Chương 2 NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 đối tượng nghiên cứu
2.5.1.Vật liệu nghiên cứu
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 25
Hóa chất: KH2PO4, K2HPO4, MgSO4, FeCl3, MnSO4, CaCl2, NaCl, NaNO3, CaCO3, FeSO4, KI, I2, Na2HPO4, KNO3, KHPO4, H2SO4, tinh bột tan, CMC, malt, pepton, cao nấm men, rose bengal, gelatin, glucoza, cao thịt, nước cất, thạch, cồn.
Dụng cụ và thiết bị thắ nghiệm
- Bình tam giác, ống nghiệm, ựĩa petri, que cấy, ựèn cồn, ống ựong, nhiệt kế., khay ựựng, bông (thấm nước và không thấm nước).
- Nồi hấp vô trùng, tủ ựịnh ôn, tủ sấy, cân kỹ thuật, máy lắc, tủ lạnh, máy cất nước, tủ cấy vô trùng, buồng cấy vô trùng.
Các công thức môi trường:
+ Môi trường Sabouraud (g/l): Pepton Ờ 10; Glucoza Ờ 40; Nước cất 1 lắt. + Môi trường Czapek Dox (g/l): Saccaroza Ờ 30g; NaNO3 Ờ 30; K2HPO4 Ờ 1; MgSO4 Ờ 0,5; KCL Ờ 0,5; FeSO4 Ờ 0,01; Thạch Ờ 20; Nước cất Ờ 1 lắt.
+ Môi trường cho vi sinh vật phân giải xenluloza ưa nhiệt (g/l): K2HPO4 Ờ 0,5; NH4H2PO4 Ờ 1,5; MgSO4 Ờ 0,4; K2HPO4 Ờ 0,5; MnSO4 Ờ vết; NaCl Ờ 0,1; CaCO3 Ờ 1; FeSO4 Ờ vết; Pepton Ờ 5; Nước cất Ờ 1 lắt.
+ Môi trường thạch Ờ glucoza (g/l): Pepton Ờ 10; NaCl Ờ 5; Cao thịt Ờ 5; Glucoza Ờ 1; Thạch Ờ 15; nước cất Ờ 1 lắt.
+ Môi trường MPA (g/l): Cao thịt Ờ 3; Pepton Ờ 10; NaCl Ờ 0,5; Thạch Ờ 20; Nước cất Ờ 1 lắt.
+ Môi trường LB (Lauria Betani) (g/l): Pepton Ờ 10; Glucoza Ờ 10; Cao nấm men Ờ 5; NaCl Ờ 10; Nước cất 1 lắt.
+ Môi trường Gost (g/l): Na2HPO4 Ờ 0,7; KH2PO4 Ờ 0,3; KNO3 Ờ 3; MgSO4 Ờ 0,4; Nước cất Ờ 1 lắt.
+ Môi trường A Ờ 4 (g/l): Glucoza Ờ 10; Bột ựậu tương Ờ 10; NaCl Ờ 5; CaCO3 Ờ 1; Nước Ờ 1 lắt.
+ Môi trường A Ờ 4H (g/l): Glucoza Ờ 15; Bột ựậu tương Ờ 15; NaCl Ờ 5; CaCO3 Ờ 1; Nước Ờ 1 lắt.
+ Môi trường A Ờ 12 (g/l): Tinh bột tan Ờ 10; Rỉ ựường Ờ 10; Bột ựậu tương Ờ 10; KH2PO4 Ờ 2; NaCl Ờ 5; CaCO3 Ờ 1; Nước Ờ 1 lắt.
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 26
+ Môi trường Gauze I (g/l): Tinh bột tan Ờ 20; KH2PO4 Ờ 0,5: MgSO4.7H2O Ờ 0,5; (NH4)2SO4 Ờ 2; KNO3 Ờ 0,5; FeSO4 Ờ 0,01; Thạch - 18g; Nước cất Ờ 1 lắt.
+ Môi trường Gauze II (g/l): Nước chiết thịt Ờ 30ml; Pepton Ờ 5; NaCl Ờ 5; Glucoza Ờ 10; Thạch Ờ 18; Nước cất Ờ 1 lắt.
+ Môi trường Rose bengal (g/l): Glucozo Ờ 10; Pepton Ờ 5; K2HPO4 Ờ 1; Rose bengal (5% w/v) Ờ 0,5x10-3 lắt; Dichloran (0,2% w/v trong ethanol) Ờ 10-3 lắt; Chloramphenicol* - 0,1 (* Chloramphenicol ựể nguội ựến 500C mới bổ sung vào); Agar Ờ 15; Nước cất Ờ 1 lắt.
Môi trường ựánh giá hoạt tắnh enzym:
+ Môi trường xác ựịnh hoạt tắnh amilaza: Tinh bột tan Ờ 0,2g; Thạch Ờ 1,5g; Nước Ờ 100ml.
+ Môi trường thử hoạt tắnh enzym xenlulaza: CMC Ờ 0,3g; Thạch Ờ 1,5g; Nước Ờ 100ml.
+ Môi trường xác ựịnh hoạt tắnh xenlulaza (g/l): NH4NO3 Ờ 1; K2HPO4 Ờ 0,5; KH2PO4 - 0,5; MgSO4. 7H2O Ờ 0,5; NaCl Ờ 1; CaCl2 Ờ 0,1; FeCl2 Ờ 0,02; Cao men Ờ 0,05; Bột giấy Ờ 2.
+ Môi trường thử hoạt tắnh enzym proteaza: Gelatin Ờ 0,2g; Thạch Ờ 1,5g; Nước Ờ 100ml.
+ Thuốc thử lugol (g/l): I2 Ờ 1g; KI Ờ 2g; Nước cất Ờ 300ml.
Môi trường sản xuất chế phẩm vi sinh
+ Môi trường nấm tổng số (Martin) (g/l): Glucoza Ờ 10; Peptone Ờ 5; KH2PO4 Ờ 1; MgSO4 Ờ 0,5; Thạch Ờ 20; H2O Ờ 1 lắt.
+ Môi trường PDA (Potato Doxtrose Agar) (g/l): Khoai tây miếng Ờ 200; Thạch Ờ 20; Gluco Ờ 20; Nước (pH= 7 Ờ 7,4) Ờ 1 lắt.
+ Môi trường Xạ khuẩn tổng số (XK) (g/l): Tinh bột tan Ờ 20; K2HPO4 Ờ 0,5; KNO3 Ờ 1; MgSO4 Ờ 0,5; NaCl Ờ 0,5; FeSO4 Ờ 0,01; Thạch Ờ 30; Nước Ờ 1 lắt.
+ Môi trường Malt Ờ Peptone - Agar (MPA) (g/l): Cao thịt Ờ 3; Pepton Ờ10; NaCl Ờ 0,5; Thạch Ờ 20, Nước Ờ 1 lắt.
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 27 (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
+ Dung dịch muối tiêu chuẩn (g/l): K2HPO4 Ờ 5; MgSO4 Ờ 2,5; NaCl Ờ 2,5; Fe2(SO4)3 Ờ 0,05; MnSO4 Ờ 0,05; Nước Ờ 1 lắt.
+ Môi trường dịch thể (g/l): Rỉ ựường Ờ 14; Peptone Ờ 1; Dung dịch muối tiêu chuẩn Ờ 10.
+ Môi trường chất mang chế phẩm (tỷ lệ): 21 Cám gạo : 3 Cám ngô : 3 Bột ựậu tương : 1 Rỉ ựường.