3. Ý nghĩa của đề tài
2.4.7. Bố trí thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng của tỷ lệ enzyme/ cơ chất và thờ
thuỷ phân tới khả năng bắt gốc tự do DPPH của dịch thuỷ phân collagen.
Khả năng bắt các gốc tự do DPPH được xác định dựa trên phương pháp của Blois [14]. Thí nghiệm được tiến hành như sau: 3ml dịch thuỷ phân collagen được cho vào 1 ml dung dịch DPPH 0,1mM trong ethanol. Hỗn được lắc đảo đều sau đó để ở nhiệt độ phòng trong điều kiện bóng tối với thời gian 30 phút. Đo độ hấp thụ mẫu tại bước sóng 517nm bằng máy quang phổ. Khả năng bắt gốc tự do DPPH được tính toán là phần trăm DPPH bị biến đổi, sử dụng phương trình:
Khả năng bắt gốc tự do DPPH (%) = 0 1 0 100 A A A
Trong đó A0 là độ hấp thụ của mẫu control và A1 là độ hấp thụ của mẫu.
Bố trí thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng của tỷ lệ enzyme/ cơ chất
Sơ đồ 2.9: Bố trí thí nghiệm tìm tỷ lệ enzyme/ cơ chất cho quá trình thuỷ phân
Thuyết minh sơ đồ: Dung dịch collagen được đem thuỷ phân bằng enzyme pepsin với
thời gian là 30 phút, ở các tỷ lệ enzyme/ cơ chất lần lượt là 0,5%, 1 %, 2% và 5%. Sau đó đem dịch thuỷ phân ly tâm và thực hiện thí nghiệm xác định khả năng bắt gốc tự do DPPH. So sánh, đánh giá khả năng bắt gốc tự do và lựa chọn ra thông số tỷ lệ enzyme/ cơ chất thích hợp cho dịch thuỷ phân có khả năng bắt gốc tự do cao. Thông số này sẽ được sử dụng cho quá trình khảo sát ảnh hưởng của thời gian thuỷ phân.
Thuỷ phân
0,5% 1% 2% 5%
Xác định khả năng bắt gốc tự do DPPH
Lựa chọn thông số thích hợp Collagen
Thời gian thuỷ phân: 30 phút Nhiệt dộ: 400C
Bố trí thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng của thời gian thuỷ phân
Sơ đồ 2.10: Bố trí thí nghiệm tìm thời gian cho quá trình thuỷ phân
Thuyết minh sơ đồ: Dung dịch collagen được đem thuỷ phân bằng enzyme pepsin
theo tỷ lệ enzyme/ cơ chất đã tìm được, với các khoảng thời gian thuỷ phân khác nhau: 5 phút, 15 phút, 30 phút và 60 phút. Sau khi thuỷ phân, đem dịch đi ly tâm và tiến hành thí nghiệm xác định khả năng bắt gốc tự do DPPH. So sánh, đánh giá khả năng bắt gốc tự do để tìm ra thông số thời gian thuỷ phân thích hợp nhất cho dịch thuỷ phân có khả năng bắt gốc tự do cao. Thuỷ phân 5 phút 15 phút 30 phút 60 phút Xác định khả năng bắt gốc tự do DPPH Lựa chọn thông số thích hợp Collagen
CHƯƠNG 3
KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN