HỘI NGHỊ CƠNG NGHỆ SINH HỌC TỒN QUỐC 2020 PHÂN TÍCH SỰ ĐA DẠNG DI TRUYỀN GIỮA CÁC GIỐNG LAN GIẢ HẠC (Dendrobium anosmum) DỰA TRÊN CHỈ THỊ PHÂN TỬ SSR Huỳnh Hữu Đức*, Nguyễn Trường Giang, Nguyễn Hoàng Cẩm Tú, Dương Hoa Xô Trung tâm Công nghệ Sinh học Thành phố Hồ Chí Minh TĨM TẮT Lan Giả hạc (Dendrobium anosmum) lồi lan có giá trị kinh tế cao, có phân bố rộng thích nghi với nhiều vùng sinh thái khác nước ta Nhằm mục tiêu đánh giá đa dạng di truyền nguồn gen từ vùng sinh thái khác phục vụ bảo tồn lai tạo giống mới, 20 mẫu giống lan Giả hạc có nguồn gốc khác thu thập đánh giá thị phân tử SSR Kết phân tích đánh giá di truyền mẫu giống lan dựa 18 SSR cho thấy tổng số alen thu 79, tổng số alen đa hình 77 với giá trị trung bình 4,28 alen/loci Kết phân tích 18 SSR cho 20 mẫu lan thu thập cho thấy có phân nhóm di truyền thành nhóm với khoảng cách di truyền 0,172 Trong đó, tính đa hình mẫu giống lan Giả hạc đạt từ 0,237 đến 0,992 với trung bình 0,699 Các kết cho thấy mẫu giống lan Giả hạc có nguồn gốc từ vùng sinh thái khác có đa dạng di truyền định, nguồn gen có giá trị cần bảo tồn sử dụng cho mục tiêu lai tạo giống tương lai Ngoài ra, thị SSR sàng lọc nghiên cứu hứa hẹn sử dụng làm thị phân tử việc đánh giá lồi lan Dendrobium anosmum nói riêng lồi lan thuộc chi Dendrobium nói chung Từ khóa: Lan Giả hạc, đa dạng di truyền, thị phân tử SSR MỞ ĐẦU Họ Lan hay họ Phong Lan (danh pháp khoa học: Orchidaceae) họ thực vật có hoa, thuộc Măng tây (Asparagales), lớp thực vật mầm Đây họ lớn thực vật, phân bổ nhiều nơi giới, tập trung chủ yếu vùng nhiệt đới (Dressler, 1993) Theo thống kê Vườn Thực vật hoàng gia Kew, họ Lan gồm 880 chi gần 22.000 loài chấp nhận, số lượng xác chưa xác định rõ, nhiều tới 25.000 lồi Số lượng loài Lan cao gấp lần số lượng lồi động vật có vú hay lần số lượng loài chim Lan chiếm khoảng - 11% số lượng lồi thực vật có hoa (Chase, 2005) Bên cạnh đó, khoảng 800 lồi Lan bổ sung thêm năm Trong họ Lan, chi lớn Bulbophyllum (khoảng 2.000 loài), Epidendrum (khoảng 1.500 loài), Dendrobium (khoảng 1.400 loài) Pleurothallis (khoảng 1.000 loài) Orchidaceae phân bố rộng khắp giới, chúng có mặt môi trường sống ngoại trừ sa mạc sơng băng Các lồi phần lớn tìm thấy khu vực nhiệt đới, chủ yêu châu Á, Nam Mỹ Trung Mỹ Ở vĩ độ cao vùng Bắc cực, miền nam Patagonia …cũng tìm thấy chúng Orchidaceae phân bố rộng khắp như: châu Đại Dương 50-70 chi, châu Âu ôn đới châu Á 40 - 60 chi, Bắc Mỹ 20 - 25 chi (De et al., 2011) Hiện nay, thị phân tử sử dụng rộng rãi để đánh dấu vị trí vùng gen số chương trình chọn giống lai tạo giống trồng Các thị phân tử liên kết chặt chẽ với nhiều tính trạng nơng học tính trạng kháng bệnh loại trồng (Gupta, Rustgi, 2000; Phillips, Vasil, 2013) Một số thị phân tử như: (i) đa hình chiều dài giới hạn (RFLP), (ii) đa hình đoạn DNA khuếch đại ngẫu nhiên (RAPD), đa hình chiều dài đoạn khuyếch đại (AFLP) microsatellite đoạn trình tự lặp lại đơn giản (SSR), (iii) đa hình nucleotide đơn (SNP) Những thị phân tử tạo với số lượng lớn chứng minh hữu ích cho nhiều mục đích khác việc cải thiện giống trồng Đối với ứng dụng lai tạo giống, thị phân tử SSR chứng minh khuyến khích sử dụng chọn giống trồng khả liên kết tính trạng cao (Gupta, Rustgi, 2000) Chỉ thị phân tử SSR cho thấy ưu tính đa hình cao, tính ổn định, độ tinh cậy, khả tự động hoá so sánh với thị phân tử khác (Shariflou et al., 2001) Việc xác định nguồn gốc giống bố mẹ đánh giá giống cách đầy đủ mặt hình thái di truyền yêu cầu bắt buộc quan trọng công tác lai tạo giống sản xuất giống trồng Trong đó, việc phân loại truyền thống dựa đặc tính hình thái sử dụng mang lại hiệu chưa cao, chưa đảm bảo tính xác tốn nhiều thời gian cơng sức Các marker phân tử DNA barcode, SSR sử dụng công tác đánh giá nguồn gen, xác định mối quan hệ di truyền, nguồn gốc bố mẹ đánh giá giống mang lại kết khả quan đầy triển vọng rút ngắn thời gian lai tạo đồng thời đánh giá xác định cách xác nguồn gốc giống lai tạo bảo hộ giống Ngoài ra, việc đảm bảo lưu trữ bảo tồn nguồn gen giống Lan bố mẹ chọn lọc song song với phân tích hình thái di truyền yêu cầu bắt buộc công tác lai tạo nghiên cứu phát triển giống Lan giống Lan quý, có giá trị kinh tế HỘI NGHỊ CƠNG NGHỆ SINH HỌC TOÀN QUỐC 2020 NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP Vật liệu nghiên cứu 20 mẫu giống lan Giả hạc (Dendrobium anosmum) thu thập từ vùng sinh thái khác như: Đắk Lắk, Gia lai, Kom Tum, Lâm Đồng, Khánh Hịa, Hịa Bình, Phú Thọ (Bảng 1) sử dụng cho mục tiêu phân tích đa dạng di truyền Bảng Danh sách 20 mẫu giống lan Giả hạc thu thập Ký hiệu Tên thông thường Nguồn gốc địa lý Tên khoa học D01 Giả hạc1 Dendrobium anosmum Kom Tum D02 Giả hạc Dendrobium anosmum Lâm Đồng D03 Giả hạc Dendrobium anosmum Đắk Lắk D04 Giả hạc Dendrobium anosmum Hịa Bình D05 Giả hạc Dendrobium anosmum Khánh Hòa D06 Giả hạc Dendrobium anosmum Phú Thọ D07 Giả hạc Dendrobium anosmum Phú Thọ D08 Giả hạc Dendrobium anosmum Lâm Đồng D09 Giả hạc Dendrobium anosmum Hịa Bình D10 Giả hạc 10 Dendrobium anosmum Lâm Đồng D11 Giả hạc 11 Dendrobium anosmum Phú Thọ D12 Giả hạc 12 Dendrobium anosmum Gia lai D13 Giả hạc 13 Dendrobium anosmum Hải Phòng D14 Giả hạc 14 Dendrobium anosmum Đắk Lắk D15 Giả hạc 15 Dendrobium anosmum Kom Tum D16 Giả hạc 16 Dendrobium anosmum Kom Tum D17 Giả hạc 17 Dendrobium anosmum Kom Tum D18 Giả hạc 18 Dendrobium anosmum Lâm Đồng D19 Giả hạc 19 Dendrobium anosmum Kom Tum D20 Giả hạc 20 Dendrobium anosmum Đắk Lắk Ly trích DNA tổng số dựa quy trình CTAB (Doyle 1987) cải tiến theo nhóm nghiên cứu Kiểm tra chất lượng DNA chạy điện di gel Agarose 0,8% nồng độ DNA máy nanodrop PCR điện di Trước thực đánh giá di truyền 20 mẫu giống lan Giả hạc, tiến hành sàng lọc dựa 40 SSR chọn lọc từ nghiên cứu trước loài thuộc chi lan Dendrobium (Boonsrangsom et al 2012; Cai et al 2012; Liu et al 2014) để xây dựng thị SSR Kết sàng