Hiện nay những bộ KITs xột nghiệm AFP đang được sử dụng tại nhiều phũng xột nghiệm hoỏ sinh ở cỏc bệnh viện trong và ngoài nước mới chỉ dừng lại ở mức độ định lượng, nghiờn cứu được sự biến động hàm lượng AFP trong huyết thanh, cũn việc phõn biệt, nhận dạng cỏc khỏng nguyờn AFP bệnh lớ là một việc làm hết sức khú khăn. Ứng dụng tớnh chất nhận dạng cỏc gốc đường rất tinh vi của lectin, chỳng tụi đó sử dụng lectin ConG để nhận dạng cỏc khỏng nguyờn AFP bệnh lớ.
Khi tiến hành kỹ thuật ConG-ELISA để nghiờn cứu khả năng bắt giữ AFP chuẩn của ConG thỡ nồng độ gắn bản của ConG thớch hợp là 5g/giếng, nhưng khi nghiờn cứu khả năng nhận dạng AFP từ HTUTG, người viờm gan siờu vi trựng và thai phụ bằng phương phỏp Western Blotting thỡ nồng độ ConG mỗi giếng điện di lại chỉ là 3 g/giếng.
Chỳng tụi tiến hành nghiờn cứu khả năng nhận dạng AFP từ HTUTG, huyết thanh bệnh nhõn viờm gan siờu vi trựng, thai phụ theo phương phỏp mụ tả ở mục 2.2.7, với mỗi loại sử dụng 20 mẫu, mỗi mẫu lặp lại 3 lần. Kết quả được thể hiện ở hỡnh 3.33.
Chế phẩm lectin ConG xuất hiện 3 băng khỏc nhau (14kDa, 23kDa, 31kDa) khi kiểm tra bằng điện di SDS-PAGE. Ba băng này đó cú sự phõn biệt nhận dạng khỏng nguyờn AFP, vỡ vậy KN AFP trong huyết thanh của bệnh nhõn ung thư gan bắt giữ cả 3 băng (14kDa, 23kDa, 31kDa), AFP từ huyết thanh của bệnh nhõn viờm gan siờu vi trựng bắt giữ 2 băng (14kDa, 23kDa) cũn AFP của thai phụ chỉ bắt giữ 1 băng (14kDa). Như vậy cú sự phõn biệt về khả năng liờn kết của ConG với ba loại AFP từ huyết thanh người khoẻ bỡnh thường và trạng thỏi bệnh lớ. Kết quả này
Hỡnh 3.33. Lectin đậu gươm ConG nhận dạng cỏc khỏng nguyờn AFP từ huyết thanh bệnh nhõn ung thư gan, viờm gan siờu vi trựng và thai phụ.
Chỳ thớch:
Cột 1,2,3: AFP của bệnh nhõn ung thư gan bắt giữ cả 3 băng 14kDa, 23kDa và 31 kDa của lectin ConG.
Cột 4,5,6: AFP của bệnh nhõn viờm gan siờu vi trựng bắt giữ 2 băng 14kDa và 23kDa của ConG.
chứng tỏ độ tin cậy bắt giữ của cỏc lectin cú cỏc gốc đường khỏc nhau là rất tinh tế, chỉ cần một lectin, sử dụng kỹ thuật điện di kết hợp với kỹ thuật thẩm tỏch miễn dịch là cú thể nhận dạng được cỏc khỏng nguyờn AFP bệnh lớ.