Xây dựng phương pháp định lượng felodipin trong viên nén GPKD bằng HPLC

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ HUYỀN XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG FELODIPIN TRONG VIÊN NÉN GPKD BẰNG HPLC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI - 2013 Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ HUYỀN XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG FELODIPIN TRONG VIÊN NÉN GPKD BẰNG HPLC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: PGS.TS Nguyễn Thị Kiều Anh Nơi thực hiện: 1.Phòng phân tích, kiểm nghiệm tương đương sinh học – Viện công nghệ Dược phẩm Quốc gia HÀ NỘI - 2013 LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian thực đề tài, may mắn nhận yêu thương, giúp đỡ tận tình gia đình, thầy bè bạn Vì vậy, trang đầu khóa luận này, tơi xin bày tỏ lòng biết ơn tới người nhiệt tình dạy dỗ, giúp đỡ tơi thời gian qua Trước hết, tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới PGS.TS Nguyễn Thị Kiều Anh, người trực tiếp hướng dẫn, bảo kỹ cần thiết, cách tư hỗ trợ giúp tơi giải khó khăn thực khóa luận Tôi xin chân thành cảm ơn thầy cơ, anh chị Phòng phân tích, kiểm nghiệm tương đương sinh học - Viện công nghệ Dược phẩm quốc gia giúp đỡ tận tình, tạo điều kiện tốt cho tơi hồn thành khóa luận Đồng thời, xin trân trọng cảm ơn Ban giám hiệu, thầy cô giáo, cán trường Đại học Dược Hà Nội giảng dạy, bảo, dìu dắt tơi suốt năm năm học tập trường Cuối xin gửi lời cảm ơn tới bố mẹ, bạn bè, người thân yêu động viên, giúp đỡ tơi suốt q trình học tập thời gian thực đề tài Mặc dù có nhiều cố gắng nhiều hạn chế mặt lý luận thực tiễn nên khóa luận nhiều thiếu sót Tơi mong góp ý thầy giáo bạn để khóa luận hồn thiện Hà Nội, ngày 20 tháng năm 2013 Sinh viên Nguyễn Thị Huyền Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi MỤC LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Đại cương felodipin 1.1.1 Cơng thức tính chất lý hóa 1.1.2 Dược động học 1.1.3 Tác dụng dược lý 1.1.4 Chỉ định 1.1.5 Chống định 1.1.6 Thận trọng 1.1.7 Tác dụng không mong muốn (ADR) 1.1.8 Liều lượng cách dùng 1.1.9 Quá liều xử trí 1.1.10 Tương tác thuốc 1.1.11 Một số chế phẩm felodipin thị trường 1.2 Một số nghiên cứu định lượng felodipin 1.3 Tổng quan HPLC 11 1.3.1 Khái niệm thơng số đặc trưng cho q trình sắc ký 11 1.3.2 Cấu tạo máy HPLC 14 1.3.3 Ứng dụng kỹ thuật HPLC 14 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 2.1 Đối tượng phương tiện nghiên cứu 16 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 16 2.1.2 Phương tiện nghiên cứu 16 2.2 Nội dung nghiên cứu 17 2.3 Phương pháp nghiên cứu 18 2.3.1 Khảo sát điều kiện sắc ký 18 2.3.2 Thẩm định phương pháp 18 2.3.3 Ứng dụng phương pháp phân tích định tính, định lượng felodipin viên nén felodipin giải phóng có kiểm sốt 20 2.3.4 Phương pháp xử lý kết 20 PHẦN 3: THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 21 3.1 Xây dựng điều kiện phân tích Felodipin HPLC 21 3.1.1 Lựa chọn cột sắc ký 21 3.1.2 Lựa chọn bước sóng thích hợp 22 3.1.3 Khảo sát lựa chọn tốc độ dòng pha động 23 3.1.4 Lựa chọn thể tích tiêm mẫu 25 3.2 Chuẩn bị mẫu 26 3.2.1 Chuẩn bị dung dịch chuẩn 26 3.2.2 Chuẩn bị dung dịch thử: 27 3.2.3 Chuẩn bị mẫu trắng: 27 3.3 Thẩm định phương pháp HPLC định lượng Felodipin 27 3.3.1 Độ thích hợp hệ thống 27 Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi 3.3.2 Tính đặc hiệu 28 3.3.3 Độ tuyến tính 29 3.3.4 Độ xác 31 3.3.5 Độ đúng: 32 3.4 Ứng dụng định tính định lượng Felodipin chế phẩm 33 3.5 BÀN LUẬN 36 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 38 TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT ATC (Anatomical Therapeutic Chemical): Hệ thống phân loại thuốc HPLC (High Performance Liquid Chromatography): Sắc ký lỏng hiệu cao HIV (Human Immuno-deficiency Virus): Virus gây suy giảm miễn dịch người MS (Mass spectrometry): Khối phổ UV- VIS (Ultraviolet - Visible): Tử ngoại - khả kiến PA (Pure for analysis): Độ tinh khiết phân tích PVP: Polyvinyl pyrrolidone ACN : Acetonitril MetOH: Methanol RSD (Relative standard deviation): Độ lệch chuẩn tương đối r: Hệ số tương quan SD (Standard deviation): Độ lệch chuẩn SKD: Sinh khả dụng t1/2: Thời gian bán thải USP (The United States Pharmacopeia): Dược điển Mỹ v/v: Thể tích/thể tích v/v/v: Thể tích/thể tích/thể tích Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Các chế phẩm felodipin thị trường Bảng 3.1 Kết khảo sát lựa chọn cột 21 Bảng 3.2 Kết khảo sát tỷ lệ pha động 24 Bảng 3.3 Cách pha dung dịch chuẩn 27 Bảng 3.5 Kết khảo sát độ tuyến tính 30 Bảng 3.6 Kết xác định độ xác 31 Bảng 3.7 Kết đánh giá độ 33 Bảng 3.8 Kết định lượng Felodipin viên giải phóng có kiểm sốt 34 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Cơng thức cấu tạo felodipin Hình 1.3 Sơ đồ hệ thống HPLC 14 Hình 3.1 Sắc ký đồ Felodipin phân tích cột Zorbax SB 21 Hình 3.2 Sắc ký đồ Felodipin phân tích cột Eclipase XDB 22 Hình 3.3 Phổ hấp thụ tử ngoại dung dịch Felodipin chuẩn 23 Hình 3.4 Sắc ký đồ hệ pha động thứ 24 Hình 3.5 Sắc ký đồ hệ pha động thứ 24 Hình 3.6 Sắc ký đồ hệ pha động thứ 25 Hình 3.7 Sắc ký đồ Felodipin (khảo sát điều kiện sắc ký) 26 Hình 3.8 Sắc ký đồ mẫu trắng 29 Hình 3.9 Sắc ký đồ mẫu chuẩn nồng độ 20µg/ml 29 Hình 3.10 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc tuyến tính nồng độ 30 diện tích pic 30 Hình 3.11 Sắc ký đồ mẫu chuẩn 35 Hình 3.12 Sắc ký đồ mẫu định lượng 35 Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi ĐẶT VẤN ĐỀ Bệnh tim mạch bệnh phổ biến, gánh nặng sức khỏe yếu, để lại nhiều tàn phế nguyên nhân gây tử vong hàng đầu toàn giới Trong đó, tăng huyết áp (hay gọi cao huyết áp) bệnh tiêu biểu thường gặp Nếu khơng chẩn đốn điều trị gây biến chứng di chứng nặng nề tai biến mạch não, suy thận… ảnh hưởng xấu đến chất lượng sống người bệnh, trở thành gánh nặng cho gia đình cho xã hội Do vậy, thuốc điều trị bệnh tim mạch tăng huyết áp ngày chiếm tỷ trọng lớn, có vai trò quan trọng cơng tác chăm sóc sức khỏe cộng đồng Cùng với phát triển mạnh mẽ cơng nghiệp dược phẩm ngồi nước nhiều năm gần đây, dạng bào chế viên tác dụng kéo dài đời để phù hợp với đặc thù điều trị bệnh tim mạch phải sử dụng thường xuyên, lâu dài mà giảm số lần dùng thuốc, giảm tác dụng bất lợi nhiều như: viên nén giải phóng chậm, viên nén bao film giải phóng chậm, viên nén giải phóng kéo dài, viên nén giải phóng có kiểm sốt… Dược điển Anh, Mỹ có số chun luận viên tác dụng kéo dài, Dược điển Việt Nam chưa có chuyên luận riêng dạng bào chế Nhiều dược chất dùng dạng bào chế như: diltiazem, nicardipin, nifedipin, verapamil, …Trong đó, felodipin thuốc sử dụng phổ biến Việt Nam năm gần Chế phẩm viên nén felodipin mg nghiên cứu bào chế Do đó, để đánh giá kịp thời chất lượng chế phẩm nghiên cứu yêu cầu bắt buộc Để góp phần phát triển chế phẩm thuốc tiến hành thực đề tài: “Xây dựng phương pháp định lượng felodipin viên nén giải phóng kéo dài HPLC” với mục tiêu sau: 26  Tốc độ dòng: 1,2 ml/phút  Nhiệt độ phân tích: nhiệt độ phòng thí nghiệm Dung dịch đệm KH2PO4 25 mM pH 3,0: Hòa tan 1,7 g kali dihydrophosphat 400 ml nước Điều chỉnh pH đến 3,0 dung dịch acid phosphoric thêm nước vừa đủ 500 ml [1] Hình 3.7 sắc ký đồ felodipin thu điều kiện sắc ký thiết lập Hình 3.7 Sắc ký đồ Felodipin (khảo sát điều kiện sắc ký) 3.2 Chuẩn bị mẫu 3.2.1 Chuẩn bị dung dịch chuẩn - Cân xác khoảng 25,0 mg Felodipin chuẩn vào bình định mức dung tích 25,0 ml, thêm khoảng 15,0 ml pha động, lắc cho tan, sau pha lỗng pha động đến vạch, lắc dung dịch nồng độ mg/ml - Pha dãy chuẩn: Cho vào bình định mức 50 ml thể tích dung dịch felodipin nồng độ mg/ml xác bảng 3.3, pha lỗng pha động đến vạch, lắc Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi 27 Bảng 3.3 Cách pha dung dịch chuẩn STT Bình định mức (ml) 50 50 50 50 50 Lọc qua màng 0,45 µm để chạy sắc ký Thể tích dung dịch chuẩn gốc (µl) 500 600 800 1000 1200 Nồng độ dự kiến sau pha loãng (µg/ml) 10 12 16 20 24 3.2.2 Chuẩn bị dung dịch thử: Cân xác khối lượng 20 viên chế phẩm, tính khối lượng trung bìnhviên, nghiền thành bột mịn Cân xác lượng bột viên tương ứng khoảng 5,0 mg felodipin (viên có khối lượng trung bình 354,60 mg) cho vào bình định mức dung tích 50,0 ml, thêm khoảng 30 ml pha động, siêu âm 15 phút thêm pha động vừa đủ tới vạch, lắc Ly tâm với tốc độ 5000 vòng/phút phút Lấy 10,0 ml dịch sau ly tâm vào bình định mức 50,0 ml, thêm pha động tới vạch, lắc Lọc qua màng lọc 0,45 µm, dung dịch thử 3.2.3 Chuẩn bị mẫu trắng: Là mẫu tá dược tự tạo cách trộn theo nguyên tắc đồng lượng dựa vào công thức viên, không chứa dược chất cân xử lý mẫu giống mẫu thử 3.3 Thẩm định phương pháp HPLC định lượng felodipin 3.3.1 Độ thích hợp hệ thống Tiến hành: chuẩn bị mẫu felodipin chuẩn nồng độ 20 µg/ml mục 3.2.1 Sắc ký lặp lại lần dung dịch theo điều kiện chọn Kết trình bày bảng 3.4 28 Bảng 3.4 Kết khảo sát độ thích hợp hệ thống sắc ký Stt TB RSD% Nhận xét: Thời gian lưu (phút) 7,273 7,154 7,051 7,280 7,281 7,175 7,203 1,29 Diện tích pic(mAU.s) 398,6 396,2 397,9 396,6 396,8 399,0 397,5 0,29 Hệ số đối xứng 0,959 0,994 0,996 0,988 0,990 0,997 Số đĩa lý thuyết 8411 8293 8102 8664 8602 8463 8422,5 Kết bảng cho thấy RSD thời gian lưu diện tích pic Felodipin phép thử