong việc đánh giá tính an tồn và hiệu quả của thảo dược là việc xác
nhận tên thảo dược Các thơng tin yêu cầu cần thiết là tên Latin, tên đồng nghĩa, tiếp đĩ là tên theo bản xứ của thảo mộc, những phần của thảo mộc
Trang 37rõ Bước tiếp theo là ghi rõ các thơng tin chỉ dẫn về điều kiện thu thập và mơi
trường nuơi dưỡng hoặc mơi trường sinh sống của thảo mộc Trong cuốn hướng dẫn về quản lý chất lượng thảo dược của Tổ chức Y tế thế giới WHO đã chỉ rõ các tiêu chí cần thiết
Quá trình chiết xuat mau (Extracting methods): Phuong phap chiét mau và chuẩn bị mẫu gĩp phần quan trọng trong việc tao ra cac sac ky fingerprint
tốt từ thảo được
Đề cĩ được những bản sắc ky fingerprint tét, trên bản sắc ký đĩ hiển thị các thành phần chủ yếu của thảo dược phụ thuộc vào nhiều yếu tố Ví dụ như:
Dung mơi chiết, điều kiện tiến hành chiết mẫu, tỷ lệ hệ dung mơi chiết mẫu, nhiệt độ tiến hành chiết mẫu, thiết bị sử dụng để chiết mẫu, điều kiện vận
hành thiết bị chiết mẫu Quá trình chuẩn bị mẫu tốt sẽ làm giảm khả năng ảnh
hưởng của nhiều thành phần đến kết quả phân tích Tùy theo từng thiết bị
phân tích được lựa chọn (HPLC, CE, GC-MS, LC-MS) đề tiến hành xây dựng các bước chuẩn bị mẫu khác nhau cho phù hợp với các thiết bị phân tích nêu
trên Cĩ nhiều mẫu phải tiến hành chiết theo phương pháp chiết lỏng-lỏng
(Liquid-Liquid extraction), cĩ mẫu cần phải chiết theo phương pháp chiết pha rắn kết hợp với pha lỏng hoặc nguyên chiết pha rắn (Solid phase extraction) Mẫu thảo được
Lua chon dung mơi
Trang 38Để đưa ra được một phương pháp thảo dược tốt, người ta thường tiến hành thử chiết mẫu theo sơ đồ hình 1.6
Khảo sát hoạt tinh sinh hoc cua mau (Pharmacological activity): Cong
việc này được thực hiện theo mục đích tiến hành đánh giá chất lượng dược
liệu của từng phịng nghiên cứu Các hoạt tính sinh học thường được xem xét
như: hoạt tính kháng sinh, hoạt tính chống oxi hĩa, hoạt tính gây độc tế bào,
hoạt tính ức chế sự phát triển xương việc kiêm sốt chất lượng cũng bao
gồm cả việc xác định hoạt tính tự nhiên vốn cĩ cũng như cả độc tính của chúng Việc xác định rõ ràng hoạt tính hoặc độc tính của thảo dược sẽ làm
cho các sản phẩm cĩ giá trị cao hon trong những ứng dụng dược phẩm va thực phẩm Trong rất nhiều trường hợp, các loại thuốc trong y học cơ truyền
được tạo ra từ một hoặc rất nhiều loại thảo dược Trong các loại thảo dược đĩ, cĩ lồi cĩ độc tính rất cao, cĩ lồi khơng thể hiện hoạt tính Ngay cả với
những lồi cĩ độc tính khi sử dụng các lồi đĩ với các liệu pháp phù hợp thì thành phần độc tính trong thảo dược khơng những khơng gây độc mà cịn
đĩng vai trị tốt trong liệu pháp chữa bệnh Chính vì vậy, việc đánh giá và lựa
chọn được liều lượng phù hợp cho các thành phần đĩ cũng là một trong những tiêu chí trong quản lý chất lượng dược liệu.[14]
Lựa chon thiét bi phan tich (Measurement instruments) Trong các phương pháp đánh giá chất lượng dược liệu, các phương tiện phân tích đĩng vai trị quan trọng Bởi vì việc lựa chọn và sử dụng các phương tiện phân tích phù hợp với đối tượng nghiên cứu sẽ mang lại hiệu quả cao trong quá trình đánh giá chất lượng được liệu
- Sau đây là một số thiết bị và cơng cụ nghiên cứu đang được sử dụng trong việc đánh giá chất lượng dược liệu:
Sắc ký lĩp mĩng (TLC): Trước khi cĩ sự ra đời của các thiết bị phân
tích hiện đại như sắc ký khí GC và sắc ký lỏng cao áp HPLC, sắc ký lớp
Trang 39pháp thực hiện đơn giản, khơng yêu cầu tiêu chuẩn kỹ thuật cao, linh hoạt, tốc độ phân tích nhanh, độ nhạy đáng tin cậy và việc chuẩn bị mẫu đơn giản, dễ
thực hiện trong mọi điều kiện Tuy nhiên, một vấn để gặp phải khi sử dụng
sắc ký lớp mỏng TUC để đánh giá dược liệu đĩ là trong mẫu thảo dược
