4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
4.3.3. Nghiên cứu sản xuất bào tử A.niger AN2 ở quy mô 100kg/mẻ
4.3.3.1. Ảnh hưởng của tỷ lệ tiếp giống ñến sản lượng bào tử chủng A. niger AN2
Môi trường cám trấu ñược trộn ñều theo tỷ lệ 4:1, bổ sung nước ñể ñạt
ñược ñộ ẩm 65%. Cho nguyên liệu cám trấu vào túi nilong, mỗi túi 2kg cám trấu, hấp khử trùng ở nhiệt ñộ 1200C trong 1 giờ. ðể nguyên liệu cám trấu nguội ñến 300C rồi ñổ vào các khay có kích thước 80cmx50cmx15cm, ñộ dày khối ủ 6cm/khay. Tiếp giống với tỷ lệ 2,5%; 5%; 7,5%; 10% và 12,5% vào môi trường cám trấu, trộn ñều. Nuôi cấy ở nhiệt 30oC, sau thời gian 7 ngày, tiến hành thu hồi sinh khối, sấy khô ở nhiệt ñộ 45oC trong 24h ñể bất hoạt hệ
sợi nấm mốc. Ảnh hưởng của tỷ lệ tiếp giống ñến mật ñộ bào tử của chủng A.
niger AN2 ñược trình bày ở bảng 4.7
Bảng 4.7: Ảnh hưởng của tỷ lệ tiếp giống tới mật ñộ bào tử
A. niger AN2
STT Tỷ lệ tiếp giống (%) Mật ñộ bào tử (CFU/g)
1 2,5 2,2 x 108
2 5,0 5,4 x 108
3 7,5 1,35 x 109
4 10,0 2,1 x 109
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……… 51
Kết quả bảng 4.7 cho thấy khi tiếp giống với tỷ lệ 2,5% mật ñộ bào tử
A. niger AN2 ñạt rất thấp 2,2 x 108 CFU/g, mật ñộ bào tử tăng dần khi tăng tỷ
lệ tiếp giống tăng tỷ lệ thuận và ñạt cực ñại ở tỷ lệ tiếp giống 10% và 12,5%. Tuy nhiên khi tăng tỷ lệ tiếp giống lên 12,5% thì mật ñộ bào tử tăng không
ñáng kể so với tỷ lệ tiếp giống 10% do ñó chúng tôi lựa chọn tiếp giống với tỷ
lệ 10% ñể tạo chế phẩm AN ở quy mô 100kg/mẻ.
4.3.3.2 Ảnh hưởng ñộ dày khối ủñến mật ñộ bào tử của chủng A. niger AN2
Chủng A. niger AN2 ñược nuôi cấy trên môi trường cám trấu với các ñiều
kiện tối ưu ñã chọn ở trên với ñộ dày khối ủ khác nhau từ 2-10 cm trên các khay có kích thước 80cmx50cmx15cm . Ảnh hưởng của ñộ dày khối ủñến mật ñộ bào
tử của chủng A. niger AN2 ñược trình bày ở bảng 4.8.
Bảng 4.8: Ảnh hưởng của ñộ dày khối ủ tới mật ñộ bào tử A. niger AN2 ðộ dày khối ủ (cm) Mật ñộ bào tử (cfu/g)
2 9,8 x 108
4 15 x 108
6 21 x 108
8 12 x 108
10 8,0 x 108
Kết quả cho thấy, ở các ñộ dày khác nhau trên khay nuôi thì mật ñộ bào
tử chủng A. niger AN2 khác nhau. Khối ủcó ñộ dày 2,0 cm mật ñộ bào tử chỉ
ñạt 9,8 x 108 CFU/g và ở 6cm khối ủ cho mật ñộ bào tử ñạt lớn nhất 2,1x109CFU/g. Khi ñộ dày khối ủ tăng lên 8 – 10 cm thì mật ñộ bào tử bắt
ñầu giảm 8,0 x 108 CFU/g do chủng A. niger AN2 thuộc nấm sợ hiếu khí ở
khối ủ quá dày sẽ giảm khả năng phát triển của nấm. Do ñó chúng tôi lựa chọn nuôi A. niger AN2 trong khay có kích thước 80cmx50cmx15cm với ñộ
dày khối ủ 6,0cm trên khay.
4.3.3.3. nghiên cứu lựa chọn chất mang
Chế phẩm bào tử của chủng A. niger AN2 ñược tạo ra bằng các chất mang khác nhau: canxi alginate, than bùn, cám gạo ñể bảo quản và thuận lợi cho quá trình ñóng gói, sử dụng. Tính ổn ñịnh của chế phẩm trong các chất
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……… 52
mang khác nhau ñược trình bày trong bảng 4.9.
Bảng 4.9: Mật ñộ bào tử A. niger AN2 trong chất mang ở các thời gian bảo quản khác nhau
Số lượng bào tử nấm mốc sau các thời gian bảo quản (CFU/g) Loại chất mang 7 ngày 6 tháng 12 tháng CT1 1,1 x 109 0,9 x 109 7,3 x 108 CT2 1,1 x 109 1 x 109 8,5x 108 CT3 1,1 x 109 2,4 x 107 5,6x 106 Chú thích:
CT1: Tỉ lệ giống/than bùn = 1/1, trộn ñều, ñóng túi nilon vi lỗ
CT2: Tỉ lệ giống/canxi alginat = 1/1, trộn ñều, ñóng túi nilon vi lỗ
CT3: Tỉ lệ giống/cám gạo = 1/1, trộn ñều, ñóng túi nilon vi lỗ
Kết quả bảng 4.9 cho thấy tỷ lệ sống sót của các bào tử tinh khiết ñược tạo chế phẩm bằng than bùn, canxi alginate và cám gạo với tỷ lệ 1:1 là rất cao
ñều ñạt 1,1 x 109 CFU/g trong 7 ngày nuôi cấy. Sau 06 tháng và 12 tháng bảo quản trên chất mang than bùn và canxi alginate mật ñộ bào tử vẫn ổn ñịnh ñạt lần lượt 7,3 x 108 CFU/g và 8,5x 108 CFU/g. Tuy vậy trên cơ chất cám gạo mật ñộ bào tửñã giảm còn 2,4 x 107 CFU/g sau 06 tháng bảo quản và 5,6x 106 CFU/g sau 12 tháng bảo quản. Than bùn và canxi alginate ñạt mật ñộ bào tử
tối ña nhưng do giá thành canxi alginat ñắt hơn cơ chất than bùn nên chúng tôi chọn công nghệ tạo chế phẩm AN là CT1 tỷ lệ giống/than bùn là 1:1.
4.3.4. Qui trình sản xuất chế phẩm AN từ chủng A. niger AN2 ñể phòng chống nấm mốc và ñộc tố ochratoxin A nhiễm trên cà phê