lọc PCR điện di với cặp mồi tương ứng cho thấy 27/40 SSR (67,5%) có sản phẩm khuếch đại, với số vạch (band) từ – vạch/SSR locus Trong đó, 18/27 SSR có tính đa hình, với tổng số alen đa hình 81 đạt trung bình alen/SSR locus Trên sở kết trên, 18 thị phân tử SSR (Bảng 2) tiếp tục sử dụng để phân tích đánh giá đa dạng di truyền cho 20 mẫu giống lan Giả hạc (Bảng 1) Thực phản ứng PCR: Thành phần phản ứng cho 20 µl chứa 0,2 mM dNTP mix, enzyme DreamTaq polymerase U, dream taq buffer 10 X, 0,4 µM primer xi, 0,4 µM primer ngược, nước cất lần khử trùng, 50 ng DNA tổng số Phản ứng PCR thực máy PCR-Thermal Cycler: Chu kỳ tiền biến tính 95°C phút; 30 chu kỳ: 95°C phút, 95°C 15 giây, Ta (nhiệt độ bắt cặp theo cặp mồi) 30 giây, 72°C 40 giây; chu kỳ hoàn thành 72°C 10 phút Sản phẩm PCR phát điện di gel agarose 2%, nhuộm với ethidium bromide chụp hình máy geldoc Phân tích đánh giá đa dạng di truyền số mẫu giống lan Giả hạc Xác định diện sản phẩm PCR, có diện sản phẩm PCR mã hóa 1, khơng có diện sản phẩm PCR mã hóa Tổng số allen thị tính tổng số băng DNA có kích thước khác mà phản ứng PCR khuếch đại Bảng Danh sách 18 cặp mồi sử dụng nghiên cứu HỘI NGHỊ CƠNG NGHỆ SINH HỌC TỒN QUỐC 2020 STT Locus Den-SSR1 F CGATCTTTCACTCTCTCCATCAC R ACAAAAGGGGAGAGAGCATGAG F CTCTCCATCTTGCCATCCTC R AGCTTGTGGGGAAGGCTGG F AGAGGGAGAGTGCAAGAG R CGCTATTTCCATCCCTCC Den-SSR5 Den-SSR6 Den-SSR7 Den-SSR8 Den-SSR9 10 Den-SSR10 11 Den-SSR11 12 Den-SSR12 Den-SSR13 14 Den-SSR14 15 Den-SSR15 16 Den-SSR16 17 Den-SSR17 Den-SSR18 Ta 57 57 Den-SSR3 Den-SSR4 18 Trình tự Den-SSR2 13 Primer xi/primer ngược 58 F ACTTGGTGGTCGACGAGGTC R GAGCAAGGGGAGGGATAGAG F CGATAACTATCTATATCCCCCTA R AGAGAGCAACAGGAGGAATG F TAGGATGATGCACGGGAAA R GGGGGTTTTTATCATTGAGGA F GGAACGGAGAAGATTAAGACAACC R TGCCCTCACATGCCGTATT F GATTTATGTAGCCGACCCC R CCTGCTCCACTCACCTGTT F AGCAACGATGGAGCAAGA R GCTGACCACGCTAACCTC F GCATTCTTTTGCCTAATTCAGGAA R TCCACCCTTTCATCCAAATACTTC F ACAGCGTTAACATAAACCATAAGC R CTGCCCGCAGATTCAGC F AAATGGGGAAAAAGGAAAGGAC R ATCCCTCCCCTCGCTCTCTC F CATCCCAGCCCTTTTTCAC R GAGAGCAAGAGGAGGATGGAA F GGAAGGGCCTAAGTGGATG R GCGTACCATGCTTAACATTCA F AGGGGACAAGCAATTGAGTTGAAT R TCGGCTAGTAGCAAGGCATCTTC F CGCTCAAATTAACACAAAGAT R CGCCAACTATAAGAAACTTAGG F CAGCGACAGCCCAAATCCT R CTTCAGCCTCGTCATCCACC F ACAAAAGAGGGATTGAAACT R CTTCTCAACCTTGTCACCTA 56 56 50 51 54 52 50 50 50 54 55 56 55 60 50 Hệ số đa dạng di truyền (Polymorphic information content –PIC) SSR tính theo cơng thức PICi= 1-∑pij2 Trong đó, pij tần số xuất allen thứ i locus j Phạm vi giá trị PIC từ (khơng đa hình) đến (đa hình hồn tồn) Xây dựng phát sinh lồi: Trên sở ma trận đồng hình di truyền, phân tích hệ số tương đồng Jaccard, xây dựng phân nhóm di truyền theo kiểu phân UPGMA dựa phần mềm phần mềm NTSYS-pc 2.1 để đánh giá mức độ đa dạng di truyền mẫu giống lan Giả hạc KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Ly trích DNA tổng số HỘI NGHỊ CƠNG NGHỆ SINH HỌC TỒN QUỐC 2020 DNA tổng số sau tách chiết định lượng kiểm tra độ tinh máy Nano Drop cho kết tỉ lệ OD260/OD280 20 mẫu nằm khoảng 1,8 – 1,95 cho thấy DNA tổng số thu tinh Nồng độ DNA tổng số mẫu nằm khoảng 245,5 - 291 ng/µl đảm bảo cho phép sử dụng cho bước PCR điện di Kết khuếch đại thị phân tử SSR 20 mẫu giống lan Giả hạc sau: Hình Kết điện di sản phẩm PCR khuếch đại thị SSR với cặp mồi Den-SSR11-F Den-SSR11-R 20 mẫu lan Kết khuếch đại 18 thị phân tử SSR 20 mẫu giống lan Giả hạc cho thấy tất locus khuếch đại thành công, tỷ lệ khuếch đại đạt 100% Các band sản phẩm PCR xuất rõ có kích thước sản phẩm PCR có sai khác so với kích thước dự kiến Yue cộng xác định 42 giống Dendrobium lai dựa thị phân tử SSR với 15 cặp mồi kết cho thấy tỷ lệ khuếch đại đạt 93,3% (14/15 cặp mồi cho sản phẩm PCR) (Yue et al., 2006) Bảng Kết phân tích đa hình, giá trị PIC 20 mẫu lan Giả hạc dựa 18 thị phân tử SSR STT Locus Kích thước sản phẩm PCR (bp) Số alen Allen đa hình Tỷ lệ allen đa hình Tần số alen đa hình PIC Den-SSR1 250-1000 3 100 0,64 0,365 Den-SSR2 1000-2000 4 100 0,05 0,990 Den-SSR3 150-1000 85,7 0,37 0,754 Den-SSR4 170-1500 9 100 0,83 0,237 Den-SSR5 100-2000 7 100 0,49 0,651 Den-SSR6 150-1500 7 100 0,11 0,979 Den-SSR7 150-2000 2 100 0,40 0,680 Den-SSR8 250-2000 7 100 0,35 0,673 Den-SSR9 400-1500 3 100 0,23 0,895 10 Den-SSR10 150-750 2 100 0,10 0,980 11 Den-SSR11 100-250 3 100 0,33 0,698 12 Den-SSR12 150-750 3 100 0,07 0,992 13 Den-SSR13 100-750 6 100 0,73 0,313 14 Den-SSR14 120-1100 5 100 0,50 0,500 15 Den-SSR15 150-750 50,0 0,24 0,913 16 Den-SSR16 100-1200 5 100 0,08 0,990 17 Den-SSR17 150-200 2 100 0,60 0,480 18 Den-SSR18 280-300 2 100 0,50 0,500 0,368 0,699 Tổng số 79 77 Trung bình 4,39 4,28 Kết phân tích di truyền 20 mẫu giống lan dựa 18 thị phân tử SSR cho thấy số sản phẩm khuếch đại từ - sản phẩm/cặp mồi Tổng số allen phát 79 từ 18 locus với giá trị trung bình 4,39 allen/locus, tổng số alen đa hình 77 với giá trị trung bình 4,28 allen/locus Loci Den-SSR4 cho số alen nhiều kích thước từ 170 - 1.500 bp; loci Den-SSR3, Den-SSR5, Den-SSR6, Den-SSR7 khuếch đại với cặp mồi tương ứng cho số alen Theo nghiên cứu Boonsrangsom cộng cho thấy số alen loci - alen, trung bình 5,25 alen/loci đánh giá mối quan hệ di truyền 49 mẫu lan Dendrobium lai dựa thị phân tử SSR với cặp mồi (Boonsrangsom et al., 2012) Cai cộng đánh giá đa dạng di truyền 96 mẫu lan Dendrobium dựa 12 thị phân tử SSR cho thấy có 98 alen HỘI NGHỊ CƠNG NGHỆ SINH HỌC TỒN QUỐC 2020 xác định với loci có từ 3-22 alen với số alen trung bình loci 8,2 (Cai et al., 2012) Chỉ số PIC đánh giá mức độ đa hình thị, với 18 thị phân tử SSR cho thấy giá trị trung bình PIC 0,699 biến thiên từ 0,237 đến 0,992 Chỉ số PIC thấp locus Den-SSR4 cao locus Den-SSR12 Chỉ thị phân tử SSR sử dụng để phân biệt quần thể biến đổi Dendrobium xác định giống lan đánh giá mối quan hệ di truyền (Liu et al., 2014) I II III IV V VI VI I 0,17 Hình Cây phân nhóm di truyền 20 mẫu giống lan Giả hạc dựa 18 thị phân tử SSR Cây phân nhóm di truyền 20 mẫu giống lan dựa 18 thị phân tử SSR cho thấy với hệ số di truyền 0,38 điều cho thấy mẫu giống lan Giả hạc có đa dạng mặt di truyền Với mức độ tương đồng di truyền mức 0,172 chia mẫu giống làm 07 nhóm Nhóm I bao gồm mẫu giống lan Giả hạc, hai mẫu thu thập tỉnh Đắk Lắk Nhóm gồm mẫu mẫu thu thập Di Linh tỉnh Lâm Đồng, mẫu thu thập tỉnh Phú Thọ mẫu thu thập tỉnh Hịa Bình Nhóm III gồm mẫu mẫu thu thập tỉnh Kom Tum mẫu Di Linh, mẫu Đắk Lắk, mẫu tỉnh Phú Thọ mẫu thu thập tỉnh Hịa Bình Nhóm IV gồm mẫu thu thập tỉnh Đắk Lắk Nhóm V gồm mẫu mẫu từ tỉnh Gia Lai, mẫu từ Hải Phịng Nhóm VI gồm mẫu từ Di Linh-Lâm Đồng Nhóm VII gồm mẫu thu từ Nha Trang Kết cho thấy mẫu giống lan địa điểm thu thập có mối quan hệ di truyền gần Kết đánh giá đa dạng di truyền dựa thị phân tử SSR đề tài sở liệu đáng tin cậy phục vụ cho công tác đánh giá đa dạng di truyền, bảo tồn lai tạo giống lan Giả hạc KẾT LUẬN Kết phân tích đa dạng di truyền 20 mẫu giống lan Giả hạc dựa 18 thị phân tử cho thấy có khác định giống thu thập từ vùng sinh thái khác loài Việt Nam Trong đó, 77/79 alen đa hình cho 18 locus, với giá trị trung bình 4,389 allen/locus giá trị alen đa hình 4,278 allen/locus Mức độ đa dạng di truyền mẫu giống lan Giả hạc thể hệ số đa dạng di truyền PIC cao đạt 0,699 Ngoài ra, nghiên cứu sàng lọc phát 12/18 thị phân tử SSR có hệ số đa dạng di truyên cao (hệ số PIC>0,65) ứng dụng nghiên cứu việc phân tích, đánh giá giống xác định nguồn gốc giống Các kết cho thấy mẫu giống lan Giả hạc có nguồn gốc từ vùng sinh thái khác có đa dạng di truyền định, nguồn gen quý cần bảo tồn đồng thời sử dụng việc lai tạo giống lan tương lai Lời cảm ơn: Nhóm tác giả xin cảm ơn Quỹ Phát triển Khoa học Công nghệ Thành phố Hồ Chí Minh cung cấp kinh phí theo hợp đồng số 12/2019/HĐ-QPTKHCN để thực nghiên cứu Các tác giả xin chân thành cảm ơn Trung tâm Cơng nghệ sinh học Thành phố Hồ Chí Minh hỗ trợ trang thiết bị sở vật chất để thực nghiên cứu TÀI LIỆU THAM KHẢO HỘI NGHỊ CƠNG NGHỆ SINH HỌC TỒN QUỐC 2020 Boonsrangsom T, Pongtongkam P, Masuthon S, Peyachoknagul S (2012) Development of microsatellite markers for Dendrobium orchids Genom Genet 1: 47-56 Cai X, Feng Z, Hou B, Xing W, Ding X (2012) Development of microsatellite markers for genetic diversity analysis of Dendrobium loddigesii Rolfe, an endangered orchid in China Biochem Sys Ecol 43: 42-47 Chase MW (2005) Classification of Orchidaceae in the age of DNA data Curtis's Bot Mag 22: 2-7 De Hert K, Jacquemyn H, Van Glabeke S, Roldán-Ruiz I, Vandepitte K, Leus L, Honnay O (2011) Patterns of hybridization between diploid and derived allotetraploid species of Dactylorhiza (Orchidaceae) co-occurring in Belgium Amer J Bot 98: 946-955 Doyle JJ (1987) A rapid DNA isolation procedure for small quantities of fresh leaf tissue Phytochem Bull 19: 1115 Dressler RL (1993) Phylogeny