I. KẾT VÀ THẢO LUẬN
1.Xác ñị nh chủng nấm mốc A.niger không sinh ñộ c tố kiểm soát nấm mốc và ñộ c tố
nấm mốc ochratoxin A trên cà phê
a. Khả năng sinh ñộc tố của các chủng A. niger phân lập từ cà phê và ñất trồng cà phê
Từ 13 chủng nấm mốc Aspergillus niger trong bộ sưu tập chủng giống của Bộ môn Nghiên cứu Công nghệ sinh học sau thu hoạch, chúng tôi tiến hành ñánh giá khả năng sinh và không sinh ñộc tố ochratoxin A trong môi trường Czapek cải tiến dưới tia UV 254nm.
Bảng 1. Khả năng sinh OTA của các chủng Aspergillus niger
phân lập từ cà phê và ñất trồng cà phê STT Kí hiệu chủng Phát quang OTA 1 AN3 Yếu 2 AN4 KPHð 3 AN1 Mạnh 4 AN2 KPHð 5 AN5 KPHð 6 AN6 KPHð 7 ANpec2 Rất mạnh 8 AN9 Yếu 9 AN7 KPHð 10 AN8 Mạnh 11 AN12 KPHð 12 AN10 KPHð 13 AN11 Yếu Chú thích: KPHð: không phát hiện ñược
Kết quả bảng 1 cho thấy, các chủng A.niger phân lập từ cà phê và ñất trồng cà phê tại ðắc Lắc và ðắc Nông, chúng tôi ñã xác ñịnh ñược các chủng AN1, AN pec2 và AN8 có khả năng phát quang mạnh, trong ñó chủng AN pec2 phát quang mạnh nhất do ñó có thể kết luận chủng này có khả năng sinh ñộc tố ochratoxin A cao. Các chủng AN2, AN4, AN5, AN6, AN7, AN10, AN12 không phát hiện khả năng sinh ñộc tố và trong số ñó các chủng AN2, AN7 và AN12 có khuẩn lạc phát triển mạnh trong cùng môi trường nuôi cấy,
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……… 85 Từ kết quả trên chúng tôi tiến hành xác ñịnh khả năng sinh ñộc tố ochratoxin A của các chủng bằng phương pháp sắc ký bản mỏng. Kết quả phân tích sắc kí bản mỏng các chủng AN2, AN3, AN8 và AN pec2 thể hiện trong hình 1.
Hình 1: Khả năng sinh ñộc tố của các chủng bằng phương pháp sắc kí bản mỏng
Chú thích: C2: Ochratoxin A chuẩn nồng ñộ 0,5ng/ml; M1: Rf của ANpec; M2: Rf của chủng AN8; M3: Rf của chủng AN3; M4: Rf của chủng AN2 (không sinh)
Kết quả phân tích sắc kí bản mỏng cho thấy các chủng AN3, AN8 và AN pec2 có Rf tương ñương với Rf chuẩn ñộc tố ochratoxin A nồng ñộ 0,5ng/ml trong ñó Rf của chủng AN pec2 mạnh nhất. Chủng nấm mốc A. niger AN2 không sinh ñộc tố có khả năng sinh trưởng phát triển mạnh, chúng tôi chọn A. niger AN2 và ANpec2 cho các thí nghiệm tiếp theo.
Từ kết quả phân tích sắc kí bản mỏng, chúng tôi tiến hành phân tích hàm lượng ñộc tố ochratoxin A của A. niger AN2 và ANpec2 bằng HPLC, kết quả thể hiện trong hình 2 và hình 3:
Hình 2. Sắc kí ñồ HPLC chủng AN pec2
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……… 86
Hình 3. Sắc kí ñồ HPLC chủng AN2
Bằng phân tích sắc kí lỏng cao áp, chúng tôi xác ñịnh ñược chủng AN2 không sinh
ñộc tố và chủng AN pec2 sinh ñộc tố ochratoxin A với hàm lượng 50ppb.
Từ kết quả trên, chúng tôi tiến hành thí nghiệm ñánh giá hiệu quả giảm ochratoxin A của chủng AN pec2 bằng các chủng không sinh ñộc tố tuyển chọn từ bảng 1.
b. Hiệu quả giảm ochratoxin A của chủng nấm mốc sinh ñộc tố cao bằng các chủng không
sinh ñộc tố
Tiến hành nuôi hỗn hợp với từng chủng A.niger không sinh ñộc tố (1,0 x 106 CFU/ml), nuôi cấy trên cơ chất ngô ñược xác ñịnh là không có ochratoxin A, trong ñiều kiện nhiệt ñộ 300C, ñộẩm 20%, cho A.niger sinh trưởng, phát triển. Sau 7 ngày nuôi cấy kiểm tra hiệu quả giảm ñộc tố ochratoxin A của từng chủng A. niger không sinh ochratoxin A ñối với chủng sinh ochratoxin A cao.
Bảng 2. Hiệu quả giảm OTA của chủng A. niger pec2 bằng các chủng A. niger không sinh ñộc tố
TT Công thức thí nghiệm Sản lượng ochratoxin A (ppb)
Hiệu quả giảm ochratoxin A(%)