- Nghiên cứu can thiệp có đối chứng.
2.3.4. Các kỹ thuật và chỉ số đánh giá sử dụng trong nghiên cứu
2.3.4.1. Kỹ thuật thử sinh học xác định tồn lưu của hóa chất diệt cơn trùng trên màn tẩm hóa chất tồn lưu lâu
Theo quy trình của WHO (2013) và WHO/CDS/WHOPES/GCDPP/2005.11 [165], [166].
- Muỗi thử nghiệm: Muỗi cái An. dirus, 2 – 5 ngày tuổi chưa hút máu,
ni ở phịng thí nghiệm của Viện Sốt rét – Ký sinh trùng – Côn trùng Trung ương đã được xác định cịn nhạy cảm với hóa chất trên màn (deltametrhin 0,05%).
+ Chọn những con muỗi cái khỏe mạnh, đủ chân, đủ cánh có tư thế đậu bình thường để thử nghiệm. Không chọn những con muỗi ăn quá no, q đói hoặc khơng đủ chân, cánh, có tư thế đậu bất thường.
+ Trên mỗi màn thử tại 5 vị trí (4 vị trí trên 4 mặt thân màn và 1 vị trí trên đình màn), mỗi vị trí thử 1 phễu gồm 5 con muỗi, lặp lại 2 lần.
+ Thời gian muỗi tiếp xúc với màn là 3 phút, sau đó cho muỗi nghỉ 24 giờ và ni bằng dung dịch đường glucose 10%. Theo dõi số muỗi chết trong 24 giờ. Sau đó ghi lại số muỗi chết ở lô đối chứng và thử nghiệm. Tất cả những con muỗi khơng bay lên được tính là muỗi chết.
* Chỉ số đánh giá hiệu lực diệt tồn lưu trên màn tẩm hóa chất [164] - Tỷ lệ muỗi chết sau 24 giờ ≥ 70%: Hóa chất cịn hiệu lực tồn lưu - Tỷ lệ muỗi chết sau 24 giờ < 70%: Hóa chất hết hiệu lực tồn lưu
* Chỉ số đánh giá hiệu lực diệt tồn lưu của màn Permanet 2.0 [165] - Tỷ lệ muỗi chết sau 24 giờ ≥ 80%: Hóa chất cịn hiệu lực tồn lưu - Tỷ lệ muỗi chết sau 24 giờ < 80%: Hóa chất hết hiệu lực tồn lưu
2.3.4.2. Kỹ thuật xác định độ nhạy cảm của muỗi Anopheles với hóa chất diệt cơn trùng[166].
- Các loại giấy tẩm hóa chất nhóm pyrethroid được sử dụng để xác định mức độ nhạy cảm của muỗi Anopheles: Lambdacyhalothrin 0,05%,
alphacypermethrin 30mg/m2, deltamethrin 0,05%. Giấy đối chứng là những giấy chỉ tẩm các dung mơi để hồ tan các hố chất đó.
- Quy trình khảo nghiệm
+ Chuẩn bị các ống nghỉ: Lót các tờ giấy sạch vào bên trong ống nghỉ, dung các vòng bằng thép ép giấy sát vào trong thành ống. Cho từ 20 – 25 con muỗi đã chọn vào một ống nghỉ. Để muỗi nghỉ 1 giờ, sau đó kiểm tra lại và loại bỏ những con muỗi không đạt yêu cầu, bổ sung muỗi cho đủ số lượng.
+ Chuẩn bị ống đối chứng và ống thử nghiệm: Lót các tờ giấy đối chứng vào trong ống đối chứng và các tờ giấy có tẩm hóa chất vào trong ống thử nghiệm. Dùng các vòng kim loại ép sát tờ giấy vào thành ống.
+ Cho muỗi tiếp xúc với giấy tẩm hóa chất: lắp ống nghỉ với ống đối chứng và ống thử nghiệm. Thổi nhẹ chuyển muỗi từ ống nghỉ sang ống đối chứng, ống thử nghiệm. Đặt ống thử nghiệm có muỗi theo chiều thẳng đứng, thời gian tiếp xúc 60 phút. Theo dõi nhiệt độ và ẩm độ trong q trình thử nghiệm (nhiệt độ phịng thử nghiệm: 25± 20C, độ ẩm tương đối: 70 – 80%).
+ Quan sát, đếm, ghi số lượng muỗi ngả gục vào thời điểm 60 phút khi muỗi bắt đầu tiếp xúc với hóa chất.
+ Sau 60 phút tiếp xúc, chuyển muỗi từ ống đối chứng và ống thử nghiệm sang ống nghỉ. Đặt ống thẳng đứng cho muỗi nghỉ trong 24 giờ. Cho muỗi hút nước đường glucose 10%. Sau 24 giờ đọc kết quả thử nghiệm. Những con muỗi được coi là còn sống nếu chúng bay được, bất kể chúng có cịn chân hay khơng.
* Đọc kết quả và nhận xét kết quả thử nghiệm:
- Nếu tỷ lệ muỗi chết trong lơ đối chứng < 5% thì giữ ngun tỷ lệ chết quan sát mà không cần điều chỉnh.
làm lại.
- Nếu tỷ lệ muỗi chết trong lô đối chứng nằm trong khoảng 5 % – 20 %, thì tỷ lệ muỗi chết ở lơ thử nghiệm được điều chỉnh theo công thức Abbott như sau:
Tỷ lệ chết ở lô thử nghiệm (%) – Tỷ lệ chết ở lô đối chứng (%)