and classification of the orchid family Cambridge University Press Gupta PK, Varshney R (2000) The development and use of microsatellite markers for genetic analysis and plant breeding with emphasis on bread wheat Euphytica 113: 163-185 Liu Y, Chen R, Lin S, Chen Y, Chin S, Chen F, Lee C (2014) Analysis of sequence diversity through internal transcribed spacers and simple sequence repeats to identify Dendrobium species Genet Mol Res 13: 2709-2717 Phillips RL, Vasil IK (2013) DNA-based markers in plants, Vol Springer Science & Business Media Shariflou M, Hassani M, Sharp P (2001) A PCR‐based DNA marker for detection of mutant and normal alleles of the Wx‐D1 gene of wheat Plant Breed 120: 121-124 Yue GH, LAM‐CHAN L, Hong Y (2006) Development of simple sequence repeat (SSR) markers and their use in identification of Dendrobium varieties Mol Ecol Res 6: 832-834 ANALYSIS OF GENETIC DIVERSITY WITHIN Dendrobium anosmum SPECIES BASED ON SSR MARKERS Huynh Huu Duc*, Nguyen Truong Giang, Nguyen Hoang Cam Tu, Duong Hoa Xo Biotechnology Center of Ho Chi Minh City SUMMARY Dendrobium anosmum is a valuable orchid species, widely distributed and adapted to various ecogeological regions in Vietnam To evaluate genetic resource diversity of this orchid species for conservation and breeding purposes, 20 accessions were collected, and then analysed based on SSR markers The results showed that a total of 79 alleles were detected from 18 SSRs, among them 77 alleles were polymorphic, with an average of 4.28 alleles per locus From the analysis of 18 SSRs on 20 orchid accessions, main groups were clustered, with the genetic distance of 0.172 The polymorphic values among the collected samples obtained from 0.237 to 0.992 with an average of 0.699 The results indicated that the Dendrobium anosmum collections from different ecological regions showed high genetic diversity, which are valuable germplasms need to conserve and can be used for further breeding purposes Moreover, the screened SSRs of this study promisely could be use as effective markers for assessing Dendrobium anosmum species in particular and other species of Dendrobium genus in general Keywords: Dendrobium anosmum, genetic diversity, SSR markers Author for correspondence: Tel: +84-967.137.046; Email: huuduchuynh82@gmail.com ... giống lan Giả hạc dựa 18 thị phân tử SSR Cây phân nhóm di truyền 20 mẫu giống lan dựa 18 thị phân tử SSR cho thấy với hệ số di truyền 0,38 điều cho thấy mẫu giống lan Giả hạc có đa dạng mặt di truyền. .. di Kết khuếch đại thị phân tử SSR 20 mẫu giống lan Giả hạc sau: Hình Kết điện di sản phẩm PCR khuếch đại thị SSR với cặp mồi Den -SSR1 1-F Den -SSR1 1-R 20 mẫu lan Kết khuếch đại 18 thị phân tử SSR. .. đa dạng di truyền, bảo tồn lai tạo giống lan Giả hạc KẾT LUẬN Kết phân tích đa dạng di truyền 20 mẫu giống lan Giả hạc dựa 18 thị phân tử cho thấy có khác định giống thu thập từ vùng sinh thái