Chương 2 NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 đối tượng nghiên cứu
2.5.5. Sản xuất chế phẩm vi sinh vật
2.5.5.1. Nghiên cứu tắnh ựối kháng giữa các chủng vi sinh vật.
Nghiên cứu tắnh ựối kháng giữa các chủng vi sinh vật dùng ựể sản xuất chế phẩm bằng phương pháp cấy vạch. Các chủng vi sinh vật ựược nuôi trên cùng một ựĩa thạch, nuôi cấy trong khoảng từ 24h ựến 48h. Tại những chỗ giao nhau nếu chúng phát triển bình thường thì có nghĩa là chúng không ựối kháng nhau. Còn nếu chúng không phát triển có nghĩa là chúng ức chế nhau.
Hình 2.1. Mô hình cấy vạch nghiên cứu tắnh ựối kháng
2.5.5.2. Sản xuất chế phẩm vi sinh vật
Sử dụng chủng vi sinh vật ựã tuyển chọn ựược ựể sản xuất chế phẩm vi sinh theo quy trình của bộ môn Vi Sinh Vật Ờ Khoa môi trường - Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội.
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 31
- Chế phẩm vi sinh vật dạng dịch: Giống vi khuẩn tuyển chọn ựược cấy truyền vào 100ml môi trường dịch thể, nuôi trên máy lắc với tốc ựộ 125 vòng/phút trong 1 ngày. Tiếp ựến ựem giống cấp 1 nhân tiếp vào 1000ml môi trường dịch thể trên máy lắc 125 vòng/phút trong 2 ngày. Tiếp theo nhân sinh khối trong nồi lên men trong 3 ngày. Sau ựó kiểm tra số lượng vi sinh vật chuyên tắnh và ựộ tạp khuẩn theo TCVN 6168:2002.
- Chế phẩm vi sinh vật dạng mang: Các chủng nấm và xạ khuẩn ựược nhân riêng rẽ trên môi trường thạch ựĩa rồi ựem nuôi ở tủ ựịnh ôn 280C trong 3 ngày, sau ựó ựem nhân tiếp trên môi trường chất mang (chất mang ựã tiệt trùng ở 1at trong 1giờ, ựể nguội và ựược trộn với các chất phụ gia) và ủ trong vòng 5-7 ngày. Sau ựó kiểm tra số lượng tế bào vi sinh vật chuyên tắnh và ựộ tạp khuẩn theo TCVN 6168:2002.
2.5.5.3. đánh giá chất lượng chế phẩm
Kiểm tra mật ựộ tế bào vi khuẩn, xạ khuẩn, nấm
Pha loãng mẫu ựến nồng ựộ 10-6 theo TCVN 6168:2002.
Chọn 3 nồng ựộ 10-4, 10-5, 10-6. Tại mỗi nồng ựộ cấy lặp lại 3 lần trên môi trường vi khuẩn tổng số, xạ khuẩn tổng số, nấm tổng số, mỗi lần cấy 0,05 ml dịch. Nuôi cấy ở 280C từ 3 Ờ 5 ngày. đếm số lượng khuẩn lạc mọc trên các ựĩa hộp lồng.
Số lượng VSV ựược tắnh bằng công thức: