D: đường kắnh vòng phân giải lớn(mm); d: đường kắnh lỗ ựục (mm)
3.3.2.Sản xuất và ựánh giá chất lượng chế phẩm vi sinh vật
∗ Sản xuất chế phẩm vi sinh vật (V5, T1, X10 và N21)
Tiến hành sản xuất chế phẩm vi sinh vật dựa theo quy trình của Bộ môn VSV - Khoa Môi Trường - Trường đại học nông nghiệp Hà Nội, sản xuất chế phẩm vi sinh vật theo nguyên tắc hợp chủng trên nền chất mang thanh trùng ựối với 4 chủng vi sinh vật ựã ựược tuyển chọn, phương pháp trình bày trong mục 2.2.5.2.
Bốn chủng vi sinh vật ựã chọn ựể làm giống sản xuất chế phẩm vi sinh vật ựều là vi sinh vật có bào tử, chịu ựược nhiệt ựộ cao (2 chủng V5 và T1 thuộc giống
Bacillus, X10 thuộc giống Streptomyces, N21: Aspergillus oryzae). Do ựó, chế phẩm vi sinh vật ựược sản xuất tử 4 chủng VSV trên có thể bảo quản ựược trong thời gian dài.
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 53 Lắc 125 vòng/ phút, Lắc 125 vòng/ phút, 1 ngày 1 ngày 3 ngày 3 ngày đóng chai, lọ, can Hình 3.9. Quy trình sản xuất chế phẩm dạng dịch từ V5, T1
Lựa chọn những ống giống thuần nhất của 2 chủng V5, T1 tiến hành nhân giống cấp 1 trong bình nón 250ml chứa 50ml môi trường dịch thể, lắc trên máy lắc với tốc ựộ 125 vòng/phút trong 1 ngày. Tiến hành kiểm tra chất lượng.
Nhân giống cấp 2: Chuyển toàn bộ 50ml giống cấp 1 trên vào bình nón 1 lắt chứa 500ml môi trường dịch thể, lắc trên máy lắc với tốc ựộ 125 vòng/phút trong 2 ngày.
Kiểm tra chất lượng
Nhân giống cấp 1
Bình 250 chứa 50ml môi trường MPA
Cấy giống V5
Nhân giống cấp 1
Bình 250 chứa 50ml môi trường thạch - glucoza Chế phẩm Cấy giống T1 Nhân giống cấp 2 Bình 1 lắt chứa 500ml môi trường MPA
Kiểm tra chất lượng
Lên men trong nồi lên men
Kiểm tra chất lượng theo TCVN 6168: 2002 Nhân giống cấp 2
Bình 1 lắt chứa 500ml môi trường thạch - glucoza
Lên men trong nồi lên men
Kiểm tra chất lượng theo TCVN 6168: 2002
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 54
Chuẩn bị 5 lắt môi trường dịch thể, khử trùng ở 1atm trong 1 giờ. đem giống cấp 2 chuyển vào 5 lắt môi trường dịch thể, lên men trong nồi men có hệ thống ựiều khiển tốc ựộ khắ trong 3 ngày.
Kiểm tra pH, số lượng vi sinh vật chuyên tắnh và vi sinh vật tạp theo TCVN 6168: 2002, sau ựó ựóng vào chai, can ựể bảo quản và sử dụng.
7 ngày 7 ngày
đóng gói
Hình 3.10. Quy trình sản xuất chế phẩm dạng bột từ X10 và N21
Lựa chọn những ống giống thuần của chủng nấm N21 và chủng xạ khuẩn X10, tiến hành nhân giống cấp 1 bằng cách nhân sinh khối riêng rẽ trên môi trường thạch ựĩa nuôi ở 280C, xạ khuẩn nuôi cấy trên môi trường xạ khuẩn tổng số, nấm nuôi cấy trên môi trường Martin, sau 7 ngày kiểm tra tạp nhiễm.
Cấy giống X10
Kiểm tra chất lượng Cấy giống N21
Nhân giống cấp 1
đĩa hoặc khay chứa 50g môi trường Martin
Nhân giống cấp 1 (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
đĩa hoặc khay chứa 50g môi trường A12
Trộn giống với chất mang
(cám gạo, cám ngô, bột ựậu tương, rỉ ựường)
Trộn giống với chất mang (cám gạo, cám ngô, bột ựậu tương, rỉ
ựường)
Kiểm tra chất lượng theo TCVN 6168: 2002
Chế phẩm Kiểm tra chất lượng
Kiểm tra chất lượng theo TCVN 6168: 2002
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 55
Chuẩn bị chất mang, ựem khử trùng ở 1atm trong 1 giờ. Trộn ựều giống cấp 1 của X10 và N21 với chất mang ựã khử trùng trong phòng vô trùng với tỷ lệ 10%, ựem ủ trong 7 ngày. Tỷ lệ chất mang gồm 6 cám gạo:3 cám ngô:1 ựậu tương/1kg chế phẩm.
Kiểm tra ựộ ẩm, ựộ xốp, pH, số lượng tế bào vi sinh vật tuyển chọn và vi sinh vật tạp theo TCVN 6168: 2002. Sau ựó ựóng gói bảo quản và sử dụng.
* đánh giá chất lượng chế phẩm vi sinh vật sau khi sản xuất
Chế phẩm vi sinh vật sau khi sản xuất ựược tiến hành kiểm tra chất lượng. Kết quả ựược trình bày ở bảng 3.7
Bảng 3.7. Chất lượng của chế phẩm vi sinh vật sau sản xuất Chế phẩm Chỉ tiêu Chế phẩm nấm Chế phẩm xạ khuẩn Chế phẩm vi khuẩn Chế phẩm vi khuẩn ưa nhiệt TCVN 6168:2002 độ ẩm (%) 35% 34,67% - - 20 - 35 pH 6,5 7,0 6,7 6,8 6 - 8 VSV hữu ắch (CFU/g hay ml) 2,8.10 9 2,9.108 4,22.108 5,47.108 1,0 x 108 VSV tạp (CFU/g hay ml) 2,5.10 2 4,3.103 1,6.102 1,15.102 1,0 x 105 Ghi chú: - không xác ựịnh
Kết quả bảng 3.7 cho thấy: Chất lượng chế phẩm trên ựạt tiêu chuẩn chất lượng Việt Nam (TCVN 6168:2002).
độ ẩm của chế phẩm nấm là 35% và 34,67% ựối với chế phẩm xạ khuẩn ựạt TCVN 6168:2002. độ ẩm của chế phẩm sau khi sản xuất ựạt TCVN là một trong những chỉ tiêu quan trọng vì ựộ ẩm ổn ựịnh sẽ ựảm bảo cho sự tồn tại của các vi sinh vật hữu ắch trong chế phẩm và không tạo ựiều kiện cho các vi sinh vật tạp nhiễm trong chế phẩm phát triển mạnh. Khoảng dao ựộng của pH từ 6,5 ựến 7 ựạt tiêu chuẩn cho phép (6 ≤ pH ≤ 8).
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 56
Số VSV hữu ắch lớn nhất ở chế phẩm nấm với 2,8.109 (CFU/g), tiếp theo là vi khuẩn ưa nhiệt với 5,47.108 (CFU/ml); vi khuẩn với 4,22.108 (CFU/ml) và xạ khuẩn X10 là 2,9.108 (CFU/g) ựều ựạt TCVN 6168:2002.
Vi sinh vật tạp ở các chế phẩm sản xuất vẫn nằm trong tiêu chuẩn cho phép ( 1,0 x 105 CFU/g hay ml).
Vì vậy chế phẩm vi sinh vật có thể ựược dùng ựể xử lý các nguồn thải hữu cơ, xử lý phế phụ phẩm nông nghiệp.
∗ đánh giá chất lượng chế phẩm ngoài thị trường EMINA
Hiệu quả có ựược từ chế phẩm Emina là do hệ vi sinh vật hữu hiệu bao gồm bốn nhóm vi sinh vật chắnh: vi khuẩn quang hợp tắa, vi khuẩn lactic, vi khuẩn
Bacillus, nấm men. đây là các chủng vi sinh vật ựược phân lập tại Việt Nam, ựược phối trộn chung lại thành chế phẩm, không ựộc hại với người và vật nuôi cũng như với môi trường.
Bảng 3.8. Chất lượng chế phẩm Emina Chỉ tiêu Chế phẩm Emina TCVN 6168:2002 độ ẩm (%) 26% 20 - 35 pH 6,8 6 - 8 VSV hữu ắch (CFU/g hay ml) 9,3.10 8 1,0 x 108 VSV tạp (CFU/g hay ml) 5,4.10 3 1,0 x 105
Phải tiến hành ựánh giá chất lượng của chế phẩm ngoài thị trường (EM) ựể ựảm bảo chất lượng của chế phẩm trước khi mang ựi sử dụng bởi vì chế chế phẩm bảo quản trong thời gian dài sẽ ảnh hưởng ựến các thành phần trong chế phẩm. Chế phẩm phải ựảm bảo về pH, số lượng vi sinh vật hữu ắch, vi sinh vật tạp, ựồng thời phải ựảm bảo về ựộ ẩm.
Kết quả bảng 3.8 cho thấy: pH = 6,8 nằm trong giới hạn pH từ 6 Ờ 8. Các chỉ tiêu còn lại như: ựộ ẩm (26%), tổng VSV hữu ắch (9,3.108 CFU/g), số lượng vi sinh vật tạp (5,4.103 CFU/g) cũng ựạt tiêu chuẩn cho phép (TCVN 6168:2002).
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 57
Như vậy chế phẩm Emina ựạt tiêu chuẩn trước khi ựưa vào xử lý rơm rạ.