thường cĩ nhiều thành phần, các thành phần này cĩ mức độ phức tạp cao, dễ phân hủy và bay hơi, cĩ nhiều thành phần chồng chéo và ở lượng rất nhỏ thì phương pháp sắc ký lớp mỏng gặp nhiều khĩ khăn Hơn thế, dữ liệu của sắc ký lớp mỏng là dữ liệu một chiều khơng thỏa mãn được yêu cầu của phân tích
dữ liệu trong điều kiện hiện nay Thêm vào đĩ, việc chuyền dữ liệu đề cĩ thé
ứng dụng các phương pháp hĩa thống kê để tiến hành xử lý số liệu gặp nhiều
khĩ khăn, đơi khi khơng thể thực hiện được việc chuyền đổi để xử lý số liệu thu được
Sắc ký khí (GC): Trong thảo dược cũng tổn tại nhiều thành phan, trong
đĩ cĩ thành phân rất dễ bay hơi Các thành phần rất dễ bay hơi này cĩ những
đặc tính riêng biệt của từng lồi thảo dược, chính những tính riêng biệt này tạo ưu thế cho việc xây dựng sắc ký Íngerprint của các thảo được theo phương pháp sắc ký khí Một ví dụ điển hình của việc áp dụng sắc ký fingerprint trén sắc ký khí là phân tích các đạng dầu béo trên hệ sắc ký khí Kết quả phân tích này cũng cho ra một dạng thích hợp sắc ký đngerprint,
dang fingerprint nay co thé duoc si dụng để nhận dạng thảo dược Thành
phần và các mối liên hệ của các hợp chất hữu cơ cĩ trong dầu béo chứa đựng những thành phần đặc biệt của thảo được và một phần tạp chat trong dầu béo
cĩ thể được xác định Phân tích bằng GC cũng thu được sự chính xác và độ
nhạy cao cho các thành phần hĩa học dễ bay hơi Tuy nhiên, phương pháp phân tích này cũng gặp khĩ khăn khi các mẫu thảo dược ở dạng phân cực và khơng phải là thành phần dễ bay hơi
Trang 40tích các thảo dược bởi vì các thiết bị này rất dễ sử dụng và khơng bị hạn chế
bởi các thành phần bay hơi hay khơng bay hơi cũng như độ bên, độ phân cực của chất nghiên cứu Thơng thường hệ HPLC thường được sử dụng đề phân tích hầu hết các hợp chất cĩ mặt trong thảo dược Các hợp chất cĩ khả năng hap thu quang (chromophic) thi ding đầu dị UV-Vis hoặc đầu đị hấp phụ huỳnh quang Fluorescene detector, đối với các hợp chất khơng cĩ khả năng hấp thụ quang (non-chromophoric) thi ding đầu dị tán xạ ánh sáng ELSD (evaporative light scattering detector) Cac k¥ thuat nay rất thích hợp cho việc xây dựng các sắc ký đngerprint và xử lý, chuyên đổi dữ liệu theo các phương pháp thống kê đa biến, kết quả thu được tin cậy và đạt chuẩn mực
Phương pháp sắc ký điện di (CE): Sắc ký điện di hứa hẹn một tiềm năng trong việc tách và phân tích các thành phần hoạt tính trong thảo dược Một ưu điểm của phương pháp này là chỉ cần một lượng rất nhỏ mẫu hoặc chất chuẩn, đồng thời phương pháp này đạt tốc độ phân tích rất nhanh và cho khả năng phân tách tốt Phương pháp xây dựng sắc ký fngerprint trên nền tảng của thiết bị này cũng mang lại kết quả cao bởi vì phần lớn các ứng dụng của sắc ký điện di tương tự như các ứng dụng trong HPLC Một phần khơng tiện lợi của phương pháp này là kết quả phân tích vẫn bị ảnh hưởng nhiều bởi một số thành
phần nhân tạo hoặc là do việc lựa chọn các dung dịch đệm gây ra
Các phương pháp phân tích trên thiết bị kết hợp: Trong khi các kết quả phân tích bằng các phương pháp sắc ký thơng thường bị hạn chế hoặc khơng
thể thực hiện do nhiều yếu tố tự nhiên hoặc nhân tạo mang lại thì kỹ thuật sắc ký kết hợp như: HPLC-MS, HPLC-NMR, CE-MS, GC-MS mang lại hiệu quả cao trong kỹ thuật phân tích Trong nhiều năm gan day, việc kết hợp giữa hệ thống sắc ký trực tiếp với các hệ khối phơ đang ngày càng thu hút được
nhiều sự quan tâm bởi các ứng dụng trong việc xác định và khẳng định sự cĩ mặt của các hợp chất đã biết cũng như một sỐ hợp chất chưa biết cấu trúc
trong thảo dược Hơn thế, dữ liệu phân tích thu được từ hệ thống kết hợp này