2.1. Nhuộm mực tàu
Thường dùng để khảo sát vi nấm có nang, nhất là vi nấm Cryptococcus neoformans, mực tàu không thấm vào nang tạo một khoảng trống, trắng chung quanh tế bào vi nấm.
a) Quy trình kỹ thuật
Trên tấm lam kính sạch, khô, nhỏ 1 giọt mực tàu. Nhỏ 1 giọt bệnh phẩm, hay lứa cấy lên giọt mực tàu. Đốt kim cấy để nguội, trộn mực tàu và bệnh phẩm. Đậy lá kính lên giọt mực tàu đã hòa với bệnh phẩm. Khảo sát tiêu bản dưới kính hiển vi.
Nếu nền mực tàu quá đậm có thể làm loãng bớt bằng 1 giọt nước cất.
b) Kết quả
Nếu trong bệnh phẩm có Cryptococcus neoformans: tế bào nấm tròn hay bầu dục, bên ngoài được bao bởi 1 nang lớn, nang không thấm màu, do đó sáng lên trên nền đen của mực tàu.
2.2. Nhuộm Gram
Thường dùng để khảo sát các bệnh phẩm dạng lỏng, ướt như: huyết trắng, mủ, đàm, cặn lắng nước tiểu, phết họng,…
b) Kết quả
Tất cả vi nấm bắt màu Gram dương.
Tuy nhiên có một số vi nấm không giữ màu tốt, do đó cần dùng phương pháp nhuộm Gram biến đổi.
2.3. Nhuộm Giemsa
Chủ yếu nhuộm bệnh phẩm máu ngoại biên, tủy xương để vi nấm trong tế bào như
Histoplasma capsulatum, kỹ thuật nhuộm giống như nhuộm phết máu bình thường.
2.4. Nhuộm kháng acid
Nhuộm kháng acid khi muốn tìm Norcardia.
a) Quy trình kỹ thuật
Phết bệnh phẩm lên lam kính, cố định bằng cách hơ nóng. Phủ Carbon fuchsin, để trong 3 phút.
Đổ bỏ Carbon fuchsin.
Nhỏ Acid sulfuric lên tiêu bản cho đến khi không còn màu của Carbon fuchsin. Phủ xanh Methylen, để trong 1 phút.
Rửa và hong khô.
Khảo sát với vật kính dầu.
b) Kết quả
Nocardia sp bắt màu đỏ của Carbon fuchsin.
2.5. Nhuộm PAS (Periodic acid Schiff)
Phương pháp này thường được sử dụng cho các mẫu mô bệnh phẩm tìm vi nấm dạng sợi tơ và hạt men.
b) Kết quả:
Vi nấm bắt màu đỏ tím.
Hiện nay, người ta dùng chất huỳnh quang để phát hiện nấm như thuốc nhuộm Calcifluor trắng phát hiện nấm nhanh, kể cả Pneumocystis carinii, xanh Toluidine nhuộm đàm để tìm P. carinii.
Bảng tóm tắt các phương pháp nhuộm tìm vi nấm trong bệnh phẩm (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Phương pháp nhuộm
Chẩn đoán Thời gian Ưu điểm Nhược điểm
Xanh Alcian Phát hiện Cryptococcus neoformans
trong DNT.
2 phút Tìm thấy trong DNT, có nghĩa là bị viêm màng não.
Ít được dùng, độ nhạy không cao.
Acid nhanh Phát hiện Mycobacteria và
Nocardia sp.
12 phút Phát hiện Nocardia
và Blastomyces dermatitidis.
Khó nhận dạng nấm trong mẫu mô.
Calcofluor Phát hiện nấm, P. carinii. 1 phút Phát hiện nhanh nhờ phát huỳnh quang.
Đòi hỏi kính hiển vi huỳnh quang. Khó nhận dạng nấm trong dịch âm đạo.
Giemsa Nhuộm tủy xương và phết máu
ngoại biên.
15 phút Phát hiện
Histoplasma capsulatum.
Thường chỉ phát hiện được
Histoplasma capsulatum.
Giemsa biến đổi
Nhuộm đàm và nước rửa phế quản.
13 phút Phát hiện thể hoạt động của Pneumocystis carinii.
Không nhuộm được bào nang
P. carinii nhưng nhuộm được các nấm khác.
Gram Phát hiện vi trùng. 3 phút Thường dùng để phát hiện vi trùng và vi nấm.
Tốt đối với một số nấm, nhưng một số nấm khác không ăn màu hoặc
ăn màu nhạt như C. neoformans, Nocardia sp. Thường có vật giả giống nấm men.
Mực tàu Phát hiện Cryptococcus neoformans
trong DNT.
1 phút Tìm thấy trong DNT, có nghĩa là bị viêm màng não. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Độ nhạy không cao.
KOH Làm trong nấm. 5 phút hoặc hơn
Phát hiện nhanh nấm. Người làm xét nghiệm phải có kinh nghiệm để nhận dạng nấm.
Xanh Methylen Phát hiện nấm trong da. 2 phút Thường thêm KOH để làm trong nấm, màu xanh giúp phát hiện nấm dễ hơn.
Mô nền bị nhuộm làm cho khó nhận dạng nấm.
Methanamin bạc
Phát hiện nấm trong mẫu mô .
1 giờ Tốt để phát hiện nấm. Cần hóa chất đặc biệt thường không có sẵn trong phòng xét nghiệm
ký sinh trùng.
Papanicolaou Phát hiện tế bào ác tính trong dịch tiết.
30 phút Có thể phát hiện được nấm. Cần hóa chất đặc biệt, người đọc tiêu bản phải có kinh nghiệm.
PAS Phát hiện nấm nói chung. 20 - 25 phút
Nhuộm nấm rất tốt, thấy rõ sợi tơ nấm và hạt men.
Nocardia không ăn màu.
B. dermatitidis biến hình, có vật giả nhìn giống nấm men.
Xanh Toluidin Nhuộm đàm và nước rửa phế quản. Phát hiện nấm, P. carinii
25 phút Nhuộm bào nang P. carinii. Không nhuộm các nấm khác.
Kháng thể đơn dòng gắn huỳnh quang
Nhuộm đàm và nước rửa phế quản. Phát hiện nấm, P. carinii.
45 phút Phát hiện bào nang P. carinii. Đặc hiệu cho P. carinii.
Wright Nhuộm tủy xương và phết máu
ngoại biên.
7 phút Phát hiện Histoplasma capsulatum.
Thường chỉ phát hiện được
Histoplasma capsulatum.
CÂU HỎI LƯỢNG GIÁ