Helicobacter pylori (H. pylori), vi khuẩn Gram âm có trong dạ dày người, được
chứng minh là có liên quan đến các bệnh về dạ dày-tá tràng và ung thư dạ dày [30]. Các chủng H. pylori khác nhau có thể có độc tính khác nhau trong quá trình gây bệnh trên
người [10].
Nhiều gene của H. pylori được chọn để phát hiện sự hiện diện của vi khuẩn này trong bệnh phẩm (urease, rRNA 16S, gene bám-adhesion gene…). Trong nghiên cứu này, chúng tôi quan tâm đến hai gene cagA và vacA vì sản phẩm của chúng được coi là hai yếu tố độc lực chủ yếu có khả năng gây bệnh và đặc trưng của vi khuẩn H. pylori [9, 20]. Sự kết hợp các týp gene khác nhau giữa hai gen này có thể liên quan đến biểu hiện lâm sàng khác nhau ở người bệnh. Gene cagA có thể không có ở tất cả các chủng H. pyori. Sự hiện diện của gene cagA ở một chủng nào đó thường có liên quan đến những
hậu quả lâm sàng nghiêm trọng cho người bị nhiễm [14]. Protein CagA, có kích thước từ 128 đến 140 kDa, có khả năng kích thích phản ứng tyrosine phosphoryl hóa trong tế bào ký chủ, dẫn đến sự tăng sinh bất thường của các tế bào biểu mô dạ dày [34]. Trong khi đó, gene vacA có mặt ở tất cả các chủng H. pylori, cảm ứng hình thành không bào. Cấu trúc gene này chứa ít nhất hai vùng biến đổi gồm vùng “tín hiệu” và vùng “giữa”. Vùng “tín hiệu” có thể có các týp gene là s1 hoặc s2. Vùng giữa có thể có các týp gene là m1 hoặc m2. Độc lực cao hay thấp của gene vacA phụ thuộc vào các týp gen của hai vùng này. Chủng H. pylori với týp gene s1/m1 tạo ra độc tố mạnh hơn và có khả năng gây bệnh cao hơn các chủng khác, trong khi đó chủng H. pylori với týp gene s2/m2 tạo ra ít hoặc không tạo ra độc tố [9].
Việc phát hiện và phân týp H. pylori có thể được thực hiện bằng nhiều phương
PCR có nhiều ưu điểm như độ nhạy cao, thao tác nhanh, chi phí thấp. Phương pháp PCR đã được sử dụng thành công để phát hiện và phân týp cagA và vacA trực tiếp từ mẫu
sinh thiết dạ dày và còn được dùng để phát hiện H. pylori từ nhiều nguồn mẫu khác
nhau như dịch dạ dày, nước bọt, mảng cao răng và phân người [37]. Ngoài ra, việc áp dụng kỹ thuật multiplex PCR còn cho phép phát hiện và định týp đồng thời các gene
vacA và cagA chỉ trong một phản ứng.
Trong nghiên cứu của chúng tôi, để phát hiện và định týp H. pylori bằng PCR,
nhiều phương pháp xử lý mẫu và tách chiết đã được dùng với nhiều loại mẫu khác nhau. Với loại mẫu sinh thiết mẫu mô ung thư hoặc mẫu mô từ niêm mạc dạ dày, chúng tôi chọn phương pháp tách chiết DNA dựa trên nguyên tắc hấp phụ trên pha rắn sau khi so sánh với phương pháp phenol : chloroform : isoamyl alcohol. Phương pháp hấp phụ DNA lên pha rắn an toàn với người sử dụng, có thao tác nhanh, đơn giản và cho phép thu hồi một lượng lớn DNA tinh sạch.
Phản ứng multiplex PCR dùng phát hiện và định týp gene của vi khuẩn H. pylori đạt hiệu quả và độ chính xác cao, với cường độ tín hiệu đặc trưng cho từng gene không chênh lệch. Điều này cho thấy các điều kiện của phản ứng đã được tối ưu hóa và phù hợp cho sự nhân bản của các gene. Kết quả áp dụng quy trình trên một số bệnh phẩm của bệnh nhân viêm và ung thư dạ dày trong nghiên cứu của chúng tôi cho thấy ưu thế của týp gene cagA (+), vacA s1m1; và cagA (+), vacA s1m2.
Tóm lại:
Phương pháp multiplex PCR là một kỹ thuật chính xác, cho phép phát hiện, và định danh các týp gene, các phân týp của vi khuẩn H. pylori từ mẫu mô sinh thiết niêm mạc dạ dày qua nội soi; hoặc từ bệnh phẩm phẫu thuật của bệnh nhân để phục vụ cho các nghiên cứu về dịch tễ học, bệnh học và điều trị.
Kết quả của công trình này góp phần vào việc phát triển một phương pháp chẩn đoán chính xác, đơn giản và hiệu quả để phát hiện nhiễm vi khuẩn từ các chủng H. pylori khác nhau có các yếu tố độc lực với khả năng gây bệnh khác nhau ở bệnh nhân
4.2. BÀN LUẬN NỘI DUNG 2
KẾT QUẢ ĐỊNH DANH CÁC TÝP GENE cagA VÀ vacA CỦA VI KHUẨN HELICOBACTER PYLORI CỦA VI KHUẨN HELICOBACTER PYLORI